способ лечения стрессового недержания мочи
Классы МПК: | A61K35/54 яичник; яица; эмбрионы A61P13/10 мочевого пузыря |
Автор(ы): | Кулаков Владимир Иванович (RU), Сухих Геннадий Тихонович (RU), Балан Вера Ефимовна (RU), Сметник Вера Петровна (RU) |
Патентообладатель(и): | Государственное учреждение Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии Российской академии медицинских наук (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2005-03-16 публикация патента:
10.11.2006 |
Изобретение относится к области медицины и касается лечения стрессового недержания мочи у женщин путем введения фетальных стволовых клеток. В рабдосфинктер парауретрально вводят 40 млн. стволовых миобластов и фибробластов, полученных от плодов 8-12 недель гестации, при соотношении клеток 5-4:3-2. Способ расширяет арсенал средств лечения стрессового недержания мочи у женщин, позволяет исключить хирургическое вмешательство.
(56) (продолжение):
CLASS="b560m"ред. В.П.Сметник, В.И.Кулакова. - М.: Медицинское информационное агентство, 2001, гл. 19, с.641-660. Wise Young, PhD MD et al. Исследования по проблеме повреждения спинного мозга: достижения и перспективы, декабрь 2003 г., найдено в Интернет на сайте http://www.sci-rus.com/for_patients/Bases_for_Hope.htm, дата обращения 27.10.2005.
Формула изобретения
Способ лечения стрессового недержания мочи у женщин путем введения клеточного материала в рабдосфинктер, отличающийся тем, что в рабдосфинктер парауретрально вводят 40 млн. стволовых миобластов и фибробластов, полученных от плодов 8-12 недель гестации, при соотношении клеток 5-4:3-2.
Описание изобретения к патенту
Настоящее изобретение относится к терапии, в частности к способам лечения стрессового недержания мочи.
Урогенитальные расстройства в климактерии - комплекс вагинальных и мочевых симптомов, развитие которых является осложнением атрофических и дистрофических процессов в эстрогензависимых тканях и структурах нижней трети мочеполового тракта: мочевом пузыре, уретре, влагалище, связочном аппарате и мышцах тазового дна.
В настоящее время единственным способом лечения стрессового недержания мочи является хирургический, который насчитывает более 200 модификаций (Х.Хирш, О.Кезер, Ф.Икле "Оперативная гинекология" Изд-во ГЭОТАР Медицина, М., 1999, стр.407).
Недостатком способа являются высокая частота рецидивов и осложнения, обусловленные хирургическим вмешательством.
Описана попытка лечения недержания мочи у 8 пациентов путем трансуретральной инъекции в рабдосфинктер и уретру комбинации аутологичных стволовых клеток, производных мышечной ткани и клеток соединительной ткани (Shiomo Pas MD "Stem cell offer exciting approach to urinary incontinence treatment" Urology Times 1 July, 2004).
Хотя популяция плюрипотентных клеток была получена из скелетных мышц, однако авторы публикации не приводят данных, подтверждающих, что используемые клетки на самом деле были стволовыми, равно как и об успехе лечения во временном интервале.
Недостатком способа является его длительность, связанная с необходимостью забора клеточного материала и выращиванием стволовых клеток на его основе.
Задача изобретения - упрощение способа лечения стрессового недержания мочи у женщин за счет использования более доступного аллогенного клеточного материала.
Поставленная задача решается способом лечения недержания мочи, заключающимся в том, что вводят аллогенные эмбриональные или фетальные соматические стволовые клетки человека - миобласты и фибробласты при их соотношении 5-4:3-2 парауретрально в рабдосфинктер.
Получение культуры клеток, обогащенной миобластами человека для последующей трансплантации.
Трупный абортивный материал доставляли в аутопсийный блок в термоконтейнере (+4°С) не позднее, чем через 4 часа после искусственного прерывания беременности. Плоды отмывали стерильным физиологическим раствором с антибиотиками. Поперечно-полосатые мышцы выделяли из плодов человека 8-12 недель гестации, отмывали забуференным физиологическим раствором (PBS) рН 7,3 с добавлением антибиотиков. Фрагменты мышечной ткани подвергали механической диссекции в стерильных чашках Петри (35 мм) до размеров не более 1,0 мм × 1,0 мм. Дважды отмывали PBS, центрифугируя при 800 g в течение 3-х минут. Кусочки мышечной ткани диссициировали на отдельные клетки инкубацией при 37°С с 0,2% коллагеназой в течение 15 минут. Затем отмывали дважды PBS.
Популяцию клеток, обогащенную миобластами, помещали в культуральные флаконы в концентрации 500000 кл/мл в среде для культуры клеток: F12 и DMEM в соотношении 1:1, с добавлением фетальной эмбриональной сыворотки, L-глютамина, хепеса, бикарбоната натрия, антибиотиков. Клетки культивировали при 37°С в атмосфере с 5% СО2 до получения монослоя, фибробласты удаляли при пассировании. Смену среды проводили каждые 3 дня на 50-75%. Суспензию, обогащенную миобластами, культивировали по вышеописанной схеме до 3 пассажа, затем использовали для трансплантации или замораживали по стандартной программе с переносом в жидкий азот.
Получение культуры клеток фибробластов человека для последующей трансплантации.
Трупный абортивный материал доставляли в аутопсийный блок в термоконтейнере (+4°С) не позднее, чем через 4 часа после искусственного прерывания беременности. Плоды отмывали стерильным физиологическим раствором с антибиотиками. Ткань кожи выделяли из плодов человека 8-12 недель гестации, отмывали забуференным физиологическим раствором (PBS) рН=7,3 с добавлением антибиотиков. Фрагменты кожи подвергали механической диссекции в стерильных чашках Петри (35 мм) до размеров не более 1,0 мм × 1,0 мм. Дважды отмывали PBS, центрифугируя при 800 g в течение 3-х минут. Кусочки мышечной ткани диссициировали на отдельные клетки инкубацией при 37°С с 0,2% коллагеназой в течение 25 минут. Затем отмывали дважды PBS.
Популяцию клеток, обогащенную фибробластами, помещали в культуральные флаконы в концентрации 500000 кл/мл в среде для культуры клеток: F12 и DMEM в соотношении 1:1, с добавлением 10% фетальной сыворотки теленка, L-глютамина, хепеса, бикарбоната натрия, антибиотиков. Клетки культивировали при 37°С в атмосфере с 5% СО2 до получения монослоя. Смену среды проводили каждые 3 дня на 50-75%. Фибробласты культивировали по вышеописанной схеме до 3 пассажа, затем использовали для трансплантации или замораживали по стандартной программе с переносом в жидкий азот.
Нижеследующий пример иллюстрирует способ по изобретению.
Больная Л.К., 55 лет, страдает стрессовым недержанием мочи в течение 5 лет. Кашлевая проба положительна, проба Вальсалвы положительна, комплексное уродинамическое исследование - недостаточность замыкательного аппарата мочевого пузыря, снижение максимального внутриуретрального давления на 50%, лечение заместительной гормональной терапией без эффекта. Пациентке парауретрально в рабдосфинктер ввели 40 млн. эмбриональных стволовых миобластов и фибробластов при соотношении клеток 4:2.
Наблюдение за больной уже через две недели показало клиническое улучшение:
1. Удерживает мочу при нагрузке (кашель, смех).
2. Проба Вальсалвы отрицательна.
Дальнейшее наблюдение за пациенткой (в течение 5 месяцев) показало сохранение лечебного эффекта.
Класс A61K35/54 яичник; яица; эмбрионы
Класс A61P13/10 мочевого пузыря