применение соединения для получения лекарственного препарата

Формула изобретения

1. Применение соединения, представляющего собой замещенный индолохиноксалин общей формулы I

в которой R₁ представляет водород либо один или несколько, предпочтительно от 1 до 4, одинаковых или различных заместителей в положениях 1-4 и/или 7-10, выбранных из галогена, предпочтительно Br, низшей алкил/алкоксигруппы, имеющей не более 4 атомов углерода, трифторметилгруппы, трихлорметилгруппы; при этом в одном из положений 7-10 R₁ может представлять гидроксильную группу;

Х представляет группу -(CH₂ )_n-R₂, в которой R₂ означает азотсодержащий основной остаток, такой как NH₂, NHR ₄ или NR₅R₆, в котором R ₄, R₅ и R₆ независимо представляют низший алкил или циклоалкил, n равно целому числу от 1 до 4, а R₃ представляет водород, низшую алкильную/циклоалкильную группу, имеющую не более 4 атомов углерода, а также физиологически приемлемых продуктов присоединения соединений с кислотами и аддуктами галогенов, предпочтительно аддуктами иода, монохлорида или монобромида иода, для получения лекарственного препарата, предназначенного для лечения рассеянного склероза.

2. Применение по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой соединение, в котором R₁ означает метил в положениях 2 и 3 и водород в других положениях.

3. Применение по п.1 или 2, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой соединение, в котором R₁ в одном из положений 7-10 означает гидрокси, предпочтительно в положении 9.

4. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой соединение, в котором Х означает СН₂N(СН₃)₂, а R ₃ означает водород.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к применению соединения общей формулы I

для получения лекарственного препарата, предназначенного для лечения рассеянного (множественного) склероза (MS).

Рассеянный склероз представляет собой хроническое заболевание, возникающее в центральной нервной системе (ЦНС), зачастую ведущее к тяжелым последствиям. Рассеянный склероз варьируется от легкого, с незначительными симптомами, до тяжелого паралича и потери зрения. Такой диагноз, как правило, ставят пациентам в возрасте от 20 до 40 лет, а затем заболевание продолжается до конца жизни. Иногда рассеянный склероз развивается быстро, в то время как в иных случаях больной может жить несколько десятилетий всего лишь с некоторыми нарушениями трудоспособности.

Рассеянный склероз наиболее часто встречается в северных широтах. В зависимости от региона в западном мире уровень его распространенности составляет 50-150 случаев на 100000.

Только в США приблизительно 250000-350000 пациентов имеют диагноз рассеянный склероз. У женщин рассеянный склероз возникает в два раза чаще, чем у мужчин.

Обычно принято считать, что иммунная защита пациента с рассеянным склерозом атакует ЦНС, в то время как точный механизм такого действия неизвестен. Из-за воспаления изоляции нерва (миелин) возникает дисфункция и «короткое замыкание» нервных волокон, и, вследствие этого, происходит действие на мышцы, контролируемые такими волокнами.

Лечение рассеянного склероза заключается в уменьшении симптомов. Современные знания не позволяют лечить или остановить такое заболевание, как рассеянный склероз. Следовательно, не существует никаких лекарственных препаратов, способствующих лечению или более позднему возникновению данного заболевания. Применяемые виды лечения включают:

- Трансплантацию костного мозга и введение цитостатиков с пожизненным введением иммуноподавляющих лекарственных препаратов. Данный способ подходит некоторым пациентам, однако он очень дорогостоящий и представляет некоторую опасность для пациентов. Использование цитостатических препаратов для лечения рассеянного склероза до сих пор является спорным, поскольку их действие неясно и чревато тяжелыми потенциальными побочными эффектами.

Существует два лекарственных препарата, применяемых для лечения или более позднего возникновения рассеянного склероза; интерферон-бета (товарные знаки Avonex^R и Betaseron ^R) способен снижать симптомы у определенных групп пациентов, поэтому его вводят большинству пациентов по этическим соображениям. Его действие на больных с рассеянным склерозом неясно, к тому же такое лечение стоит очень дорого.

Глатирамера ацетат (товарный знак Copaxone^R) способен снизить количество приступов у некоторых пациентов, однако он оказывает существенное побочное действие, к тому же возникает проблема дифференциации симптомов рассеянного склероза и побочного действия.

В настоящее время не существует эффективного лечения рассеянного склероза. Лечение сводится к снижению симптоматики. Опыты с трансплантацией и различными видами лекарственного лечения данного заболевания до сих пор не привели ни к какому решению. Они способны помочь некоторым пациентам, несмотря на риск, побочное действие и очень высокую стоимость. Рассеянный склероз является достаточно обычным заболеванием, возникающим в молодом возрасте. Кроме того, он представляет собой пожизненное заболевание с тяжелыми симптомами. Поэтому существует насущная потребность в лекарственных препаратах, способных защитить пациентов с рассеянным склерозом от тяжелого развития данного заболевания.

В соответствии с настоящим изобретением было неожиданно обнаружено, что замещенный индолохиноксалин нижеприведенной общей формулы I может быть использован для получения лекарственного препарата, предназначенного для лечения рассеянного склероза.

Соединение, предназначенное в соответствии с настоящим изобретением для получения лекарственного препарата для лечения рассеянного склероза, представляет собой соединение следующей общей формулы I:

в которой R₁ представляет водород либо один или несколько, предпочтительно от 1 до 4, одинаковых или различных заместителей в положениях 1-4 и/или 7-10, выбранных из галогена, предпочтительно, Br, низшей алкил/алкокси группы, имеющей не более 4 атомов углерода, трифторметилгруппы, трихлорметилгруппы; при этом в одном из положений 7-10 R₁ может представлять гидроксильную группу;

Х представляет группу -(CH₂ )_n-R₂, в которой R₂ означает азотсодержащий основной остаток, такой как NH₂, NHR ₄ или NR₅R₆, в котором R ₄, R₅ и R₆ независимо представляют низший алкил или циклоалкил, n равно целому числу от 1 до 4, а R₃ представляет водород, низшую алкильную/циклоалкильную группу, имеющую не более 4 атомов углерода,

а также физиологически приемлемые продукты присоединения соединений с кислотами и аддуктами галогенов, предпочтительно аддуктами иода, монохлорида или монобромида иода.

R₁ предпочтительно выбран из водорода и низших алкильных групп, особенно метильных. Более предпочтительно, R₁ представляет метил в положениях 2 и 3 и водород в других положениях.

Предпочтительными соединениями являются такие соединения, в которых R₁ представляет гидрокси в одном из положений 7-10, особенно в положении 9.

Соединения, применяемые в соответствии с настоящим изобретением, и их получение описаны в ЕР патенте 0238459 и патенте США 4990510, приводимых в описании в качестве ссылки.

Соединение, которое оказалось особенно эффективным, представляет собой соединение следующей формулы II

На чертежах:

Фиг.1 показывает результаты, полученные в тесте на модели ЕАЕ (экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит).

Фиг.2 показывает результаты, полученные в тесте на модели ЕАЕ у крыс с различными дозами соединения, применяемого в соответствии с настоящим изобретением.

Фиг.3 показывает результаты предварительного лечения соединением, применяемым в соответствии с настоящим изобретением.

Фиг.4 показывает результаты применения соединения в соответствии с настоящим изобретением после лечения.

Модель ЕАЕ (экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит) представляет собой общепринятую модель исследования острых симптомов рассеянного склероза на животных ( (1) Ruuls et al., J. Immunology, 1996, 157, 5721-5731; (2) van der Mendide et al., J. Neuroimmunology, 1998, 84, 14-23; (3) Smith et al. Nature Medicine, 2000, 6, 1, 62-66). В данной модели применяют крыс Льюиса, индуцируемых в 0 день 20 мкг пептида миелина (МБР 68-86) или 2 мг Myobacterium tuberculosis. Через неделю появляются тяжелые симптомы ЦНС, которые в результате двойного, слепого исследования определяют как величину «клинического счета». Чем выше данная величина, тем тяжелее действие. Шкала пронумерована от 0 до 5. Приблизительно через 14 дней наблюдается пик симптоматики, а затем ее снижение до нормального уровня.

Отрицательный контроль не получает лечения, за исключением иммунизации (0 день) с целью индуцирования острого ответа рассеянного склероза. На фиг.1 представлены результаты применения отрицательного контроля, интеферонабета и соединения, применяемого в соответствии с настоящим изобретением, т.е. 2,3-диметил(диметиламиноэтил)-5Н-индоло-(2,3-b)хиноксалина (В-220). Из фиг.1 следует, что интерферон-бета не оказывает снижающего действия на симптомы ЦНС. Нижняя кривая представляет исследуемое вещество, применяемое в соответствии с настоящим изобретением, при этом данное вещество удивительным образом и неожиданно снижает симптомы ЦНС на 2/3.

В данном тесте интерферон-бета вводят ежедневно по 3×10⁵ ед./животное, что составляет среднюю дозу (2). Исследуемое соединение (В-220) вводят ежедневно по 6 мг/животное; данная доза может быть увеличена, поскольку диапазон токсичного действия широк и, скорее всего, обеспечит дальнейшее снижение симптомов. Следует отметить, что острая токсичность исследуемого вещества, применяемого в соответствии с данным изобретением, низка, что подтверждается следующим образом:

LD₅₀ , перорально, крыса; >800 мг/кг массы тела

LD₅₀ , внутривенно, крыса; >100 мг/кг массы тела

NOEL, внутривенно, крыса; 12,5 мг/кг массы тела

NOEL, кожно, кролик; 200 мг/кг массы тела

(NOEL = ненаблюдаемый уровень действия)

Хроническую токсичность исследуют на протяжении до 270 дней на мышах; токсичность вещества не обнаружена; напротив, данное вещество защищает животных от различного рода влияния на их здоровье.

В хорошо поставленной ЕАЕ модели с применением крыс для исследования рассеянного склероза было установлено, что соединение, применяемое в соответствии с настоящим изобретением, т.е. В-220, снижает клинические симптомы (клинический счет) зависимым от дозы образом. Результаты представлены на фиг.2. При наивысшей дозе, составляющей 12 мг/животное (нижняя кривая), заболевание возникает приблизительно на 4 дня позже, выздоровление начинается приблизительно на 3 дня раньше и общее действие резко понижается. Большинство животных в данной группе вообще не проявляют никаких симптомов. Таким образом, симптом, обозначенный цифрой 1, представляет собой очень слабое и умеренное действие, в то время как цифра 3 означает тяжелый паралич. Промежуточная кривая иллюстрирует дозу, составляющую 6 мг/животное, при этом заболевание возникает приблизительно на 2 дня позже, выздоровление наступает приблизительно на 2 дня раньше, а общее действие существенно ниже по сравнению с контрольной, самой высокой кривой в том случае, когда В-220 не применяют.

Фиг.3 иллюстрирует применение в-220 до возникновения заболевания. Верхняя кривая представляет контроль без применения В-220, в то время как нижняя кривая иллюстрирует введение В-220 в дозе, составляющей 6 мг/животное. Как следует из данной фигуры, предварительное введение В-220 вызывает несомненно более мягкое и позднее действие рассеянного склероза. В-220 вводят за 7 или через 7 дней в зависимости от возникновения заболевания (день 0).

Фиг.4 иллюстрирует применение В-220, начиная с 7-го дня после инициации заболевания (день 0) и в течение всего эксперимента, при этом верхняя кривая представляет контроль без добавления В-220, а нижняя кривая представляет дозу В-220, составляющую 6 мг/животное. Как следует из данной фиг.4, применение В-220 после возникновения заболевания снижает действие рассеянного склероза у крыс.

Вертикальные линии на фиг.3 и 4 означают среднее ± стандартное отклонение.

Подходящий интервал дозировки для людей составляет от 1 до 50 мг/кг массы тела.

Экспериментальная часть

Изучение проводилось с целью оценки лечебно-профилактического действия различных аналогов соединения В-220 при их повторяющемся подкожном введении 1 раз в сутки в течение 10 дней успешного курса лечения с использованием мышиной модели экспериментального аллергического энцефаломиелита.

Лечение начинали одновременно с индукцией экспериментального аллергического энцефаломиелита в «День 0». Группы животных, которым вводились тестируемые соединения, включали n=10 самок мышей SJL одинакового размера в каждой группе, получавших либо соединение В-220 в дозе 60 мг/кг, либо другие соединения из заявленной группы в дозе 20 мг/кг, либо кукурузное масло в количестве 5 мл/кг, т.е. дозировка других соединений составляла 1/3 от дозировки соединения В-220.

Принципиальные особенности мышиной модели экспериментального аллергического энцефаломиелита

Экспериментальный аллергический энцефаломиелит представляет собой аутоиммунное демиелинизирующее заболевание центральной нервной системы, которое в точности имитирует клинические и патологические особенности рассеянного склероза. Острый опыт на мышиной модели включает период сенсибилизации, провоцируемой однократной подкожной инъекцией эмульсии протеолипидного протеина (PLP) в полном адъюванте Фрейнда (CFA), в «День 0» исследования, с последующей добавочной иммуностимуляцией посредством внутрибрюшинного введения коклюшного токсина одновременно с индукцией экспериментального аллергического энцефаломиелита в «День 0» исследования, и повторно - через 48 часов.

Конкретнее, экспериментальный аллергический энцефаломиелит в остром опыте на мышиной модели индуцировали в «День 0» исследования однократной подкожной инъекцией энцефалитогенного инокулюма PLP/CFA в виде эмульсии (125 мкг PLP/300 мкг CFA на каждое животное), с последующей добавочной иммуностимуляцией посредством внутрибрюшинного введения коклюшного токсина в дозе 20 мкг/кг одновременно с индукцией экспериментального аллергического энцефаломиелита в «День 0» исследования, и повторно - через 48 часов («День 2» исследования).

Результаты исследования.

Обнаруженные эффекты, имеющие место при прижизненном исследовании испытуемых животных, которым вводили соединение В-220 в дозе 60 мг/кг, либо соединения 0208300936, 0210241720 и 0304080852 (см. формулы ниже) в дозе 20 мг/кг, при повторяющемся подкожном введении 1 раз в сутки в течении 10 дней лечения, свидетельствуют о выраженном лечебно-профилактическом действии при данном заболевании (см. Фиг.5 в приложении). Структурные формулы соединений 7-ОН-монодеметил-В-220, 0210241720 (№ группы 021024)

9-ОН-монодеметил-В-220, 0208300936 (№ группы 021024)

2,3-диметил-6(2-диметиламиноэтил)-9-фтор-индоло[2,3-b] хиноксалин, 0304080852, (№ группы 0304080852)

Вышеперечисленные соединения могут быть получены в соответствии с методиками, описанными в тех же источниках, из которых стала известна данная группа соединений. В частности, получение соединения 0304080852 раскрыто в патенте ЕР 0238459, получение соединений 0210241720 и 0208300936 - в патенте ЕР 0799038. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены с использованием обычных процедур (раскрытых, в частности, в публикации WO 00/76984 А2). В одном из вариантов осуществления фармацевтическая композиция имеет следующий состав.

Ингредиент	мг на таблетку
1. Активное соединение	10,0
2. Микрокристаллическая целлюлоза	57,0
3. Гидрофосфат кальция	15,0
4. Натрия гликолят крахмал	5,0
5. Коллоидный диоксид кремния	0,25
6. Стеарат магния	0,75

Активный ингредиент 1 перемешивают с ингредиентами 2, 3, 4 и 5 в течение приблизительно 10 мин. Затем добавляют стеарат магния, полученную смесь перемешивают в течение приблизительно 5 мин и прессуют в таблетки, которые могут содержать или не содержать пленочное покрытие.