способ прогнозирования угрозы прерывания беременности при урогенитальной инфекции

Формула изобретения

Способ прогнозирования угрозы прерывания беременности при урогенитальной инфекции путем определения уровня неоптерина в периферической крови, отличающийся тем, что дополнительно определяют уровень неоптерина в слизи цервикального канала и при значениях неоптерина в крови выше (3,2±0,7) нг/мл, в цирвикальной слизи выше (10,1±6,4) нг/мл прогнозируют высокий риск невынашивания беременности в 1 триместре.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования угрозы прерывания беременности при урогенитальной инфекции.

Угроза прерывания беременности по своей социальной и медицинской значимости относится к наиболее актуальным проблемам современного акушерства. Частота этой патологии колеблется от 8-до 15% и служит причиной высокой перинатальной заболеваемости и смертности (Серов В.Н.,1999). Среди многофакторных причин угрозы прерывания беременности ведущими признаются инфекционные (Сельков С.А., 2000). Персистирующая урогенитальная микрофлора играет важную роль в развитии таких осложнений при беременности как самопроизвольные аборты, преждевременные роды, может приводить к тяжелым поражениям плода и новорожденного (Сидельникова В.М., 2001). К микроорганизмам, наиболее часто ассоциируемым с патологией беременности, относят Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealiticum, Chamydia Trachomatis, Herpes virus. При инфекционном процессе в репродуктивном тракте женщины происходит активация макрофагов и лимфоцитов, что приводит к индукции клеточного иммунного ответа, следствием чего является продукция провоспалительных цитокинов, оказывающих прямое эмбриотоксическое действие, прекращается, рост и развитие трофобласта (Dudley D.J., Collmer D., Mitchel M.D. et all, 1996). Несмотря на проводимые научные исследования в проблеме урогенитальной инфекции при беременности, не разработаны четкие прогностические критерии невынашивания беременности при этой патологии. Разработка прогностических иммунологических критериев позволит снизить процент плодовых потерь при урогенитальной инфекции, даст возможность своевременно осуществить комплекс лечебно-профилактических мероприятий.

Известен способ диагностики невынашивания беременности в ранние сроки путем определения содержания эстрадиола и прогестерона в крови радиоиммунологическим методом со стандартными наборами КГТ и исследования содержания Т-лимфоцитов супрессоров (CD8) в реакции иммунофлюоресценции с моноклональными антителами. На основании установленных различий в величине эстрадиол-прогестеронового коэффициента и CD8 клеток в крови беременных определяют гормонально-иммунологический индекс, позволяющий установить этиологический фактор невынашивания беременности (заявка РФ N 93003010, 04.10.96).

Известен способ диагностики угрозы невынашивания плода путем определения уровня содержания периферических Т_Y - лимфоцитов до и после инкубации с АМГФ и при снижении экспрессии F_cY R на поверхности Т_Y - лимфоцитов на 12 и более процентов по отношению к исходному уровню диагностируют угрозу вынашиванию плода (патент РФ N 2077727, 20.04.97).

Известен способ ранней диагностики невынашивания беременности, осуществляемый путем предварительной инкубации эритроцитов быка с препаратом трофобластического бета <Mv><D>-гликопротеида (ТБГ) в концентрации 60 мкг/мл с определением содержания нейтрофилов, образовавших розетки с эритроцитами диагностикума ТБГ-быка, и при уровне этого показателя выше или равном 29% диагностируют угрозу невынашивания беременности (патент РФ N 2077729, 20.04.97).

Известен способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах, осуществляемый путем исследования пробы периферической крови, в которой определяют относительное содержание СД16+ и СД3+ клеток и при их соотношении, меньшем или равном 0,11, прогнозируют наступление преждевременных родов при угрожающих преждевременных родах (патент РФ N 2132069, 20.06.99).

Описан способ прогнозирования угрозы прерывания беременности, индуцированной инфекцией, описанный Mattsby-Baltzer I, в журнале Acta Obstet Gynecol Scand, 1998, N 7, стр.701-706, согласно которому у беременной определяют ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО в цервикальном секрете и по повышению содержания уровня данных цитокинов прогнозируют риск развития осложнений данной беременности.

Описан метод доклинической диагностики преждевременных родов инфекционного генеза по определению ИЛ-1b, ИЛ-6, ФНО в периферической крови и цервикальном секрете, повышение уровня которых служит маркерами неблагополучия на ранних этапах беременности (Тетруашвили Н.К., "Роль системы цитокинов в патогенезе привычного выкидыша и преждевременных родов", Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов 1999, N3, стр.37-44).

Прототипом изобретения выбран способ оценки риска прерывания беременности, описанный Oleszczuk J, в журнале Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 1997, N 74, р.27-30. Авторы исследовали уровень ИЛ-6, неоптерина и С-реактивного белка в периферической крови женщин в 28-36 недель беременности с признаками прерывания беременности и лабораторными маркерами инфекции. Ими было установлено, что ИЛ-6, неоптерин и С-реактивный белок могут быть маркерами прерывания беременности, вызванного инфекцией.

Способ обладает рядом недостатков.

1) Определение концентрации только цитокинов не может считаться адекватным подходом к оценке клеточного иммунитета, это связано с коротким периодом полужизни цитокинов, которые быстро связываются со специфическими рецепторами, представленными на клетках-мишенях или циркулирующими в кровотоке. В связи с этим для оценки клеточного звена иммунного ответа представляется оптимальным измерение содержания биологически более инертного продукта.

2) Экономически более несообразно определение определение одного значимого маркера воспаления, например неоптерина, поскольку его концентрация отражает совместное действие различных цитокинов на популяцию моноцитов/макрофагов.

3) Уровень провоспалительных цитокинов, индуцируемых инфекцией, в периферической крови становится высоким, однако цитокины являются локальными медиаторами, следовательно, целесообразно также их определение и на местном уровне.

4) В исследовании не приводятся данные по определению конкретных показателей неоптерина, позволяющих акушеру-гинекологу сделать вывод об отборе женщин в группу риска.

5) Авторы не указывают на изменение уровня исследуемых маркеров в ранние сроки беременности.

Указанные недостатки устраняются в данном заявляемом способе.

Задача изобретения - повышение точности прогнозирования угрозы прерывания беременности в 1 триместре при верифицированной урогенитальной инфекции для назначения своевременной адекватной терапии.

Поставленная задача решается тем, что у беременных женщин 1 триместра с верифицированной урогенитальной инфекцией проводят одновременное определение в сыворотке периферической крови и цервикальной слизи неоптерина и при значении неоптерина в крови выше 3,2±0,7 нг/мл, в цервикальной слизи выше 10,1±6,4 нг/мл прогнозируют высокий риск невынашивания беременности в 1 триместре.

Данный способ позволяет определить с высокой точностью, чувствительностью и специфичностью угрозу прерывания беременности при наличии маркеров урогенитальной инфекции для проведения своевременной адекватной терапии.

Известно, что неоптерин это ранний маркер клеточной активации, является чувствительным индикатором серьезности воспалительного процесса инфекционного генеза. В организме человека синтез неоптерина начинается под воздействием освобождающегося из Т-лимфоцитов интерферона Y, который активирует ГТФ - циклогидроксилазу - ключевой фермент в цепи превращения ГТФ в неоптерин (Шевченко О.П.; Олефиренко Г.А., Орлова О.В., 2000). Определение концентрации неоптерина играет прогностическую роль при аутоиммунных, хронических инфекционных заболеваниях, в трансплангалогии, однако в литературе не встречается примеров использования изменения содержания этого показателя при угрозе прерывания беременности и урогенитальной инфекции. Уровень неоптерина по данным (Burns D.N., Nourjah P., Wright D.J., 1999) значительно повышается перед родами.

Все вышеуказанное явилось основанием для исследований изменения уровня неоптерина в периферической крови и цервикальном секрете для прогноза невынашивания беременности при урогенитальной инфекции, т.к. обнаружение повышения уровня неоптерина на локальном и системном уровне свидетельствует о выраженности воспалительного процесса. Наши исследования позволили установить очень важные количественные величины неоптерина, которые являются показательными для отбора беременных женщин в группу риска.

Технический результат, получаемый в результате реализации предложенного способа, состоит в том, что заявляемый способ позволит контролировать динамику течения беременности и прогнозировать степень риска невынашивания беременности, оценить эффективность проводимой терапии. Сочетание тестов на неоптерин в периферической крови и слизи цервикального канала позволяет повысить точность и эффективность прогнозирования невынашивания беременности.

Способ осуществляется следующим образом.

У беременной в сроке до 12-13 недель исследуют периферическую кровь и цервикальную слизь. 3 мл крови из локтевой вены забирают в сухую центрифужную пробирку, отстаивают 20 минут при комнатной температуре. Гуморальную фракцию крови получают стандартным методом скоростного центрифугирования при 1500 оборотов в минуту в течение 20 минут. Сыворотку отбирают в пробирки типа Ependorf. Смыв секрета цервикального канала производится 1 мл физиологического раствора, после чего аспират помещается в пробирку для гомогенизации. Определение уровня неоптерина проводят методом иммуноферментного анализа с использованием тест-системы IBL (Германия). Учет реакции проводят на мультискане при длине волны 450 нм. При получении уровня неоптерина в периферической крови 3,2 нг/мл или выше и в цервикальной слизи 10,1 нг/мл и выше, прогнозируют угрожающее состояние беременности.

Материально-техническое обеспечение метода

Мультискан ORGANON TEHNIKA (Финляндия), диагностические тест-системы для определения неоптерина фирмы IBL, Германия, центрифуга (рег.N 93/199-262).

Пример 1

Беременная К-ко., 26 лет. Беременность 2-я, в анамнезе медицинский аборт, осложненный дисфункциональным кровотечением, хронический тонзиллит. На учете в женской консультации по беременности состоит с 7 недель. Обследована, жалоб не предъявляла. При наружном осмотре в зеркалах - эндоцервицит, шейка матки гипертрофирована, тонус матки не повышен. При ПЦР-диагностике выявлены Ureaplasma urealiticum, Micoplasma homynis, Trichomonas vaginalis. Определен уровень неоптерина в крови 3,2 нг/мл, в цервикальной слизи 10,1 нг/мл. Заключение: прогнозируется высокий риск угрозы прерывания беременности. В сроке 12-недель беременности появились клинические признаки угрозы невынашивания беременности: обильные кровянистые выделения из половых путей, тянущие боли внизу живота. Беременная госпитализирована в специализированный стационар с диагнозом при поступлении: Угроза самоаборта. При осмотре шейка матки конической формы, размягчена на всем протяжении, матка легко возбудима. По данным УЗИ - беременность 12 недель, участок отслойки ветвистого хориона, риск низкой плацентации. В стационаре проведена сохраняющая и антибактериальная терапия, однако тянущие боли внизу живота усилились, перешли в схваткообразные. При УЗ-диагностике диагносцирована отслойка хориона. В сроке 13 недель произошло прерывание беременности, что подтвердило прогноз, сделанный по заявляемому способу.

Пример 2

Беременная С-ая, 22 лет. Беременность первая, наступила спонтанно. За год до наступления беременности терапия уреаплазмоза, генитального герпеса, лазерокоагуляция эрозии шейки матки. На учете в женской консультации с 6-7 недель беременности. Жалоб не предъявляла. При осмотре матка вне тонуса, размеры соответствуют сроку беременности. При наружном осмотре в зеркалах шейка матки с явлениями эндоцервивита, наружный зев закрыт. При ПЦР-диагностике выявлены Ureaplasma urealiticum, Mycoplasma hominis. Беременная обследована по заявляемому способу. Неоптерин в крови 3,0 нг/мл, в цервикальной слизи 9,8 нг/мл.

Заключение: риск прерывания беременности отсутствует. Беременность протекала без осложнений. Роды произошли в срок.

Пример 3

Беременная Б-ва, 24 лет. Беременность 3-я. В анамнезе 2 самоаборта в сроке 7-8 недель (abrasio cavi uteri), хронический аднексит, хронический гнойный средний отит, гайморит, метроэндометрит. На учете в женской консультации с 7-8 недель. Жалоб не предъявляла. При наружном осмотре в зеркалах шейка матки эрозирована с явлениями эндоцервицита. При ПЦР-диагностике обнаружены Ureaplasma parvo, Chlamydia trachomatis, Herpes virus тип 2. Беременная обследована по заявляемому способу.

Неоптерин в крови 3,8 нг/мл, в цервикальной слизи 16,4 нг/мл. Заключение: прогнозируется высокий риск прерывания беременности. В сроке 9-10 недель беременность осложнилась явлениями угрозы прерывания, появились жалобы на тянущие боли в поясничной области и внизу живота, мажущие кровянистые выделения из половых путей. Женщина госпитализирована в отделение патологии беременности НИИАП с диагнозом: Беременность 9-10 недель, ОАА, угроза аборта, ранний гестоз. При обследовании тонус матки повышен. По результатам УЗИ выявлен участок отслойки хориона, риск низкой плацентации, нарушение маточно-плацентарной гемодинамики. В стационаре проводилась общепринятая сохраняющая терапия. Однако в сроке 10-11 недель при УЗИ отмечены явления начавшегося аборта. Беременность прервалась. Прогноз прерывания беременности по заявляемому способу подтвердился.

Достоверность способа подтверждена клинико-лабораторными исследованиями. По заявляемому способу было обследовано 300 женщин в сроке беременности от 7 до 13 недель с верифицированной урогенитальной инфекцией. У 210 женщин уровень неоптерина в периферической крови составил 3,2±0,7 нг/мл, в цервикальной слизи от 10,1±6,4 нг/мл, что свидетельствовало о неблагоприятном прогнозе течения беременности. У 98 процентов из этих обследованных верифицирована угроза прерывания беременности. Обследуемые были разделены на две группы. В 1-й группе (150 женщин) проводилось лечение как урогенитальной инфекции, так и угрожающего течения беременности. В данной группе прерывание беременности произошло только у 4,8 процентов женщин. Во 2-й группе (70 женщин) с выявленной угрозой прерывания беременности патогенетическая терапия не проводилась. В данной группе процент невынашивания составил 12,7. Таким образом, заявляемый способ позволяет значительно снизить перинатальные потери за счет своевременного выявления беременных группы риска и выбора акушерской тактики.

Данный способ обладает высокой точностью, быстротой исполнения с использованием стандартных тест-систем, что позволяет широко использовать его в практическом здравоохранении.