способ изоляции патогенного биоматериала при криоконсервации

Формула изобретения

Способ изоляции патогенного биоматериала при криоконсервации, характеризующийся тем, что герметизируют его в криоемкости с последующим погружением ее, вплоть до полного "притопления", в раствор 70^o спирта, заполняющего криостойкий герметичный пенал.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицинской микробиологии.

Известен способ изоляции патогенного биоматериала как биотического, так и культурального для целей криоконсервации в криоемкостях из различного материала. (Гернат Р. Хранение микроорганизмов /Методы общей бактериологии/ под ред. Ф. Герхардта и др./. - М.: Мир, 1983, с.512-534).

Применение специальных криоемкостей из криостойких материалов (фирм Gruner, Nunc и др. ) требует учета гарантийной кратности их использования (степени аммортизации) и дозированного усилия при их укупорке, не исключает полностью риск их разгерметизации.

Технический результат заключается в обеспечении биологической безопасности метода криоконсервации патогенных биоматериалов.

Указанный технический результат достигается помещением криоемкостей с патогенным биоматериалом внутрь криостойких пеналов типа ПХВ-1, ПХВ-2 (из вирусологических наборов), заполненных раствором 70^o спирта таким образом, чтобы вся поверхность верхней криоемкости находилась ниже уровня спиртового раствора. Имея температуру замерзания (от - 51,3 до -52^oС) ниже практически любого криоконсервируемого биоматериала, раствор 70^o спирта позволяет реализовать различные скоростные градиенты его замораживания и обеспечить изоляцию патогенного биоматериала на любом этапе криоконсервации внутри криоемкости даже в случае ее разгерметизации или разрушении. Использование раствора 70^o спирта (в соответствии с требованиями СП 1.2.011.-94) также позволяет осуществлять стерилизацию неспоровых микроорганизмов на этапе оттаивания криоемкостей в случае их разгерметизации (см.таблицу).

Пример 1. Суспензию Y.pestis EV76 в концентрации 100 млрд./мл разливают по 1 мл в криоемкости фирмы Nunc и герметизируют. Затем погружают их в пенал из полипропилена с раствором 70^o спирта, притапливают верхнюю криоемкость вкладышем-поплавком и также герметизируют. Замораживание биоматериала осуществляют или непосредственно в жидком азоте или на програмном замораживателе УОП-6 (Производства СКТБ ИПКиК Украины). После замораживания криоемкости с культурой Y. pestis EV76 оказываются вмороженными в лед, состоящий из раствора 70^o спирта. При размораживании первым оттаивают раствор 70^o спирта, а затем криоемкости с культурой, что исключает попадание в них жидкого азота и как следствие аварию.

Оценка дезинфицирующего действия 70^o спирта проводилась на культуре вакцинного штамма чумы Y.реstis EV76 (см. таблицу).

Пример 2. Суспензию внутренних органов обыкновенной полевки разливают по 1 мл в криоемкости фирмы Nunc и герметизируют. Затем погружают их в пенал из полипропилена с раствором 70^o спирта, притапливают верхнюю криоемкость вкладышем-поплавком и также герметизируют. Замораживание биоматериала осуществляют или непосредственно в жидком азоте или на програмном замораживателе. После замораживания криоемкости с суспензиями оказываются вмороженными в лед, состоящий из раствора 70^o спирта. При размораживании первым оттаивают раствор 70^o спирта, а затем криоемкости с суспензией, что исключает попадание в них жидкого азота и соответственно возможность аварии.

Применение предложенного способа изоляции биообъектов позволяет использовать метод криоконсервации для сохранения патогенных культуральных и биотических материалов, с соблюдением необходимых мел личной и общественной безопасности.