способ прогноза осложненного течения демодекозного блефароконъюнктивита

Формула изобретения

Способ прогноза осложненного течения демодекозного блефароконъюнктивита путем одновременного определения в слезной жидкости концентрации IgE и IL-4, при соотношении которых 1:8 и менее прогнозируют неблагоприятное течение заболевания, при соотношении 1:11 и более - благоприятное течение.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности, к офтальмологии и может быть использовано для прогноза течения демодекозного блефароконъюнктивита (ДБК).

Из доступной нам патентной и научной технической литературы информации о способах прогноза осложненного течения ДБК нами не обнаружено.

Техническим результатом изобретения является прогноз осложненного течения ДБК на основе определения уровней IgE и IL-4 в слезной жидкости и их цифрового соотношения в острый период заболевания.

Технический результат достигается способом прогноза осложненного течения ДБК путем одновременного определения в слезной жидкости концентрации IgE и IL-4, при соотношении которых 1:8 и менее прогнозируют неблагоприятное течение заболевания, при соотношении 1:11 и более - благоприятное течение.

Способ осуществляют следующим образом.

Слезную жидкость забирают микропипеткой из конъюнктивального мешка после предварительной стимуляции слезоотделения парами 10% нашатырного спирта.

Количественное определение уровня IgE в слезной жидкости проводят методом ИФА с использованием набора реагентов "IgE-ИФА-БЕСТ-стрип" (пр-во ЗАО "Вектор-БЕСТ"). Используемый твердофазный метод иммуноанализа основан на принципе "сэндвича". Анализ проводят в две стадии. На первой стадии калибровочные пробы с известной концентрацией IgE и исследуемые образцы инкубируют в лунках стрипированного планшета с иммобилизованными моноклональными антителами (МКАТ) к IgE. Затем планшет отмывают. На второй стадии связавшийся в лунках IgE обрабатывают конъюгатом МКАТ к IgE с пероксидазой (конъюгат МКАТ и иммобилизованные в лунках планшета МКАТ специфичны к разным участкам молекулы IgE). После отмывания избытка конъюгата образовавшиеся иммунные комплексы "иммобилизованные МКАТ - IgE - выявляют ферментативной реакцией пероксидазы с перекисью водорода в присутствии хромогена (орто-фенилендиамина). Интенсивность окраски хромогена пропорциональна концентрации IgE в анализируемом образце. После остановки пероксидазной реакции стоп-реагентом результаты учитывают фотометрически и выражают в МЕ/мл.

Определение уровня IL-4 в слезной жидкости больных проводят твердофазным иммуноферментным методом с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента по стандартной методике с использованием тест-систем РroСоn (OOO "Протеиновый контур", С.-Петербург) по описанной методике (Котов А.Ю. с соавт., 1993). Один тип антител иммобилизуется на внутренних поверхностях ячеек планшетов для микротитрования. Другой тип моноклональных антител к независимому эпитопу молекулы IL-4 находится в наборе в виде конъюгата с биотином. Индикаторным компонентом является конъюгат пероксидазы хрена со стрептавидином, имеющим очень высокое сродство к биотину. После инкубации и промывок в ячейки вносят конъюгат пероксидазы со стрептавидином, вновь инкубируют, промывают, вносят субстрат и измеряют активность связанной пероксидазы с использованием автоматического фотометра для микропланшетов. Счет результатов осуществляют с использованием автоматического фотометра" Multisan" при длине волны 450 нм. Результаты выражают в пкг/мл.

Уровень IgE в слезной жидкости в контрольной группе (6 человек) составляет 7,42,7 мЕ/мл, при неосложненном течении ДБК (12 человек) - 8,21,1 мЕ/мл, при осложнении ДБК эписклеритом или кератитом (8 человек) - достоверно выше (18,05,8 мЕ/мл, р<0,05). Уровень IL-4 в контрольной группе составляет 116,67,8, при неосложненном течении ДБК он достоверно ниже - 92,810,0 пкг/мл, при осложнении ДБК эписклеритом или кератитом - 135,96,0 пкг/мл. Соотношение IgE/IL-4 в контрольной группе равно 1:16, при неосложненном течении ДБК-1:11, при осложнении ДБК уменьшается до 1:8.

Таким образом, подтверждением данного способа прогноза ДБК при осложнении его эписклеритом или кератитом является совпадение результатов наших иммунологических исследований с клиническим течением ДБК в 100% случаев.

Пример 1. Больной Б., 1950 г.р. Диагноз: демодекозный блефароконъюнктивит. При обращении уровень IgE в слезной жидкости составлял 5,6 МЕ/мл, IL-4 - 125,5 пкг/мл, соотношение IgE/IL-4 равно 1:22. Был осуществлен прогноз неосложненного течения ДБК. В дальнейшем наблюдалось неосложненное течение ДБК.

Пример 2. Больной К., 1965 г.р. Диагноз: рецидивирующий демодекозный блефароконъюнктивит. При обращении уровень IgE в слезной жидкости - 62 МЕ/мл, IL-4 - 68,6 пкг/мл, соотношение IgE/IL-4 равно 1:1. На основании разработанного способа прогнозировали осложненное течение ДБК. Как показало клиническое наблюдение, все рецидивы ДБК осложнялись краевым кератитом.

Пример 3. Больной А., 1936 г.р. Диагноз: демодекозный блефароконъюнктивит. Уровень IgE в слезной жидкости - 20,8 МЕ/мл, IL-4 - 87,6 пкг/мл, соотношение IgE/IL-4 равно 1:4. На основании разработанного способа прогнозировали осложненное течение ДБК. Как показало клиническое наблюдение, течение ДБК в последующем осложнилось эписклеритом.

Таким образом, предлагаемый способ прогноза осложненного течения ДБК позволяет одновременно определить уровни IgE и IL-4 в слезной жидкости и их цифровое соотношение: при соотношении IgE/IL-4 1:8 и менее прогнозируют неблагоприятное течение заболевания, при соотношении 1:11 и более - благоприятное течение.