новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga

Классы МПК:
Автор(ы):	ВЕЙДНЕР Мортен Слот (DK), ПЕТЕРСЕН Мортен Юст (DK), ЙЕНСЕН Нина Ворм (DK)
Патентообладатель(и):	ЕВРОВИТА А/С (DK)
Приоритеты:	подача заявки: 1999-04-16 публикация патента: 27.05.2005

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается новых композиций, содержащих ароматические соединения и терпеноиды, которые присутствуют в растении Alpinia galanga (Zingiberaceae) и предпочтительно могут быть получены из него, проявляют синергические эффекты по отношению к иммуномодуляции, при этом они существенно подавляют гиперчувствительные реакции. Изобретение заключается в том, что композиции могут быть применены для приготовления соответствующих лекарств, предназначенных, в частности, для лечения или предотвращения IgE ответных аллергических реакций и состояний, таких как астма, аллергический ринит, атопическая экзема или анафилаксия, и аутоиммунных расстройств, таких как болезнь Крона, язвенный колит, ревматоидный артрит или псориаз, а также для облегчения боли. Они могут быть введены, например, в фармацевтические и косметические препараты или диетические добавки. Описывается также способ приготовления таких композиций из Alpinia galanga. Изобретение обеспечивает получение композиций, которые подавляют гиперчувствительные реакции и имеют преимущество, заключающееся в отсутствии каких-либо серьезных побочных эффектов по сравнению с кортикостероидами. 12 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 табл.

Формула изобретения

1. Фармацевтический препарат, косметический препарат или диетическая добавка для иммуномодуляции, в частности, для подавления гиперчувствительных реакций, а также для облегчения боли, включающие в себя 0,01-99,9% (по весу) композиции, содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

б) 0,5-98% (по весу) одного или нескольких соединений, выбранных из группы, состоящей из 1’-ацетоксиэвгенолацетата, транс-р-кумарилдиацетата, кониферилдиацетата, 1’-гидроксишавиколацетата, 1’-гидроксишавикола, р-гидрокси-транс-циннамальдегида, р-метокси-транс-циннамилового спирта и 3,4-диметокси-транс-циннамилового спирта,

0,1-99,99% (по весу) фармацевтически приемлемого носителя.

2. Фармацевтический препарат, косметический препарат или диетическая добавка по п.1, отличающаяся тем, что указанная композиция дополнительно содержит

в) 0,5-98% (по весу) одного или нескольких соединений, выбранных из группы, состоящей из 1,8-цинеола, новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -пинена, -пинена, лимонена, -терпинеола, терпен-4-ола и транс- новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -фарнезена,

причем общее содержание компонентов (б) и (в) составляет 0,5-98% (по весу).

3. Фармацевтический препарат, косметический препарат или диетическая добавка, включающие в себя 0,01-99,9% (по весу) композиции (предпочтительно в форме экстракта или концентрата Alpinia galanga), содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

0,1-99,99% (по весу) фармацевтически приемлемого носителя.

4. Фармацевтический препарат, косметический препарат или диетическая добавка по п.3, отличающаяся тем, что указанная композиция дополнительно содержит

в) 0,5-98% (по весу) летучего масла Alpinia galanga или его смесей, причем общее содержание компонентов (б) и (в) составляет 0,5-98% (по весу).

5. Фармацевтический препарат, косметический препарат или диетическая добавка для иммуномодуляции, в частности, для подавления гиперчувствительных реакций, а также для облегчения боли, включающие в себя 0,01-99,89% (по весу) композиции, содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

причем общее содержание компонентов (б) и (в) составляет 0,5-98% (по весу); или композиции (предпочтительно в форме экстракта или концентрата Alpinia galanga), содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

в) 0,5-98% (по весу) летучего масла Alpinia galanga или его смесей, причем общее содержание компонентов (б) и (в) составляет 0,5-98% (по весу); а также 0,01-99,89% (по весу) Zingiber officinale или ее фрагментов, экстрактов или компонентов и 0,1-99,98% фармацевтически или косметически приемлемого носителя.

6. Фармацевтический препарат, косметический препарат или диетическая добавка для иммуномодуляции, в частности, для подавления гиперчувствительных реакций, а также для облегчения боли, включающие в себя 0,01-99,89% (по весу) композиции, содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

в) 0,5-98% (по весу) летучего масла Alpinia galanga или его смесей, причем общее содержание компонентов (б) и (в) составляет 0,5-98% (по весу); а также 0,01-99,89% (по весу) Y-линолеиновой кислоты или эйкозапентаеновой кислоты в форме, на выбор, растительного масла или рыбьего жира, и 0,1-99,98% фармацевтически приемлемого носителя.

7. Лекарство для иммуномодуляции, включающее композицию, содержащую

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

причем общее содержание компонентов (б) и (в) составляет 0,5-98% (по весу); или композицию (предпочтительно в форме экстракта или концентрата Alpinia galanga), содержащую

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

8. Лекарство для подавления гиперчувствительных реакций, включающее композицию, содержащую

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

9. Лекарство по п.7 или 8, отличающееся тем, что применяется для лечения или предотвращения IgE ответных аллергических реакций и состояний, таких, как астма, аллергический ринит, атопическая экзема или анафилаксия.

10. Лекарство по п.7 или 8, отличающееся тем, что применяется для лечения или предотвращения аутоиммунных расстройств, таких, как болезнь Крона, язвенный колит, ревматоидный артрит или псориаз.

11. Лекарство для облегчения боли, включающее композицию, содержащую

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

12. Способ лечения или предотвращения гиперчувствительной болезни в индивидууме, предусматривающий введение указанному индивидууму композиции, содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

причем общее содержание компонентов (б) и (в) составляет 0,5-98% (по весу); или композиции (предпочтительно в форме экстракта или

концентрата Alpinia galanga), содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

в) 0,5-98% (по весу) летучего масла Alpinia galanga или его смесей, причем общее содержание компонентов (б) и (в) составляет 0,5-98% (по весу), или фармацевтического препарата согласно любому из пп.1-6.

13. Способ лечения или предотвращения аутоиммунного расстройства индивидуума, предусматривающий введение указанному индивидууму композиции, содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

14. Способ лечения или предотвращения IgE-ответной аллергической реакции или состояния у индивидуума, предусматривающий введение указанному индивидууму композиции, содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

концентрата Alpinia galanga), содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

15. Способ облегчения боли у индивидуума, предусматривающий введение указанному индивидууму композиции, содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

концентрата Alpinia galanga), содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

16. Способ приготовления композиции, содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

концентрата Alpinia galanga), содержащей

а) 2-99,5% (по весу) 1’-ацетоксишавиколацетата,

и при необходимости,

в) 0,5-98% (по весу) летучего масла Alpinia galanga или его смесей, причем общее содержание компонентов (б) и (в) составляет 0,5-98% (по весу), включающий дистилляцию свежей или высушенной Alpinia galanga или ее фрагментов, предпочтительно корневища, и/или экстракцию указанного растительного материала с экстрагирующим агентом, включающим в себя органический растворитель, или воду, или их смеси, и далее, если необходимо, удаление экстрагирующего агента.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанный органический растворитель выбирают из группы, состоящей из ацетона, метилэтилкетона, метилацетата, низших алканолов, имеющих 1-4 углеродных атома, пентана, гексана, гептана и их смесей.

18. Способ по п.16 или 17, отличающийся тем, что экстракт дополнительно подвергают жидкостно-жидкостной экстракции или хроматографии для удаления или концентрации определенных составляющих.

Приоритет по пп.1-18 - 20.10.1998.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Настоящее изобретение относится к новым композициям, содержащим ароматические соединения и терпеноиды, которые присутствуют в растении Alpinia galanga (Zingiberaceae) и могут быть достаточно легко извлечены из него, и более конкретно к новым фармацевтическим и косметическим препаратам или диетическим добавкам, содержащим такие композиции. Далее, изобретение относится к применению композиций для приготовления лекарств, предназначенных для лечения или предотвращения гиперчувствительных реакций и болезней, связанных с такими реакциями. Изобретение относится также к способу приготовления таких композиций из Alpinia galanga.

Уровень техники

Alpinia galanga (L.) из семейства Zingiberaceae, обычно известное как Greater Galangal или Java Galangal, культивируется и произрастает в диком виде в Азии. Растение относится к корневищному типу, имеет высоту 1,8-2,1 м, продолговатые гладкие листья и зеленовато-белые цветы. Плоды представляют собой оранжево-красные коконы. Растение известно также под именем Languas galanga, особенно в Таиланде, где оно имеет также местное название Katuk karohinee.

В контексте настоящего изобретения термин "Alpinia galanga" относится к любой разновидности Alpinia galanga, или Languas galanga, найденной в любом месте земного шара.

Летучее масло Alpinia galanga можно получить паровой дистилляцией (перегонкой) корневища. Указанное масло состоит, в первую очередь, из терпеноидов с 1,8-цинеолом в качестве наиболее обильно представленного компонента. К другим главным терпеноидам относятся новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -пинен, -пинен, лимонен, -терпинеол, терпен-4-ол и транс- новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -фарнезол.

Другим важным классом химических компонентов в Alpinia galanga являются ароматические соединения. В этом классе количественно доминирует 1'-ацетоксишавиколацетат. К другим ароматическим составляющим относятся 1'-ацетоксиэвгенолацетат, транс-р-кумарилдиацетат, кониферилдиацетат, 1'-гидроксишавиколацетат, 1'-гидроксишавикол, р-гидрокси-транс-циннамальдегид, р-метокси-транс-циннамиловый спирт и 3,4-диметокси-транс-циннамиловый спирт.

Было показано, что несколько компонентов Alpinia galanga оказывают фармакологические воздействия. Так, Янсен и Шеффер обнаружили, что 1'-ацетоксишавиколацетат проявляет антигрибковые свойства (Janssen AM, Scheffer J.J.C., Planta Medica, pp.507-511,1985). Кроме того, поданным Ватанабе, это вещество ингибирует фагоцитоз перитонеальных макрофагов (Watanabe N. et al, Biosci., Biotechnol., Biochem., vol.59 (8), pp.1566-67,1995).

Экстракты или концентраты Alpinia galanga, содержащие синергические композиции терпеноидов и ароматических соединений, до сих пор описаны не были.

Под гиперчувствительностью понимается состояние измененной реакционной способности, в котором на вещество (антиген) тело реагирует с преувеличенным иммунным ответом. Она может быть вызвана экзогенными или эндогенными антигенами.

Гиперчувствительные реакции лежат в основе многих болезней, среди которых чрезвычайно важными являются аллергические и аутоиммунные состояния. Классификация болезней, связанных с гиперчувствительностью, приводится в учебнике Р. Kumar and M. Clark "Clinical Medicine" (3rd edition, 1944, pp.147-150, Bailliere Tindall, London).

Гиперчувствительные реакции типа I (IgE-ответные аллергические реакции, где IgE - иммуноглобулин Е) вызываются аллергенами (специфическими экзогенными антигенами), например, пыльцой, домашней пылью, перхотью животных, плесенями и т.п. Перечень аллергических болезней, в которых реакции типа I играют существенную роль, включает в себя астму, экзему (атопический дерматит), крапивницу, аллергический ринит и анафилаксию.

Гиперчувствительные реакции типа II вызываются поверхностью клеток или антителами, фиксированными на тканях (IgG и IgM, иммуноглобулины G и M), и играют существенную роль в патогенезе тяжелой миастении, синдрома Гудпасчура и злокачественного пернициозного малокровия.

Гиперчувствительные реакции типа III (иммунный комплекс) вызываются ауто- или экзогенными антигенами, такими как бактерии определенного типа, плесени и паразиты. Перечень болезней, в которых гиперчувствительные реакции типа III играют существенную роль, включает в себя красную волчанку, ревматоидный артрит и гломерулонефрит.

Гиперчувствительные реакции типа IV (замедленные) вызываются клетками или антителами, фиксированными на тканях. Этот тип гиперчувствительности играет существенную роль в нескольких состояниях, например, при болезни "трансплантат против хозяина", лепре (проказе), контактном дерматите и реакциях, вызванных укусами насекомых.

Для лечения гиперчувствительных реакций применимы несколько классов лекарств. Некоторые из них являются системными, а некоторые применяют для местного лечения.

К наиболее широко применяемым лекарствам для лечения гиперчувствительных болезней относятся кортикостероиды. В первую очередь, они оказывают свое фармакологическое воздействие неселективным ингибированием функционирования и деления различных классов иммунных клеток. Тем самым подавляются гиперчувствительные реакции. К сожалению, кортикостероиды связаны с несколькими серьезными побочными эффектами, например с иммуносупрессией, остеопорозом и атрофией кожи (при местном применении).

Сущность изобретения

Неожиданно для себя мы обнаружили синергические фармакологические эффекты между определенными группами соединений, которые можно получить из Alpinia galanga.

Так, мы обнаружили синергические эффекты между ароматическими соединениями, выбранными из группы, состоящей из 1'-ацетоксишавиколацетата, 1'-ацетоксиэвгенолацетата, транс-р-кумарилдиацетата, кониферилдиацетата, 1'-гидроксишавиколацетата, 1'-гидроксишавикола, р-гидрокси-транс-циннамальдегида, р-метокси-транс-циннамилового спирта и 3,4-диметокси-транс-циннамилового спирта, и терпеноидами, выбранными из группы, состоящей из 1,8-цинеола, новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -пинена, -пинена, лимонена, -терпинеола, терпен-4-ола и транс- новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -фарнезена. Эту группу терпеноидов представляют главные компоненты летучей смолы Alpinia galanga.

Такие синергические эффекты четко демонстрируются в примере 1.

Далее, мы обнаружили синергические эффекты между количественно доминирующим ароматическим соединением 1'-ацетоксишавиколацетатом и другими ароматическими соединениями, выбранными из группы, состоящей из 1'-ацетоксиэвгенолацетата, транс-р-кумарилдиацетата, кониферилдиацетата, 1'-гидроксишавиколацетата, 1'-гидроксишавикола, р-гидрокси-транс-циннамальдегида, р-метокси-транс-циннамилового спирта и 3,4-диметокси-транс-циннамилового спирта.

Такие синергические эффекты четко демонстрируются в примере 2.

Нами обнаружено, что указанные композиции существенно подавляют гиперчувствительные реакции. По сравнению с кортикостероидами эти композиции имеют преимущество, заключающееся в отсутствии каких-либо серьезных побочных эффектов.

Обсуждаемые синергические эффекты между компонентами Alpinia galanga до сих пор не были описаны. Более того, не были описаны и синергические композиции, содержащие такие соединения.

В соответствии со сказанным, настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую:

а) 2-99,5% (по весу) одного или нескольких соединений, выбранных из группы, состоящей из 1'-ацетоксишавиколацетата, 1'-ацетоксиэвгенолацетата, транс-р-кумарилдиацетата, кониферилдиацетата, 1'-гидроксишавиколацетата, 1'-гидроксишавикола, р-гидрокси-транс-циннамальдегида, р-метокси-транс-циннамилового спирта и 3,4-диметокси-транс-циннамилового спирта;

б) 0,5-98% (по весу) одного или нескольких соединений, выбранных из группы, состоящей из 1,8-цинеола, новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -пинена, -пинена, лимонена, -терпинеола, терпен-4-ола и транс- новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -фарнезена.

Далее, изобретение обеспечивает композицию, предпочтительно в форме экстракта или концентрата Alpinia galanga, содержащую:

б) 0,5-98% (по весу) летучего масла Alpinia Galanga или его смесей. Кроме того, изобретение обеспечивает композицию, содержащую:

а) 2-99,5% (по весу) 1'-ацетоксишавиколацетата;

б) 0,5-98% (по весу) одного или нескольких соединений, выбранных из группы, состоящей из 1'-ацетоксиэвгенолацетата, транс-р-кумарилдиацетата, кониферилдиацетата, 1'-гидроксишавиколацетата, 1'-гидроксишавикола, р-гидрокси-транс-циннамальдегида, р-метокси-транс-циннамилового спирта и 3,4-диметокси-транс-циннамилового спирта.

В силу своих фармакологических эффектов указанные синергические композиции можно применять для следующих терапевтических приложений:

- иммуномодуляция,

- лечение или предотвращение гиперчувствительных реакций,

- лечение или предотвращение lgE-ответных аллергических реакций и состояний,

- лечение или предотвращение аутоиммунных расстройств,

- облегчение боли.

В соответствии со сказанным, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтический и косметический препараты или диетическую добавку, содержащие указанные композиции и фармацевтически или косметически приемлемый носитель.

В более конкретной формулировке настоящее изобретение обеспечивает применение указанных композиций для приготовления лекарства, предназначенного для иммуномодуляции, подавления гиперчувствительных реакций, таких как IgE-ответные аллергические реакции и аутоиммунные реакции, и облегчения боли.

Таким образом, согласно изобретению указанные композиции можно применять в способе лечения или предотвращения гиперчувствительной болезни пациента, включающем введение такой композиции или содержащего ее фармацевтического препарата в организм указанного пациента, а изобретение включает в себя применение указанных композиций для приготовления лекарства, предназначенного для лечения или предотвращения гиперчувствительных болезней.

Кроме того, согласно изобретению указанные композиции можно применять в способе лечения или предотвращения аутоиммунного расстройства пациента, включающем в себя введение такой композиции или содержащего ее фармацевтического препарата в организм указанного пациента, а изобретение предусматривает применение указанных композиций для приготовления лекарства, предназначенного для лечения или предотвращения аутоиммунных расстройств.

Далее, согласно изобретению указанные композиции можно применять в способе лечения или предотвращения IgE-ответной аллергической реакции или состояния пациента, включающем введение такой композиции или содержащей его фармацевтического препарата в организм указанного пациента; а изобретение включает в себя применение указанных композиций для приготовления лекарства, предназначенного для лечения или предотвращения IgE ответных аллергических реакций и состояний.

Кроме того, согласно изобретению указанные композиции можно применять в способе облегчения боли у пациента, включающем в себя введение такой композиции или содержащего ее фармацевтического препарата в организм указанного пациента; а изобретение включает в себя применение указанных композиций для приготовления лекарства, предназначенного для облегчения боли.

Далее, изобретение предусматривает способ приготовления указанных композиций, включающий в себя дистилляцию и/или экстракцию Alpinia galanga или ее фрагментов, предпочтительно корневища, с использованием экстрагирующего агента, включающего в себя органический растворитель, и последующим, при необходимости, удалением экстрагирующего агента.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Неожиданно мы обнаружили синергические фармакологические эффекты между ароматическими соединениями, выбранными из группы, состоящей из 1'-ацетоксишавиколацетата, 1'-ацетоксиэвгенолацетата, транс-р-кумарилдиацетата, кониферилдиацетата, 1'-гидроксишавиколацетата, 1'-гидроксишавикола, р-гидрокси-транс-циннамальдегида, р-метокси-транс-циннамилового спирта и 3,4-диметокси-транс-циннамилового спирта, и терпеноидами, выбранными из группы, состоящей из 1,8-цинеола, новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -пинена, -пинена, лимонена, -терпинеола, терпен-4-ола и транс- новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -фарнезена. Эту группу терпеноидов представляют главные компоненты летучей смолы Alpinia galanga.

Такие синергические эффекты четко демонстрируются в примере 1, где композиция согласно изобретению по сравнению с ее компонентами проявляет значительно более высокие фармакологические эффекты.

Далее, мы обнаружили синергические эффекты между 1'-ацетоксишавиколацетатом, ароматическим соединением, количественно доминирующим в Alpinia galanga, и другими ароматическими соединениями, выбранными из группы, состоящей из 1'-ацетоксиэвгенолацетата, транс-р-кумарилдиацетата, кониферилдиацетата, 1'-гидроксишавиколацетата, 1'-гидроксишавикола, р-гидрокси-транс-циннамальдегида, р-метокси-транс-циннамилового спирта и 3,4-диметокси-транс-циннамилового спирта.

Такие синергические эффекты четко демонстрируются в примере 2, где композиция согласно изобретению по сравнению с ее компонентами проявляет значительно более высокие фармакологические эффекты.

К нашему удивлению, мы обнаружили, что такие синергические композиции оказывают фармакологические воздействия, пригодные для терапевтического лечения состояний, связанных с гиперчувствительными реакциями и болью.

В более конкретной формулировке указанными композициями при введении их в живой организм обеспечиваются следующие фармакологические эффекты:

- иммуномодуляция,

- подавление гиперчувствительных реакций,

- подавление IgЕ ответных аллергических реакций,

- подавление аутоиммунных реакций,

- уменьшение боли.

В соответствии со сказанным, настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую:

В типичной композиции процентные содержания (по весу) соединений, выбранных из группы, состоящей из 1'-ацетоксишавиколацетата, 1'-ацетоксиэвгенолацетата, транс-р-кумарилдиацетата, кониферилдиацетата, 1'-гидроксишавиколацетата, 1'-гидроксишавикола, р-гидрокси-транс-циннамальдегида, р-метокси-транс-циннамилового спирта и 3,4-диметокси-транс-циннамилового спирта, составляют по меньшей мере 2,0%, например, по меньшей мере 2,5%, по меньшей мере 3,0%, по меньшей мере 4,0%, по меньшей мере 5,0%, или по меньшей мере 7,5%, предпочтительно по меньшей мере 10,0%, например, по меньшей мере 12,5%, по меньшей мере 15,0%, или по меньшей мере 17,5%, более предпочтительно по меньшей мере 20,0%, например, по меньшей мере 25,0%, по меньшей мере 30,0%, или по меньшей мере 40,0%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 50,0%, например, по меньшей мере 75,0%.

В типичной композиции процентные содержания (по весу) соединений, выбранных из группы, состоящей из 1,8-цинеола, новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -пинена, -пинена, лимонена, -терпинеола, терпен-4-ола и транс- новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -фарнезена, составляют по меньшей мере 0,5%, например, по меньшей мере 1,0%, по меньшей мере 2,5%, по меньшей мере 5,0%, или по меньшей мере 7,5%, предпочтительно по меньшей мере 10,0%, например, по меньшей мере 12,5%, по меньшей мере 15,0%, или по меньшей мере 17,5%, более предпочтительно по меньшей мере 20,0%, например, по меньшей мере 25,0%, по меньшей мере 30,0%, или по меньшей мере 40,0%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 50,0%, например, по меньшей мере 75,0%.

б) 0,5-98% (по весу) летучего масла Alpinia Galanga или его смесей.

В типичной композиции процентные содержания летучего масла Alpinia galanga составляют по меньшей мере 0,5%, например, по меньшей мере 1,0%, по меньшей мере 2,5%, по меньшей мере 5,0%, или по меньшей мере 7,5%, предпочтительно по меньшей мере 10,0%, например, по меньшей мере 12,5%, по меньшей мере 15,0%, или по меньшей мере 17,5%, более предпочтительно по меньшей мере 20,0%, например, по меньшей мере 25,0%, по меньшей мере 30,0%, или по меньшей мере 40,0%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 50,0%, например, по меньшей мере 75,0%.

Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую:

а) 2-99,5% (по весу) 1'-ацетоксишавиколацетата;

В типичной композиции процентные содержания (по весу) 1'-ацетоксишавиколацетата составляют по меньшей мере 2,0%, например, по меньшей мере 2,5%, по меньшей мере 3,0%, по меньшей мере 4,0%, по меньшей мере 5,0%, или по меньшей мере 7,5%, предпочтительно по меньшей мере 10,0%, например, по меньшей мере 12,5%, по меньшей мере 15,0%, или по меньшей мере 17,5%, более предпочтительно по меньшей мере 20,0%, например, по меньшей мере 25,0%, по меньшей мере 30,0%, или по меньшей мере 40,0%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 50,0%, например, по меньшей мере 75,0%.

В типичной композиции процентные содержания (по весу) одного или нескольких соединений, выбранных из группы, состоящей из 1'-ацетоксиэвгенолацетата, транс-р-кумарилдиацетата, кониферилдиацетата, 1'-гидроксишавиколацетата, 1'-гидроксишавикола, р-гидрокси-транс-циннамальдегида, р-метокси-транс-циннамилового спирта и 3,4-диметокси-транс-циннамилового спирта, составляют по меньшей мере 0,5%, например, по меньшей мере 1,0%, по меньшей мере 2,5%, по меньшей мере 5,0%, или по меньшей мере 7,5%, предпочтительно по меньшей мере 10,0%, например, по меньшей мере 12,5%, по меньшей мере 15,0%, или по меньшей мере 17,5%, более предпочтительно по меньшей мере 20,0%, например, по меньшей мере 25,0%, по меньшей мере 30,0%, или по меньшей мере 40,0%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 50,0%, например, по меньшей мере 75,0%.

Синергические композиции согласно изобретению являются новыми и по своим качествам превосходят используемые по отдельности компоненты, например, 1'-ацетоксишавиколацетат (см. пример 2).

Компоненты композиций согласно изобретению можно получить, кроме Alpinia galanga, и из других растений. Например, некоторые терпеноиды, применяемые в композициях, можно извлечь из растений семейства Labiatae, например, новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -терпинеол из Thymus vulgaris или Origanum cordifolium, a транс- новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -фарнезен из Mentha piperita. Их можно получить также и из растений других семейств. В частности, 1,8-цинеол можно извлечь из Eucalyptus globulus, Achillea distans или Melaleuca alternifolia, новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -пинен/-пинен из Achillea distans, а -терпинеол из Melaleuca alternifolia. Кроме того, ароматические соединения, применяемые в композициях, можно извлечь, например, из других растений семейства Zingiberaceae, например, из Alpinia conchigera. В качестве источников ароматических соединений можно опять-таки использовать растения других семейств, например, 1'-гидроксишавикол можно извлечь из Piper betel. Кроме того, многие вещества, применяемые в качестве компонентов композиций согласно изобретению, можно произвести синтетическим путем.

Далее, изобретение обеспечивает новые фармацевтические и косметические препараты, а также диетические добавки со специфическими химическими составами.

Термин "диетическая добавка" определяется согласно документу The Dietary Supplement Health and Education Act of 1994 (DSHEA) Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (США). В этом документе дается следующее формальное определение "диетической добавки":

"Диетическая добавка есть предназначенный для добавления в пищу продукт (не являющийся табаком), который несет в себе или содержит один или несколько следующих пищевых ингредиентов: витамин, минерал, растение или какую-либо другую ботаническую субстанцию, аминокислоту, пищевое вещество, и предназначен для приема человеком с целью добавления в пищу с целью увеличения суммарной ежедневной принимаемой дозы, или концентрат, метаболит, составляющая, экстракт или комбинации этих веществ, предназначенные для поглощения в виде пилюль, капсул, таблеток или в жидкой форме".

Подобные определения существуют и в других частях света, например в Европе; в данном контексте используется приведенное выше определение. В мире используют различные наименования, касающиеся "диетических добавок", например, "пищевые добавки", "нейтральные вещества", "функциональные пищевые вещества" или просто "пищевые вещества". В данном контексте термин "диетическая добавка" включает в себя любое такое наименование или определение.

В соответствии со сказанным, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтический и косметический препараты или диетическую добавку, включающие в себя:

а) 0,01-99,9% (по весу) любой из указанных композиций согласно изобретению;

б) 0,1-99,9% (по весу) фармацевтически или косметически приемлемого носителя.

В типичном случае процентное содержание любой из указанных композиций в фармацевтическом и косметическом препаратах или диетической добавке составляет по меньшей мере 0,01%, например, по меньшей мере 0,025%, по меньшей мере 0,05%, по меньшей мере 0,1%, по меньшей мере 0,25%, по меньшей мере 0,5%, по меньшей мере 1,0%, по меньшей мере 2,5%, по меньшей мере 5,0%, или по меньшей мере 7,5%, предпочтительно по меньшей мере 10,0%, например, по меньшей мере 12,5%, по меньшей мере 15,0%, или по меньшей мере 17,5%, более предпочтительно по меньшей мере 20,0%, например, по меньшей мере 25,0%, по меньшей мере 30,0%, по меньшей мере 35,0%, или по меньшей мере 40,0%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 50,0%, например, по меньшей мере 75,0%.

Далее, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтический и косметический препараты или диетическую добавку, включающие в себя:

а) 0,01-99,89% (по весу) любой из указанных композиций согласно изобретению;

б) 0,01-99,89% (по весу) Zingiber officinale или его фрагментов, экстрактов или компонентов;

в) 0,1-99,98% (по весу) фармацевтически или косметически приемлемого носителя.

В типичной композиции процентное содержание Zingiber officinale или его фрагментов, экстрактов или компонентов составляет по меньшей мере 0,01%, например, по меньшей мере 0,025%, по меньшей мере 0,05%, по меньшей мере 0,1%, по меньшей мере 0,25%, по меньшей мере 0,5%, по меньшей мере 1,0%, по меньшей мере 2,5%, по меньшей мере 5,0%, или по меньшей мере 7,5%, предпочтительно по меньшей мере 10,0%, например, по меньшей мере 12,5%, по меньшей мере 15,0%, или по меньшей мере 17,5%, более предпочтительно по меньшей мере 20,0%, например, по меньшей мере 25,0%, по меньшей мере 30,0%, по меньшей мере 35,0%, или по меньшей мере 40,0%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 50,0%, например, по меньшей мере 75,0%.

Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтический и косметический препараты или диетическую добавку, содержащие:

а) 0,01-99,89% (по весу) любой из указанных композиций согласно изобретению;

б) 0,01-99,89% (по весу) новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -линолеиновой кислоты или эйкозапентаеновой кислоты в форме, на выбор, растительного масла или рыбьего жира;

в) 0,1-99,98% (по весу) фармацевтически или косметически приемлемого носителя.

В типичной композиции процентное содержание новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -линолеиновой кислоты или эйкозапентаеновой кислоты в форме, на выбор, растительного масла или рыбьего жира составляет по меньшей мере 0,01%, например, по меньшей мере 0,025%, по меньшей мере 0,05%, по меньшей мере 0,1%, по меньшей мере 0,25%, по меньшей мере 0,5%, по меньшей мере 1,0%, по меньшей мере 2,5%, по меньшей мере 5,0%, или по меньшей мере 7,5%, предпочтительно по меньшей мере 10,0%, например, по меньшей мере 12,5%, по меньшей мере 15,0%, или по меньшей мере 17,5%, более предпочтительно по меньшей мере 20,0%, например, по меньшей мере 25,0%, по меньшей мере 30,0%, по меньшей мере 35,0%, или по меньшей мере 40,0%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 50,0%, например, по меньшей мере 75,0%.

Указанные эффекты обеспечивают часть рациона для следующих терапевтических приложений обсуждаемых композиций согласно изобретению.

- Способ лечения или предотвращения гиперчувствительных болезней, характеризуемый введением указанных композиций. Терапевтическое воздействие может проявляться по отношению ко всем известным болезням, связанным с гиперчувствительными реакциями. Далее аутоиммунные расстройства и IgE-ответные аллергические состояния описываются более детально. В добавление к этим специфическим терапевтическим областям, воздействие указанных композиций проявляется по отношению ко всем известным состояниям и болезням, связанным с гиперчувствительными реакциями, таким как инфекции (вирусные, бактериальные, грибковые, паразитарные и т.п.), простуда и грипп, контактный дерматит, укусы насекомых, аллергические сосудистые заболевания, послеоперационные реакции, трансплантационное отторжение (болезнь типа "трансплантат против хозяина") и т.д., причем последующие примеры не должны рассматриваться как ограничивающие полный перечень.

- Способ лечения или предотвращения аутоиммунных расстройств, характеризуемый введением указанных композиций. Заявитель выдвигает гипотезу, что терапевтическое воздействие имеет место вследствие иммуномодуляции и подавляющего эффекта указанных композиций по отношению к гиперчувствительным реакциям. Терапевтическое воздействие может проявляться по отношению ко всем известным аутоиммунным расстройствам, таким как аутоиммунный гепатит, первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит, аутоиммунная гемолитическая анемия, болезнь Грейвса, тяжелая миастения, сахарный диабет типа I, воспалительные миопатии, рассеянный склероз, зоб Хашимото, аутоиммунная болезнь надпочечников, болезнь Крона, язвенный колит, гломерулонефрит, прогрессирующий системный склероз (склеродермия), болезнь Шегрена, красная волчанка, первичное сосудистое заболевание, ревматоидный артрит, ювенильный артрит, смешанная болезнь соединительной ткани, псориаз, пузырчатка, пемфигоид, везикулярный дерматит и т.д., причем последующие примеры не должны рассматриваться как ограничивающие полный перечень.

- Способ лечения или предотвращения IgE-ответных аллергических реакций и состояний, характеризуемый введением указанных композиций. Заявитель выдвигает гипотезу, что терапевтическое воздействие имеет место вследствие подавляющего эффекта указанных композиций по отношению к гиперчувствительным реакциям. Терапевтическое воздействие может проявляться по отношению ко всем известным lgE-ответным аллергическим реакциям и состояниям, таким как астма, экзема (например, атопический дерматит), крапивница, аллергический ринит, анафилаксия и т.д., причем последующие примеры не должны рассматриваться как ограничивающие полный перечень.

- Способ лечения или предотвращения любого состояния, связанного с болью, характеризуемый введением указанных композиций. Заявитель выдвигает гипотезу, что терапевтическое воздействие относится к иммуномодуляции, возможно, к подавляющим эффектам по отношению к гиперчувствительным реакциям.

Предпочтительный вариант осуществления изобретения представляет собой экстракт или концентрат Alpinia galanga. Экстракты согласно изобретению можно получить экстракцией или дистилляцией (например, водной, паровой или вакуумной дистилляцией) свежей или высушенной Alpinia galanga или ее фрагментов, предпочтительно корневища. Экстракцию можно проводить с множеством различных органических растворителей, предпочтительно с водорастворимыми растворителями и их смесями с водой. Эта операция может проводиться в холодном или нагретом варианте с использованием любого способа экстракции, например мацерацией, фильтрацией или сверхкритической экстракцией (например, с двуокисью углерода).

К предпочтительным экстрагирующим растворителям относятся ацетон, метилэтилкетон, метилацетат, этилацетат, низшие алканолы с 1-4 углеродными атомами, пентан, гексан, гептан и их смеси. С точки зрения эффективности экстракции предпочтительная температура экстракции близка к точке кипения используемого растворителя, но могут применяться и более низкие температуры с необходимым удлинением периода экстракции.

Для определенных составляющих Alpinia galanga экстракцию можно сделать более селективной путем изменения состава используемого растворителя, повышая или понижая таким образом их содержание в конечном экстракте.

После процесса первичной экстракции с целью удаления или концентрирования с возможным выделением любой составляющей экстракта может быть использована вторая стадия процесса, такая как жидкостно-жидкостная экстракция, колоночная хроматография или любой тип дистилляции. Таким образом в конечном экстракте можно устранить или сконцентрировать любую составляющую Alpinia galanga, например, 1,8-цинеол, новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -пинен, -пинен, лимонен, -терпинеол, терпен-4-ол, транс- новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -фарнезен, 1'-ацетоксишавиколацетат, 1'-ацетоксиэвгенолацетат, транс- новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -кумарилдиацетат, кониферилдиацетат, 1'-гидроксишавиколацетат, 1'-гидроксишавикол, р-гидрокси-транс-циннамальдегид, р-метокси-транс-циннамиловый спирт, 3,4-диметокси-транс-циннамиловый спирт, галангал А, галангал В, галанолактон, лабда-8(17)-12-диен-15,16-диал и 8-17-эпокси-лабд-12-ен-15,16-диал. В результате для получения синергической композиции согласно изобретению содержание любого компонента можно стандартизировать.

Согласно изобретению для усиления терапевтического воздействия указанные композиции можно комбинировать с любым другим активным ингредиентом или растительным экстрактом. Поэтому мы предлагаем комбинировать синергические композиции, предусматриваемые изобретением, с эйкозапентаеновой кислотой (полученной, например, из различных модификаций рыбьего жира) или новые синергические композиции, содержащие ароматические соединения и терпеноиды, присутствующие в alpinia galanga, патент № 2252771 -линолеиновой кислотой (полученной, например, из Borago officinalis). Для таких же терапевтических приложений в порядке параллельного варианта мы предлагаем комбинировать композиции, предусмотренные изобретением, с Zingiber officinale или ее фрагментами, экстрактами или компонентами.

Далее, очевидно, что в применении согласно изобретению для приготовления лекарств указанные композиции можно смешивать с такими добавками, как поверхностно-активные вещества, растворители, загустители, стабилизаторы, консерванты, антиокислители, вкусовые приправы и т.д., чтобы получить желаемую композицию продукта. Сходным образом фармацевтические препараты согласно изобретению могут дополнительно содержать такие добавки. Для курса введения или формы дозирования композиции ограничений нет, и в этом смысле следующие далее примеры ничем не ограничены (таблетки, капсулы, жидкости, гранулы, гели, мази, эмульсии (например, кремы и лосьоны), спреи (например, аэрозоли), глазные капли и т.д. При необходимости для улучшения диспергируемости композиции в желудочных жидкостях, приводящей к повышению биологической активности, или получения конечной формы дозирования композиции она может содержать также поверхностно-активные вещества, такие как соли желчных кислот, полиоксиэтилен-сорбент-сложные эфиры жирных кислот или сложные эфиры длинноцепных жирных кислот, смешанные с многоатомными спиртами.

Примеры

Пример 1

Задача исследования

Композицию согласно изобретению испытывали в данном исследовании на ингибиторную активность в трех анализах, ингибирующих энзимы, для соответственно лейкотриен-С4-синтетазы, 5-липоксигеназы и фосфодиэстеразы-IV. Состав, состоящий из смеси, в соотношении 1:1, концентрата терпеноидов и концентрата ароматических соединений, полученных из Alpinia galanga, сопоставляли с двумя его компонентами с целью идентификации возможных синергических эффектов.

Резюме исследования

Характеристика проблемы

Задача исследования заключалась в установлении активности композиции согласно изобретению на пути обмена липоксигеназы и в качестве ингибитора фосфодиэстеразы-IV (ФДЭ IV).

Лейкотриен-С4(ЛТС4)-синтетаза и 5-липоксигеназа представляют собой энзимы, включенные в путь обмена липоксигеназы. Лейкотриен-С4(ЛТС4)-синтетаза включается в формирование ЛТС4 из ЛТА4. 5-липоксигеназа катализирует окислительный метаболизм арахидоновой кислоты по отношению к 5-гидроксиэйкозатетраеновой кислоте (5-ГЭТЕ), при этом исходная реакция приводит к формированию лейкотриенов. Таким образом, взятые вместе, эти анализы могут установить степень активности, а также локус действия для агентов, ингибирующих формирование лейкотриенов.

Фосфодиэстераза типа IV (ФДЭ IV) катализирует конверсию цАМФ или цГМФ (циклические аденозинмонофосфат и гуанозинмонофосфат) в их соответствующие монофосфатные формы. ФДЭ IV нечувствительна к Са2+/калмодулину или регулированию цГМФ, проявляет цАМФ-субстратную зависимость и ингибируется специфичным ингибитором RO 20-1724. Поскольку цикличные нуклеотиды являются важными вторичными переносчиками в клетках многих тканей и органов, важной задачей считается развитие направлений терапии, селективно нацеленных на специфичные изоформы ФДЭ. Есть основания полагать, что ФДЭ IV является наиболее важной изоформой ФДА в бронхиальной релаксации, аллергии и воспалении. Поэтому ингибиторы для ФДЭ IV считаются ценными агентами в лечении астмы, аллергии и заболевания воспалительного типа.

Методы

Испытуемые соединения

Терпеноидный концентрат (далее обозначенный как Соединение A) Alpinia galanga приготавливали паровой дистилляцией сухого корневища, растертого в порошок. Присутствие ключевых терпеноидов подтверждали с помощью ГХ-МС (газовой хроматографии - масс-спектрометрии).

Концентрат ароматических соединений (далее обозначенный как Соединение Б) из Alpinia galanga приготавливали фильтрованием сухого корневища, растертого в порошок, с ацетоном или гексаном с последующим удалением экстрагирующего растворителя испарением под вакуумом. Остатки летучего масла удаляли с помощью флаш-хроматографии.

Композицию согласно изобретению (далее обозначенную как Соединение В) приготавливали смешиванием соединений А и Б (1:1 по весу).

Анализ лейкотриен-С4-синтетазы

Применяли ЛТС4 синтетазу, приготовленную в виде необработанной фракции из легкого морской свинки. Испытуемые соединения тестировали в дубликатном варианте при концентрации 300 мкг/мл. Испытуемое соединение и/или растворитель инкубировали с 12 мкг энзима, 0,3 мкг ЛТА4 метилового сложного эфира, 0,2% (по весу) альбумина (для стабилизации продукта) и 4,5 мМ бората серина (для предотвращения конверсии ЛТС4 в ЛТД4) в фосфатном буфере с рН 7,8 в течение 30 мин при 37°С. Реакцию остановили добавлением замороженного метанола. Формирование ЛТС4 количественно оценивали с помощью РИА (радиоиммуноанализ).

Анализ 5-липоксигеназы

Применяли приготовление необработанного 5-липоксигеназного энзима из крысиных базофильных лейкемических клеток (КБЛ-1). Испытуемые соединения тестировали в дубликатном варианте при концентрации 9 мкг/мл. Испытуемое соединение и/или растворитель предварительно инкубировали с энзимом в течение 5 мин в трис-буфере с рН 7,2 при комнатной температуре. Реакцию инициировали добавлением 15 мкМ арахидоновой кислоты в качестве субстрата и продолжили в течение дополнительных 8 мин, после чего остановили добавлением 70 мМ лимонной кислоты. Формирование 5-ГЭТЕ количественно оценивали с помощью РИА.

Анализ фосфодиэстеразы-IV

Применяли ФДЭ-IV, частично очищенную из проноцитических (pronocytic) клеток U937 человека. Испытуемые соединения тестировали в дубликатном варианте при концентрации 30 мкг/мл. Испытуемое соединение и/или растворитель инкубировали с 40 мкг энзима и 1 мкг цАМФ, содержащего 0,01 мкМ [³H]цАМФ, в трис-буфере с рН 7,5 в течение 20 мин при 30°С. Реакцию остановили кипячением в течение 2 мин, и полученный в результате АМФ конвертировали в аденозин добавлением 10 мг/мл нуклеотидазы змеиного яда с последующей инкубацией при 30°С в течение 10 мин. Негидролизованный цАМФ связывали смолой AGI-X2, а остающийся [³H]аденозин в жидкой фазе определяли количественно с помощью сцинтилляционного подсчета.

Полученные данные

Результаты представлены в Таблице 1 (ингибирование в процентах по сравнению с контрольным анализом без испытуемого соединения).

Таблица 1
Испытуемое соединение	Анализ	Ингибирование %
Соединение А	ЛТС4 синтетаза	25
Соединение Б	ЛТС4 синтетаза	21
Соединение В	ЛТС4 синтетаза	32
Соединение А	5-липоксигеназа	-89
Соединение Б	5-липоксигеназа	16
Соединение В	5-липоксигеназа	35
Соединение А	ФДЭ-IV	14
Соединение Б	ФДЭ-IV	4
Соединение В	ФДЭ-IV	56

Интерпретация

В настоящем исследовании синергический эффект композиции (Соединение В) оценивают путем сравнения его эффекта со средним значением эффекта Соединений А и Б (вычисленный аддитивный эффект двух соединений).

В анализе лейкотриен-С4-синтетазы эффект Соединения В составляет 32% ингибирования, что на 39% больше, чем вычисленный аддитивный эффект Соединений А и Б (23% ингибирования). Этот результат четко демонстрирует синергический эффект согласно изобретению.

В анализе 5-липоненазы эффект Соединения В составляет 35% ингибирования, что удивительно, т.к. вычисленный аддитивный эффект Соединений А и Б равен -37% ингибирования. Этот результат четко демонстрирует синергический эффект согласно изобретению.

В анализе фосфодиэстеразы-IV эффект Соединения В составляет 56% ингибирования, что на 522% больше, чем вычисленный аддитивный эффект Соединений А и Б (9% ингибирования). Этот результат четко демонстрирует синергический эффект согласно изобретению.

Пример 2

Задача исследования

Композицию согласно изобретению испытывали в данном исследовании на ингибиторную активность в двух анализах, ингибирующих энзимы, для соответственно лейкотриен-С4-синтетазы и фосфодиэстеразы-IV. Композицию, состоящую из 1'-ацетоксишавиколацетата и концентрата ароматических соединений, полученных из Alpinia galanga, сопоставляли с двумя ее компонентами с целью идентификации возможных синергических эффектов.

Резюме исследования

Характеристика проблемы

Лейкотриен-С4(ЛТС4)-синтетаза и 5-липоксигеназа представляют собой энзимы, включенные в путь обмена липоксигеназы. Лейкотриен-С4(ЛТС4)-синтетаза включается в формирование ЛТС4 из ЛТА4. 5-липоксигеназа катализирует окислительный метаболизм арахидоновой кислоты по отношению к 5-гидроксиэйкозатетраеновой кислоте (5-ГЭТЕ), при этом исходная реакция приводит к формированию лейкотриенов. Таким образом, взятые вместе эти анализы могут установить степень активности, а также локус действия для агентов, ингибирующих формирование лейкотриенов.

Фосфодиэстераза типа IV (ФДЭ IV) катализирует конверсию цАМФ или цГМФ в их соответствующие монофосфатные формы. ФДЭ IV нечувствительна к Са2+/калмодулину или регулированию цГМФ, проявляет цАМФ субстратную зависимость и ингибируется специфичным ингибитором RO 20-1724. Поскольку цикличные нуклеотиды являются важными вторичными переносчиками в клетках многих тканей и органов, важной задачей считается развитие направлений терапии, нацеленных на специфичные изоформы ФДЭ. Есть основания полагать, что ФДЭ IV является наиболее важной изоформой ФДА в бронхиальной релаксации, аллергии и воспалении. Поэтому ингибиторы для ФДЭ IV считаются ценными агентами в лечении астмы, аллергии и заболевания воспалительного типа.

Методы

Испытуемые соединения

1'-ацетоксишавиколацетат (далее обозначенный как Соединение А) приготавливали путем препаративной ВРЖХ. Чистоту соединения подтверждали с помощью ГХ-МС.

Концентрат ароматических соединений (далее обозначенный как Соединение Б) из Alpinia galanga приготавливали фильтрованием сухого корневища, растертого в порошок, с ацетоном или гексаном, с последующим удалением экстрагирующего растворителя испарением под вакуумом. Остатки летучего масла удаляли с помощью флаш-хроматографии.

Анализ лейкотриен-С4-синтетазы

Применяли ЛТС4 синтазу в виде необработанной фракции из легкого морской свинки. Испытуемые соединения тестировали в дубликатном варианте при концентрации 300 мкг/мл. Испытуемое соединение и/или растворитель инкубировали с 12 мкг энзима, 0,3 мкг ЛТА4 метилового сложного эфира, 0,2% (по весу) альбумина (для стабилизации продукта) и 4,5 мМ бората серина (для предотвращения конверсии ЛТС4 в ЛТД4) в фосфатном буфере с рН 7,8 в течение 30 мин при 37°С. Реакцию остановили добавлением замороженного метанола. Формирование ЛТС4 количественно оценивали с помощью РИА.

Анализ фосфодиэстеразы-IV

Применяли ФДЭ-IV, частично очищенную из проноцитических клеток U937 человека. Испытуемые соединения тестировали в дубликатном варианте при концентрации 30 мкг/мл. Испытуемое соединение и/или растворитель инкубировали с 40 мкг энзима и 1 мкг цАМФ, содержащего 0,01 мкМ [³H]цАМФ, в трис-буфере с рН 7,5 в течение 20 мин при 30°С. Реакцию остановили кипячением в течение 2 мин, и полученный в результате АМФ конвертировали в аденозин добавлением 10 мг/мл нуклеотидазы змеиного яда с последующей инкубацией при 30°С в течение 10 мин. Негидролизованный цАМФ связывали смолой AGI-X2, а остающийся [³H]аденозин в жидкой фазе определяли количественно с помощью сцинтилляционного подсчета.

Полученные данные

Результаты представлены в Таблице 2 (ингибирование в процентах по сравнению с контрольным анализом без испытуемого соединения).

Таблица 2
Испытуемое соединение	Анализ	Ингибирование %
Соединение А	ЛТС4 синтетаза	20
Соединение Б	ЛТС4 синтетаза	24
Соединение В	ЛТС4 синтетаза	44
Соединение А	ФДЭ-IV	49
Соединение Б	ФДЭ-IV	12
Соединение В	ФДЭ-IV	67

Интерпретация

В настоящем исследовании синергический эффект композиции (Соединение В) оценивают путем сравнения эффекта Соединения В со средним значением эффекта Соединений А и Б (вычисленный аддитивный эффект двух соединений).

В анализе лейкотриен-С4-синтетазы эффект Соединения В составляет 44% ингибирования, что на 100% больше, чем вычисленный аддитивный эффект Соединений А и Б (22% ингибирования). Этот результат четко демонстрирует синергический эффект согласно изобретению.

В анализе фосфодиэстеразы-IV эффект Соединения В составляет 67% ингибирования, что на 116% больше, чем вычисленный аддитивный эффект Соединений А и Б (31% ингибирования). Этот результат четко демонстрирует синергический эффект согласно изобретению.

Пример 3

Фармацевтический препарат согласно изобретению приготавливали в следующем виде.

Полученная из Alpinia galanga композиция согласно изобретению, содержащая 80% концентрата ароматических соединений и 20% терпеноидного концентрата, при приготовлении была модифицирована в препарат для применения в виде капель или спрэя для впрыскивания в нос согласно следующему рецепту:

для приготовлении 100 г спрэя, 1 мг/мл:

а) состав ароматика/терпеноиды: 0,05 г

б) кремофор RH 40, BASF: 2,00 г

в) этилендиаминтетрауксусная кислота, Fluka: 0,05 г

г) хлорид бензалькония, Sigma: 0,01 г

д) хлорид натрия, Merck: 0,89 г

е) вода Milli Q, Milliipore: 97,00 г

Процедура:

а) диспергируют в б) при нагреве до 37°С на водяной бане; добавляют в), г) и д). После смешивания понемногу при энергичном перемешивании добавляют е).

Спрей, приготовленный согласно приведенному выше рецепту, испытывали на 4 добровольцах. По их отзывам, указанный спрей эффективен против аллергических ринитов.

Пример 4

Фармацевтический препарат согласно изобретению приготавливали в следующем виде.

Полученную из Alpinia galanga композицию согласно изобретению, содержащую 50% концентрата ароматических соединений и 50% терпеноидного концентрата, при приготовлении модифицировали в виде основы для мази согласно следующему рецепту:

Для приготовления 30 г мази, 0,5% (по весу):

а) состав ароматика/терпеноиды: 0,3 г

б) кремеол Е-45, Århus Oliefabrik A/S: 19,5 г

в) летучий силикон VS72, Bionord A/S: 9,0 г

г) кремеол HF-52 SPC, Århus Oliefabrik A/S: 1,2 г

Процедура:

г) расплавляют при приблизительно 100°С и добавляют б) при непрерывном нагреве и перемешивании. Затем добавляют в) и охлаждают смесь до комнатной температуры. В заключение добавляют а) и композицию перемешивают.

Композицию мази, приготовленную согласно приведенному выше рецепту, испытывали на 5 добровольцах, страдающих атопической экземой. По их отзывам, мазь эффективна против симптомов атопической экземы.

Пример 5

Фармацевтический препарат согласно изобретению приготавливали в следующем виде.

Полученную из Alpinia galanga композицию согласно изобретению, содержащую 85% концентрата ароматических соединений и 15% терпеноидного концентрата, смешали с ацетоновым экстрактом Zingiber officinale и приготовили композицию в растительном масле согласно следующему рецепту:

для приготовления 100 г наполнителя мягких желатиновых капсул:

а) состав ароматика/терпеноиды: 15,0 г

б) экстракт Zingiber officinale 20,0 г

в) масло земляного ореха, Århus Oliefabrik A/S: 65,0 г

Процедура:

Желатиновые капсулы, содержащие 350 мг наполнителя, приготовленные согласно указанному предписанию, испытывали на 5 добровольцах, страдающих остеоартритом. После двух недель введения (две капсулы в день) все добровольцы сообщили об уменьшении боли.