способ оценки общего физиологического состояния осетровых рыб

Формула изобретения

Способ оценки общего физиологического состояния осетровых рыб путем определения естественного фактора ингибиции активности антител класса М с последующей регистрацией снижения титров антител, в котором реакцию непрямой гемагглютинации проводят с эритроцитарным сальмонелезным О диагностикумом, а исследуемую сыворотку крови разводят изотоническим раствором хлористого натрия, смешивают с равным количеством тест-сыворотки в разведении 1:20 и инкубируют при 37°С, отличающийся тем, что смесь исследуемой сыворотки крови с изотоническим раствором хлористого натрия готовят в соотношении 1:20 и инкубируют в течение 4-х ч.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ихтиологии и рыбоводству, а именно к способам оценки физиологического состояния осетровых рыб.

Известен способ отбора физиологически полноценных самок севрюги при заводском воспроизводстве путем определения физиолого-биохимических тестов (Металлов Г.Ф., Гераскин П.П., Аксенов В.П. Физиолого-биохимические аспекты оценки рыбоводного качества самок севрюги Asipenser stellatus Pall. В кн.: Информационный пакет. Рыбное хозяйство. Серия аквакультура. Аквакультура: проблемы и достижения. М, 1997, вып.7, с.4-14). Применяют тесты, характеризующие красную кровь (концентрация гемоглобина, скорость оседания эритроцитов - СОЭ), белковый обмен (концентрация сывороточного белка и бета-липопротеидов) и жировой обмен (концентрация сывороточных липидов и холестерина). Объективно оценить физиологическое состояние рыб можно, лишь определив все эти показатели. Однако определение нескольких показателей трудоемко и требует достаточно много времени.

Известен способ определения естественного фактора ингибиции активности антител (ЕИФ) класса М для выявления вторичного иммунодефицита у людей и наземных животных и, таким образом, оценки состояния их здоровья (Авт. св-во СССР №1486929, МКИ 4 G 01 N 33/53; опуб. в БИ№22,15.06.89 г.).

Целью изобретения является объективная экспресс оценка физиологического состояния осетровых рыб.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве показателя оценки общего физиологического состояния осетровых рыб используют наличие в крови естественного фактора ингибиции активности антител класса М, которые являются основными у осетровых рыб. При этом сыворотку крови разводят раствором хлористого натрия в соотношении 1:20 и выдерживают при 37°С в течение 4-х часов.

Способ осуществляется следующим образом.

Постановка производится в полистироловых пластинках системы Такачи или планшетах для проведения иммунологических микрореакций. Исследуемую сыворотку крови осетровых рыб разводят изотоническим раствором хлористого натрия (рН 7,4) в соотношении 1:20. Смесь инкубируют в термостате при 37°С в условиях водяной бани в течение 4-х часов.

После инкубирования из опытной и контрольной смесей готовят двукратные серийные разведения в объеме 50 мкл в изотоническом растворе хлористого натрия, начиная с 1:40 до 1:10240.

В контроле вместо исследуемого материала добавляют изотонический раствор хлористого натрия. Затем осуществляют постановку реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с эритроцитарным сальмонеллезным О диагностикумом по наставлению МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского.

Оценку реакции проводят через 2 часа после инкубации в термостате при 37°С. Определяют титры агглютининов в опыте и контроле по четырехплюсовой системе во всех разведениях. Подсчитывают суммарный титр реакции опытного и контрольного рядов - общее количество плюсов во всех лунках ряда. Вычисляют индекс ингибирования (ИИ) - отношение суммарного титра контрольного ряда к таковому в опыте. Способ апробирован на опытном материале (сыворотка крови), полученном от 1176 экземпляров осетровых рыб (русского осетра, севрюги, персидского осетра, белуги и стерляди), отловленных в реке Волге, Каспийском море, а также взятых на рыбоводных заводах в период с 1993 по 2000 год.

Пример 1. Задачей эксперимента являлось выяснение возможного влияния реагентов исследуемого материала на результаты РНГА. В качестве исследуемого материала использовали сыворотку крови 100 (50 самок и 50 самцов) практически здоровых особей русского осетра.

Проведенное исследование показало, что сыворотка крови русского осетра в разведении, используемом при постановке реакции, не оказывает ингибирующего действия на антитела тест сыворотки в РНГА. Это заключение сделано на основании того, что суммарные реакции с сывороткой крови рыб не отличались достоверно от таковых в контроле (Р>0,05), а ИИ практически во всех случаях были равны 1,00.

Основные физиолого-биохимические показатели у подопытных рыб были в пределах нормы, то есть исследуемые рыбы были практически здоровы. Содержание суммарного сывороточного белка находилось в пределах 33,0-34,1 г/л. Концентрация гемоглобина варьировала от 56,0 до 67,0 г/л. Среднее содержание бета-липопротеидов находилось в пределах 241-317 мг. %. Концентрация холестерина варьировала в пределах 71,0-75,0 мг. %. Эти показатели подтверждают правильность вывода, сделанного на основании результатов определения естественного ингибирующего фактора.

Пример 2. Диагностика общего физиологического состояния путем определения уровня вторичного иммунодефицита у производителей севрюги при получении зрелой икры в условиях рыбоводного завода. При нарушениях в развитии и созревании оплодотворенной икры, низком проценте оплодотворения и выклева личинок развиваются иммунодефицитные состояния, связанные с функционированием ЕИФ.

У рыб недозревших (процент оплодотворения - 60,0; процент выклева личинок - 17,0) и у рыб перезревших (процент оплодотворения не превышал 40,0; процент выклева составил в среднем 14,6) отмечено появление ЕИФ в сыворотке крови по снижению титров агглютинирующей сыворотки. ИИ статистически достоверно были выше (Р<0,001) таковых у нормально созревших рыб (процент оплодотворения превысил 80,0; процент выклева составил в среднем 54,0).

Таким образом, показано, что уровень ЕИФ в сыворотке крови осетровых рыб может быть с успехом использован для отбора производителей при заводском воспроизводстве.

Определение ЕИФ в сыворотке крови осетровых рыб с помощью предлагаемого способа позволяет достаточно объективно оценить общее физиологическое состояние рыб за счет чувствительности и объективности диагностики вторичного иммунодефицита, связанного с ингибицией активности антител класса М, на основе выявления ЕИФ в сыворотке крови осетровых рыб.