способ профилактики опухолевой болезни в эксперименте

Формула изобретения

Способ профилактики опухолевой болезни в эксперименте, включающий перевивку культуры опухолевых клеток, отличающийся тем, что через 1 ч после перевивки культуры опухолевых клеток экспериментальным животным у них из подключичной вены забирают 1 мл крови в герметично закрытый флакон с антикоагулянтом, добавляют туда циклофосфан, инкубируют смесь в течение 30 мин и реинфузируют крысам внутривенно струйно, процедуру проводят однократно.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а точнее к экспериментальной онкологии, и может быть использовано при разработке новых способов экспериментальной терапии опухолевой болезни и профилактики роста опухоли на ранних стадиях появления опухолевых клеток в организме.

Известен способ замедления роста солидной опухоли при применении электрических полей экстремально низкой частоты (Ghannam M.M., El-Gebaty R.H., Gader M.H., АН F.M. Inhibition of ehrlich tumor growth in mice by electric interference therapy (in vivo studies) // Electromagn. Biol. and Med. - 2002. - 21, №3. - С.255-268). Поля генерировались путем интерференции двух высокочастотных синусоидальных волн, центрированных в ядре опухоли. Результаты показали значительное замедление опухолевого роста у животных, подвергавшихся воздействию магнитного поля с интерферинциальной частотой 5 Гц по 1 часу ежедневно. Лечение по 1 часу в день давало более значимое замедление роста опухоли, чем применение аналогичного воздействия полем в течение 1 часа в неделю. Авторы отмечают ведущую роль длительности обработки в подавлении роста опухоли. Этот эффект связывают с тем, что диэлектрические свойства опухолевых клеток имеют большую удельную емкость и проводимость, чем гомологичные нормальные ткани. При этом удельная емкость опухолевых клеток, обработанных электромагнитным полем с частотой 5 Гц в ежедневном режиме, достигала значений, характерных для нормальной ткани. Гистологические исследования показали, что обработанная опухолевая ткань подвергалась частичной регрессии и содержала очень мало неопластических агрегатов.

Однако, несмотря на выраженный противоопухолевый эффект применяемого воздействия, не удается полностью предотвратить развитие и рост опухолевых клеток в организме.

Известен способ воздействия на опухолевые клетки с помощью химиопрепаратов (Островская Л.А., Блюхтерова Н.В., Фомина М.М., Рыкова В.А., Корман Д.Б., Бурлакова Е.Б. Сверхмалые дозы доксорубицина: ингибирование опухолевого роста в эксперименте // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2002. - Прил.4 - С.52-54). Изучена противоопухолевая эффективность цитостатика доксорубицина, который применяли в сверхмалых дозах на модели карциномы легких Льюис у мышей BDG ₁. Препарат вводили однократно внутрибрюшинно на следующие сутки после перевивки опухоли в дозах 10^-5, 10 ^-10, 10^-15 и 10^-20 M. Для сравнения использована стандартная терапевтическая доза доксорубицина 8 мг/кг массы тела животного, что соответствует 1,4×10 ^-3 М. Найдена способность доксорубицина в сверхмалых дозах вызывать противоопухолевый эффект при указанной постановке опыта, сопоставимый с эффектом, полученным при применении стандартной терапевтической дозы. На 12 сутки размер опухоли у экспериментальных животных, получавших стандартную и сверхмалую дозы химиопрепарата, был уменьшен в среднем на 80% по сравнению со значениями у контрольных, т.е. не получавших химиопрепаратов, животных.

Однако, несмотря на возможность значимо влиять на опухолевый рост при этом, снижая токсичность доксорубицина путем применения сверхмалых доз химиопрепарата, не удается предотвратить рост опухолевых клеток в организме животных.

Целью изобретения является предотвращение распространения и развития опухолевых клеток в организме.

Поставленная цель достигается тем, что через 1 час после перевивки культуры опухолевых клеток экспериментальным животным у них из подключичной вены забирают 1 мл крови в герметично закрытый флакон с антиоагулянтом, добавляют туда цитостатик, инкубируют смесь в течение 30 мин и реинфузируют крысам внутривенно струйно, однократно.

Анализ известных способов экспериментальных противоопухолевых воздействий дает основание говорить о новизне предлагаемого способа, которая представлена соотношением объективных показателей.

Новизна изобретения заключается в том, что для профилактики развития опухолевых клеток в организме экспериментальных животных химиопрепараты вводят после их биотрансформации аутокровью вслед за попаданием в организм опухолевых клеток.

Изобретение имеет изобретательский уровень, так как оно не известно для специалиста-онколога в этой области и явным образом не следует из уровня экспериментальной онкологии.

В доступных источниках информации России, стран СНГ и за рубежом указаний на подобный способ профилактики опухолевой болезни в эксперименте не обнаружено.

Изобретение является промышленно применимым, так как может быть многократно воспроизведено и применено в здравоохранении, в научно-исследовательских учреждениях специализированного профиля, так как может явиться основанием для разработки в клинике способов защиты от распространения опухолевых клеток во время оперативного вмешательства после манипуляций на организме, пораженном опухолевым процессом.

Способ профилактики опухолевой болезни в эксперименте осуществляется следующим образом.

Ткань экспериментальной опухоли (саркома С-45, лимфосаркома Плисса) гомогенизируют, разводят физиологическим раствором в соотношении 1:1 и имплантируют животным в подкожную жировую клетчатку в количестве 0,5 мл. Через 1 час после указанной манипуляции из подключичной вены этих крыс забирают 1 мл крови во флакон, содержащий 0,2 мл глюгицира. Флакон инкубируют при 37°С 30 мин с 40 мг циклофосфана. Затем смесь аутокровь-цитостатик реинфузируют внутривенно, струйно экспериментальным животным. В результате проведенного исследования было установлено, что опухоли не возникали и не развивались, животные жили под наблюдением в течение полугода без признаков опухолевого процесса.

Пример конкретного применения способа профилактики опухолевой болезни в эксперименте.

Опыты проводили в осенне-зимний период. Объектом исследования служили белые беспородные крысы-самцы массой 220-250 г в количестве 60 штук.

В качестве контрольных использовали две группы животных. В 1 контрольной группе 20 животным в подкожную жировую клетчатку имплантировали гомогенизированную и разведенную физиологическим раствором в соотношении 1:1 ткань экспериментальной опухоли (саркома С-45) в количестве 0,5 мл. Опухоли росли без каких-либо химиотерапевтических и других противоопухолевых воздействий. Животным - 20 крысам 2 контрольной группы, через 1 час после аналогичной перевивки в подкожную жировую клетчатку ткани опухоли внутривенно струйно вводили 40 мл циклофосфана, разведенного физиологическим раствором.

В основной группе 20 крысам в подкожную жировую клетчатку вводили 0.5 мл гомогената перевивной саркомы С-45 на физиологическом растворе так же, как и животным контрольных групп и в те же сроки. Через 1 час у этих животных из подключичной вены забирали 1 мл крови во флакон с глюгициром, инкубировали его с циклофосфаном при 37°С 30 мин и реинфузировали внутривенно.

Влияние экспериментальной химиотерапии оценивали с помощью хронометрирования латентного периода развития опухоли (подтвержденного гистологически), процента торможения роста опухоли и оценки продолжительности жизни крыс.

Было установлено, что появление гистологически верифицированных опухолевых узелков у крыс первой контрольной группы наступало через 14±3 дней от момента перевивки опухоли. Во второй контрольной группе этот срок был в среднем в 2,2 раза больше (данные представлены в таблице).

Таблица
Группы животных	Величина латентного периода(дни)	% торможения роста опухоли	Продолжительность жизни крыс (дни)
1 контрольная (п=20)	14±3		75±10
2 контрольная (п=20)	30±5	32,4	70±15
Основная (п=20)	Опухоли не появились и не развивались		Животные живы в течение 200 дней

В основной группе крыс в течение 7 месяцев не отмечено появление опухолевых узелков. Животные живы без признаков кахексии и каких-либо нарушений со стороны внутренних органов.

Таким образом, по совокупности исследуемых параметров экспериментальное воздействие по предлагаемому способу профилактирует рост и развитие опухолевых клеток в организме.

Технико-экономическая эффективность способа профилактики опухолевой болезни в эксперименте заключается в том, что при перевивке культуры опухолевых клеток экспериментальным животным используют противоопухолевые средства, инкубированные с аутокровью, что предотвращает возникновение и развитие опухолевых клеток в организме. Полученные в эксперименте результаты могут быть использованы при разработке в клинике новых способов защиты от распространения опухолевых клеток во время оперативного вмешательства.