способ определения подлинности и чистоты ксантинола никотината

Формула изобретения

Способ определения подлинности и чистоты ксантинола никотината путем приготовления растворов определяемого вещества и возможных примесей, хроматографирования и обнаружения с помощью УФ-света, отличающийся тем, что готовят раствор определяемого вещества с использованием спирта 95%, а в качестве подвижной фазы используют систему растворителей ацетон - 25%-ный раствор аммиака в соотношении 9:0,5.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в Центрах контроля качества лекарств, контрольно-аналитических и заводских лабораториях для стандартизации и анализа лекарственных средств.

Обеспечение населения высококачественными лекарственными средствами является одной из важнейших задач, стоящих перед здравоохранением и фармацевтической наукой. Существующие методы оценки качества отдельных лекарственных средств не всегда отвечают постоянно возрастающим требованиям фармацевтического анализа. Объектом настоящего исследования является производное пурина - ксантинола никотинат, сочетающий свойства веществ группы теофиллина и кислоты никотиновой и обладающий в связи с этим сосудорасширяющим действием, а также влияющим на мозговое кровообращение

Одним из требований нормативно-технической документации для оценки подлинности и чистоты ксантинола никотината является обнаружение кислоты никотиновой и специфической примеси теофиллина методом хроматографии в тонком слое сорбента.

Известен способ оценки подлинности и чистоты ксантинола никотината, принятый нами за прототип, который заключается в приготовлении водно-метанольного раствора испытуемого вещества и водно-этанольных растворов веществ свидетелей с последующим нанесением их на пластинку “Силуфол”, хроматографированием в системе растворителей спирт н-бутиловый - спирт метиловый - аммиака раствор концентрированный - хлороформ в соотношении 8:9:6:14 и обнаружении путем облучения хроматограммы УФ-светом (см. ФС 42-2596-94 “Ксантинола никотинат”).

Рекомендованный нормативно-технической документацией метод хроматографии в тонком слое сорбента, применяемый для контроля подлинности и чистоты ксантинола никотината, не позволяет определять наличие еще одной специфической примеси 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина, которая может присутствовать в препарате. Кроме того, система растворителей, описанная в нормативно-технической документации, состоит из нескольких высокотоксичных растворителей.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение качества лекарственного средства за счет определения дополнительной примеси 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина. Технический результат достигается путем приготовления раствора определяемого вещества и обнаружения примесей.

Новым в достижении технического результата является то, что готовят раствор определяемого вещества с использованием спирта 95%.

Новым является также то, что в качестве подвижной фазы используют систему растворителей ацетон - 25%-ный раствор аммиака в соотношении 9:0,5, которая позволяет, кроме подлинности кислоты никотиновой и примеси теофиллина, определять дополнительную примесь 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина.

В качестве растворителя для приготовления раствора определяемого вещества использовали спирт 95% как более доступный и менее токсичный растворитель.

Исходя из способа получения ксантинола никотината установили, что в качестве возможных специфических примесей в нем могут быть исходный продукт синтеза - теофиллин и промежуточный продукт синтеза 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина

Ксантинола никотинат и возможные примеси характеризуются наличием в молекулах различных функциональных групп и поэтому отличаются по физико-химическим свойствам. Исходя из этого, оптимальным методом их разделения следует считать метод хроматографии в тонком слое сорбента, который характеризуется экспрессностью, селективностью и высокой чувствительностью (Шталь Э. Хроматография в тонких слоях. - М.: Мир, 1965, 542 с.).

Для обнаружения исследуемых объектов на хроматограммах использовали облучение УФ-светом (длина волны 254 нм). Чувствительность обнаружения исследуемых веществ указанным методом составила 0,5 мкг. Детектирование ксантинола никотината, кислоты никотиновой, теофиллина и 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина на хроматограммах осуществляли с помощью ультрафиолетового осветителя типа “ВИО-1” (светофильтры УФС-1, УФС-2 длина волны 254 нм).

Для выбора оптимальной подвижной фазы провели анализ физико-химических свойств ксантинола никотината, кислоты никотиновой, теофиллина и 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина. Известно, что немаловажное значение для хроматографирования препаратов, обладающих кислотно-основными свойствами, имеет создание определенной рН среды. В связи с этим для выявления оптимальной подвижной фазы, позволяющей добиться разделения основания ксантинола, никотиновой кислоты и возможных примесей, авторы изучили двухкомпонентные системы растворителей, состоящих из органического растворителя и ледяной уксусной кислоты (либо 25%-ного раствора аммиака), создающих различные значения рН. Для этого изучили хроматографическое поведение исследуемых веществ в различных растворителях. Авторы установили, что в сильнополярных растворителях зона ксантинола имеет вытянутую форму, а зона всех веществ не отличается по хроматографической подвижности. В малополярных растворителях зоны всех исследуемых соединений остаются на линии старта. На основании анализа полученных результатов в качестве органической фазы авторы выбрали ацетон, как растворитель, обладающий средней полярностью и хорошо смешивающийся с водными растворами. Ксантинол, кислота никотиновая, теофиллин и 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллин в ацетоне имеют R_f соответственно 0; 0; 0,61 и 0,72.

Для разделения ксантинола и никотиновой кислоты авторы использовали их различия в химических свойствах. Поэтому в состав подвижной фазы вводили ледяную уксусную кислоту. Добавление ледяной уксусной кислоты к ацетону привело к увеличению подвижности всех исследуемых веществ. В системе растворителей ацетон - ледяная уксусная кислота (9:0,5) значение R_f ксантинола, никотиновой кислоты и 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина составили соответственно 0,5; 0,55; 0,66; 0,77.

Для более надежного разделения зон ксантинола и никотиновой кислоты увеличили количество ледяной уксусной кислоты в подвижной фазе. Увеличение количества кислоты в составе подвижной фазы привело к снижению подвижности ксантинола и никотиновой кислоты и получению зоны никотиновой кислоты вытянутой формы.

Следует отметить, что хроматографическая подвижность исследуемых веществ в системах с ледяной уксусной кислотой в большей степени зависит от проявления ими основных свойств. Кислота никотиновая, имеющая более выраженные кислотные свойства, в системах с ледяной уксусной кислотой диссоциирует. Зона кислоты никотиновой имеет вытянутую форму в связи тем, что скорость распределения диссоциированной и недиссоциируемой форм между подвижной и неподвижной фазами различна. Для предотвращения этих явлений, как правило, пользуются хроматографическими системами с различным интервалом значений рН.

В дальнейшем хроматографирование проводили, добавляя к ацетону с ледяной уксусной кислотой 25%-ный раствор аммиака. Добавление аммиака к системе с уксусной кислотой привело к увеличению подвижности ксантинола и никотиновой кислоты и сближению зон теофиллина и 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина (система ацетон - ледяная уксусная кислота - 25%-ный раствор аммиака 9:1:1). Уменьшение количества аммиака по отношению к ледяной уксусной кислоте восстанавливает дифференциацию в хроматографическом поведении исследуемых веществ. В подвижной фазе состава ацетон - ледяная уксусная кислота - 25%-ный раствор аммиака (9:1:0,5) значение R_f ксантинола, кислоты никотиновой, теофиллина и 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина составили соответственно 0,06; 0,53; 0,76 и 0,81. Однако в данной подвижной фазе зоны ксантинола и никотиновой кислоты имеют вытянутые формы. Поэтому в дальнейшем проводили хроматографирование в системах с добавлением 25%-ного раствора аммиака к ацетону. В системах основного характера наблюдалось разделение зон всех исследуемых веществ. Следует отметить, что зоны веществ имеют правильную форму и в системе ацетон - 25%-ный раствор аммиака в соотношении 9:0,5 наблюдалось наибольшее значение R_f между зонами. Значение R_f ксантинола, кислоты никотиновой, теофиллина и 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина в подвижной фазе ацетон - 25%-ный раствор аммиака (9:0,5) составили соответственно 0,41; 0,03; 0,24 и 0,77. Увеличение количества аммиака в подвижной фазе не рекомендуется, так как это приводит к получению зоны ксантинола вытянутой формы.

Таким образом, авторы подобрали хроматографическую систему состава ацетон - 25%-ный раствор аммиака (9:0,5), которая является оптимальной для контроля подлинности и чистоты ксантинола никотината.

Сопоставительный анализ показывает, что готовят раствор определяемого вещества с использованием спирта 95%, а в качестве подвижной фазы используют систему растворителей ацетон - 25%-ный раствор аммиака в соотношении (9:0,5), позволяющую определять кроме подлинности кислоты никотиновой и примеси теофиллина, дополнительную примесь 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина, что соответствует критерию изобретения “новизна”.

Новая совокупность признаков обеспечивает повышение качества лекарственного средства за счет определения дополнительной примеси 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина, исключает использование дорогостоящих и высокотоксичных реактивов, что соответствует критерию “промышленная применимость”.

При анализе известных решений было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков на достижение поставленного технического результата, следовательно, изобретение соответствует критерию “изобретательский уровень”.

Способ осуществляют следующим образом. Готовят раствор испытуемого лекарственного вещества. Для этого 0,01 г препарата растворяют в 1 мл воды, прибавляют 4 мл спирта 95% и перемешивают. 0,02 мл полученного раствора (400 мкг) микропипеткой наносят на линию старта хроматографической пластинки “Армсорб” или “Сорбфил” в виде полоски длиной 1 см. Рядом наносят 0,02 мл (120 мкг) 0,6%-ного раствора стандартного образца вещества свидетеля (СОВС) кислоты никотиновой в спирте 95% в виде полоски длиной 1 см, 0,02 мл (2 мкг) 0,01%-ного раствора СОВС теофиллина в спирте 95% и 0,02 мл (2 мкг) СОВС 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина в спирте 95% в виде пятен.

Пластинку с нанесенными пробами после высушивания в течение 5 мин помещают в хроматографическую камеру с системой растворителей ацетон - 25%-ный раствор аммиака (9:0,5) и хроматографируют восходящим методом. После хроматографирования пластинку сушат на воздухе в течение 10 мин, а затем просматривают в УФ-свете (длина волны 254 нм). На хроматограмме анализируемого образца наблюдается пятно основания препарата с R_f 0,41-0,42 и пятно кислоты никотиновой с R_f 0,03-0,05, расположенное на уровне пятна СОВС. Пятно примесей теофиллина и 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина на хроматограмме испытуемого препарата не должно превышать по совокупности и интенсивности окраски пятна СОВС (не более 0,5% в препарате).

Предлагаемый способ поясняется следующим примером. Готовят растворы испытуемого образца и растворы веществ свидетелей описанным выше способом. Хроматографируют испытуемые растворы, используя оптимальную систему растворителей. Далее обнаруживают зоны веществ на хроматограмме УФ - светом.

Испытуемый образец ксантинола никотината имел на хроматограмме пятно основания, соответствующее ксантинолу с _f 0,42, пятно кислоты никотиновой с R_f 0,03, а также пятна специфических примесей: теофиллина с r_f 0,25 и 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина с R_f 0,78, которые по величине и интенсивности окраски не превышают пятна свидетелей.

Данный пример подтверждает, что предлагаемый способ может быть использован для контроля подлинности и чистоты ксантинола никотината и испытуемые образцы этого лекарственного вещества соответствуют требованиям нормативного документа.

Таким образом, предлагаемый способ контроля подлинности и чистоты ксантинола никотината с использованием тонкослойной хроматографии позволяет повысить качество данного лекарственного средства и исключить использование дорогостоящих и высокотоксичных реактивов.