способ прогнозирования течения инфекционного мононуклеоза у детей

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения инфекционного мононуклеоза у детей, включающий отбор пробы биологической жидкости и ее исследование, отличающийся тем, что пробу отбирают со слизистой ротоглотки, разводят ее в соотношении 1:1 физиологическим раствором, выдерживают в диагностической ячейке 20-24 ч, затем микроскопируют в поляризационном свете и при выявлении разветвленных морфоструктур конфокальных доменов и анизотропных структур в виде нитей проогнозируют благоприятное течение инфекционного мононуклеоза, а при выявлении пластовых конфокальных доменов с обильным черным налетом и анизотропными структурами в виде густой сети нитей и сферолитов прогнозируют неблагоприятное течение инфекционного мононуклеоза у детей.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике инфекционных болезней у детей, в частности к инфекционному мононуклеозу (ИМ), обусловленному Эпштейна-Барр вирусом (ЭБВ), и может быть использовано при прогнозировании течения заболевания.

ИМ характеризуется системным лимфопролиферативным процессом доброкачественного характера, общей интоксикацией, лихорадочным состоянием, поражением ротоглотки и носоглотки, увеличением печени и селезенки, наличием атипичных мононуклеаров в периферической крови. Многообразие клинических проявлений ИМ вызывает определенные трудности при установлении своевременного и правильного диагноза, а в последующем и определения прогноза. Наряду с выздоровлением отмечается возможность развития осложнений и неблагоприятного течения ИМ, в том числе у 20% детей после выписки из стационара имеет место возврат симптоматики острого периода, у половины больных рецидивирующее течение, в 2/3 случаев склонность к частым острым респираторным вирусным инфекциям или бактериальным тонзиллитам.

Известен способ лабораторной диагностики инфекционного мононуклеоза у детей, который заключается в проведении иммуноферментного анализа (ИФА) и раздельнного определения антител класса иммуноглобулинов М (IgM) и G (IgG) к антигенам ЭБВ (М.В.Филатова и др. Клинико-лабораторная характеристика больных инфекционным мононуклеозом. Сб. Актуальные вопросы вирусно-бактериальных инфекций у детей, М.: МОНИКИ, 2000, с.35-37).

Данный способ является информативным и специфическим методом лабораторной диагностики ИМ, позволяющим лабораторно подтвердить диагноз ИМ в ранние сроки болезни и судить о сроках инфекционного процесса, обусловленного ЭБВ.

Недостатками данного способа является то, что он инвазивный, дорогостоящий, не отражает степень воспалительного процесса и не позволяет прогнозировать течение ИМ.

Известен способ диагностики инфекционного мононуклеоза у детей (Х.Д.Перадзе Эффективность применения ПЦР и иммуноблот-диагностики Эпштейн-Барр вирусной инфекции у подростков и взрослых. Матер. конференции Перспективы снижения инфекционной заболеваемости и летальности детей: патогенез, терапия, профилактика. - СПб, 2001, с.51).

Известный способ заключается в том, что в отделяемом со слизистой ротоглотки больного с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяют ДНК-ЭБВ.

Данный метод не инвазивен и имеет высокую специфичность ПЦР для подтверждения этиологии ИМ.

Однако продолжительные сроки обнаружения возбудителя не могут служить фактором прогнозирования течения заболевания как в остром периоде, так и в периоде реконвалесценции, когда могут возникать обострения, рецидивы.

Наиболее близким к предлагаемому является способ прогнозирования течения инфекционного мононуклеоза у детей, включающий отбор пробы биологической жидкости и ее исследование (В.Ф.Учайкин. Руководство по инфекционным болезням у детей. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001, с.262-274).

Данный способ основан на исследовании в периферическом анализе крови гематологических изменений у больных сегментоядерной нейтропении по увеличению количества палочкоядерных и одноядерных элементов, наличию атипичных мононуклеаров - самому характерному признаку ИМ - и связи их количества с тяжестью болезни.

Однако гематологические изменения не всегда постоянны и могут наблюдаться и при других инфекционных заболеваниях, в том числе протекающих с мононуклеозоподобным синдромом, что снижает достоверность исследований, кроме того, данный способ трудоемок.

В связи с вышеизложенным задачей настоящего изобретения является повышение достоверности исследований, специфичности и доступности метода, ускорения получения результатов, что позволит в ранние сроки определять степени поражения ротоглотки и на основании этого прогнозировать течение ИМ.

Предлагаемый способ диагностики неинвазивен, так как проба, отбираемая для исследования (смывы со слизистой ротоглотки - миндалин, задней стенки глотки) берется непосредственно из очага поражения. Оценка степени воспалительного поражения ротоглотки и прогноз течения ИМ проводится путем кристаллополяризационного исследования отделяемого со слизистой ротоглотки.

Для решения этой задачи в способе прогнозирования течения инфекционного мононуклеоза у детей, включающем отбор пробы биологической жидкости и ее исследование, предложено пробу отбирать со слизистой ротоглотки, разводить ее в соотношении 1:1 физиологическим раствором, выдерживать в диагностической ячейке 20-24 часа, затем микроскопировать в поляризационном свете и при выявлении разветвленных морфоструктур конфокальных доменов и анизотропных структур в виде нитей прогнозировать благоприятное течение инфекционного мононуклеоза, а при выявлении пластовых конфокальных доменов с обильным черным налетом и анизотропными структурами в виде густой сети нитей и сферолитов прогнозировать неблагоприятное течение инфекционного мононуклеоза.

На фиг.1 изображен фрагмент исследуемой пробы - пример 1.

На фиг.2 то же - пример 2.

Способ осуществляют следующим образом.

Пробу смыва со слизистой ротоглотки разводят в соотношении 1:1 с физиологическим раствором, помещают ее в диагностическую ячейку. Выдерживают 20-24 часа при комнатной температуре, после чего исследуют поляризационно-оптическим методом в скрещенных лучах. При этом определяют характер наличных анизотропных структур вирусной и бактериальной принадлежности, форму и толщину конфокальных комплексов, наличие и степень выраженности черного органического налета (продукты токсико-катаболических реакций) и при выявлении разветвленных морфоструктур конфокальных доменов и анизотропных структур в виде нитей прогнозируют благоприятное течение инфекционного мононуклеоза, а при наличии пластовых конфокальных доменов с обильным черным налетом и анизотропными структурами в виде густой сети нитей и сферолитов прогнозируют неблагоприятное течение инфекционного мононуклеоза.

Применение данного способа при обследовании 20 больных ИМ (40 исследований), обусловленного ЭБВ, позволило быстро, неинвазивно, недорого оценить степень выраженности воспалительного процесса в ротоглотке и определить возможный прогноз течения заболевания.

Способ поясняется конкретными клиническими примерами.

Пример 1.

Больной Л., 2 года 2 мес, поступил в стационар 04.12.03 г., на 6-й день болезни.

Заболел остро, подъем температуры тела до 38,5°С, слабость, сонливость, рвота, боль при глотании. При поступлении состояние ребенка расценено как среднетяжелое, выражены явления интоксикации (бледность кожных покровов, сонливость, снижение аппетита), пастозность лица, затруднение носового дыхания, "храпящее" во сне, болезненность при глотании, полиаденопатия. Слизистая оболочка ротоглотки ярко гиперемирована, небные миндалины увеличены до III степени, покрыты гнойным налетом. Увеличение печени до 2 см (из-под края реберной дуги), селезенки до 1 см. Клинический диагноз: инфекционный мононуклеоз, типичная, среднетяжелая форма, лабораторно подтвержденный обнаружением в крови больного методом ИФА ранних антител к ЭБВ, ПЦР - в смывах со слизистой ротоглотки ДНК-ЭБВ.

При кристаллографии отделяемого со слизистой ротоглотки больного при поступлении выявлена разветвленная система морфоструктур конфокальных доменов шириной от 17 до 20 мкм и нитевидные анизотропные структуры, разбросанные по всему препарату, что свидетельствует о благоприятном течении ИМ.

На фоне комплексной терапии, включавшей парентерально цефазолин, супрастин, ректально Кипферон, сосудосуживающие капли в нос, гексорал-спрей на пораженные участки слизистой ротоглотки отмечено улучшение в состоянии ребенка: купировались явления интоксикация, носовое дыхание свободное, миндалины уменьшились до II степени и очистились от налетов, уменьшились размеры периферические лимфатические узлов, печени, селезенки.

В поляризационно-оптическом анализе, проведенном после лечения больного, обнаружено небольшое количество конфокальных доменов до 3-4 мкм.

Ребенок выписан домой на 7 день пребывания в стационаре в удовлетворительном состоянии. На 18 день от начала болезни в смывах со слизистой ротоглотки методом ПЦР выявлена ДНК-ЭБВ.

При катамнестическом наблюдении через 1 и 6 месяцев период реконвалесценции протекал гладко, что подтверждает прогноз.

Пример 2.

Больной Д., 4-х лет, с отягощенным преморбидным фоном: частые острые респираторные вирусные инфекции, хронический тонзиллит, лекарственная аллергия. Поступил в стационар 06.11.03 г., на 15 день болезни, в состоянии средней тяжести. Отмечались явления интоксикации (вялость, бледность кожных покровов, синева под глазами, снижение аппетита), субфебрильная лихорадка, затруднение носового дыхания, "храпящее" во сне, пастозность век и одутловатость лица, гнилостный запах изо рта, яркая гиперемия слизистой ротоглотки, гипертрофия миндалин до III степени с серо-желтым на них налетом, полиаденопатия с преимущественным увеличением подчелюстных, переднешейных лимфоузлов до 3,0 см. Печень выступала из-под края реберной дуги на 3,0 см, селезенка на 2,0 см. Диагностирован инфекционный мононуклеоз, типичная, среднетяжелая форма, подтвержденный ИФА обнаружением в крови ранних антител в классе иммуноглобулинов М, методом ПЦР в смывах со слизистой ротоглотки - ДНК-ЭБВ.

При кристаллооптическом исследовании смывов со слизистой ротоглотки выявлено наличие пластовых конфокальных доменов шириной от 40 до 80 мкм, с обильным черным налетом шириной от 1 до 8 мкм, густо пронизанных анизотропными структурами, в виде сети нитей и сферолитов. Полученный рисунок свидетельствовал о выраженном воспалительном процессе в ротоглотке, на основании этого можно сделать заключение о неблагоприятном течении ИМ.

После проведения комплексной терапии, включающей линкомицин, супрастин, гидрокортизон, кипферон-суппозитории, аципол, сосудосуживающие капли в нос, гексорал-спрей, состояние больного улучшилось, на 3 сутки температура тела снизилась до нормальных цифр, в последующем носовое дыхание свободное, миндалины уменьшились до II степени и очистились от налетов, уменьшились размеры периферические лимфатические узлы, в том числе подчелюстных и переднешейных до 1,5 см, печени и селезенки до 2 см и 0,5 см соответственно.

Кристаллооптическое исследование смывов со слизистой ротоглотки, проведенное в динамике, выявило разветвленные закругленные конфокальные структуры разной ширины от 20 до 50 мкм с включениями нитевидных анизоропных структур и сферолитов.

Выписан домой 14.11.03 г. в удовлетворительном состоянии.

В смывах со слизистой ротоглотки от 18.11.03. г. (27 день от начала болезни) методом ПЦР обнаружена ДНК-ЭБВ.

При катамнестическом наблюдении после выписки из стационара через 2 недели у ребенка имело место возврат симптоматики острого периода, что потребовало назначение в течение 5 дней кипферона-суппозиториев. В последующем в течение года у мальчика отмечались редко острые респираторные вирусные инфекции. Но при осмотре 30.10.04 г., через 11 месяцев от начала болезни у ребенка выявлены затруднение носового дыхания, гипертрофия миндалин III степени, увеличение подчелюстных и переднешейных лимфоузлов до 1 см, что является подтверждением неблагоприятного прогноза исхода течения ИМ.

Использование данного изобретения позволит в ранние сроки, простым, доступным методом провести достоверный прогноз течения ИМ, на основании чего своевременно провести соответствующее лечение и необходимую профилактику.