питательная среда для культивирования и выделения бифидобактерий
| Классы МПК: | C12N1/20 бактерии; питательные среды для них A61K35/74 бактерии |
| Автор(ы): | Балаклеец В.С., Алиева Х.М. |
| Патентообладатель(и): | Научно-производственное объединение "Питательные среды" |
| Приоритеты: |
подача заявки:
2001-07-30 публикация патента:
10.05.2003 |
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для выращивания бифидобактерий и количественного определения их при диагностике дисбактериоза кишечника. Среда содержит при заданном соотношении компонентов в качестве источника азотистого питания микробов питательный бульон сухой, в качестве источника витаминов группы В экстракт кормовых или хлебных дрожжей, в качестве растворителя белковых компонентов среды трехзамещенный цитрат натрия, D(+) глюкозу, соду кальцинированную, в качестве оксиданта и прооксиданта сернокислое железо, цистеин, а также воду дистиллированную и агар микробиологический. Изобретение обеспечивает улучшение ростовых свойств питательной среды и упрощение способа ее получения. 1 табл.
Рисунок 1
Формула изобретения
Питательная среда для культивирования и выделения бифидобактерий, содержащая источник азотистого питания, источник витаминов группы В, Д(+) глюкозу, цистеин, натрий лимоннокислый трехзамещенный, железо сернокислое 7-водное, агар микробиологический, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит воду дистиллированную, соду кальцинированную, в качестве источника азотистого питания - питательный бульон сухой, в качестве источника витаминов группы В - экстракт кормовых или хлебных дрожжей при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:Питательный бульон сухой - 20,0-30,0
Д(+) глюкоза - 15,0-25,0
Экстракт кормовых или хлебных дрожжей сухой - 5,0-8,0
Цистеин - 0,45-0,7
Железо сернокислое 7-водное - 0,13-0,18
Натрий лимоннокислый трехзамещенный - 0,8-1,2
Агар микробиологический - 1,5-2,0
Сода кальцинированная - 0,8-1,2
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине, а именно микробиологии, и может быть использовано для выращивания бифидобактерий и количественного определения их при диагностике дисбактериоза кишечника. Известно использование для выращивания бифидобактерий казеиново-дрожжевой среды и гидролизованного молока (1, 2), среды Блаурокка (в модификации Гончаровой) (3). Недостатком этих сред является трудоемкость в их приготовлении в лабораторных условиях. Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является питательная среда для накопления биомассы, содержащая источник азотистого питания - ферментативный гидролизат обезжиренного молока, глюкозу, источник витаминов группы В - кормовой концентрат витаминов группы В, кукурузный экстракт, натрий лимоннокислый трехзамещенный, железо сернокислое 7-водное, трилон Б, маннит, агар-агар (4). Задача предлагаемого изобретения - повышение вегетирующих свойств среды и упрощение технологии ее изготовления. Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда дополнительно содержит воду дистиллированную, соду кальцинированную, в качестве источника азотистого питания - питательный бульон сухой, в качестве источника витаминов группы В - экстракт кормовых или хлебных дрожжей, при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:Питательный бульон сухой - 20,0-30,0
Д (+) глюкоза - 15,0-25,0
Экстракт кормовых или хлебных дрожжей, сухой - 5,0-8,0
Цистеин - 0,45-0,7
Железо сернокислое 7-водное - 0,13-0,18
Агар микробиологический - 1,5-2,0
Натрий лимоннокислый трехзамещенный - 0,8-1,2
Сода кальцинированная - 0,8-1,2
Среду получают следующим образом. Пример 1. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 20,0 г питательного бульона, 15,0 г Д (+) глюкозы, 5,0 г экстракта кормовых дрожжей, 0,45 г цистеина, 0,13 г железа сернокислого 7-водного, 0,8 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1,5 г агара микробиологического, 0,8 г соды кальцинированной. Смесь нагревают, кипятят 2 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватный фильтр, разливают по 9 мл в стерильные пробирки и во флаконы по 50,0 мл, 100 мл, стерилизуют 30 мин при 112oС. Перед употреблением среду регенерируют (кипятят на водяной бане в течение 45 мин). Перед употреблением среду регинирируют (кипятят на водяной бане в течение 10 мин и остужают под струей холодной воды). Для контроля качества среды использовали культуру второй генерации лиофилизированного тест-штамма Bifidobacterium bifidum-I, полученного из ГИСК им. Л. А. Тарасевича. При получении первой генерации маточной культуры тест-штамм стерильно вскрывали и в ампулу пастерованной пипеткой вносили 5 мл стерильного 0,85 % раствора хлористого натрия. По 1,0 мл микробной взвеси пересевали в пробирки с 9 мл предлагаемой и контрольной средами и титровали каждую среду до разведения 10-5 для определения жизнеспособности культуры В.bifidum- 1. Пипетку с культурой опускали на дно пробирки со средой и постепенно освобождали культуру, перемешивая содержимое пробирки, не аэрируя. В процессе разведения перенос микробной взвеси в следующую пробирку производили новой стерильной пипеткой вместимостью 1 мл. Через 48-72 ч инкубации при (37
1)oС учитывали рост культуры по 4-бальной системе. Затем производили титрование каждой культуры до разведения 10-5 из первых пробирок в соответствующих средах. Дополнительно выращивали культуры (2-я генерация) при той же температуре при инкубации (481) ч. После инкубации определяли визуально характер роста культуры В. bifidum-1, учитывали их количество в разведениях с изолированным ростом колоний. Для культуры бифидобактерий характерен рост колоний в полужидкой среде в виде штрихов размером от 3 и более мм. Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 1 л воды растворяют экстракт хлебных дрожжей в таком же (5,0) г количестве вместо экстракта кормовых дрожжей. Далее согласно примеру 1. Пример 3. Отличается от примера 1,2 тем, что в 1,0 л воды растворяют 25,0 г питательного бульона, 20,0 Д (+) глюкозы, 6,5 г экстракта кормовых дрожжей, 0,55 г цистеина, 0,15 г железа сернокислого 7-водного, 1,7 г агара микробиологического, 1,0 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1,0 г соды кальцинированной. Далее согласно примеру 1. Пример 4. Отличается от примера 3 тем, что в 1,0 л воды растворяют экстракт хлебных дрожжей в таком же (6,5 г) количестве вместо экстракта кормовых дрожжей. Далее согласно примеру 1. Пример 5. Отличается от примера 1 и 3 тем, что в 1,0 л воды растворяют 30,0 г питательного бульона, 25,0 г Д (+) глюкозы, 8,0 г экстракта кормовых дрожжей, 0,7 г цистеина, 0,18 г железа сернокислого 7-водного, 2,0 г агара микробиологического, 1,2 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1,2 г соды кальцинированной. Далее согласно примеру 1. Пример 6. Отличается от примера 5 тем, что в 1 л воды растворяют экстракт хлебных дрожжей в таком же (8,0) г количестве вместо экстракта кормовых дрожжей. Далее согласно примеру 1. Результаты биологического контроля предлагаемой и контрольной сред представлены в таблице. Из таблицы видно, что предлагаемая среда обеспечивала типичный рост маточной культуры В. bifidum-1 и обладала лучшими вегетирующими свойствами по сравнению с контрольной средой. Предлагаемая среда экономически выгодна, проста в приготовлении, не требует дополнительных затрат в приготовлении. Использование ее в практике здравоохранения будет способствовать улучшению диагностики дисбактериоза кишечника и правильной тактики его лечения. БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ1. Калина Т.Э. Автореферат (Ростов-на-Дону), 1995 г. 2. Богданов В.М. Микробиология молока и молочных продуктов. - М.: Пищевая промышленность, 1969 г., с. 296. 3. Эпштейн-Литвак Р. В. Методические рекомендации. Вильшанская Ф.Л. (Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника). - М., 1977 г. 4. Эрвольд Т.М., Перфильев Г.Д., Гудков А.В., Белова Г.А. Автор.свид-во 789580, кл. С 12 N 1/20, 23.12.80.0
Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
