биологически активная добавка для косметических средств и способ ее получения

Формула изобретения

1. Способ получения биологически активной добавки для косметических средств, включающий выделение содержимого пищеварительного тракта медицинской пиявки, отличающийся тем, что выделение содержимого пищеварительного тракта медицинской пиявки осуществляют путем его выдавливания в направлении от десятого-пятнадцатого сегмента задней присоски, за которую фиксируют пиявку, через ротовое отверстие пиявки, полученный продукт подвергают замораживанию с последующим оттаиванием и выделением жидкой фазы.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что выделенную жидкую фазу дополнительно экстрагируют в воде или физиологическом растворе, после чего отделяют осадок, а оставшуюся жидкость подвергают высушиванию.

3. Биологически активная добавка для косметических средств, отличающаяся тем, что она получена по способу в соответствии с п.1.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к косметологии, и может быть использовано при производстве биологически активного сырья для косметических средств с лечебно-профилактическими свойствами.

Известно, что в процессе жизнедеятельности медицинская пиявка (Hirudo medicinalis) вырабатывает комплекс биологически активных веществ (БАВ), в зависимости от способов обработки медицинской пиявки и выделения того или иного комплекса БАВ могут быть получены препараты с различными свойствами, обеспечивающими направленное воздействие на организм человека.

Известна биологически активная добавка (БАД) для косметических средств [1], полученная из медицинской пиявки, представляющая собой надосадочную жидкость экстракта из порошка лиофильно высушенных медицинских пиявок. Известная БАД оказывает некоторое влияние на белково-липидный обмен^: в коже. но в то же время обладает значительным протеолитическим действием, что вызывает снижение собственной ферментативной активности клетки кожи, и нередко вызывает аллергический ответ.

Процесс производства исходного сырья для получения известной БАД включает лиофильное высушивание пиявок и измельчение лиофилизата до порошообразного состояния, что не способствует высвобождению и сохранению БАВ, которые вместе с балластными веществами переходят при экстрагировании в осадок. И, как следствие, полученная известным способом БАД не обладает достаточной степенью активности из-за низкого содержания антиоксидантов и веществ, обеспечивающих стимуляцию белково-липидного обмена в коже и подкожной клетчатке.

Наиболее близкой из известных к описываемому изобретению является биологически активная добавка для лечебных и косметических средств в виде надосадочной жидкости экстракта из крови пищеварительного канала медицинской пиявки [2].

Известная БАД, представляющая собой препарат из живой медицинской пиявки, включает комплекс биологически активных соединений, обеспечивающих незначительное стимулирование белково-липидного обмена в коже, а также некоторую антиоксидантную и антистрессорную активность.

Однако значительная часть БАВ, продуцируемых медицинской пиявкой, адсорбируется на клетках стенки пищеварительного тракта, мышечных клетках, на балластных веществах кутикулы пиявки и на основном сорбенте - клетках стенки бактерии-симбионата (Aeromonas hirudinis) пиявок, образуя с ними прочные связи, а потому не переходят в жидкую фазу в процессе экстрагирования, утрачивая свойства ингибировать ферменты. Эти факторы обусловливают при использовании известной БАД недостаточно высокий уровень стимуляции белкового обмена и проявление такого нежелательного эффекта, как накопление суммарных липидов (нарушение метаболизма липидов) в коже, а также низкую активность БАВ, обладающих антиоксидантным и противовоспалительным действием, и отсутствие БАВ, вызывающих местный иммунный ответ.

При этом продукты, полученные непосредственно из живой пиявки, сильно загрязнены балластными веществами, различными бактериями и прежде всего продуктами жизнедеятельности (эндо- и экзопептидазами) бактерии-симбионата пиявки (Aeromonas hirudinis), которые увеличивают их протеолитаческую активность, что является нежелательным фактором воздействия на клетки кожи, поскольку в значительной степени провоцирует аллергический ответ организма.

Кроме того, БАВ в гомогенном состоянии сохраняют свою активность лишь незначительный срок. Поэтому препараты на основе экстрактов из медицинских пиявок или их частей имеют крайне ограниченное применение как в лечебных, так и в косметических средствах.

Таким образом, технический результат, получаемый при реализации описываемого изобретения, состоит в создании биологически активной добавки для косметических средств, обладающей антиоксидантным, противовоспалительным и иммуномодулирующим действием с повышенной биологической активностью целевого продукта, при отсутствии раздражающего и аллергизирующего действия на кожу.

Указанный технический результат достигается тем, что биологически активная добавка для косметических средств, полученная из медицинской пиявки, представляет собой жидкую фазу продукта, полученного после оттаивания предварительно замороженного содержимого пищеварительного тракта медицинской пиявки.

Указанный технический результат достигается также тем, что способ получения биологически активной добавки для косметических средств, включающий выделение содержимого пищеварительного тракта медицинской пиявки, отличается тем, что выделение содержимого пищеварительного тракта медицинской пиявки осуществляют путем его выдавливания в направлении от задней присоски, за которую фиксируют пиявку через ротовое отверстие, полученный продукт подвергают замораживанию с последующим оттаиванием и выделением жидкой фазы.

При этом выделенная жидкая фаза может быть дополнительно подвергнута экстрагированию в воде или физиологическом растворе, после чего отделяют осадок, а оставшуюся жидкость высушивают и полученный порошок используют в качестве биологически активной добавки в косметических средствах.

Биологически активная добавка для косметических средств, полученная в соответствии с настоящим изобретением, содержит следующие ингредиенты: гиалуронидазу, гирудин, липосому (дестабилазный комплекс, структуированный в липосому), антиоксиданты, стабильный аналог простациклина (6-keto-PGF₁), ингибиторы трипсина, плазмина, тромбина, химотриксина, эластазы и катепсина G, иммуноактивные компоненты (ИАК), цитомодуляторы (ЦМ), липазу и холестерин-эстеразу.

Полученная композиция БАВ позволяет стимулировать белковый обмен и повысить уровень суммарных липидов в коже, обладает выраженным антиоисидантным, противовоспалительным, пролиферативным и иммуномодулирующим действием, не проявляя при этом протеолитической активности, раздражающего или аллергизирующего действия.

Описываемый способ получения БАД для косметических средств осуществляют следующим образом.

Берут 500 медицинских пиявок общим весом 600 г. Каждую пиявку фиксируют за заднюю присоску, начиная с 10-15 сегмента от задней присоски (т.е. отступя от анального отверстия-порошицы, препятствуя таким образом поступлению в целевой продукт экскрементов пиявки), протягивают пиявку через плотно сдавленные бланши, например, другого пинцета и собирают кровь, поступающую из ротового отверстия. Полученный продукт замораживают при температуре -4С, оттаивают при комнатной температуре в течение 4-6 часов и выделяют жидкую фазу, например, центрифугированием. Получают 150 мл жидкого продукта. Выделение жидкой фазы осуществляют также любым известным способом, например, фильтрованием или отстаиванием. Полученный таким образом жидкий продукт непосредственно используют в качестве БАД для косметических средств. При выпаривании под вентилятором при температуре +37С получают 95 г порошка.

Полученный жидкий продукт может быть разбавлен дистиллированной водой или физиологическим раствором (соотношение объемов 1:1), перемешивают, центрифугируют и собирают жидкую фазу. Таким образом получают 650 мл жидкого целевого продукта. В цепях длительного хранения продукт подвергают выпариванию, получая 25 г порошкообразной БАД к косметическим средствам.

В процессе оттаивания предварительно замороженного продукта, выделенного из пищеварительного тракта пиявки, происходит сохранение целостности бактерии-симбионата пиявки, позволяющее перевести бактерию в состояние спор, при котором разрушаются адсорбционные связи между БАВ и стенной бактерии, БАВ переходят в жидкую фазу в процессе экстрагирования, в то время как бактерии вместе с протеолитическими ферментами, эндо- и экзопептитазами поступают в осадок. Таким образом, продукты жизнедеятельности бактерий не попадают в жидкую фазу, что снижет протеолитическую активность получаемого продукта в целом.

Сущность изобретения поясняется конкретными примерами реализации описываемого изобретения, где приведена экспериментальная оценка эффективности полученных БАД.

Пример 1. Изучение раздражающего и аллергизирующего действия БАД, ее подострой токсичности, влияния накожных длительных аппликаций препаратов на морфологические структуры кожи и печени экспериментальных животных по методу Е. Иевливой.

Исследования проводились на 90 половозрелых морских свинках, находящихся на обычном рационе питания. Полученную по описанному способу жидкую БАД наносили на кожу морских свинок ежедневно в течение 15 дней в концентрации 0,01% (n=30) и 0,1% (n=30). В качестве контроля животным апплицировали 0,85% раствор NaCl (физиологический раствор; n=15).

Установлено, что БАД, полученная в соответствии с настоящим изобретением, не обладает раздражающим и аллергизирующим действием на кожу, не оказывает отрицательного действия на морфологические структуры кожи и печени, не вызывает общетоксического действия на организм подопытных животных. Животные не отставали в прибавлении веса от контрольных, были активны, подвижны, имели блестящую шерсть, хороший аппетит. При анализе влияния препарата-прототипа установлено аллергизирующее действие на кожу животных, которое выражалось в нарушении пигментации отдельных участков кожи и расчесывании кожи.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об отсутствии отрицательного воздействия полученного комплекса БАВ на состояние кожи экспериментальных животных.

Пример 2. Изучение содержания общего растворимого белка в коже.

Исследования проводились по стандартному методу Д. Бейли. Полученный по описанному способу жидкий продукт наносили на кожу 90 половозрелых морских свинок ежедневно в течение 30 дней в концентрации 0,001% (n=30), 0,01% (n=30) и 0,1% (n=25). В качестве контроля животным апплицировали 0,85% раствор NaCl (физиологический раствор; n=15).

Установлено, что полученная БАД увеличивает содержание общего белка:

- в концентрации 0,001% на 21,3%,

- в концентрации 0,01% на 145,8%,

- в концентрации 0,1% на 532,7%.

У животных, получающих физиологический раствор, этот показатель не изменялся.

Полученные результаты свидетельствуют об эффективности изучаемого препарата в стимулировании белкового обмена.

Пример 3. Изучение содержания малонового диальдегада

Исследования проводились по стандартному методу В. Стальной.

Постановка эксперимента проводилась по методике, аналогичной примеру 2. Установлено, что содержание малонового диальдегида снижается при использовании 0,001% раствора жидкой БАД на 9,4%, при использовании 0,01% раствора - на 27,5%, при использовании 0,1% раствора - на 43,6%. При использовании физиологического раствора содержание малонового диальдегида практически не изменялся.

Достоверное снижение уровня малонового диальдегида является показателем антиоксидантной (антипротеазной) активности исследуемого комплекса БАВ.

Пример 4. Изучение фагоцитарной активности нейтрофилов

Исследование иммуномодулирующего действия описываемой БАД проводилось по известному истоду Е. Чернушенко [3].

Жидкую БАД, полученную в соответствии с настоящим изобретением, наносили на кожу 40 половозрелых нелинейных крыс-самцов, находящихся на обычном рационе питания, ежедневно в течение 45 дней в концентрации 0,001% (n=10), 0,01% (n=10) и 0,1% (n=10). В качестве контроля животным апплицировали 0,85% раствор NaCl (физиологический раствор; n=10). По истечении указанного срока у животных производился отбор крови и исследовалась фагоцитарная активность нейтрофилов. Анализу подвергались фагоцитарный индекс (ФИ) и процент фагоцитоза (Ф). ФМ при использовании 0,001% водного раствора описываемой БАД составил 1,2±0,3, 0,01% водного раствора - 2,4±0,3, 0,1% - 7,5±0,9, в контроле - 1,8±0,7.

Процент фагоцитоза при использовании 0,001% водного раствора БАД, полученной в соответствии с настоящим изобретением, составил 37,5±0,4, при использовании 0,01% раствора - 65,5±7,8, при использовании 0,1% раствора -89,7±4,6, в контроле - 45,4±6,3.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что по сравнению с контролем описываемая БАД в 0,001% водном растворе увеличивает фагоцитарный индекс на 34%, а процент фагоцитоза - на 17%; в 0,01% водном растворе - увеличивает фагоцитарный индекс на 33%, а процент фагоцитоза - на 50%, тогда как БАД в растворе 0,1% увеличивает фагоцитарный индекс на 180%, а процент фагоцитоза - на 98%.

Показатель фагоцитоза лейкоцитов является одним из критериев оценки уровня сопротивляемости организма инфекциям. Фагоциты - важнейшая составляющая иммунологической защиты организма.

Таким обрезом, содержимое кишечного канала медицинской пиявки, подвергнутое криообработке, повышая фагоцитарный индекс и процент фагоцитоза, демонстрирует выраженное иммуномодулирующее действие.

Пример 5.

Влияние на показатель клеточного иммунитета изучали по ингибированию активности компонентов системы комплемента методом определения гемолитической активности разбавленной сыворотки крови человека [4]. Модулирующая активность анализируемого препарата (контроль - равный объем физиологического раствора) на классический путь активации комплемента иллюстрируется следующими результатами.

При использовании 5 мкл комплементарная активность увеличивалась на 13%, при использовании 15 мкл комплементарная активность снижалась на 7%, а при использовании 25 мкл наблюдалось снижение комплементарной активности на 16% относительно контроля.

Таким образом, описываемая БАД наглядно демонстрирует иммуномодулирующее действие, которое проявляется в изменении направленности эффекта целевого продукта, а именно: низкие дозы продукта (5 мкл) стимулируют, а относительно высокие дозы (увеличение в три и более раз) депрессируют комплементарную активность.

Полученные результаты свидетельствуют о иммуномодулирующих свойствах описываемой БАД.

Пример 6. Изучение противовоспалительного действия

Исследование противовоспалительных свойств описываемой БАД проводили по стандартному методу внутрикожного введения формалина.

30 половозрелым нелинейным крысам-самцам, находящимся на обычном рационе питания, вводили по 0,05 мл 0,3% раствора формалина. На область инъекции наносили 0,01% (n=10) и 0,1% (n=10) раствор БАВ по описываемому изобретению. В качестве контроля животным апплицировали 0,85% раствор NaCl (физиологический раствор; n=10). По истечении 3-х часов анализировали размер папулы, образованной под воздействием формалина.

Процент угнетения воспаления через 3 часа после внутрикожного введения формалина при использовании 0,01% раствора БАД составил 30%, а при использовании 0,1% раствора БАД - 75%, что свидетельствует о выраженном противовоспалительном действии содержимого пищевартельного тракта медицинских пиявок, прошедших криогенную обработку.

Таким образом, полученный комплекс БАВ стимулирует белковый обмен в коже, обладает выраженным антиоксидантным, противовоспалительным и иммуномодулирующим действием, не проявляя раздражающего и аллергизирующего действия на кожу. Предназначен для использования в качестве биологически активной добавки для косметических средств.

Источники информации

1. Патент РФ № 2113843, МКИ А 61 К 7/48, опубл. в 1998 г.

2. Патент РФ № 2153325, МКИ А 61 К 7/48, опубл. в 2000 г.

3. Чернушенко Е.Ф., Колосова Л.С. Иммунологические исследования в клинике. - Киев, 1978 г.

4. Козлов Л.В. и др. ж. Биоорганическая химия, 1982, 8, 625-659.