способ моделирования кишечной инфекции у мелких лабораторных животных

Формула изобретения

Способ моделирования клебсиелезной кишечной инфекции у мелких лабораторных животных, включающий однократное введение через зонд в желудок культуры Klebsiella pneumoniae, отличающийся тем, что используют культуру Klebsiella pneumoniae: штамм NCTC - 5054, которую вводят в дозе 10⁹ микробных тел на 1 кг массы тела через 6 суток после создания иммунодефицитного состояния подкожной инъекцией 2,5%-ной эмульсии гидрокортизона ацетата в дозе 0,125 мг/100 г массы тела трижды с интервалом в 2 дня.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальному моделированию патологических состояний, в частности синдрома избыточной колонизации тонкой кишки (СИК), и может найти применение при изучении механизмов патогенеза СИК и для оценки эффективности способов его лечения.

Известен способ моделирования вторичного иммунодефицитного состояния организма путем иммунизации животного антигеном (Авторское свидетельство СССР 934534, М.Кл. G 09 В 23/28).

Недостатками этого метода является трудоемкость получения антигена, длительность эксперимента.

Известно моделирование кишечного дисбактериоза, при котором удаляют вилочковую железу. Через 7 месяцев возникает дисбактериоз кишечника, который может существовать 6-8 месяцев (Авторское свидетельство СССР 1562952, G 09 B 23/28).

В этом случае резко угнетенный иммунный статус не поддается коррекции, и длительность эксперимента в 7-14 месяцев не пригодна для крыс.

Известен способ моделирования клебсиеллезной кишечной инфекции у кроликов (Авторское свидетельство СССР № 1707615 А1, G 09 В 23/28).

В этой модели патологический процесс носит острый характер.

Задачей изобретения является создание синдрома избыточной колонизации тонкой кишки (СИК) у мелких лабораторных животных (крыс).

Поставленная задача решается тем, что в способе моделирования кишечной инфекции, включающем введение Klebsiela pneumoniae, перед введением создают иммунодефицитное состояние с помощью инъекции 2,5% раствора гидрокортизона ацетата в количестве 0,125 мг/100 г массы тела трижды с интервалом 2 дня, через 6 суток вводят культуру клебсиеллы (штамм NCTC-5054) в дозе 10⁹ микробных тел на кг массы тела.

Под синдромом избыточной колонизации тонкой кишки подразумевают повышенную концентрацию в ней бактериальных популяций, аналогичных по видовому и количественному составу микрофлоре толстой кишки и фекалий. У здорового человека в двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишке количество бактерий незначительно (до 104-108 в 1 г содержимого), при СИК количество условно патогенных бактерий в тонкой кишке возрастает в десятки раз. Одним из факторов, лежащих в основе СИК в клинике, является иммунодефицит.

При моделировании клебсиеллезной кишечной инфекции у мелких лабораторных животных (крыс) перед инфицированием Klebsiella pneumoniae создают иммунодефицитное состояние с помощью инъекций 2,5% раствора гидрокортизона ацетата в количестве 0,125 мг/100 г массы тела. Таким образом, за счет полного воспроизведения патогенетических механизмов экспериментальная модель приближается к клиническим формам течения СИК.

Для оценки динамики течения заболевания используют общеклинические данные, общий анализ крови и лейкограмму, показатели фагоцитарной и функциональной активности лейкоцитов, морфометрические показатели лимфатических узлов, бактериологическое исследование.

Эксперимент проводят на белых крысах массой 180-200 г, которых методом случайных чисел делят на опытную и контрольную группы. Животным опытной группы подкожно вводят 2,5% эмульсию гидрокортизона ацетата в дозе 0,125 г/100 г массы тела 3 раза с интервалом в 2 дня. Через 6 суток после начала эксперимента всем животным через зонд в желудок вводят суточую культуру Klebsiella pneumoniae (NCTC-5054) в дозе 10⁹ микробных тел на кг массы тела.

После инъекций гидрокортизона животные теряют массу тела (до 20% за 14 суток), становятся малоактивными, грязными, отказываются от пищи. Животные из контрольной группы внешне выглядят здоровыми.

Забивают животных под эфирным наркозом через 7 и 14 суток после начала эксперимента. При осмотре брюшной полости крыс опытной группы выявлено вздутие петель тонкой кишки, гипоплазия и атрофия мезентериальных лимфатических узлов и пейеровых бляшек, у двух крыс в брюшной полости обнаружен экссудат. У животных контрольной группы видимых макроскопически патолгических изменений не обнаружено.

При сравнительном анализе популяции тучных клеток брыжейки тонкой кишки у животных с иммунодепрессией отмечено уменьшение общего числа тучных клеток (на 26%) и снижение степени дегрануляции их (особенно 2-3 степени). При исследовании показателей крови отмечена лимфопения (снижение количества Т-лимфоцитов до 36% и В-лимфоцитов до 10%), лейкоцитоз, повышение СОЭ. Несмотря на повышение количества лейкоцитов в периферической крови при вторичном иммунодефиците хемотаксические свойства лейкоцитов, поглотительные и переваривающие функции их снижаются. Фагоцитарный индекс составил 35,6±0,6%, фагоцитарное число - 2,5±0,1, в то время как в контрольных исследованиях эти значения - 73,8±0,6% и - 5,15±0,1 соответственно. Количество лейкоцитов, восстанавливающих нитросиний тетразолий, у животных, которые получали гидрокортизон, составляет 0-1%, у контрольной группы - 15,6%±0,8. При бактериологическом исследовании содержимого тонкой кишки опытных животных обнаружен массивный рост К. pneumoniae (24 млн колониеобразующих единиц), который сохранялся до 14 суток течения заболевания. При исследовании структурно-функциональной организации лимфатических узлов обнаружено опустошение Т- и В-зависимых зон и резкое уменьшение их площади по сравнению с контролем.

Таким образом, предлагаемый способ имеет следующие преимущества по сравнению с известными:

- позволяет в короткие сроки получить адекватную модель синдрома избыточной колонизации бактерий тонкой кишки с учетом полного воспроизведения патогенетических механизмов;

- позволяет контролировать длительность течения воспроизводимого в эксперименте заболевания;

- позволяет проводить медикаментозную коррекцию;

- наглядно показывает необходимость санации кишечника при СИК.