состав для лечения рака и способ применения натуральных растительных масел

Формула изобретения

1. Фармацевтический состав для предотвращения или лечения рака мягких тканей у млекопитающих, содержащий, по крайней мере, одно соединение растительных эфирных масел, отличающийся тем, что указанное соединение растительных эфирных масел выбирают из группы, включающей альдегид С 16 (чистый), амилсалицилат, анисовый альдегид, бензиловый спирт, бензилацетат, циннамаль, карвакрол, цитронеллаль, цитронеллол, п-кумен, диэтилфталат, диметилсалицилат, дипропиленгликоль, эвгенол, изоэвгенол, галаксолид, гераниол, гваякол, ионон, метилантранилат, метилионон, метилсалицилат, -фелландрен, масло кудрявой мяты, периллальдегид, 1- или 2-фенилэтиловый спирт, 1- или 2-фенилэтилпропионат, пиперональ, пиперонилацетат, пиперониловый спирт, D-пулегон, терпинен-4-ол, терпинилацетат, 4-трет-бутилциклогексилацетат, тимьяновое масло, метаболиты транс-анетола, этилванилин и фармацевтически приемлемый носитель.

2. Фармацевтический состав по п.1, отличающийся тем, что указанный рак мягких тканей представляет собой рак молочный железы.

3. Способ лечения рака, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества состава по п.1.

Описание изобретения к патенту

Перекрестные ссылки на связанные заявки

Настоящее описание предъявляет права на заявку США №60/111,271 от 7 декабря 1998 г., полное раскрытие которой включено здесь в виде ссылки.

Область применения настоящего изобретения

Настоящее изобретение относится в основном к терапевтически эффективным составам, включающим соединения натуральных эфирных масел, и способам их использования в профилактических или лечебных целях при раке мягких тканей у млекопитающих (включая человека), например, при заболеваниях типа рака молочной железы.

Предпосылки настоящего изобретения

Рак молочной железы представляет собой пролиферативное заболевание эпителиальных клеток млекопитающих и, как было показано, эстроген стимулирует пролиферацию этих клеток как в культуре, так и у мышей (Soto and Sonnenschein, 1985; Osborne, 1988). Было предположено, что ксеноэстрогены стимулируют пролиферацию клеток путем связывания и активирования рецепторов эстрогенов (Miller et al., 1993: Hoffman, 1992). На протяжении двух или трех последних десятилетий постоянно увеличиваются случаи рака молочной железы, эта тенденция характеризуется увеличением эстрогензависимых форм рака, продолжением роста заболевания среди женщин старшего возраста и увеличением их количества как в развитых, так и в развивающихся странах (Harris et al., 1992). В 1973-1980 годах случаи рака молочной железы в США среди женщин в возрасте до 50 лет характеризовались умеренным ростом в 8%, в то время как среди женщин в возрасте 50 лет и старше эта величина составила 32,1% (Ries et al., 1991). Это смещение в сторону увеличения согласуется со сложившейся картиной накопления в окружающей среде остатков хлорорганических инсектицидов (Mussalo-Rauhamaa et al., 1990; Wolff et al., Davis et al., 1993). Рак молочной железы также стоит на втором месте в ряду причин смертности женщин от рака, и согласно оценкам, сделанным в 1998 году, рак молочной железы приведет к дополнительной смертности в 43900 случаях. Эстрогены окружающей среды или разрушители эндокринной системы, как предполагается, играют определенную роль в этиологии или развитии рака молочной железы (Davis et al., 1993; Dewailly et al., 1995). Экспериментально выявлено, что ксеноэсрогены влияют на выработку эстрогенов и на метаболизм, и что они представляют собой один из факторов риска, возникновения рака молочной железы Nelson, 1974; Berthois et al., 1986; Henderson et al., 1993; Jobling et al., 1996; Dees et al., 1997). Большинство из известных факторов риска рака молочной железы, вызывающих по крайней мере 30% случаев этого заболевания, связаны с общим прижизненным воздействием репродуктивных химических веществ, таких как эстрогены и ксеноэстрогены.

Стало ясным, что в результате увеличения уровня эстрогенов и за счет воздействия ксеноэкстрогенов окружающей среды количество случаев рака мягких тканей у млекопитающих ежегодно растет. Например, количество назначений эстрогена женщинам в менопаузальный период быстро увеличивается, в настоящее время оно оценивается в 50000000 рецептов, ежегодно выписываемых только в США. Такой рост применения эстрогена частично объясняется высоким риском рака молочной железы как у женщин молодого возраста, так и у женщин среднего возраста. Эстроген присутствуют у всех млекопитающих, он важен для женских репродуктивных органов (таких как яичники, матка, молочная железа и т.п.). У мужчин же наличие эстрогена необходимо для выработки спермы и полового созревания. Отмеченное злоупотребление использования эстрогена, который выписывают женщинам, по крайней мере частично ответственно за развитие рака мягких тканей, в частности рака молочной железы. Поэтому желательно противодействие или нейтрализация тех побочных воздействий, которые оказывают эстрогены на женщин.

Использование в США современных способов лечения, разрешенных к применению Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (США), например лечение тамоксифеном части женского населения, оказалось до некоторой степени эффективным в отношении противодействия побочным действиям эстрогена. К сожалению, эти методы лечения не являются безоговорочно эффективными и они сами по себе могут быть причиной ухудшения состояния здоровья, например, могут вызывать рак матки. Таким образом, если бы было возможно определить те соединения, которые могут сделать современные способы лечения более эффективными, или те соединения, которые можно применять в сочетании с этими способами или вместо них, то вероятно, что будут ослаблены или даже устранены некоторые из этих побочных эффектов. Возможным источником альтернативных способов лечения являются природные, нетоксические соединения. Предполагается, что эти соединения смогут преимущественно обеспечить более безопасные и эффективные способы лечения.

Для возможного лечения рака молочной железы предлагается использование определенных растительных монотерпеноидных эфирных масел (-терпинеол, линалоол и лимонен). Однако эти монотерпеноиды не обладают абсолютной эффективностью, и было доказано, что они представляют собой соединения, обладающие слабым антипролиферативным действием. Кроме того, эти данные не подтверждают способность этих соединений противодействовать воздействию эстрогена. Этот факт может вызвать вопрос, каким образом в организме женщины будет происходить взаимодействие этого продукта с добавкой эстрогена.

Следовательно, существует серьезная потребность в новых фармацевтических составах, содержащих нетоксичные ингредиенты, которые могут быть эффективно использованы для предотвращения или лечения у млекопитающих рака мягких тканей.

Краткое содержание настоящего изобретения

Первой целью настоящего изобретения является обеспечение новых составов, содержащих определенные растительные эфирные масла природного или синтетического происхождения, или смесь этих масел, или их производные, для профилактики или лечения рака мягких тканей.

Настоящее изобретение, нацеленное на новые фармацевтические составы, содержащие по крайней мере одно растительное эфирное масло, включая их смеси или производные, которые изготовлены синтетическим путем или получены из природных источников, выполняет указанную выше цель и другие цели настоящего изобретения. Оно нацелено также на способы использования таких новых фармацевтических составов для профилактического или терапевтического лечения рака мягких тканей.

Дополнительные цели и преимущества, присущие настоящему изобретению, частично будут описаны в приведенном далее описании или их можно узнать из практического применения или использования настоящего изобретения. Эти цели и преимущества могут быть реализованы и достигнуты путем использования средств и комбинаций, которые, в частности, приведены в пунктах формулы изобретения. Следует понимать, что приведенное ниже основное описание и следующее за ним детальное описание являются лишь примерами и даны только в целях объяснения, их не следует рассматривать как ограничительные.

Детальное описание предпочтительных воплощений настоящего изобретения

На все патенты, патентные описание и литературу, цитируемые в данном описании, здесь даны ссылки во всей своей полноте. В случае несогласованности преимущественную силу должно иметь настоящее раскрытие, включая определения.

В предпочтительном воплощении настоящее изобретение обеспечивает новый фармацевтический состав для профилактики или лечения рака, причем этот состав содержит по крайней мере одно растительное эфирное масло, включая смеси соединений растительных эфирных масел, или их производные природного или синтетического происхождения. К примерам растительных эфирных масел, попадающих в границы настоящего изобретения, относятся (но ими не ограничиваются): члены, выбранные из группы, включающей альдегид С 16 (чистый), амилокоричный альдегид, амилсалицилат, анисовый альдегид, бензиловый спирт, бензилацетат, циннамаль, коричный спирт, -терпинеол, карвакрол, карвеол, цитраль, цитронеллаль, цинтронеллол, п-кумен, диэтилфталат, диметилсалицилат, дипропиленгликоль, эвкалиптол (цинеол), эвгенол, изо-эвгенол, галаксолид, гераниол, гваякол, ионон, d-лимонен, ментол, метил-антранилат, метилионон, метилсалицилат, -фелландрен, периллальдегид масла кудрявой мяты, 1- или 2-фенилэтиловый спирт, 1- или 2-фенилэтилпропионат, пиперональ, пиперонилацетат, пиперониловый спирт, D-пулегон, терпинен-4-ол, терпинилацетат, 4-трет-бутилциклогексилацетат, тимьяновое масло, тимол, метаболиты транс-анетола, ванилин, этилванилин и им подобные. Поскольку эти эфирные масла известны и их применяют в других целях, то квалифицированным в этой области людям их можно получить при использовании стандартных способов.

Указанные выше соединения растительных эфирных масел по настоящему изобретению могут быть приобретены из обычных источников, могут быть легко выделены из определенных растений или деревьев и очищены (выделены), или их можно синтезировать по стандартной технологии. Преимущественно такие соединения удобно синтезировать из доступных сырьевых материалов. Сравнительная легкость, с которой соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы, представляет собой огромное преимущество для их массового получения.

Следует принять во внимание, что терапевтически активные соединения растительных эфирных масел можно модифицировать, или получить их производные путем присоединения соответствующих функциональных групп, в целях усиления селективных биологических свойств этих соединений. Такие модификации известны и они включают такие изменения, благодаря которым увеличивается биологическая проницаемость в заданную биологическую ячейку (например, кровь, лимфатическая система, центральная нервная система), увеличивается доступность орального применения, увеличивается растворимость (что допускает возможность инъекционного введения), ускоряется метаболизм и скорость выделения. Кроме того, указанные соединения растительных эфирных масел могут быть видоизменены в форму пролекарства, так что в организме пациента в результате действия метаболических или других биохимических процессов указанного пролекарства образуется необходимая терапевтически активная форма. К некоторым примерам пролекарства относятся: кеталь, ацеталь и гидразоновые формы соединений, содержащих кетонные или альдегидные группы.

Кроме того, указанные терапевтически эффективные соединения природных растительных эфирных масел по настоящему изобретению могут содержать один асимметричный атом углерода или большее их число. И поэтому возможно их существование в виде рацематов или рацемических смесей, отдельных энантиомеров, смесей диастереоизомеров и отдельных диастереоизомеров. Каждый стерический атом углерода может иметь R- или S-конфигурацию.

Все такие изомерные формы этих соединений определенно входят в границы настоящего изобретения.

Следует понимать, что составы и способы настоящего изобретения включают фармацевтические составы, содержащие по крайней мере одно растительное эфирное масло и их фармацевтически приемлемые соли с сочетании с любым фармацевтически приемлемым носителем, адъювантом или наполнителем. Термин “фармацевтически приемлемый носитель или адъювант” относится к носителю или адъюванту, который может быть введен пациенту вместе с соединением растительного эфирного масла по настоящему изобретению, и который при введении в дозах, достаточных для обеспечения терапевтического количества этого соединения, не разрушает его фармакологической активности и не обладает токсичностью.

Фармацевтические соли соединений растительного эфирного масла по настоящему изобретению включают соли, являющиеся производными фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот и оснований. Примеры подходящих солей включают (без ограничения): ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гликолат, полусульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, салицилат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат. При получении солей, пригодных в качестве промежуточных для синтеза соединений по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемых кислых аддитивных солей, можно использовать другие кислоты, такие как щавелевая, хотя эти кислоты сами по себе не являются фармацевтически приемлемыми.

Соли, полученные в виде производных соответствующих оснований, включают соли щелочных металлов (например, натрия), щелочноземельных металлов (например, магния), аммония и соли N-(C_1-4-алкил)⁴⁺. Настоящее изобретение допускает также кватернизацию любой азотсодержащей группы раскрываемых здесь соединений. Путем такой кватернизации могут быть получены водо- или маслорастворимые продукты или диспергируемые продукты.

Далее, фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и наполнители включают (но ими не ограничены): ионообменные смолы, глинозем, стеарат алюминия, лецитин, самоэмульгирующую систему доставки лекарственного вещества к участку действия (типа d.-токоферолполиэтиленгликоль 1000 сукцината, или аналогичной полимерной системы, или матрицы доставки лекарственного вещества), сывороточные белки (типа сывороточного человеческого альбумина, буферные соединений (типа фосфатов), глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, неполные глицеридовые смеси насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты (такие как протамин-сульфат), двунатриевый гидрофосфат, калиевый дигидрофосфат, хлорид натрия, соли цинка, коллодиальный кремнезем, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрий карбоксиметилцеллюлоза, полиакрилаты, вески, блоксополимеры полиэтилена и полиоксипропилена, полиэтиленгликоль и ланолин (шерстный жир). Циклодекстрины, такие как -, - и -циклодекстрин, или их химически модифицированные производные (такие как гидроксиалкилциклодекстрины, включая 2- и 3-гидроксипропил--циклодекстрины, или другие растворимые производные) могут быть преимущественно использованы для облегчения процесса доставки терапевтически эффективных соединений растительных эфирных масел по настоящему изобретению.

Фармацевтические составы по настоящему изобретению можно вводить орально, парентерально, путем ингаляционного распыления, местно, ректально, назально, буккально, вагинально, или через имплантированный сосуд; предпочтительно, однако, оральное или инъекционное введение. Указанные фармацевтические составы по настоящему изобретению могут содержать любые стандартные нетоксические фармацевтически приемлемые носители, адъюванты или наполнители. В некоторых случаях в целях увеличения стабильности приготовленного лекарственного состава или формы его доставки можно отрегулировать рН с помощью фармацевтически приемлемых кислот, оснований или буферов. Используемый здесь термин “парентеральный” включает методику подкожных, чрезкожных, внутривенных, внутримышечных, внутрисуставных, внутригрудинных, интраторокальных и интракраниальных инъекций или инфузий.

Указанные фармацевтические составы могут находиться в форме стерильных для инъекционного введения препаратов, например, в виде стерильной инъекционной формы водной или маслянистой суспензии. Эту суспензию можно приготовить по известной в этой области технологии использованием подходящих диспергирующих или смачивающих веществ (таких как, например, Твин 80) и суспендирующих агентов. Указанные стерильные пригодные для инъекции препараты могут также представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию в приемлемом для парентерального введения нетоксичном разбавителе или растворителе, например, такой как раствор в 1,3-бутандиоле. Приемлемые наполнители и растворители, которые могут быть использованы, включают: маннитол, воду, раствор Рингера, изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, обычно в качестве растворителя или в качестве суспендирующей среды применят стерильные жирные (нелетучие) масла. Для этих целей можно использовать любую смесь жирных (нелетучих) масел, включая синтетические моно- или диглицериды. Жирные кислоты (такие, как олеиновая кислота и ее глицеридные производные) пригодны для получения инъекционных форм, поскольку они представляют собой природные фармацевтически приемлемые масла (такие как оливковое или касторовое масло), особенно в своей полиоксиэтилированной модификации. Такие масляные растворы или суспензии могут также содержать спиртовой растворитель с длиной цепью или диспергатор с длинной цепью (типа производных фенола или аналогичного спирта).

Указанные фармацевтические составы по настоящему изобретению могут быть введены оральным путем в любой пригодной для орального применения дозировочной форме, включая (но не ограничиваясь ими): капсулы, таблетки и водные суспензии и растворы. Для таблеток в случае орального применения обычно используемые носители включают в себя лактозу и кукурузный крахмал. Обычно добавляют также пластифицирующий агент типа стеарата магния. Для орального применения в форме капсулы к пригодным разбавителям относятся, в частности лактоза и высушенный кукурузный крахмал. При оральном применении водных суспензий активный ингредиент объединяют с эмульгатором и суспендирующим агентом. Если требуется, то дополнительно могут быть введены определенные подсластители, и/или ароматизатор, и/или краситель.

Указанные фармацевтические составы по настоящему изобретению можно также использовать в форме суппозиториев для ректального введения. Эти составы можно получить путем смешивания соединения по настоящему изобретению с подходящим и не вызывающим раздражения наполнителем. Последний является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре, поэтому в прямой кишке он будет расплавляться, высвобождая активные ингредиенты. Такие вещества включают (но не ограничиваются ими): масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли. Хотя и нечасто, но местное введение фармацевтических составов по настоящему изобретению особенно пригодно в случае, когда необходимо лечение областей или органов, легкодоступных для местного применения. Для местного применения в виде накожной аппликации указанные фармацевтические составы должны быть приготовлены с подходящей мазью, которая содержит активные компоненты, суспендированные или растворенные в носителе. Носители для местного применения указанных соединений по настоящему изобретению включают (но ими не ограничены): минеральное масло, жидкий нефтепродукт, белый (медицинский) нефтепродукт, пропиленгликоль, соединение полиоксиэтилена и полиоксипропилена, эмульгирующий воск и воду. Или же указанные фармацевтические составы могут быть приготовлены с использованием подходящего лосьона или крема, содержащего указанное активное соединение, суспендированное или растворенное в носителе. Подходящие носители включают (но ими не ограничены): минеральное масло, сорбитмоностеарат, полисорбат 60, воск цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду. Указанные фармацевтические составы по настоящему изобретению можно также применять в прописи приготовленного ректального суппозитория или в составе подходящей клизмы местно к нижнему отделу кишечного тракта. В настоящее изобретение включены также пластыри, предназначенные для местного трансдермального применения.

Указанные фармацевтические составы по настоящему изобретению могут быть введены с помощью назального аэрозоля или ингаляционным способом. Такие составы готовят по технологии, хорошо известной в области приготовления фармацевтических составов, и их можно приготовить в виде солевых растворов, с использованием бензилового спирта или других подходящих консервантов, промоторов абсорбции (для улучшения биологической доступности), фтороуглеродов и/или известных в этой области солюбилизаторов или диспергаторов.

Другим приемлемым фармацевтическим препаратом будет инкапсулированная форма указанных растительных эфирных масел в чистом виде, или модицицированных согласно приведенным выше описаниям. Оболочки этих капсул должны быть такими, чтобы происходило быстрое (то есть в течение 1 минуты, часа или суток) высвобождение указанных растительных эфирных масел; или эти оболочки должны быть сделаны такими, чтобы высвобождение осуществлялось через некоторый определенный период времени (то есть через сутки, недели или месяцы). В качестве сырья для этих оболочек могут быть использованы природные или синтетические полимеры, разрешенные к применению Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (США) или состоящие из липидов и других подходящих веществ. Способом доставки этих капсул может быть оральное или инъекционное введение, это могут быть капсулы на основе или воды, или масла, в зависимости от необходимого способа применения или требуемой скорости высвобождения.

В целях предотвращения или лечения рака мягких тканей пригодны суточные дозировки активного ингредиента, составляющие от приблизительно 0,001 до 100 мг/кг массы тела, предпочтительно - от приблизительно 0,5 до 75 мг/кг массы тела. Обычно фармацевтические составы по настоящему изобретению следует вводить приблизительно от 1 до 5 раз в сутки или же путем непрерывного вливания. Такое введение можно использовать для лечения хронических или неотложных состояний. Количество активного ингредиента, которое можно соединить с веществом носителя с целью получения однократной дозировочной формы, будет варьироваться в зависимости от особенностей курса лечения конкретного организма и определенного способа введения этой дозировочной формы. Обычно препарат должен содержать от приблизительно 5% до приблизительно 95% активного соединения (вес/вес). Предпочтительно, чтобы такие препараты содержали от приблизительно 20% до приблизительно 80% активного соединения.

При улучшении состояния пациента, если это необходимо, может быть введена поддерживающая доза соединения по настоящему изобретению, состава или их комбинация. Следовательно, дозировку или частоту введения (или и то, и другое) в зависимости от конкретной симптоматики можно снизить до такого уровня, при котором поддерживается достигнутое улучшение состояния; при ослаблении симптомов до необходимого уровня лечение следует прекратить. Однако при любом рецидиве симптомов заболевания пациенты могут нуждаться в периодическом лечении на долговременной основе.

Применение настоящего изобретения в профилактических целях может потребовать ежедневного приема эффективного с профилактической точки зрения количества препарата.

Как будет понятно квалифицированным технологам, могут потребоваться более низкие или более высокие дозы, чем упомянутые. Конкретные дозировки и режимы лечения каждого отдельного пациента будут зависеть от разнообразных факторов, включая конкретную активность используемого соединения, возраст и массу тела пациента, состояние здоровья, пол, рацион питания, продолжительность введения, скорость всасывания, сочетания лекарственных средств, стадию и течение опухолевого процесса, предрасположенность пациента к раку и избранную врачом тактику лечения.

Составы и способы по настоящему изобретению будут далее проиллюстрированы неограничительными примерами. Эти примеры представляют собой лишь иллюстрации, они не ограничивают настоящее изобретение в отношении указанных здесь материалов, условий, весовых соотношений, параметров процесса и т.п. При ознакомлении с приведенными далее примерами станет понятно, что рост и пролиферация клеток MCF-7 являются определенно эстроген-зависимыми. В присутствии эстрогена эти клетки растут, сливаются и образуют очаги, что является ориентиром в диагностике рака. В отсутствии эстрогена рост этих клеток происходит медленно, а образование таких очагов - редко.

Пример 1

Антипролиферативное действие на эпителиальные клетки человека при раке молочной железы (MCF-7)

Клетки MCF-7 культивировали в питательной среде с добавкой 10% фетальной бычьей сыворотки. При 85% слиянии клеток их пересевали в десорбированную 5% фетальную бычью сыворотку. До проведения обработки испытуемыми химическими веществами феноловый красный оставили в свободном состоянии на 24 ч. После 24 ч обработки измерили пролиферацию клеток путем включения ³H-тимидина. Исследуемые химические вещества испытывали в присутствии эстрогена и в отсутствии эстрогена чтобы установить, обладают ли они, помимо антипролиферативного действия, и антиэстрогенной активностью. Опыт проводили три раза, а контроль осуществляли только при наличии растворителя. Контрольный образец собирал растворитель только при содержании этанола <0,1%. Эстроген анализировали при его концентрации 1нМ (=27 нг/Е ₂/мл). Соединения взятых в качестве примеров эфирных растительных масел испытывали в концентрации 50 мкг/мл. Полученные результаты приведены в Таблице 1.

Таблица 1
Анализируемые химические вещества	Включение 3H-тимидина
	Число распадов в минуту/мкг белка	В процентах от контрольной величины	В процентах от содержания эстрогена
Контроль	414,2	100
Эстроген	658,6	158	100
-терпинеол	480,5	116
-терпинеол + эстроген	679,1	164	103
Транс-анетол	434,9	105
Транс-анетол + эстроген	589,8	142	89
Карвакрол	207,2	50
Карвакрол + эстроген	181,7	43	28
Коричный спирт	18,5	4
Коричный спирт + эстроген	220,8	53	34
Эвгенол	215,6	52
Эвгенол + эстроген	289,1	70	44
Изо-эвгенол	119	29
Изо-эвгенол + эстроген	164	40	25
Тимол	97,3	23
Тимол + эстроген	108,2	26	16
Цитронеллаль	85,2	20
Цитронеллаль + эстроген	284,0	69	43
П-кумен	419,0	101
П-кумен + эстроген	632,0	152	96
Эвкалиптол	398,0	96
Эвкалиптол + эстроген	568,0	137	86
Метилсалицилат	444,0	107
Метилсалицилат + эстроген	693,9	168	106

Пример 2

Антипролиферативное действие

Клетки MCF-7 культивировали в питательной среде с добавкой 10% фетальной бычьей сыворотки. При 85% слиянии клеток их пересевали в десорбированную 5% фетальную бычью сыворотку. До проведения обработки испытуемыми химическими веществами феноловый красный оставили в свободном состоянии на 24 ч. После 24 ч обработки измерили пролиферация клеток путем включения ³H-тимидина. Исследуемые химические вещества испытывали в присутствии эстрогена и в отсутствии эстрогена, чтобы установить, обладают ли они, помимо антипролиферативного действия, и антиэстрогенной активностью. Опыт проводили три раза, а контроль осуществляли только при наличии растворителя. Контрольный образец собирал растворитель только при содержании этанола <0,1%. Эстроген анализировали при его концентрации 1нМ (=27 нг/Е ₂/мл). Соединения эфирных растительных масел испытывали в концентрации 50 мкг/мл. Полученные результаты приведены в Таблице 2.

Таблица 2
Анализируемые химические вещества	Включение 3H-тимидина
	Число распадов в минуту/мкг белка	% от контрольной величины	% от содержания эстрогена
Контроль	438,1	100
Эстроген	664,2	151,6	100
-терпинеол	490,7	112,0
-терпинеол + эстроген	636,7	145,3	96
Гваякол	712,3	162,6
Гваякол + эстроген	788,8	180,1	119
R-(+)-лимонен	393,1	89,7
R-(+)-лимонен + эстроген	522,6	119,3	79
-фелландрен	348,4	79,5	96
-фелландрен + эстроген	635,3	145,0

Пример 3

Влияние дозы на вызываемый эстрогеном рост клеток

Клетки MCF-7 культивировали в питательной среде с добавкой 10% фетальной бычьей сыворотки. При 85% слиянии клеток их пересеяли в 6 чашек Петри с добавлением десорбированной 5% фетальной бычьей сыворотки. До проведения обработки испытуемыми химическими веществами феноловый красный оставили в свободном состоянии на 24 ч. После обработки в течение 5 суток клетки обработали трипсином и собрали с помощью микроцентрифуги Эппендорфа. Осажденные центрифугой клетки повторно суспендировали в 1% трипановом синем. Затем три аликвоты суспензии (по 10 мкл каждая) жизнеспособных клеток анализировали в счетной камере. Для каждого образца подсчет проводили трижды, и приведенные в таблице величины являются среднеарифметическими этих трех подсчетов. Все тестируемые химические вещества анализировали в присутствии 10 нМ эстрогена (=2,7 нг эстрогена/мл). Для каждой из исследуемых концентраций использовалось две чашки Петри. Эксперимент повторяли дважды. Контрольный образец собирал растворитель только при содержании этанола <0,1%. Полученные результаты приведены в Таблице 3

Таблица 3
Обработка	Количество клеток ×(10 4)/мл
	Чашка Петри #1	Чашка Петри #2	Среднее	% от контроля
5-е сутки
Контроль	22	22	22,0	100
E2 (10 нМ)	36	28	32,0	145
				% анти-Е2
E2 /тимол (20 мкг/мл)	10	14	12,0	62,50
Е2/тимол (10 мкг/мл)	12	12	12,0	62,50
Е 2/тимол (5 мкг/мл)	20	18	19,0	40,60
Е2/тимол (1 мкг/мл)	32	32	32,0	00,00
Е2/изо-эвгенол (20 мкг/мл)	10	10	10,0	69,00
Е 2/изо-эвгенол (10 мкг/мл)	6	10	8,0	75,00
Е2/изо-эвгенол (5 мкг/мл)	18	23	21,0	35,60
Е2/изо-эвгенол (1 мкг/мл)	21	21	21,0	35,60
Е 2/эвгенол (20 мкг/мл)	10	16	13,0	60,40
Е2/эвгенол (10 мкг/мл)	18	14	16,0	50,00
Е2/эвгенол (5 мкг/мл)	19	19	19,0	41,70
Е 2/эвгенол (1 мкг/мл)	19	29	24,0	25,00
Е2/бензиловый спирт	24	18	21,0	35,40
(50 мкг/мл)
Е2/коричный альдегид	00	02	01,0	96,90
(50 мкг/мл)

Полученные нами данные демонстрируют зависимость “доза - эффект” для растительных эфирных масел, а также их антиэстрогенные свойства в отношении вызываемого Е₂ аномального роста клеток и в отношении пролиферации эпителиальных клеток человека при раке молочной железы (MCF-7). Эти данные показывают, что тимол при его низких концентрациях (5 мкг/мл) обеспечивает 40% защиту от вызываемого Е₂ аномального роста клеток при раке молочной железы. Помимо этого, полученные данные также показывают, что эвгенол (1 мкг/мл) и изо-эвгенол (1 мкг/мл) обеспечивают соответственно 35% и 25% защиту от вызываемого Е₂ аномального роста клеток при раке молочной железы (см. пример 3). Кроме того, коричный альдегид при концентрации 50 мкг/мл обеспечивает почти 96% контроль над индуцируемым Е₂ аномальным ростом клеток при раке молочной железы (см. пример 3).

Эти данные демонстрируют также, что определенные растительные эфирные масла и их комбинации пригодны для включения в соединения, обладающие антипролиферативными, антиэстрогенными и/или митогенетическими свойствами, которые полезны для профилактического или терапевтического лечения рака мягких тканей.

Хотя иллюстративные воплощения настоящего изобретения были описаны детально, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается именно указанными воплощениями, и что люди, квалифицированные в этой области, могут осуществить различные изменения этих воплощений и сделать разные их модификации, не отступая от сущности и границ настоящего изобретения, которые выражены в приведенной далее формуле изобретения.