способ прогнозирования инфекционных заболеваний новорожденных

Формула изобретения

Способ прогнозирования инфекционных заболеваний у новорожденных путем исследования периферической венозной крови матери, отличающийся тем, что у женщин в 36-40 недель гестации определяют относительное содержание СD71 - позитивных лимфоцитов и при его уровне, равном или большем 7%, прогнозируют инфекционные заболевания у доношенных новорожденных.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и перинатологии, и может быть использовано для прогнозирования инфекционных заболеваний у доношенных новорожденных.

Актуальность предлагаемого способа определяется высокой частотой инфекционной патологии в структуре заболеваемости новорожденных, которая по данным различных авторов колеблется от 6 до 53% [1, 2, 3]. Отмечаемый повсеместно рост числа неонатальных инфекций диктует необходимость поиска новых методов их прогнозирования.

Известен способ диагностики локальных форм инфекционно-воспалительных заболеваний у доношенных новорожденных путем исследования показателей содержания в сыворотке периферической крови интерлейкина 6 (IL-6) методом иммуноферментного анализа и иммуноглобулина М (Ig М) методом радиальной иммунодиффузии [4], при инфекционно-воспалительной патологии выявлено снижение показателей IL-6 и повышение уровня Ig М.

Недостатки способа

1. Исследование IL-6 и Ig М выполняется для диагностики уже развившихся неонатальных инфекций, так как Ig М вырабатывается в результате первичного иммунного ответа, а IL-6 является регулятором острофазного воспалительного ответа [5].

2. Отсутствие прогноза не дает возможности предотвратить инфекционно-воспалительную патологию.

3. Нельзя говорить о снижении показателей IL-6, так как нормальными показателями являются от 0 до 50 ед/мл [5].

4. Высокая стоимость используемого метода (стоимость обследования 1 ребенка свыше 5 долларов).

5. Субъективность оценки с помощью радиальной иммунодиффузии содержания Ig М.

6. Отсутствие данных о точности способа.

Наиболее близким по техническому решению является “Способ диагностики внутриутробной инфекции” путем определения антител в пуповинной крови новорожденного и крови матери, сравнения титров этих антител, отличающийся тем, что с целью повышения точности способа дополнительно определяют титры антител в ретроплацентарной крови, дифференцируют антитела по классу IgM и IgG, далее сравнивают полученные титры у новорожденного с титрами у матери и при 4-кратном увеличении их без повышения титра антител в ретроплацентарной крови и по наличию антител класса IgM в крови новорожденного диагностируют внутриутробную инфекцию [6].

Недостатки способа

1. Способ предполагает определение двух показателей (IgM и IgG) в трех образцах крови (кровь матери, пуповинная кровь новорожденного, ретроплацентарная кровь), что делает его чрезвычайно трудоемким.

2. Методика определения титра антител предполагает не менее чем 24 часа для прохождения реакции взаимодействия антиген-антитело.

3. В настоящее время метод определения содержания IgM и IgG по их титру считается морально устаревшим и практически не используется в лабораторной практике.

4. Выявление антител класса IgM в пуповинной крови новорожденного уже предполагает наличие внутриутробного инфицирования.

5. Использование показателей пуповинной крови делает невозможным прогнозирование инфекционных заболеваний новорожденных на антенатальном этапе.

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе. Заявляемый технический результат достигается тем, что в периферической крови беременных женщин в 36-40 недель гестации определяют относительное содержание CD71-позитивных лимфоцитов и при значениях этого показателя, равных или больших 7%, прогнозируют инфекционные заболевания у доношенных новорожденных в первые 7-10 дней жизни с точностью 85,3%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать инфекционные заболевания у новорожденных по определению относительного содержания CD71-позитивных лимфоцитов в периферической венозной крови их матерей в сроки гестации 36-40 недель.

Исследование уровня CD71+ лимфоцитов ранее проводилось в периферической крови детей с бронхиальной обструкцией в острой фазе респираторной вирусной инфекции. Было установлено снижение экспрессии CD71 молекул у детей с данной патологией [7]. Кроме того, изучалась экспрессия CD71 лимфоцитами пуповинной крови новорожденных с внутриутробной гипоксией. Было выявлено недостоверное увеличение количества лимфоцитов, несущих CD71, при данной патологии по сравнению с показателями у здоровых детей [8]. Однако для прогнозирования инфекционных заболеваний у новорожденных по иммунологическим параметрам матери этот показатель не использовали.

Известно, что антиген CD71 является рецептором трансферрина, находящийся на плазматической мембране и обеспечивающий поступление в клетку железа. На покоящихся лимфоцитах он практически не экспрессируется, но под влиянием факторов острой фазы воспаления экспрессия CD71 на лимфоцитах возрастает. Следовательно, увеличение содержания в периферической крови лимфоцитов, несущих CD71 молекулу, свидетельствует об активации клеток иммунной системы. Мы предполагаем, что повышение количества CD71 + лимфоцитов у беременных женщин в сроке 36-40 недель может отражать отклонения в иммунной реактивности плода и способствовать в дальнейшем развитию у него инфекционной патологии.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом [9].

1) Выделение лимфоцитов из периферической венозной крови.

2) 100 мкл лимфоцитов в концентрации 110⁶ кл/мл инкубируют с 20 мкл моноклональных анти-CD71, меченных FITC, в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего клетки отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя содержание CD71-позитивных клеток в лимфоцитарном гейте.

Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью (83,3%) прогнозировать инфекционные заболевания у новорожденных. Отличительными признаками способа являются:

1. Использование венозной крови беременных в сроки гестации 36-40 недель.

2. Определено значение содержания CD71+ лимфоцитов, равное или большее 7%, при котором прогнозируются инфекционные заболевания у доношенных новорожденных в первые 7-10 дней жизни.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Беременная Н., 26 лет, срок беременности 36 недель. Настоящая беременность вторая. Первая беременность закончилась медицинским абортом без осложнений. Объективно в 36 недель: жалоб не предъявляет, артериальное давление 120/80 мм рт. ст., прибавка массы тела за неделю 250 г. ВСДМ - 34 см, ОЖ - 85 см. Сердцебиение плода приглушенное, ритмичное до 142 в минуту. Видимых отеков нет. Общий анализ мочи без патологии. Заключение УЗИ: размеры плода соответствуют 36 неделям беременности, матка в нормальном тонусе, количество околоплодных вод в норме, плацента расположена на передней стенке, толщиной 40 мм, I степени зрелости. Поставлен клинический диагноз: беременность 36 недель, ФПН, ХВУГП. При обследовании заявленным способом: содержание в периферической крови CD71+ лимфоцитов 6,5%. Заключение: инфекционное заболевание у новорожденного не прогнозируется. Беременность закончилась своевременными родами и рождением доношенного новорожденного массой 3500 г, ростом 52 см, с оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов. Ребенок выписан на 5 сутки с диагнозом: здоров. Заключение: прогноз отсутствия инфекционных заболеваний у новорожденного по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2. Беременная К., 28 лет, срок беременности 37 недель. Настоящая беременность первая. С 36 недель предъявляет жалобы на отеки голеней, общая прибавка массы тела + 14 кг, неравномерная. Артериальное давление 110/70 мм рт. ст. ВСДМ - 34 см, ОЖ - 87 см. Сердцебиение плода ясное, ритмичное до 138 в минуту. Общий анализ мочи без патологии. Заключение УЗИ: размеры плода соответствуют 37 неделям беременности, матка в нормальном тонусе, количество околоплодных вод в норме, плацента на задней стенке, толщиной 35 мм, III степени зрелости. Поставлен клинический диагноз: беременность 37 недель, водянка I степени. При обследовании заявленным способом: содержание CD71+ лимфоцитов в периферической крови 7%. Заключение: прогнозируется развитие инфекционных заболеваний у новорожденного. Беременность закончилась своевременными родами и рождением доношенного новорожденного массой 3200 г, ростом 50 см, с оценкой по шкале Апгар 7-8 баллов. При обследовании у ребенка выявлена инфекция мочевыводящих путей. Ребенок получил антибактериальную терапию, выписан на 8 сутки. Заключение: прогноз развития инфекционных заболеваний у новорожденного по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3. Беременная А., 25 лет, срок беременности 40 недель. Настоящая беременность первая, протекает без осложнений. В сроке 40 недель объективно: жалоб не предъявляет. Артериальное давление 110/70 мм рт. ст., прибавка массы тела за неделю 300 г, отеков нет. ВСДМ - 35 см, ОЖ - 90 см. Сердцебиение плода ясное, ритмичное до 142 в минуту. Общий анализ мочи без патологии. Заключение УЗИ: размеры плода соответствуют 40 неделям беременности, матка в нормальном тонусе, количество околоплодных вод в норме, плацента по передней стенке, толщиной 35 мм, III степени зрелости. Поставлен клинический диагноз: беременность 40 недель. При обследовании заявленным способом: содержание CD71 + лимфоцитов в периферической крови 8,5%. Заключение: прогнозируется развитие инфекционных заболеваний у новорожденного. Беременность закончилась своевременными родами и рождением доношенного новорожденного массой 3000 г, ростом 51 см, с оценкой по шкале Апгар 6-7 баллов. При обследовании у ребенка выявлена внутриутробная пневмония, проводилась антибактериальная терапия, выписан на 11 сутки. Заключение: прогноз развития инфекционных заболеваний у новорожденного по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом обследовано 36 беременных женщин в 36-40 недель гестации, данные исследований приведены в таблице.

Преимущества заявляемого способа.

1. Высокая точность - 83,3%, чувствительность - 72,3%, специфичность - 88%.

2. Длительность проведения методики определения CD71 + лимфоцитов не превышает 1 час 30 минут.

3. Срок действия прогноза 7-10 дней.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Шабалов Н.П. Неонатология. T.1 - С.-Пб.: Специальная литература, 1995. - 494 с.

2. Яцык Г.В. Руководство по неонатологии. - М., 1998. - 400 с.

3. Сидорова И.С., Черниенко И.Н. Внутриутробные инфекции: хламидиоз, микоплазмоз, герпес, цитомегалия //Рос. Вестник перинатологии и педиатрии. - 1998. - Т.43. - №3. - С.7-13.

4. Пинаева А.Р. Состояние цитокиновой системы и клеточного иммунитета при инфекционно-воспалительных заболеваниях у новорожденных детей: Автореф. дис.... канд. мед. наук. - М., 2002. - 23 с.

5. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врачей. - С-Пб., 1998. - С.110.

6. А.С. 1516980. Способ диагностики внутриутробной инфекции /О.А. Аксенов, З.А. Осипова, Г.П. Курбатова, В.Ф. Мельникова (СССР)// Открытия. Изобретения. - 1989. - №39. - С.216.

7. Погорецкая С.А., Сибиряк С.В., Файзуллина P.M. Субпопуляционная структура, митогенный ответ и апоптоз лимфоцитов в острой фазе респираторной вирусной инфекции (РВИ) у детей с бронхиальной обструкцией //Медицинская иммунология. - 2001.- Т.3, №2. - С.233-234.

8. Торубарова Н.А., Кошель И.В., Яцык Г.В. Кроветворение плода и новорожденного. - М.: Медицина, 1993. - С.95-117.

9. Boyum A. Isolation of mononuclear cell and granulocytes from human blood and bone marrow //Scand.J.Clin.Lab.Invest. - 1968. - V.21. - N97. - P.77.1.