натриевая соль поли(парадигидрокси- парафенилен)тиосульфокислоты в качестве регулятора метаболизма клеток и антигипоксанта, фармацевтическая композиция на ее основе

Формула изобретения

1. Натриевая соль поли(парадигидрокси-парафенилен)тиосульфокислоты общей формулы

где n = 2 ÷ 6,

в качестве регулятора метаболизма клеток.

2. Натриевая соль поли(парадигидрокси-парафенилен)тиосульфокислоты по п. 1 в качестве антигипоксанта.

3. Фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного начала терапевтически или профилактически эффективное количество антигипоксанта, отличающаяся тем, что в качестве антигипоксанта используют натриевую соль поли(пара-дигидрокси-парафенилен)тиосульфокислоты, как она определена в п.1 или 2.

4. Фармацевтическая композиция по п. 3, отличающаяся тем, что дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, связующее вещество или инертный наполнитель.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к фармакологии и медицине, а также может быть использовано в косметологии и пищевой промышленности, и касается препаратов, регулирующих метаболизм отдельно взятых клеток и их сообщества в биологических тканях.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Исследования последних трех десятилетий показали, что в регулировании клеточного гомеостаза особо важное значение имеет поддержание баланса между энергопродуцирующими и энергопотребляющими функциями клеток. Особенно остро данная проблема возникает в случае возникновения в тканях или в организме в целом состояния гипоксии, связанного с недостаточным поступлением кислорода или нарушением механизмов его утилизации. Показано, что гипоксия вызывает сильнейший клеточный стресс и приводит к появлению обратимых или необратимых клеточных повреждений в зависимости от продолжительности и силы воздействия стрессового фактора (Deguchi J., Negoro S., Kishimoto S. // Biochem. & Biophys. Communs., 1987, Vol.149, No.3, p.1093-1098, [1]). Восстановление снабжения кислородом тканей после гипоксии (реоксигенация) сопровождается дополнительным повреждением элементов клеточных структур.

Для защиты тканей от повреждающего воздействия гипоксии или реоксигенации предложено использовать антигипоксанты. В настоящее время выделяют 5 типов подобных препаратов (Смирнов А.В., Криворучко Б.И. Сб.: Применение инфузионных антигипоскантов и искусственных переносчиков кислорода в хирургии, - СПб.: 1999, с.53-62, [2]).

К первой группе относят препараты типа гутимина и амтизола, которые усиливают гликолиз и повышают синтез аденозинтрифосфата (АТФ) в результате процесса анаэробного окисления субстрата.

Вторую группу антигипоксантов составляют вещества макроэргической природы (креатинфосфат, АТФ).

Остальные три группы антигипоксантов составляют препараты, регулирующие активность главной энергопродуцирующей системы клеток - митохондриальной дыхательной цепи. В частности, в третью группу включены препараты, поддерживающие высокую активность одного из двух субстратных участков дыхательной цепи - сукцинатоксидазного. К этой группе относится янтарная кислота, оксибутират натрия, препараты мексидол и муфасол.

К четвертой группе антигипоксантов относят синтетические препараты с электроноакцепторными свойствами, представляющие собой производные хинонов.

В пятую группу антигипоксантов включены цитохром С и убихинон Q₁₀ (коэнзим Q₁₀), являющиеся естественными компонентами митохондриальной дыхательной цепи.

Среди перечисленных антигипоксантов особый интерес представляет убихинон Q₁₀ , поскольку в митохондриальной цепи он играет ключевую роль в переносе электронов от субстратных участков (никотинамидадениндинуклеотид оксидазы (НАДН-оксидазы) или сукцинатоксидазы) на цитохромную цепь.

Дефицит убихинона Q₁₀ блокирует перенос электронов по дыхательной цепи и ведет к прекращению синтеза АТФ.

При изучении соотношения между убихиноном и остальными партнерами по дыхательной цепи было обнаружено преобладание на порядок первого над остальными компонентами. Кажущаяся “расточительность” природы, использовавшей при конструировании дыхательной цепи большой избыток одного из элементов конструкции по сравнению с остальными, удалось понять, изучив более детально механизм функционирования коэнзима Q₁₀. Оказалось, что реальным партнером, непосредственно участвующим во взаимодействии с субстратными участками дыхательной цепи, является не убихинон Q₁₀ , а его полувосстановленная свободнорадикальная форма - убисемихинон (Nohl H. Free Rad. Res. Communs, 1990, Vol.8, No.4-6, р.307-315, [3]). Поскольку пордолжительность жизни убисемихинона крайне мала, и он диспропорционирует на убихинон Q₁₀ и убихинол Q₁₀ (восстановленную форму убихинона), избыток коэнзима необходим для поддержания оптимальной концентрации убисемихинона.

Учитывая важную роль молекул, содержащих неспаренный электрон, в работе митохондриальной дыхательной цепи, одной из задач исследования было получение продукта, способного более продолжительное время по сравнению с убисемихиноном находиться в свободнорадикальном состоянии, и оценка эффективности его антигипоксической активности.

Наиболее близким структурным аналогом предложенного соединения является натриевая соль [поли-(2,5-дигидрокси-фенилен)]-4-тиосульфокислоты (мета НПФ), состоящей из последовательно соединенных между собой в мета-положении гидрохиноидных звеньев, имеющих в крайнем звене заместитель в виде натриевой соли тиосульфокислоты. Продукт получают взаимодействием пара-бензохинона с тиосульфатом натрия в водно-спиртовой среде при температуре выше 65°С. Показано, что продукт влияет на метаболизм клеток (Патент РФ №2105000, МПК⁶: С 07 С 381/02, C 08 G 61/10, А 61 К 31/05, [4]).

В современной фармакологии известны почти две тысячи различных регуляторов клеточного метаболизма, из которых только около ста являются препаратами фенольного типа (Машковский М.Д. Лекарственные средства. Изд. 13-е в двух томах. - Харьков: Торсинг, 1997, [5]).

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задачей настоящего изобретения является расширение спектра препаратов, регулирующих метаболическую активность клеток, в том числе проявляющих антигипоксическую активность.

В результате проведенных исследований было показано, что желаемой активностью - способностью регулировать метаболизм клеток, в том числе регулировать их энергетический обмен - обладает натриевая соль поли(пара-дигидроски-пара-фенилен)тиосульфокислоты (далее также для краткости называемая “пара-НПФ”), имеющая следующую структурную формулу:

где n=2-6.

Брутто-формула продукта: C_6n H_4n+1O_2n+3S₂Na.

Продукт был получен в результате реакции пара-бензохинона с тиосульфатом натрия в водной среде при нагревании от 50 до 100°С. Образующийся в результате реакции продукт отделяют от растворителя, очищают от низкомолекулярных примесей с помощью диэтилового эфира и сушат от экстрагента под вакуумом при температуре 50°С. Более подробно условия синтеза продукта и его свойства описаны в нижеследующих примерах.

Принципиальное отличие предложенного соединения от его аналога заключается в том, что известное соединение состоит из звеньев гидрохинона, соединенных между собой в мета-положении, тогда как в предложенном соединении эти звенья расположены в пара-положении. Как известно, изменение химической структуры вещества неизбежно связано с изменением его свойств. Из химии ароматических соединений известно, что заместители, расположенные в мета-положении ароматического ядра, оказывают слабое взаимное влияние друг на друга, тогда как заместители, расположенные в пара-положении, сильно влияют друг на друга и на молекулу в целом. Наиболее ярким проявлением особых свойств продукта, предложенного в соответствии с настоящим изобретением, по сравнению с аналогом является проявление характерного сигнала, регистрируемого с помощью метода спектроскопии электронного парамагнитного резонанса (ЭПР-спектроскопии), свидетельствующего о наличии в образцах пара-НПФ неспаренных электронов, которые не были зафиксированы в образцах аналога (Фиг.1). Важно отметить также, что в отличие от малостабильного убисемихинона, для регистрации спектра которого применяют замораживание, ЭПР-спектры образцов пара-НПФ сохраняют устойчивость месяцами в условиях комнатной температуры. Наличие стабильного сигнала ЭПР в образцах пара-НПФ связано с проявлением сильного взаимодействия между всеми фенильными ядрами, соединенными друг с другом в пара-положении, при этом образуется достаточно протяженная система сопряжения, обеспечивающая эффективную стабилизацию неспаренного электрона в пределах молекулы. Спектр ЭПР наблюдается как для твердого пара-НПФ (кривая 1 на Фиг.1), так и для его водного раствора (кривая 2 на Фиг.1).

Проверка возможного влияния пара-НПФ на аэробный энергетический метаболизм проводилась на изолированных митохондриях скелетных мышц. Оценивалось влияние препарата на скорости эндогенного дыхания митохондрий (V₀), дыхания митохондрий в метаболических состояниях 3 (V₃) и 4 (V₄) по Чансу, а также скорость разобщенного дыхания в присутствии разобщителя - 2,4-динитрофенола (V_ДНФ ). Рассчитывался коэффициент дыхательного контроля по Чансу-Вильямсу (ДК_ч-в) и коэффициент фосфорилирования (АДФ/О) (Краковский М.Э., Аширметов А.X., Иноятова Ф.X. Вопр. мед. химии, 1986, т.32, №6, с.66-70, [6]). Результаты представлены в Таблице 1.

Таблица 1 Влияние препарата пара-НПФ на дыхание и фосфорилирование изолированных митохондрий скелетных мышц крыс
Показатели	Контроль	Конц пара-НПФ (мкМ/л)
		1,2	2,4	6,0
V 0	15,0	16,1	17,9	22,6
V3	113,0	85,7	83,9	60,4
V 4	46,3	26,0	22,3	21,7
VДНФ	82,4	62,5	54,5	52,8
ДК Ч-В	2,4	3,3	3,8	2,8
АДФ/О	1,75	1,94	2,63	1,85

Из Таблицы 1 следует, что пара-НПФ активно влияет на аэробный энергетический метаболизм, при этом достигаемый эффект зависит от дозы препарата. Значения дыхательного контроля (ДК_Ч-В ) и коэффициента сопряженности окислительного фосфорилирования и дыхания (АДФ/О) по мере увеличения концентрации пара-НПФ вначале растут, что соответствует более эффективной энергопродуцирующей функции митохондрий, а затем падают (разобщающий эффект).

При внесении пара-НПФ в состав глюкозо-минеральной питательной среды, содержащей (г/л) глюкозу - 4, Na₂HPО₄ - 7, КН₂РО₄ - 3, NH₄Cl - 1, NaCl - 0,5, MgSO₄ - 0,2, СаСl₂ - 0,02, никотиновую кислоту - 0,005, пара-НПФ - 0,02, при культивировании факультативных аэробов Escherichia coli штамм М-17 время генерации микробной популяции на стадии логарифмического роста культуры сокращалось на 24±12% по сравнению с контролем (эффект стимуляции роста). Внесение 50 мг/л пара-НПФ в культуральную жидкость замедляет развитие микробных клеток (эффект ингибирования роста).

Представленные результаты показывают, что пара-НПФ участвует в регуляции метаболических процессов как в случае прокариотических, так и эукариотических клеток. Возможность повышения сопряженности процессов фосфорилирования и дыхания, подтвержденная на модели изолированных митохондрий скелетных мышц, позволяет рассматривать пара-НПФ в качестве активного антигипоксанта прямого действия.

Предложенная в соответствии с настоящим изобретением натриевая соль поли(пара-дигидрокси-пара-фенилен)тиосульфокислоты может быть применена в качестве антигипоксического препарата в составе фармацевтической композиции в любой подходящей фармацевтической форме, известной специалистам в данной области, например в форме таблетки, капсулы или раствора. Фармацевтическая композиция также может включать известные фармацевтически приемлемые наполнители, разбавители, связующие вещества и носители. Доза фармацевтической композиции должна содержать, в зависимости от назначения, по меньшей мере, терапевтически или профилактически эффективное количество активного соединения - натриевой соли поли(пара-дигидрокси-пара-фенилен)тиосульфокислоты.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На Фиг.1 изображен спектр электронного парамагнитного резонанса (ЭПР-спектр) молекулы натриевой соли поли(пара-дигидроски-пара-фенилен)тиосульфокислоты (пара-НПФ). Кривая 1 представляет собой ЭПР-спектр порошка пара-НПФ, а кривая 2 - ЭПР-спектр, полученный при 20-кратном разбавлении пара-НПФ водой (ЭПР-спектр 5%-ного водного раствора пара-НПФ).

На Фиг.2 представлен ИК-спектр пара-НПФ в таблетке КВг.

На Фиг.3 изображены УФ-спектры поглощения водного раствора пара-НПФ (кривая 3) и водного раствора гидрохинона (кривая 4).

На Фиг.4 изображен ¹³С-ЯМР спектр пара-НПФ в твердой фазе.

ОПИСАНИЕ ПРИМЕРОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для лучшего понимания сути изобретения приведены следующие примеры.

Пример 1.

В аппарат емкостью 2 л, снабженный мешалкой и рубашкой, помещают 76,6 г (0,31 М) тиосульфата натрия в 1 л дистиллированной воды. Раствор нагревают до температуры 50°С и при интенсивном перемешивании вводят 100 г (0,93 М) пара-бензохинона. Через 2,5 часа процесс прекращают и образовавшийся продукт сушат на распылительной сушилке. Сухой порошкообразный продукт помещают в аппарат Сокслетта и удаляют примеси с помощью диэтилового эфира в качестве экстрагента. Время экстракции - 24 часа. Затем продукт сушат под вакуумом при температуре 50°С. Выход целевого продукта 102,7 г. Молекулярная масса, определенная криоскопическим методом, равна 440. Содержание серы по данным элементного анализа составляет 16,2%.

На Фиг.2 представлен ИК-спектр образца в таблетке КВг. На нем видна широкая полоса поглощения в области 3600-2000 см^-1, относящаяся к валентным колебаниям НО-групп; полосы при 1200 и 1040 см ^-1 относятся к валентным колебаниям SО₃-групп. Набор полос в области 1600-1500 см^-1 относится к валентным колебаниям связей С=С в ароматическом кольце, а полоса при 830 см^-1 связана с неплоскими деформационными колебаниями связи С-Н в тетразамещенном бензольном кольце.

На Фиг.3 представлены УФ-спектры растворов пара-НПФ (кривая 3) и гидрохинона (кривая 4) в воде. Гидрохинон можно рассматривать в качестве модельного соединения для элементарного звена пара-НПФ. Два слабо выраженных пика в области 45000 и 33000 см^-1, наблюдаемые в спектре пара-НПФ, смещены в более низкочастотную область по сравнению с характерными полосами поглощения гидрохинона 45200 и 32780 см^-1. Подобное смещение, а также непрерывное поглощение образца от ультрафиолетовой (УФ-) до видимой области спектра свидетельствует об эффективном сопряжении в синтезированном продукте.

Пример 2.

В аппарат, описанный в примере 1, помещают 23 г (0,093 М) тиосульфата натрия в 1 л дистиллированной воды, раствор нагревают до 90°С и вводят при интенсивном перемешивании 100 г (0,93 М) пара-бензохинона. Через 1,5 часа реакцию прекращают и содержимое сушат на распылительной сушилке. Выделенный сухой продукт экстрагируют диэтиловым эфиром в течение 24 часов, затем сушат под вакуумом при температуре 50°С. Выход целевого продукта 80,2 г. По данным элементного анализа содержание серы составляет 10,8%, молекулярная масса полученного продукта равна 750.

Присоединение гидрохиноидных звеньев в синтезированном образце в пара-положении друг относительно друга подтверждается данными спектроскопии ядерного магнитного резонанса ¹³С-ЯМР по наличию полосы поглощения при 147,87 м.д., характерной для С_аром.-С_аром. связи между бензольными кольцами (Фиг.4).

Пример 3. Оценка влияния пара-НПФ на метаболизм клеток

Для оценки влияния пара-НПФ, полученного в примере 1, на метаболическую активность клеток была использована культура гриба Aspergillus oryzae, являющегося продуцентом амилолитических ферментов. Данный гриб относится к строгим аэробам и выращивается на плотных питательных средах. Из-за ограничений с диффузией кислорода воздуха внутрь “коржа” эффективность продуцирования амилолитических ферментов прогрессивно снижается по мере увеличения толщины слоя плотной питательной среды. В таблице 2 приведены данные по амилолитической активности гриба из проб, взятых из образцов с толщиной “коржа” 1, 3 и 4 см.

Таблица 2 Влияние пара-НПФ на амилолитическую активность гриба Aspergillus oryzae
Толщина “коржа”, см	Концентрация пара-НПФ, мг/л
	25			50			100
	Контроль	Опыт	Эффект, %	Контроль	Опыт	Эффект, %	Контроль	Опыт	Эффект, %
1	394	362	-8	394	397	-1	327	370	15
3	233	299	28	233	286	23	210	226	8
4	168	156	-7	168	246	46	141	172	22

Из таблицы 2 видно, что вблизи поверхности плотной питательной среды, где условия аэрации максимально благоприятны для развития культуры, добавка пара-НПФ мало сказывается на амилолитической активности гриба. Однако по мере увеличения толщины “коржа” с ростом ограничений по диффузии кислорода амилолитическая активность гриба снижается. В этих условиях добавление пара-НПФ в питательную среду заметно повышает амилолитическую активность гриба Aspergillus oryzae.

Пример 4. Оценка антигипоксической активности пара-НПФ

В аппарат, описанный в примере 1, помещают 38,3 г (0,15 М) тиосульфата натрия в 1 л дистиллированной воды, раствор нагревают до 70°С и при интенсивном перемешивании вводят 100 г (0,93 М) пара-бензохинона. Через 2 часа реакцию прекращают и содержимое сушат на распылительной сушилке. Полученный продукт экстрагируют в течение суток диэтиловым эфиром и сушат от экстрагента под вакуумом при 50°С. Выход целевого продукта - 95,7 г. По данным элементного анализа содержание серы составляет 11,7%. Молекулярная масса полученного образца равна 650.

Оценку антигипоксического действия пара-НПФ проводили на модели гипоксической гипоксии при моделировании в барокамере подъема на высоту 12000 м над уровнем моря. В качестве подопытных животных использовались крысы. Использовалась барокамера с приточно-вытяжной вентиляцией, исключающей накопление углекислого газа. Был использован следующий режим “подъема” животных: первые 5000 м - за 3 минуты, каждые последующие 1000 м - за 1 минуту. На высоте 12000 м производили экспозицию крыс в течение 45 минут. Эффективность препарата оценивалась по следующим показателям: выживаемость животных (в %), продолжительность жизни на высоте (мин), коэффициент эффективности антигипоксического воздействия препарата (), определяемый по отношению продолжительности жизни на высоте животных, получивших препарат, к продолжительности жизни животных в контрольной группе контролю. В качестве эталонного препарата был использован убихинон Q_io. Результаты опыта представлены в Таблице 3.

Таблица 3 Сравнительная антигипоксическая активность пара-НПФ и убихинона Q10 в оптимальных дозах на модели гипоксической гипоксии (крысы)
Условия опыта	Число крыс	Доза препарата, мг/кг	Время введения препарата до подъема	Выживаемость, %	Продолжительность жизни крыс, мин
Контроль	20	0	45	0	12±1,7	3,5±0,3
Пара-НПФ	20	10	45	80	41,5±2,2
Контроль	20	о	80	0	9,6±1,7	2,3±0,4
Убихинон Q10	20	200	80	0	22,8±0,6

На модели гипоксической гипоксии преимущество пара-НПФ по сравнению с убихиноном Q₁₀ проявилось как в увеличении продолжительности жизни животных при экспозиции “на высоте” 12000 м, так и в выживаемости 80% крыс, тогда как все контрольные животные и животные, получившие убихинон Q₁₀, погибли.

В таблице 4 представлены результаты сравнительной эффективности пара-НПФ и убихинона Q₁₀ на модели гистотоксической гипоксии. В эксперименте использовали мышей, которым вначале вводили внутрибрюшинно антигипоксанты, а через 45 минут - летальную дозу цианида калия, составляющую 15 мг/кг массы.

Таблица 4 Сравнительная антигипоксическая активность пара-НПФ и убихинона Q10 на модели гистотоксической гипоксии (доза цианида калия 15 мг/кг, внутрибрюшинно)
Условия опыта	Число животных	Доза препарата, мг/кг	Число выживших животных	Продолжительность жизни животных, мин
Контроль	68	0	0	2,53±0,18	-
Пара-НПФ	14	15	0	3,81±0,26	1,5
	10	35	1	5,08±0,51	2,0
	45	70	18	5,38±0,48	2,1
Убихинон Q 10	12	100	0	2,55±0,14	1,0
	16	200	0	3,43±0,20	1,4

Таким образом, защитный эффект пара-НПФ при введении летальной дозы цианистого калия оказался более высоким по сравнению с убихиноном Q₁₀.

В Таблице 5 представлены результаты сравнительной эффективности пара-НПФ и убихинона Q₁₀ на модели циркуляционной гипоксии, вызванной кровопотерей. Опыты поставлены на крысах, у которых из общей сонной артерии отбирали кровь в объеме 3 мл крови на 100 г массы животного. Препараты вводили внутрибрюшинно за 45 мин до кровопотери. Отслеживали количество выживших животных через 6, 12 и 24 часа после кровопотери.

Таблица 5 Сравнительная антигипоксическая активность пара-НПФ и убихинона Q10 на модели циркуляционной гипоксии, вызванной кровопотерей
Условия опыта	Число крыс	Выживаемость крыс после кровопотери, %
		6 час	12 час	24 час
Контроль	30	0	0	0
пара-НПФ	30	70	60	60
Убихинон Q10	30	20	0	0

Нетрудно видеть, что на модели циркуляционной гипоксии, вызванной кровопотерей, антигипоксический эффект пара-НПФ существенно превосходит аналогичный эффект убихинона Q₁₀.

Пример 5. Оценка острой и хронической токсичности пара-НПФ

Острую токсичность препарата определяли на мышах-самцах массой 20-25 г при внутрибрюшинном введении 7%-ного водного раствора пара-НПФ. Летальную дозу ЛД₅₀ рассчитывали по методу Беренса. Оказалось, что летальная доза зависит от молекулярной массы препарата. Для образца пара-НПФ, описанного в примере 1 (молекулярная масса М=440), летальная доза ЛД₅₀ составляет 520 мг/кг, для образца пара-НПФ, описанного в примере 2 (М=750), летальная доза ЛД₅₀ составляет 920 мг/кг, а для образца пара-НПФ, описанного в примере 4 (М=650), летальная доза ЛД ₅₀ составляет 810 мг/кг.

Хроническую токсичность препарата определяли на крысах-самцах. При введении образца пара-НПФ, описанного в примере 4 (М=650), в дозе 20 мг/кг ежедневно в течение 1 года видимых изменений в поведении животных не выявлено. Проведенные гистологический исследования образцов легких, сердца, печени, почек, селезенки, щитовидной железы, скелетной мышцы не выявили патологических изменений по сравнению с контролем.

Пример 6. Сравнение биологической активности пара-НПФ и мета-НПФ

Задачей исследования было сравнение биологической активности соединения согласно изобретению (пара-НПФ) и его ближайшего структурного аналога - мета-НПФ, описанного в упомянутом выше патенте РФ №2105000. Биологическая активность мета-НПФ описана также в патенте РФ № 2124888. В качестве экстремального фактора была выбрана острая гипоксическая гипоксия.

Методика

Исследование выполнено на беспородных белых крысах-самцах массой 180-200 г в условиях хронического эксперимента. Предварительно у крыс исследовали индивидуальную устойчивость к острой гипоксической гипоксии. Для этого изучали время выживания их "на высоте" 12000 м, скорость "подъема" на высоту составляла 75 м/с. Согласно методике В.А.Березовского, определяли время устойчивости от момента достижения высоты 12000 м и до появления атонального дыхания или приступа судорог. Животные, имеющие низкую устойчивость к гипоксии, из эксперимента исключались. За неделю до основного эксперимента ежедневно внутрибрюшинно крысам I (контрольной) группы вводили 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия (15 животных), II группы - мета-НПФ 1 мл 4% раствора (14 животных), III группы - пара-НПФ 1 мл 4% раствора (16 животных). Для всех трех препаратов доза составила 40 мг/кг. Доза мета-НПФ и пара-НПФ была предварительно подобрана в тесте физической работоспособности. Через три дня после теста с гипоксической гипоксией у животных изучали в крови маркеры неспецифической резистентности.

В нижеследующих таблицах количество животных в группе обозначено “п”.

Результаты

Приведенные в Таблице 6 результаты исследования показали, что пара-НПФ проявляет большую эффективность в отношении устойчивости к гипоксической гипоксии.

Таблица 6
Группы	Количество животных	Время устойчивости к гипоксии (с)
		Минимальное	Максимальное	Среднее	Ошибка среднего	Процент от контроля
I (контроль)	15	31	144	77,3	19,05	100
II (мета-НПФ)	14	44	217	114,2	23,44	147
III (пара-НПФ)	16	48	219	128	23,7	166

Результаты исследования показателей нейроэндокринной регуляции представлены в Таблице 7, белков сыворотки крови - в Таблице 8, углеводного обмена - в Таблице 9, процессов пероксидации и состояния антиоксидантной системы - в Таблице 10.

Таблица 7 Показатели нейроэндокринной регуляции (X±х)
Показатели	Группы животных
	I (контроль) п=15	II (мета-НПФ) п=14	III (пара-НПФ) п=16
Катехоламины (мкг/л)	2,13±0,14	2,67±0,06	1,72±0,13
Адреналин (мкг/л)	1,1+0,08	0,92±0,05	1,06±0,13
Норадреналин (мкг/л)	1,83±0,07	1,05±0,05	1,56±0,07
Норадреналин (усл. ед.) Адреналин	1,86±0,08	2,0±0,16	1,59±0,2
Ацетилхолин (мкг/л)	2,14±0,06	2,11±0,04	1,90±0,05
Катехоламины (усл. ед.) Ацетилхолин	1,67±0,08	0,80±0,03	1,47±0,06
Ацетилхолин (усл. ед.) Норадреналин	1,43±0,05	2,01±0,08	1,14±0,09
Примечание: - различия достоверны

Таблица 8 Содержание белков в сыворотке крови (Х±х)
Показатели	Группы животных
	I (контроль) п=15	II (мета-НПФ) п=14	III (пара-НПФ) п=16
Общий белок (г/л)	68,7±1,4	73,2±1,8*	79,8±1,5*
Альбумин (г/л)	32,8±1,0	40,8±1,8*	36,3±1,7*
1 - глобулины (%)	4,3±0,4	4,5±0,5	5,3±0,2
2 - глобулины (%)	12,2±0,8	12,1±0,9	11,6±0,3
- глобулины (%)	12,3±0,6	12,5±0,7	12,1±0,4
- глобулины (%)	20,3±0,5	19,5±0,6	22,8±0,6
1 - глобулины (%)	4,3±0,4	4,5±0,5	5,3±0,2
2 - глобулины (%)	12,2±0,8	12,1±0,9	11,6±0,3
- глобулины (%)	12,3±0,6	12,5±0,7	12,1±0,4
- глобулины (%)	20,3±0,5	19,5±0,6	22,8±0,6
Примечание: - различия достоверны
Таблица 9 Показатели углеводного обмена (Х±х)
Показатели	Группы животных
	I (контроль) п=15	II (мета-НПФ) п=14	III (пара-НПФ) п=16
Глюкоза (ммоль/л)	2,7±0,07	4,51±0,09	4,28±0,08
Лакт (ммоль/л)	183±18,5	185,0±20,0	151,0±17,0
Пируват (ммоль/л)	9,7±1,89	10,31±0,81	13,3±1,6
Гликоген (отн. ед.)	0,28±0,09	0,15±0,01	0,19±0,01
Г-6ФДГ(отн. ед.)	53,2±3,9	54,0±6,0	43,5±3,8
ЩФ (отн. ед.)	121±6,5	121,0±2,0	105,0±6,08
Примечание: - различия достоверны

Таблица 10 Показатели процессов пероксидации и состояния антиоксидантной системы(Х±х)
Показатели	Группы животных
	I (контроль) п=15	II (мета-НПФ) п=14	III (пара-НПФ) п=16
Малоновый диальдегид (мкмол/л)	3,3±0,13	3,6±0,15	6,1±0,36
Супероксиддисмутаза (уел. ед.)	1,83±0,06	2,09±0,24	2,1±0,19
Витамин “Е” (мкмоль/л)	3,7±0,16	5,31±0,51	7,6±0,35
Дегидроаскорбиновая кислота (мкмоль/л)	4,2±0,17	7,6±0,62	6,8±0,34
Аскорбиновая кислота (мкмоль/л)	3,9±0,14	17,7±1,31	17,66±0,78
Общая аскорбиновая кислота (мкмоль/л)	18,6±1,2	29,3±1,25	24,6±1,62
Аскорбиновая / Дегидроаскорбиновая кислота (усл.ед.)	2,1±0,12	3,12±0,38	3,21±0,24
Бета-каротин (мкг/дл)	12,3±0,9	17,9±4,15	21,3±0,59
Ретинол (мкг/дл)	8,7±0,7	7,7±1,29	12,5±3,1
Восстановленный глутатион (мкмоль/л)	1,0±0,06	1,1±0,03	1,39±0,07
Окисленный глутатион (мкмоль/л)	3,1±0,5	2,6±0,02	1,7±0,06
Общий глутатион (мкмоль/л)	12,5±0,5	13,4±0,04	18,6±0,07
Примечание: - различия достоверны

ВЫВОДЫ

1. Пара-НПФ обеспечивает более выраженный антигипоксический эффект, чем мета-НПФ.

2. Действие экстремального фактора после введения в организм мета-НПФ или пара-НПФ приводит к увеличению неспецифической резистентности, при этом повышение неспецифической резистентности более выражено при использовании пара-НПФ, что свидетельствует о том, что пара-НПФ обладает более выраженным стресспротективным действием.

3. Механизм действия пара-НПФ при действии экстремальных факторов заключается в оптимизации нейроэндокринной регуляции, усилении белкового синтеза, анаэробного окисления.

4. Пара-НПФ обладает более выраженным защитным противоокислительным действием, чем мета-НПФ.