способ и композиции для ингибирования артериосклероза

Формула изобретения

1. Способ ингибирования артериосклероза, включающий использование комбинации агента, снижающего уровень холестерина в крови, и восстановленного кофермента Q₁₀, представленного формулой (1)

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанным агентом, снижающим уровень холестерина, является ингибитор гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы.

3. Применение комбинации агента, снижающего уровень холестерина, и восстановленного кофермента Q₁₀, представленного формулой (1)

для получения лекарственного средства для ингибирования артериосклероза.

4. Применение по п.3, отличающееся тем, что указанным агентом, снижающим уровень холестерина, является ингибитор гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы.

5. Способ усиления антиоксидантной активности ЛНП в плазме, включающий использование комбинации агента, снижающего уровень холестерина, и восстановленного кофермента Q₁₀, представленного формулой (1)

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что указанным агентом, снижающим уровень холестерина, является ингибитор гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы.

7. Применение комбинации агента, снижающего уровень холестерина, и восстановленного кофермента Q₁₀, представленного формулой (1)

для получения лекарственного средства для усиления антиоксидантной активности ЛНП в плазме.

8. Применение по п.7, отличающееся тем, что указанным агентом, снижающим уровень холестерина, является ингибитор гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы.

Описание изобретения к патенту

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к способу ингибирования артериосклероза путем одновременного введения лекарственного средства, снижающего уровень холестерина в крови, например ингибитора гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы (далее называемой статином), и восстановленного кофермента Q ₁₀, присутствующего в липопротеине низкой плотности в плазме (называемом далее ЛНП) и обладающего антиоксидантной активностью ЛНП. Настоящее изобретение относится также к композиции, содержащей указанные ингредиенты.

Коронарная болезнь сердца заслуживает в настоящее время особо пристального внимания. Высказываются предположения, что в сложном пути развития артериосклероза определенную роль играет ряд факторов, которые стимулируют развитие коронарной болезни сердца, однако, главным фактором такого развития являются повышенные уровни холестерина в крови, а более конкретно действующим фактором является повышение уровня и окислительная дегенерация липопротеина низкой плотности (ЛНП), который содержит частицы холестерина.

Для предупреждения развития артериосклероза важное значение имеет снижение уровня холестерина в крови. Статины, как сообщалось, способствуют заметному снижению уровней холестерина у пациентов с гиперхолестеринемией. Статины ингибируют гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазу, скорость-определяющий фермент, участвующий в биосинтезе холестерина, в результате чего они препятствуют биосинтезу холестерина и посредством последующего снижения содержания холестерина в печени и увеличения рецепторов ЛПН приводят к снижению уровня холестерина в плазме. Однако несмотря на то, что это лекарственное средство уже было разработано примерно десять лет назад, каких-либо изменений в заболеваемости коронарной болезнью сердца пока не наблюдается, а поэтому, очевидно, что для ингибирования артериосклероза недостаточно лишь одного снижения уровня холестерина.

Что касается этиологического механизма развития артериосклероза, то существует гипотеза образования окиси ЛПН. Так, например, была высказана гипотеза, что ЛПН окисляется до окиси ЛПН, которая поглощается макрофагами, и образующиеся в результате ксантанные [пенистые] клетки осаждаются на стенках артерий, вызывая развитие артериосклероза. За последние годы было получено много результатов исследований, подтверждающих эту гипотезу. Считается, что действие гиполипидемического лекарственного средства, пробукола, против артериосклероза способствует увеличению антиоксидантной способности, но не его активности в снижении уровня холестерина. Таким образом, для ингибирования артериосклероза эффективным средством может оказаться не только снижение уровня холестерина, но также ингибирование окисления ЛПН.

Известными природными антиоксидантами, присутствующими в ЛПН, являются кофермент Q₁₀ и витамин Е. До настоящего времени витамин Е, если исходить из его избыточного присутствия в ЛПН, считался главным веществом с антиоксидантной активностью, но недавние исследования показали, что кофермент Q₁₀ является более важным фактором. Хотя кофермент Q₁₀ представляет собой молекулу, синтезируемую in vivo, однако, хорошо известно, что в его биосинтетическом пути участвует гидроксиметилглутарил-СоА-редуктаза, которая участвует в биосинтетическом пути холестерина, а поэтому биосинтез кофермента Q₁₀ также ингибируется указанными статинами. В действительности, имеется много работ, в которых сообщается, что введение статинов вызывает снижение уровня кофермента Q₁₀ в плазме. Кроме того, сообщалось, что введение статина делает ЛПН более чувствительным к окислению, а поэтому предполагается, что статин влияет на кофермент Q₁₀ , а следовательно, и на способность ЛПН к окислению. Что касается вышеуказанного снижения уровня кофермента Q₁₀, обусловленного введением статина, то были предприняты попытки компенсировать это снижение путем введения кофермента Q₁₀ (JP-A-02-233611, US 5082650, US 5316765).

Кофермент Q₁₀ присутствует в двух формах, в окисленной форме и в восстановленной форме, и известно, что в живом организме обычно примерно 40-90% данного кофермента присутствует в восстановленной форме. Данная форма представляет собой кофермент Q₁₀, который обладает антиоксидантной активностью внутри частиц ЛПН, а окисленный кофермент Q₁₀ независимо от его количества вообще не обладает антиоксидантной активностью. Поэтому для ингибирования артериосклероза необходимо увеличить уровень восстановленного кофермента Q ₁₀ в плазме. Однако в вышеуказанном введении кофермента Q₁₀ постоянно используется окисленный кофермент Q ₁₀ (убихинон).

Задачей настоящего изобретения являются разработка способа и композиции для достижения более эффективного восстановления, или даже увеличения, антиоксидантной активности ЛПН в плазме, подавляемой использованием гиполиподемического или снижающего уровни холестерина лекарственного средства, так, чтобы обеспечивалась повышенная эффективность указанного лекарственного средства против артериосклероза.

Для осуществления вышеуказанной цели авторами настоящего изобретения были проведены интенсивные исследования и было обнаружено, что введение восстановленного кофермента Q₁₀ по сравнению с введением окисленного кофермента Q₁₀ вызывает значительное увеличение концентрации восстановленного кофермента Q₁₀ в плазме. И на основании этого факта было разработано настоящее изобретение.

Таким образом, настоящее изобретение относится к способу ингибирования артериосклероза, который предусматривает использование комбинации агента, снижающего уровень холестерина в крови, и восстановленного кофермента Q₁₀, представленного нижеследующей формулой (1).

Настоящее изобретение также относится к композиции против артериосклероза, содержащей указанный снижающий уровень холестерина агент и указанный восстановленный кофермент Q₁₀.

Известно, что окисленный кофермент Q₁₀ используют для компенсации снижения концентрации кофермента Q₁₀ в плазме после введения статина. Однако использование восстановленного кофермента Q₁₀ согласно настоящему изобретению в отличие от введения его окисленной формы приводит к заметному увеличению концентрации восстановленного кофермента Q₁₀ в плазме, а поэтому такое использование является очень эффективным в ингибировании окисления ЛПН, а следовательно, и в ингибировании артериосклероза.

Используемое в настоящей заявке выражение «ингибирование артериосклероза» означает профилактику для предупреждения артериосклероза и терапии для лечения артериосклероза.

Ниже приводится подробное описание настоящего изобретения.

Описание изобретения

Способ ингибирования артериосклероза в соответствии с настоящим изобретением предусматривает использование комбинации снижающего уровень холестерина агента и восстановленного кофермента Q₁₀.

Вышеуказанным агентом, снижающим уровень холестерина, являются, но не ограничиваются ими, ингибитор гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы (статин), гиполипидемическое лекарственное средство клофибрат, производное никотиновой кислоты, производное стерина, эластаза, полиенфосфатидилхолин, мелинамид, пантетин, икозапентановая кислота EDTA и т.п. Однако предпочтительным является ингибитор гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы.

Ингибитором гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы являются, но не ограничиваются ими, ловастатин, симвастатин, правастатин, аторвастатин, розувастатин, флувастатин, церивастатин, питавастатин и т.п.

Отношение агента, снижающего уровень холестерина, к восстановленному коферменту Q₁₀ предпочтительно составляет, но не ограничивается им, 1:10-10:1, а более предпочтительно 1:5-5:1 (по массе).

В способе настоящего изобретения агент, снижающий уровень холестерина, и восстановленный кофермент Q ₁₀ предпочтительно вводят орально, при этом доза восстановленного кофермента Q₁₀ предпочтительно составляет 10 мг - 1 г, а более предпочтительно 50 мг - 500 мг.

В способе настоящего изобретения агент, снижающий уровень холестерина, и восстановленный кофермент Q₁₀ могут быть введены поочередно или одновременно. При одновременном введении агент, снижающий уровень холестерина, и восстановленный кофермент Q ₁₀ могут быть введены в виде одного препарата, содержащего два активных агента, или в виде двух отдельных препаратов. Кроме того, введение восстановленного кофермента Q₁₀ может быть осуществлено до или после введения агента, снижающего уровень холестерина, либо они могут быть введены одновременно.

Способами получения указанного восстановленного кофермента Q ₁₀ являются, например, но не ограничиваются ими, известные способы получения кофермента Q₁₀, такие как химический синтез, ферментация или экстракция из природного материала, и концентрирование элюата, содержащего восстановленный кофермент Q₁₀, методом хроматографии. Другой вариант указанной техники предусматривает добавление стандартного восстановителя, такого как борогидрид натрия, дитионит натрия (гидросульфит натрия) или т.п., к вышеуказанному коферменту Q₁₀ в целях восстановления окисленного кофермента Q₁₀ с образованием восстановленного кофермента Q₁₀, происходящим в указанном коферменте Q₁₀, в соответствии с общепринятым методом и концентрирование этого продукта с помощью хроматографии. Нужный кофермент Q₁₀ может быть также получен стимуляцией воздействия восстановителя на доступный высокоочищенный кофермент Q₁₀.

В соответствии с настоящим изобретением композицию для ингибирования артериосклероза получают путем объединения указанного восстановленного кофермента Q₁₀ и агента, снижающего уровень холестерина.

Снижающим уровень холестерина агентом предпочтительно является, но не ограничивается им, ингибитор гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы (статин).

Отношение агента, снижающего уровень холестерина, к восстановленному коферменту Q₁₀ в композиции не имеет конкретных ограничений, но предпочтительно составляет 1:10-10:1, а более предпочтительно 1:5-5:1 (по массе).

В композицию настоящего изобретения могут быть добавлены другие фармацевтически приемлемые технологические агенты в подходящих количествах в соответствии с общепринятой техникой. Такими фармацевтическими технологическими агентами являются, но не ограничиваются ими, эксципиенты, дезинтегрирующие агенты, замасливатели, связывающие агенты, антиоксиданты, красители, антикоагулянты, стимуляторы абсорбции, солюбилизаторы для активных ингредиентов, стабилизаторы и т.п.

Вышеуказанными эксципиентами являются, но не ограничиваются ими, сахароза, лактоза, глюкоза, кукурузный крахмал, маннит, кристаллическая целлюлоза, фосфат кальция, сульфат кальция и т.п.

Вышеуказанными дезинтегирующими агентами являются, но не ограничиваются ими, крахмал, агар, цитрат кальция, карбонат кальция, бикарбонат кальция, декстрин, кристаллическая целлюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, трагакантовая камедь и т.п.

Вышеуказанными замасливателями являются, но не ограничиваются ими, тальк, стеарат магния, полиэтиленгликоль, двуокись кремния, гидрогенизированное растительное масло и т.п.

Вышеуказанными связующими агентами являются, но не ограничиваются ими, этилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, трагакантовая камедь, шеллак, желатин, аравийская камедь, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, полиакриловая кислота, полиметакриловая кислота, сорбит и т.п.

Вышеуказанными антиоксидантами являются, но не ограничиваются ими, аскорбиновая кислота, токоферол, витамин А, каротин, бисульфит натрия, тиосульфат натрия, пиросульфит натрия, лимонная кислота и т.п.

Вышеуказанными красителями являются, но не ограничиваются ими, красители, разрешенные для применения в фармацевтических продуктах.

Вышеуказанными антикоагулянтами являются, но не ограничиваются ими, стеариновая кислота, тальк, легкий кремниевый ангидрид, гидрат кремниевой кислоты и т.п.

Вышеуказанными стимуляторами абсорбции являются, но не ограничиваются ими, высшие спирты, высшие жирные кислоты и поверхностно-активные вещества, такие как сложные эфиры глицерина и жирных кислот и т.п.

Вышеуказанными солюбилизаторами для активных ингредиентов являются, но не ограничиваются ими, бензойная кислота, бензоат натрия, этил-п-гидроксибензоат и т.п.

Обычная доза для перорального введения композиции против артериосклероза настоящего изобретения составляет предпочтительно от 10 мг до 1 г, а более предпочтительно от 50 до 500 мг кофермента Q₁₀.

Композиция настоящего изобретения может быть получена в виде лекарственных форм с различными дозами. Так, например, мягкие капсулы могут быть получены путем добавления или растворения восстановленного кофермента Q ₁₀ и агента, снижающего уровень холестерина, в натуральном масле, маслянистой высшей жирной кислоте, моноглицериде высшей жирной кислоты или в их смеси, и наполнения оболочки мягкой капсулы полученным маслянистым продуктом. В этом случае могут быть использованы любые материалы для капсул на основе желатина и материалы для капсул на основе других водорастворимых полимеров. Такими капсулами также являются микрокапсулы.

Наилучший вариант осуществления изобретения

Нижеследующие примеры и примеры получения фармацевтических композиций более подробно иллюстрируют настоящее изобретение, но не ограничивают его объема.

Пример 1

Влияние восстановленного кофермента Q₁₀ и окисленного кофермента Q₁₀ на уровень восстановленного кофермента Q₁₀ в плазме у хомячков, получающих корм с высоким содержанием жира.

Хомячкам давали корм с высоким содержанием жира, включающий 1,5% холестерина, в течение одной недели, а затем в течение 4 последующих дней перорально вводили 1% (мас./об.) раствора либо окисленного кофермента Q₁₀, либо восстановленного кофермента Q ₁₀ в оливковом масле. После выдерживания хомячков в условиях голодания в течение ночи плазму собирали, и уровень восстановленного кофермента Q₁₀ в плазме оценивали с помощью ВЭЖХ.

Таблица 1 Уровень восстановленного кофермента Q10 в плазме (n=3)
Обработка	Увеличение уровня восстановленного кофермента Q 10 в плазме (нг/мл)
Введение окисленного кофермента Q10	10,1 (100%)
Введение восстановленного кофермента Q10	14,4 (143%)

Как видно из таблицы 1, в которой приведено сравнение с группой, получавшей окисленный кофермент Q₁₀, уровень восстановленного кофермента Q₁₀ в плазме был заметно выше у группы, которая получала восстановленный кофермент Q ₁₀.

Пример 2

Оценка антиоксидантной активности липопротенина низкой плотности (ЛПН) в плазме у хомячков, которые получали корм с высоким содержанием жира.

Хомячкам давали корм с высоким содержанием жира, включающий 1,5% холестерина, в течение одной недели, а затем в течение 4 последующих дней орально вводили 1% (мас./об.) раствора либо окисленного кофермента Q₁₀, либо восстановленного кофермента Q₁₀ в оливковом масле и 10 мг правастатина на 1 кг массы тела. После выдерживания хомячков в условиях голодания в течение ночи плазму собирали, из этой плазмы выделяли ЛПН путем центрифугирования в градиенте плотности, после чего измеряли лаг-период (скрытый период) как показатель антиоксидантной активности ЛПН. Лаг-период определяли как величину, определяемую путем добавления иона меди (1 мкМ) к ЛПН (40 мкг белка/мл) и мониторинга (при 234 нм) времени, которое проходит структура окисленного жира/окисленной жирной кислоты с сопряженными диенами от момента ее окисления до момента определения интервала времени вплоть до начала резкого увеличения концентрации сопряженных диенов. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 Антиоксидантная активность ЛПН (n=3)
Обработка	лаг-период (мин)
Контроль-растворитель	17±4
Введение окисленного кофермента Q10	25±8
Ведение восстановленного кофермента Q10	44±9
Р < 0,05, Р < 0,01, т-критерий Стьюдента

Из таблицы 2 можно видеть, что хотя введение окисленного кофермента Q₁₀ приводило к повышению антиоксидантной активности ЛПН, однако, введение восстановленного кофермента Q₁₀ приводило к значительно большему увеличению антиоксидантной активности ЛПН.

Фармацевтический пример 1

Инкапсулированный фармацевтический продукт, содержащий ингибитор гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы и восстановленный кофермент Q₁₀, изготовляли в соответствии с нижеследующей формулой

Правастатин	20 мг масс. частей
Восстановленный кофермент Q10	50 мг масс. частей
Лактоза	200 мг масс. частей
Стеарат магния	5 мг масс. частей

Промышленное применение

Способ и композиция согласно настоящему изобретению позволяет значительно увеличить уровень восстановленного кофермента Q₁₀ в плазме с усилением антиоксидантной активности ЛПН, что обеспечивает высокую эффективность данной композиции против артериосклероза.