способ диагностики субарахноидального кровоизлияния

Формула изобретения

Способ диагностики субарахноидального кровоизлияния, включающий исследование цереброспинальной жидкости, отличающийся тем, что определяют активность каталазы и при ее появлении в цереброспинальной жидкости диагностируют наличие субарахноидального кровоизлияния.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике субарахноидальных кровоизлияний.

В настоящее время для диагностики субарахноидального кровоизлияния используют определение количества эритроцитов в цереброспинальной жидкости, при этом к 0,9 мл физиологического раствора NaCl приливают 0,1 мл цереброспинальной жидкости и подсчитывают количество эритроцитов в камере Горяева в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали и расчерченных на 16 маленьких. Полученное число клеток умножают на коэффициент 500, чтобы получить количество эритроцитов в 1 мл цереброспинальной жидкости. Таким образом, количество клеток увеличивается скачкообразно, и наличие всего 1 эритроцита в границе этих пяти квадратов увеличивает результат с нуля сразу до пятисот. Причем при повторном исследовании этого же ликвора при подсчете в границах пяти квадратов может не быть ни одной клетки и результат тогда равняется нулю. Ложно положительный результат возможен также при попадании в ликвор “путевой крови” (Юрищев Е.П. и др. Клиническая ликворология в нейрохирургии. Клиническая лабораторная диагностика, 1995, № 6, c. 105-107).

В диагностике наличия и массивности субарахноидального кровоизлияния важно, чтобы подсчет проводился сразу же после забора ликвора, пока не произошел цитолиз эритроцитов.

Целью предлагаемого изобретения является повышение точности диагностики субарахноидального кровоизлияния.

Поставленная цель достигается определением активности каталазы в цереброспинальной жидкости, повышение активности которой в цереброспинальной жидкости говорит о гемолизе эритроцитов в ликворном пространстве, так как в норме активность этого фермента в ликворе не определяется. Каталаза является органоспецифичным для эритроцитов ферментом, активность которых связана на 15% с их мембраной и на 85% с гемоглобином. Отличается от ранее применявшегося метода диагностики субарахноидального кровоизлияния - подсчета количества эритроцитов - тем, что более объективен, отсчет результата ведется с нуля, не будет давать ложноположительный результат при попадании в цереброспинальную жидкость путевой крови, так она содержит свежие эритроциты, не подвергшиеся гемолизу. Следовательно, при этом не происходит выхода каталазы в ликворное пространство и ее активность в ликворе не определяется. Исследование можно проводить не сразу после забора ликвора, что обязательно при подсчете количества эритроцитов из-за их быстрого гемолиза, так как активность фермента стойкая, не требует дополнительной энергии активации. Необходимо малое количество биоматериала - 0,1 мл цереброспинальной жидкости.

Способ осуществляется следующим образом. У больного берем цереброспинальную жидкость, полученную в результате люмбальной пункции, центрифугируем при 1500 об/мин 15 мин. К 2 мл 0,03% раствора перекиси водорода добавляем 0,1 мл супернатанта цереброспинальной жидкости. В холостую пробу вместо цереброспинальной жидкости вносим 0,1 мл дистиллированной воды. Реакцию останавливаем через 10 минут добавлением 1 мл 4% раствора молибдата аммония. Интенсивность развившейся окраски измеряем на фотоэлектроколориметре при длине волны 410 нм против контрольной пробы, в которую вместо перекиси водорода вносим 2 мл воды. Активность каталазы цереброспинальной жидкости рассчитываем по формуле

E=(A_хол.-A_oп.)(V·t·K),

где Е - активность каталазы (мкат/л);

А_хол. и A_оп. - экстинкция холостой и опытной проб;

V - объем вносимой пробы 0,1 мл;

t - время инкубации 600 с;

К - коэффициент миллимолярной концентрации перекиси водорода, равный 22,2·10³ мМ^-1·см^-1.

Появление активности каталазы в ликворе говорит о наличии субарахноидального кровоизлияния.

Данный метод может выполняться в любой лаборатории, так как метод не требует дорогостоящих реактивов и оборудования.

Приводим примеры реализации заявленного способа.

Пример 1. Больной Ф., 53 г. 24 июня 2001 года был избит и в этот же день госпитализирован в нейрохирургическое отделение в тяжелом состоянии с жалобами на головную боль, потерю сознания. При обследовании был в сознании, дезориентирован, отмечались элементы сенсорной афазии, зрачки D=S, слабость конвергенции с обеих сторон. Лицо было симметричное. Сухожильные рефлексы без разницы сторон. Патологических стопных и менингеальных знаков не было. АД 160/90 мм рт.ст., пульс 84 уд./мин, частота дыхания 20 в мин. В результате люмбальной пункции была получена цереброспинальная жидкость красного цвета, мутная, в которой уровень белка составил 0,858 г/л, свободного гемоглобина - 0,017 г/л, билирубина - 0 мкмоль/л, количество лейкоцитов 98 кл/мкл, эритроцитов - 155000 кл/мкл. После обследования был поставлен диагноз: закрытая черепно-мозговая травма, ушиб головного мозга средней степени тяжести, массивное субарахноидальное кровоизлияние. При этом активность каталазы в цереброспинальной жидкости составляла 81,3 мкат/л. На 8-е сутки после травмы в цереброспинальной жидкости уровень белка составил 0,106 г/л, свободного гемоглобина - 0 г/л, билирубина - 4,7 мкмоль/л, количество лейкоцитов 108 кл/мкл, количество эритроцитов 1500 кл/мкл, активность каталазы была 14,6 мкат/л.

Пример 2. Больной П., 28 лет. 18 июня 2001 года поступил в нейрохирургическое отделение в бессознательном состоянии. При обследовании больной был без сознания, иногда появлялась бессвязная речь. Состояние расценивалось как тяжелое, отмечался горизонтальный нистагм с обеих сторон, зрачки D=S, слабость конвергенции с обеих сторон. Лицо было симметричное. Язык по средней линии. Сухожильные рефлексы D больше S. Патологических стопных знаков не было. Ригидность мышц затылка на 2 поперечных пальца. АД 110/70 мм рт.ст., пульс 104 уд./мин, частота дыхания 20 в минуту. В результате люмбальной пункции была получена цереброспинальная жидкость красного цвета, мутная, в которой уровень белка составил 0,231 г/л, свободного гемоглобина - 0 г/л, билирубина - 0 мкмоль/л, количество лейкоцитов - 37 кл/мкл, эритроцитов - 22000 кл/мкл.

После обследования был поставлен диагноз: открытая черепно-мозговая травма, ушиб головного мозга средней тяжести, субарахноидальное кровоизлияние, закрытый перелом лобной кости, пазухи. При этом активность каталазы в цереброспинальной жидкости составляла 74,6 мкат/л. На 3-и сутки после травмы в цереброспинальной жидкости уровень белка составил 0,182 г/л, свободного гемоглобина - 0,27 г/л, билирубина - 0,017 мкмоль/л, количество лейкоцитов - 42 кл/мкл, количество эритроцитов - 85000 кл/мкл, активность каталазы была 259,7 мкат/л.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики субарахноидального кровоизлияния с помощью определения активности каталазы в цереброспинальной жидкости обеспечивает более точную и раннюю диагностику субарахноидального кровоизлияния, более прост и удобен в исполнении, чем известный.