способ приготовления раствора фармацевтической композиции на основе субстанции генно-инженерного (рекомбинантного) инсулина человека

Формула изобретения

Способ приготовления раствора фармацевтической композиции на основе субстанции генно-инженерного рекомбинантного инсулина человека, включающий приготовление растворов инсулина и вспомогательных веществ, их смешивание, стерилизующую фильтрацию в розлив во флаконы, отличающийся тем, что предварительно готовят буферный раствор, содержащий 2,35-2,45 мг натрия фосфорно-кислого двузамещенного, 2,25-3,0 мг м-крезола и 15-17 мг глицерина из расчета на 100 ЕД инсулина, затем - раствор инсулина при рН 3,1-3,3, который добавляют к буферному раствору, смешивание растворов проводят при перемешивании 10-20 мин, устанавливают рН 7,2-7,4 и добавляют воду до конечной концентрации инсулина в препарате 100 МЕ/мл.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к получению применяемых в терапии сахарного диабета препаратов инсулина быстрого действия, и может быть использовано в фармацевтической промышленности для изготовления раствора отечественного генно-инженерного (рекомбинантного) инсулина человека 100 МЕ/мл для инъекций во флаконах.

Известен способ приготовления препарата раствора свиного монокомпонентного инсулина, предназначенного для розлива в картриджи (Патент РФ 2157238, МКИ А 61 К 38/28, опубл. 10.10.2000). По этому способу при подготовке препарата используют субстанцию свиного инсулина, простерилизованную с помощью предфильтра с диаметром пор 0,45 мкм и фильтра с диаметром пор 0,22 мкм, а в качестве консерванта применяют нипагин. Недостатками известного способа являются:

а) использование в качестве консерванта нипагина, для растворения которого требуется нагревание его смеси с водой до температуры 85-90°С с последующим охлаждением при тщательном контроле температуры из-за возможного обратного осаждения консерванта; б) необходимость проведения предварительной фильтрации перед стерилизующей фильтрацией.

Известен наиболее близкий к заявленному способ приготовления раствора генно-инженерного человеческого инсулина с дополнительным внесением хлорида цинка, применением в качестве консерванта м-крезола и исключением предварительной фильтрации перед осуществлением стерилизующей фильтрации (Пат. РФ №2184533, МКИ А 61 К 9/08, опубл. 07.10.2002).

Известный способ не позволяет получить инсулин с высокими показателями качества и стабильности при хранении: содержание высокомолекулярных белков составляет при получении 0,4% и повышается при хранении в течение года до 1%, а количество дезамидоинсулина составляет при получении препарата 0,9% и повышается при хранении в течение года более чем в 2 раза.

Изобретение решает задачу получения раствора фармацевтической композиции на основе субстанции отечественного генно-инженерного (рекомбинантного) инсулина человека 100 МЕ/мл для розлива его во флаконы с повышенными чистотой и стабильностью при хранении.

Поставленная задача решается за счет того, что в способе приготовления раствора фармацевтической композиции на основе субстанции генно-инженерного рекомбинантного инсулина человека, включающем приготовление растворов инсулина и вспомогательных веществ, их смешивание, стерилизующую фильтрацию и розлив во флаконы, предварительно готовят буферный раствор, содержащий 2,35-2,45 мг натрия фосфорнокислого двузамещенного, 2,25-3,0 мг м-крезола и 15-17 мг глицерина из расчета на 100 ME инсулина, затем - раствор инсулина при рН 3,1-3,3, который добавляют к буферному раствору, смешивание растворов проводят при перемешивании 10-20 мин, устанавливают рН 7,2-7,4 и добавляют воду до конечной концентрации инсулина в препарате 100 МЕ/мл.

Заявленный способ осуществляют следующим образом.

Готовят предварительно растворы следующих компонентов (в расчете на 1 мл инъекционной воды): 2,35-2,45 мг натрия фосфорнокислого двузамещенного растворяют в воде при перемешивании, затем вносят 15-17 мг глицерина и перемешивают до однородности (раствор 1). Параллельно готовят раствор 2,25-3,0 мг м-крезола и добавляют к раствору 1.

Получают буферный раствор.

3,67 мг субстанции отечественного генно-инженерного инсулина человека (при активности субстанции 27,5 МЕ/мг) смешивают с водой для инъекций, смесь суспендируют, подкисляют 0,1М раствором соляной кислоты и перемешивают до полного растворения инсулина (рН должен быть не ниже 3,1).

В емкость с буферным раствором при перемешивании магнитной мешалкой (со скоростью 60-80 об/мин) медленно добавляют раствор инсулина. Перемешивают 10-20 минут и контролируют рН. При необходимости рН корректируют 0,1N раствором натрия гидроокиси или 0,1N раствором соляной кислоты до рН 7,2-7,4.

Свежеприготовленный с температурой не выше 20°С раствор направляют на стерилизующую фильтрацию. Фильтрацию проводят на фильтровальной системе «Stericup Filter Units» («Миллипор», США), объем фильтрования 1000 мл, размер пор 0,22 мкм.

Далее раствор разливают во флаконы на автоматическом поршневом медицинском дозаторе (АО «Медлабортехника», Украина).

Технический результат заявленного способа заключается в приготовлении раствора отечественного генно-инженерного инсулина человека для флаконов, сохраняющего свои физико-химические и биологические свойства при хранении в течение длительного времени, т.е. более стабильного при хранении (см. таблицу). Для препарата получена Фармакопейная статья предприятия ФСП №42-0452-5919-04.

Разработка заявленного препарата дает возможность обеспечить здравоохранение новым эффективным и недорогим отечественным средством для лечения сахарного диабета и существенно сократить импорт дорогостоящих зарубежных препаратов.

Заявленный способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1

В емкость вместимостью 1,5 л загружают 2,35 г натрия фосфорнокислого двузамещенного и 200 мл воды для инъекций. Раствор перемешивают до полного растворения соли. Затем вносят 15 г глицерина и перемешивают до однородности. В стакане емкостью 50 мл взвешивают 2,25 г м-крезола, растворяют его в 30 мл воды для инъекций при перемешивании и переносят раствор в емкость с раствором натрия фосфорнокислого, смывая стакан несколько раз водой для инъекций. Объем буферного раствора доводят водой для инъекций до объема 700 мл, рН раствора 8,3. Получают буферный раствор.

В емкость объемом 500 мл вносят 3,67 мг субстанции отечественного генно-инженерного инсулина человека (при активности субстанции 27,5 МЕ/мг) и 150 мл воды для инъекций. Смесь суспендируют, подкисляют 0,1N раствором соляной кислоты и перемешивают до полного растворения инсулина (рН 3,1). Объем инсулинового раствора доводят водой для инъекций до 300 мл.

В емкость с буферным раствором при перемешивании магнитной мешалкой (со скоростью 60-80 об/мин) медленно добавляют раствор инсулина. Перемешивают 10 минут, рН=7,2. При необходимости рН корректируют раствором 0,1N NaOH или 0,1N HCl. Свежеприготовленный с температурой не выше 20°С раствор направляют на стерилизующую фильтрацию. Далее раствор разливают во флаконы. Свойства препарата представлены в таблице.

Пример 2.

В емкость вместимостью 1,5 л загружают 2,45 г натрия фосфорнокислого двузамещенного и 200 мл воды для инъекций. Раствор перемешивают до полного растворения соли. Затем вносят 17 г глицерина и перемешивают до однородности. В стакане емкостью 50 мл взвешивают 3,0 г м-крезола, растворяют его в 30 мл воды для инъекций при перемешивании и переносят раствор в емкость с раствором натрия фосфорнокислого, смывая стакан несколько раз водой для инъекций. Объем буферного раствора доводят водой для инъекций до объема 700 мл, рН раствора 8,5. Получают буферный раствор.

В емкость объемом 500 мл вносят 3,67 мг субстанции отечественного генно-инженерного инсулина человека (при активности субстанции 27,5 МЕ/мг) и 150 мл воды для инъекций. Смесь суспендируют, подкисляют 0,1N раствором соляной кислоты и перемешивают до полного растворения инсулина ( рН 3,1). Объем инсулинового раствора доводят водой для инъекций до 300 мл.

Далее в емкость с буферным раствором при перемешивании магнитной мешалкой (со скоростью 80 об/мин) медленно добавляют раствор инсулина. Перемешивают 20 минут, рН=7,4.

В емкость с буферным раствором при перемешивании магнитной мешалкой (со скоростью 60-80 об/мин) медленно добавляют раствор инсулина. Перемешивают 10 минут, рН=7,2. При необходимости рН корректируют раствором 0,1N NaOH или 0,1N HCl. Свежеприготовленный с температурой не выше 20°С раствор направляют на стерилизующую фильтрацию с последующим розливом во флаконы. Свойства препарата представлены в таблице.

Таблица Свойства раствора генно-инженерного (рекомбинантного) инсулина человека во флаконах.
Тесты и нормы			Примеры
			1				2
			После розлива	Через 6 мес.	Через 12 мес.	Через 18 мес.	Через 24 мес.	После розлива	Через 6 мес.	Через 12 мес.	Через 18 мес.	Через 24 мес.
Описание	Бесцветная прозрачная или почти прозрачная жидкость		+	+	+	+	+	+	+	+	+	+
Прозрачность	Мутность не> эталона №1 ГФ XI, в.2		Прозр.	Прозр.	Прозр.	Прозр.	Прозр.	Прозр.	Прозр.	Прозр.	Прозр.	Прозр.
рН	Потенцио-метрически	7,2-7,4	7,22	7,21	7,19	7,20	7,22	7,40	7,38	7,41	7,41	7,40
количество дезамидо-инсулина	ВЭЖХ, % А21	Не> 1,8	0,44	0,47	0,51	0,63	0,71	0,42	0,44	0,50	0,55	0,63
Высокомолекулярные белки	ВЭЖХ, %	Не>2	0,02	0,03	0,03	0,05	0,06	0,018	0,02	0,025	0,035	0,05
Количеств. определение	ВЭЖХ, %	95-105	100,70	100,68	100,67	100,10	100,0	100,8	100,72	100,65	100,21	100,10
Другие родствен. белки	ВЭЖХ, %	Не>6	1,53	1,55	1,54	1,65	1,75	1,52	1,53	1,55	1,63	1,71
Примечание: + - удовлетворяет требованиям проекту ФСП