эритроцитарный диагностикум и способ диагностики хронической интоксикации неорганическими соединениями ванадия

Формула изобретения

1. Оригинальный эритроцитарный диагностикум, специфичный неорганическим соединениям ванадия, заключающийся в том, что для сенсибилизации эритроцитов готовят раствор с концентрацией ванадата натрия 0,1 мг/мл на забуференном физиологическом растворе рН 6,4, который соединяют с 1 мл 5%-ной взвеси глютаризированных эритроцитов, смесь тщательно встряхивают и выдерживают при комнатной температуре 25-30 мин, после чего эритроциты дважды отмывают центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин изотоническим раствором хлорида натрия и им же доводят до 0,5%-ной взвеси.

2. Способ диагностики эритроцитарным диагностикумом, полученным по п.1, интоксикации ванадием путем обследования пациента, характеризующийся тем, что к лейкоцитам крови больного добавляют равный объем 0,5% взвеси глютаризированных эритроцитов барана, нагруженных ванадатом натрия, смесь инкубируют при 37-37,5С в течение 10-15 мин, центрифугируют при 1500 об/мин 5-10 мин, надосадочную жидкость удаляют пипеткой, осадок ресуспендируют в капле любой интактной сыворотки: (бычьей, лошадиной, человеческой), делают мазок, фиксируют в метиловом спирте или этиловом спирте, высушивают, окрашивают по Романовскому-Гимза, подсчитывают в мазке число розеткообразующих лимфоцитов и при увеличении числа розеток по сравнению с нормой диагностируют хроническую профессиональную интоксикацию неорганическими соединениями ванадия.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике профессиональных заболеваний, и может быть использовано для постановки диагноза хронической профессиональной интоксикации неорганическими соединениями ванадия.

Цель изобретения - повышение объективности и точности диагностики профессиональных болезней, вызванных неорганическими соединениями ванадия.

Прототипом данного изобретения является “Способ диагностики интоксикации высшими алифатическими аминами жирного ряда” [Т.А.Юшкова, В.В.Юшков, Н.С.Сединина //АС № 1783438, БИ № 47], заключающийся в следующем: соединяются 0,1 мл лейкоцитов пациента с равными объемами 0,5% взвеси глютаризированных эритроцитов барана, нагруженных ВААЖР. Смесь инкубируют в течение 10-15 минут при температуре 37,0-37,5C, центрифугируют, делают мазок, фиксируют его, высушивают, окрашивают по Романовскому-Гимза. Просматривают под микроскопом 100 лимфоцитов, отмечая среди них клетки, фиксировавшие на себе три и более эритроцитов барана (РОК). При увеличении количества РОК, специфичных ВААЖР, по сравнению с нормой (3,40,5%) диагностируют наличие ВААЖР в организме и ставят диагноз: профессиональная интоксикация высшими алифатическими аминами жирного ряда.

Предложенное изобретение отличается от прототипа тем, что создан оригинальный эритроцитарный диагностикум, специфичный неорганическим соединениям ванадия (ванадат натрия).

Оригинальный эритроцитарный диагностикум, специфичный неорганическим соединениям ванадия, готовят следующим образом.

Для сенсибилизации эритроцитов готовят раствор с концентрацией ванадата натрия 0,1 мг/мл на забуференном физиологическом растворе рН 6,4. 1 мл 5%-ной взвеси глютаризированных эритроцитов центрифугируют, надосадочную жидкость удаляют, а к осадку эритроцитов приливают 1 мл раствора ванадата натрия. Смесь тщательно встряхивают и выдерживают при комнатной температуре 25-30 мин, после чего эритроциты дважды отмывают центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин изотоническим раствором хлорида натрия и им же доводят до 0,5%-ной взвеси.

У интактных лабораторных животных (крыс) число РОК, специфичных ванадию, составляет 5,3±0,8% (табл.1), а через 30 минут после внутрибрюшинного введении ванадата натрия в дозе 1 ПДК -38,21,1% (p₁<0,001) или пятиокиси ванадия в дозе 1 ПДК -34,0±2,3% (p₁<0,001; p₂>0,05).

Специфичность диагностикума доказывали обработкой избытком ванадата натрия или ВААЖР лимфоцитов, полученных от крыс, подвергавшихся воздействию ванадата натрия. Если в первом случае уровень РОК существенно снижался и был равен тому, что выявляется у интактных крыс, то во втором он соответствовал уровню РОК, обнаруженному у лабораторных животных, подвергавшихся воздействию ванадата натрия.

Сущность изобретения - обнаружение неорганических соединений ванадия основана на способности лимфоцитов организма сенсибилизироваться к веществу, попадаемому в организм любым путем, что сопровождается активизацией числа соответствующих рецепторов к этим соединениям ванадия.

Сущность способа состоит в определении числа лимфоцитов, способных взаимодействовать с эритроцитами барана, сенсибилизированных неорганическими соединениями ванадия.

Способ осуществляют следующим образом. Забирают 0,1-0,2 мл крови пациента в 0,1-0,2 мл 5%-ного раствора цитрата натрия для предупреждения свертывания крови. После тщательного встряхивания пробирки в нее добавляют для лизирования эритроцитов 1 мл дистиллированной воды на 30 с, а потом приливают 1 мл 1,8% раствор хлорида натрия для восстановления рН 7,0. Пробирки центрифугируют 5-10 мин при 1500 об/мин, после чего надосадочную жидкость сливают, а осадок лейкоцитов ресуспендируют в 0,1-0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия или среды 199. К полученной взвеси добавляют 0,1-0,2 мл 0,5%-ной взвеси глютаризированных эритроцитов барана, нагруженных неорганическими соединениями ванадия, смесь инкубируют 10-15 мин при t 37,0-37,5C, после чего центрифугируют при 1500 об/мин 5-10 мин. Надосадочную жидкость удаляют пипеткой, осадок ресуспендируют в капле любой интактной сыворотки (бычьей, лошадиной, человеческой). Из полученной суспензии клеток делают мазок, фиксируют в метиловом спирте или этиловом спирте, высушивают, окрашивают по Романовскому-Гимза. Под микроскопом рассматривают 100 лимфоцитов, отмечая среди них число (%) клеток, фиксировавших на себе три и более эритроцитов (РОК).

Обработку эритроцитов барана в глютаровом альдегиде производят следующим образом: соединяют 1 мл 5%-ной взвеси тщательно отмытых нативных эритроцитов барана с 0,25%-ным раствором глютарового альдегида в соотношении 1:1, смесь выдерживают при 37,0С в течение 15 мин, после чего эритроциты дважды отмывают от альдегида забуференным изотоническим раствором хлорида натрия рН 7,2 и доводят до первоначального объема этим же раствором (5%-ная взвесь).

Контроль за “нагруженностью” эритроцитов ванадием определяли атомно-эмиссионным методом добавок на дифракционном спектрографе ДФС-452 с универсальным электронным генератором УГЭ-4 (табл.2).

При использовании атомно-эмиссионноного метода обнаружения ванадия установлено, что ванадий выявлен на эритроцитах, нагруженных ванадатом натрия, но его нет на интактных (контрольных) эритроцитах (см. табл.3).

Показателем нормы является обнаружение числа РОК, специфичных неорганическим соединениям ванадия, равного 5,90,6%.

Примеры практического использования способа.

Пример 1. Б-ная А-ва, 32 года, аппаратчица цеха феррованадия. Стаж работы 10 лет.

Жалобы на головные боли, головокружение, боли в эпигастральной области, метеоризм, нарушение менструального цикла.

У б-ной взяли в пробирку кровь 0,1 мл в 0,1 мл 5% цитрата натрия, тщательно смешали для лизиса эритроцитов на 30 секунд, прилили 1 мл дистиллированной воды, а затем до восстановления рH 7,0 добавили 1 мл 1,8 % изотонического раствора хлорида натрия. Пробирку центрифугировали 5-10 мин при 1500 об/мин, после чего надосадок слили, осадок ресуспендировали в 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия, к полученной взвеси добавили 0,1 мл 0,5% взвеси эритроцитов, нагруженных ванадатом натрия. Смесь инкубировали 10-15 мин при t=37-37,5С, после чего центрифугировали 5-10 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость отсосали пипеткой, а осадок ресуспендировали в капле интактной лошадиной сыворотки. На чистое предметное стекло перенесли каплю суспензии из пробирки, сделали мазок, высушили его, фиксировали в спирте этиловом, окрасили по Романовскому-Гимза. Мазок микроскопировали под иммерсией (90), подсчитывали 100 лимфоцитов, отмечая среди них число (%) розеток (РОЛ), т.е. клеток, фиксировавших на своей поверхности три и более эритроцита. При подсчете в мазке б-ной А-вой обнаружено 26% РОК, специфичных ванадату натрия, тогда как в норме их уровень равен 5,90,6%.

Диагноз: Хроническая профессиональная интоксикация неорганическими соединениями ванадия; дисбаланс гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы и, как следствие, дисфункция яичников, нарушение эстрогенно-андрогенного баланса, предменструальный синдром, хронический гастроэнтероколит, пиелонефрит.

Пример 2. Б-ная Е-ва, 48 лет, аппаратчица цеха феррованадия. Стаж работы 26 лет.

Жалобы на слабость, утомляемость, головные боли, головокружение, одышку, боли в правом подреберье и в эпигастральной области, нарушение менструального цикла.

У б-ной взяли в пробирку кровь 0,1 мл в 0,1 мл 5% цитрата натрия, тщательно смешали для лизиса эритроцитов на 30 секунд, прилили 1 мл дистиллированной воды, а затем до восстановления рH 7,0 добавили 1 мл 1,8 % изотонического раствора хлорида натрия. Пробирку центрифугировали 5-10 мин. при 1500 об/мин, после чего надосадок слили, осадок ресуспендировали в 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия, к полученной взвеси добавили 0,1 мл 0,5% взвеси эритроцитов, нагруженных ванадатом натрия. Смесь инкубировали 10-15 мин при t=37-37,5C, после чего центрифугировали 5-10 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость отсосали пипеткой, а осадок ресуспендировали в капле интактной лошадиной сыворотки. На чистое предметное стекло перенесли каплю суспензии из пробирки, сделали мазок, высушили его, фиксировали в спирте этиловом, окрасили по Романовскому-Гимза. Мазок микроскопировали под иммерсией (90), подсчитывали 100 лимфоцитов, отмечая среди них число (%) розеток (РОК), т.е. клеток, фиксировавших на своей поверхности три и более эритроцита. При подсчете в мазке б-ной Е-вой обнаружено 39% РОК, специфичных ванадату натрия, тогда как в норме их уровень равен 5,90,6%.

Диагноз: Хроническая профессиональная интоксикация неорганическими соединениями ванадия; хронический гастроэнтероколит, угнетение функции микросомальных ферментов, ферментопатия, угнетение гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы и, как следствие, дисфункция яичников, нарушение эстрогенно-андрогенного баланса, дебют климактерического синдрома; хронический пиелонефрит.

Пример 3. Б-ной Ст-н, 47 лет, аппаратчик цеха феррованадия. Стаж работы 25 лет.

Жалобы: на слабость, утомляемость, головные боли, головокружение, одышку, легкую возбудимость, обильный пот, субфебрильную температуру, боли в эпигастральной области и правом подреберье, снижение потенции.

У б-ного взяли в пробирку кровь 0,1 мл в 0,1 мл 5% цитрата натрия, тщательно смешали для лизиса эритроцитов на 30 секунд, прилили 1 мл дистиллированной воды, а затем до восстановления рН 7,0 добавили 1 мл 1,8 % изотонического раствора хлорида натрия. Пробирку центрифугировали 5-10 мин при 1500 об/мин, после чего надосадок слили, осадок ресуспендировали в 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия, к полученной взвеси добавили 0,1 мл 0,5% взвеси эритроцитов, нагруженных ванадатом натрия. Смесь инкубировали 10-15 мин при t=37-37,5C, после чего центрифугировали 5-10 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость отсосали пипеткой, а осадок ресуспендировали в капле интактной лошадиной сыворотки. На чистое предметное стекло перенесли каплю суспензии из пробирки, сделали мазок, высушили его, фиксировали в спирте этиловом, окрасили по Романовскому-Гимза. Мазок микроскопировали под иммерсией (90), подсчитывали 100 лимфоцитов, отмечая среди них число (%) розеток (РОК), т.е. клеток, фиксировавших на своей поверхности три и более эритроцита. При подсчете в мазке б-ного Ст-на обнаружено 43% РОК, специфичных ванадату натрия, тогда как в норме их уровень равен 5,90,6%.

Диагноз: Хроническая профессиональная интоксикация неорганическими соединениями ванадия; дисбаланс гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, хронический простатит, нарушение диуреза, хронический пиелонефрит, нарушение функции щитовидной железы - гипертиреоз.