способ получения природного гуманизированного антитела
| Классы МПК: | C07K16/00 Иммуноглобулины, например моноклональные или поликлональные антитела C12N15/13 иммуноглобулины C12N15/63 введение чужеродного генетического материала с использованием векторов; векторы; использование их хозяев; регулирование экспрессии C12N15/64 общие способы получения вектора для введения в клетку или для отбора векторсодержащего хозяина |
| Автор(ы): | ЦУТИЯ Масаюки (JP) |
| Патентообладатель(и): | ТУГАИ СЕЙЯКУ КАБУСИКИ КАЙСЯ (JP) |
| Приоритеты: |
подача заявки:
1998-10-02 публикация патента:
20.01.2004 |
Изобретение относится к иммунологии. Предложен способ получения гуманизированного антитела, в котором присутствуют искусственные замещения одного или нескольких аминокислотных остатков в FR области. Так как большая часть гуманизированного антитела получена от антитела человека, а CDR проявляет низкую антигенность, полученное антитело обладает низкой антигенностью и поэтому является весьма многообещающим при лечении. 3 з.п.ф-лы, 33 ил., 9 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91, Рисунок 92, Рисунок 93, Рисунок 94, Рисунок 95, Рисунок 96, Рисунок 97, Рисунок 98, Рисунок 99, Рисунок 100, Рисунок 101, Рисунок 102, Рисунок 103, Рисунок 104, Рисунок 105, Рисунок 106, Рисунок 107, Рисунок 108, Рисунок 109, Рисунок 110, Рисунок 111, Рисунок 112, Рисунок 113, Рисунок 114, Рисунок 115, Рисунок 116, Рисунок 117, Рисунок 118, Рисунок 119, Рисунок 120, Рисунок 121, Рисунок 122, Рисунок 123, Рисунок 124, Рисунок 125, Рисунок 126, Рисунок 127, Рисунок 128, Рисунок 129, Рисунок 130, Рисунок 131, Рисунок 132, Рисунок 133, Рисунок 134, Рисунок 135, Рисунок 136, Рисунок 137, Рисунок 138, Рисунок 139, Рисунок 140, Рисунок 141, Рисунок 142, Рисунок 143, Рисунок 144, Рисунок 145, Рисунок 146, Рисунок 147, Рисунок 148, Рисунок 149, Рисунок 150, Рисунок 151, Рисунок 152, Рисунок 153, Рисунок 154, Рисунок 155, Рисунок 156, Рисунок 157, Рисунок 158, Рисунок 159, Рисунок 160, Рисунок 161, Рисунок 162, Рисунок 163, Рисунок 164, Рисунок 165, Рисунок 166, Рисунок 167, Рисунок 168, Рисунок 169, Рисунок 170, Рисунок 171, Рисунок 172, Рисунок 173, Рисунок 174, Рисунок 175, Рисунок 176, Рисунок 177, Рисунок 178, Рисунок 179, Рисунок 180, Рисунок 181, Рисунок 182, Рисунок 183, Рисунок 184, Рисунок 185, Рисунок 186, Рисунок 187, Рисунок 188, Рисунок 189, Рисунок 190, Рисунок 191, Рисунок 192
Формула изобретения
1. Способ получения природного гуманизированного антитела, включающий I) получение первичного антитела, представляющего собой гуманизированное антитело, полученное путем CDR-переноса и искусственного замещения одного или более аминокислотных остатков в FR; II) поиск гомологии FR последовательности природного антитела человека и FR первичного антитела с использованием базы данных последовательностей; III) составление списка последовательностей FR природного антитела, имеющего высокую степень гомологии с FR первичного антитела; IV) отбор из списка, полученного на стадии III) FR природного антитела человека, в котором природный FR содержит один или более аминокислотных остатков, искусственно введенных на стадии I) путем замещения аминокислот, причем аминокислотная последовательность FR в этом антителе является такой же или имеет высокую степень гомологии с FR первичного антитела; V) если FR в первичном антителе имеет одну или более аминокислот, которые отличаются от соответствующих аминокислот в FR, выбранном на стадии IV), то указанные отличающиеся аминокислоты замещают в FR соответствующими аминокислотами в природном FR, выбранном на стадии IV); VI) конструирование экспрессирующего вектора, включающего ДНК, кодирующую аминокислотную последовательность антитела, полученного на стадии V); VII) культивирование штамма клеток, включающих экспрессирующий вектор, сконструированный на стадии VI), и VIII) выделение из культуральной жидкости природного гуманизированного антитела, включающего природный FR антитела человека.2. Способ по п.1, в котором первичное антитело содержит CDR, полученные от животного первого вида, и FR, полученные от животного второго вида, имеющие искусственные аминокислотные остатки.3. Способ по п.2, в котором животным первого вида является крыса, а животным второго вида является человек.4. Способ по любому и пп.1-3, в котором искусственные аминокислотные остатки происходят от FR антитела, не принадлежащего человеку.Описание изобретения к патенту
Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)аКласс C07K16/00 Иммуноглобулины, например моноклональные или поликлональные антитела
Класс C12N15/13 иммуноглобулины
Класс C12N15/63 введение чужеродного генетического материала с использованием векторов; векторы; использование их хозяев; регулирование экспрессии
Класс C12N15/64 общие способы получения вектора для введения в клетку или для отбора векторсодержащего хозяина
