способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга) при сальмонеллезах животных

Формула изобретения

Способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации при сальмонеллезах животных, включающий выращивание бактериальной массы сальмонелл, ее осаждение, обработку 12%-ным раствором натрия хлорида, автоклавирование при температуре 121°С в течение 20 мин, добавление детергента, осаждение центрифугированием при 8-9 тыс. об./мин в течение 30-35 мин и использование надосадочной жидкости (липополисахариднопротеиновый комплекс) для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к приготовлению диагностических препаратов, и может бить использовано для серологической диагностики сальмонеллезов животных.

Известен способ изготовления эритроцитарных диагностикумов для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). (См. Способ получения эритроцитарных диагностикумов, а.с. №648228, авт. И.Я.Мошиашвили, С.И.Елкина и Н.Е.Конделаки).

Недостатками указанного способа являются сложность технологии приготовления диагностикума, заключающаяся в использовании для сенсибилизации эритроцитов специфического белкового сенситина, и его танизация, проведение дополнительной сенсибилизации эритроцитов неспецифическим белком при температуре 4-8°С в течение 18-20 ч и консервации 4%-ным формалином в фосфатно-буферном растворе.

Целью данного изобретения является упрощение технологии приготовления диагностикума путем разработки чувствительного, доступного для серийного производства, стабильного, с длительным сроком хранения, препарата для ускоренной диагностики сальмонеллезов, позволяющего своевременно и наиболее полно выявить больных животных и пригодного для проведения массовых серологических исследований.

Технический результат, который может быть получен при реализации заявленного изобретения, заключается в упрощении технологии приготовления диагностикума.

Предлагаемый нами способ приготовления эритроцитарного диагностикума заключается в следующем: суточную бульонную культуру сальмонелл осаждают путем центрифугирования, доводят ее концентрацию до 25 млрд микробных клеток в 1 мл путем внесения 12%-ного раствора натрия хлорида и подвергают автоклавированию при давлении 1 атм. (121°С) в течение 20 минут.

После автоклавирования бакмассу охлаждают до температуры 40-45°С и добавляют 2% детергента (ПАВ - поверхностно-активное вещество). Полученную взвесь сальмонелл выдерживают в водяной бане при температуре 45-50°С в течение 40-45 минут, периодически встряхивая. Затем ее осаждают центрифугированием при 8-9 тыс. об/мин в течение 30-35 минут. Надосадочную жидкость (липополисахаридопротеиновый комплекс) используют в качестве сенситина для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана. Сенсибилизацию эритроцитов проводят в водяной бане при температуре 45°С в течение 1 часа, периодически встряхивая. После этого антиген (липополисахаридопротеиновый комплекс) трижды отмывают физиологическим раствором центрифугированием в течение 15-20 мин при 1500 об/мин (с целью удаления избытка сенситина). Затем взвесь сенсибилизированных эритроцитов доводят до 5%-ной концентрации физиологическим раствором и консервируют добавлением формалина с таким расчетом, чтобы концентрация формальдегида составила 0,3%.

Готовый диагностикум проверяют на активность и специфичность с использованием сывороток крови от заведомо здоровых животных, от больных сальмонеллезами телят и абортировавших на почве сальмонеллезов овцематок. В качестве контроля используют гипериммунную сальмонеллезную сыворотку.

Для постановки РНГА используют 2,5%-ные формалинизированные и сенсибилизированные эритроциты.

С целью проверки активности и специфичности приготовленного диагностикума нами проведены производственные испытания на 1018 пробах сывороток крови от абортировавших на почве сальмонеллезов и 1019 пробах клинически здоровых овцематок, а также на 45 пробах больных сальмонеллезами и 75 - здоровых телят.

В результате испытания разработанного диагностикума получены положительные реакции на сальмонеллезы в титрах 1:400-1:6400 и выше с оценкой в 3-4 креста, а сыворотки крови от здоровых животных дали отрицательный результат. Исследования сывороток в РНГА сопровождались положительным и отрицательным контролем.

Во всех хозяйствах, где испытывали диагностикум в РНГА, диагноз на сальмонеллезы подтвержден бактериологически.

Таким образом, проведенные исследования показали активность и специфичность эритроцитарного диагностикума для РНГА, изготовленного по вышеописанному способу. Кроме того, последний является экономичным и доступным в производстве диагностическим препаратом как в лабораторных, так и биофабричных условиях.