антагонисты gnrh, модифицированные в положениях 5 и 6
Классы МПК: | C07K7/23 лютеинизирующие гормон-выделяющие гормоны (ЛГВГ); родственные пептиды A61K38/09 гормон высвобождения лютеинизированного гормона (LHRH); относящиеся к нему пептиды A61P5/02 гормонов гипоталамуса, например TRH, GnRH, CRH, GRH, соматостатина |
Автор(ы): | СЕМПЛ Грам (GB), ЖИАНГ Гуангченг (US) |
Патентообладатель(и): | ФЕРРИНГ Б.В. (NL) |
Приоритеты: |
подача заявки:
1998-04-13 публикация патента:
27.02.2003 |
Изобретение относится к пептидам-антагонистам GnRH, имеющим формулу: X-D-Nal-(A)D-Phe-D-Pal-Ser-Xaa5-Xaa6-Leu-Xaa8-Pro-Xaa10, и их фармацевтически приемлемым солям, где Х = ацильная группа, имеющая более 7 атомов углерода; А = 4Cl или 4F; Хаа5 представляет собой Арh(Q1) или Аmf(Q1), где Q1 представляет собой Q или


где Q представляет собой
и где R представляет собой Н или низший алкил; Хаа6 представляет собой D-Aph(Q2), D-Amf(Q2), D-Cit или D-Pal, где Q2 представляет собой Аc или Q1; Xaa8 представляет собой Lys(ipr); и Хаа10 представляет собой D-Ala-NH2, D-Ala-ol, Ala-ol, NHCH2CH3, Gly-NH2 или Ala-NH2, при условии, что, если Хаа5 содержит Q, Хаа6 также содержит Q; фармацевтической композиции для ингибирования секреции гонадотропинов у млекопитающих, содержащей в качестве активного ингредиента эффективное количество антагониста по GnRH; способу ингибирования секреции гонадотропинов у млекопитающих и соединению X1-D-Nal-(A)D-Phe-D-Pal-Ser (X2)-Xaa5-Xaa6-Leu-Lys (ipr)(X4)-Pro-X5, гдe Х1 =
-аминозащитная группа; А = 4Сl или 4F; Х2 = Н или гидроксизащитная группа; Хаа5 представляет собой Aph(Q1) или Amf(Q1), где Q1 = структуры I и II, или карбамоил, или метилкарбамоил; Хаа6 = D-Aph(Q2), D-Amf(Q2) или D-Pal, где Q2 = Ас; X4 представляет собой восприимчивую к действию кислоты аминозащитную группу; и Х5 представляет собой D-Ala-, Gly-, Аlа-[полимерный носитель], N(Et)-[полимерный носитель], амид D-Ala, Gly или Аlа; или этиламид, являющемуся промежуточным соединением для получения пептида-антагониста GnRH. 4 с. и 12 з.п.ф-лы.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4


где Q представляет собой


Формула изобретения
1. Пептид-антагонист GnRH, имеющий формулуX-D-Nal-(A)D-Phe-D-Pal-Ser-Xaa5-Xaa6-Leu-Xaa8-Pro-Xaa10,
и его фармацевтически приемлемые соли,
где Х - ацильная группа, имеющая не более 7 атомов углерода;
А - 4Сl или 4F;
Хаа5 представляет собой Aph(Q1) или Amf(Q1), где Q1 представляет собой Q или


где Q представляет собой

и где R представляет собой Н или низший алкил;
Хаа6 представляет собой D-Aph(Q2), D-Amf(Q2), D-Cit или D-Pal, где Q2 представляет собой Ас или Q1;
Xaa8 представляет собой Lys(ipr); и
Хаа10 представляет собой D-Ala-NH2, D-Ala-ol, Ala-ol, NHCH2CH3, Gly-NH2 или Ala-NH2, при условии, что если Хаа5 содержит Q, Хаа6 также содержит Q. 2. Пептид-антагонист GnRH по п.1, где X, А, Q1 и Xaa8 определены, как в п. 1; D-Pal представляет собой D-3Pal; Хаа5 представляет собой 4Aph(Q1) или 4Amf(Q1), Q представляет собой карбамоил или метилкарбамоил; Хаа6 представляет собой D-4Aph(Q2), D-4Amf(Q2), где Q2 представляет собой Q или D-, или L-Hor, либо L-Imz, при условии, что если Q1 представляет собой Q, то Q2 также представляет собой Q; и Хаа10 представляет собой D-Ala-NH2, D-Ala-ol или Ala-ol. 3. Антагонист GnRH по п.1 или 2, где Q1 представляет собой L-Ноr или D-Hor. 4. Антагонист GnRH по любому из пп.1-3, где Х представляет собой Ас и Хаа10 представляет собой D-Ala-NH2. 5. Антагонист GnRH по любому из пп.1-4, где Хаа5 представляет собой 4Aph(L- или D-Hor) и Хаа6 представляет собой D-4Aph(Ac) или D-3Pal. 6. Антагонист GnRH по любому из пп.1-4, где Хаа5 представляет собой 4Aph(L- или D-Hor) и Q2 представляет собой Q, и R представляет собой Н или метил. 7. Антагонист GnRH по любому из пп.1-4, где Xaa5 представляет собой 4Aph(L- или D-Hor) и Хаа6 представляет собой D-Cit. 8. Антагонист GnRH по любому из пп.1-4, где Хаа6 представляет собой D-4Aph(D-Hor). 9. Антагонист GnRH по п.1, где Х представляет собой For, Ac, Acr, Pn, By, V1, Vac или Bz; D-Pal представляет собой D-3Pal; Хаа5 представляет собой Aph(Q1) или Amf(Q1), где Q1 представляет собой D-изомер или L-изомер Ноr или представляет собой Imz, и Хаа6 представляет собой D-Aph(Q2), D-Amf(Q2), D-Cit или D-Pal, где Q2 представляет собой Ac, Q или Q1;
10. Антагонист GnRH по п.9, где Q1 представляет собой L- или D-Hor и Хаа6 представляет собой D-4Amf(Q), где R представляет собой Н или метил. 11. Антагонист GnRH по п.9, где Х представляет собой Ac; R представляет собой Н или метил; Хаа6 представляет собой D-4Aph(Q2), D-4Amf(Q2) или D-3Раl, где Q2 представляет собой Ac, Q или Q1; и Хаа10 представляет собой D-Ala-NH2. 12. Антагонист GnRH по п.1, имеющий формулу
Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L-Hor)-Xaa6-Leu-Lys(ipr)-Pro-Xaa10,
где Хаа6 представляет собой D-4Aph(Ac), D-3Pal, D-4Aph(карбамоил), D-4Amf(карбамоил), D-4Аmf(метилкарбамоил) или D-4Aph(D-Hor) и Хаа10 представляет собой D-Ala-NH2, D-Ala-ol или Ala-ol. 13. Антагонист GnRH по п.12, имеющий формулу
Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L-Hor)-D-4Aph(карбамоил)-Leu-Lys(ipr)-Pro-D-Ala-NH2,
или его фармацевтически приемлемая соль. 14. Фармацевтическая композиция для ингибирования секреции гонадотропинов у млекопитающих, включающая в себя в качестве активного ингредиента эффективное количество антагониста GnRH по любому из пп.1-13 в сочетании с нетоксичным разбавителем. 15. Способ ингибирования секреции гонадотропинов у млекопитающих, предусматривающий введение определенного количества фармацевтической композиции по п.14, которое обеспечивает значительное снижение уровней LH и FSН. 16. Промежуточное соединение для получения пептида-антагониста GnRH, имеющее формулу
X1-D-Nal-(A)D-Phe-D-Pal-Ser(X2)-Xaa5-Xaa6-Leu-Lys(ipr)(X4)-Pro-X5, гдe Х1 представляет собой

А представляет собой 4Сl или 4F;
Х2 представляет собой Н или гидроксил-защитную группу;
Хаа5 представляет собой Aph(Q1) или Amf(Q1), где Q1 представляет собой


Хаа6 представляет собой D-Aph(Q2), D-Amf(Q2) или D-Pal, где Q2 представляет собой Ас, Q1, карбамоил или метилкарбамоил;
X4 представляет собой восприимчивую к действию кислоты аминозащитную группу; и
Х5 представляет собой D-Ala-, Gly-, А1а-[полимерный носитель], N(Et)-[полимерный носитель], амид D-Ala, Gly или А1а; или этиламид.
Описание изобретения к патенту
В общих чертах, настоящее изобретение относится к пептидам, которые являются антагонистами гонадотропинрилизинг-гормона человека (GnRH) и обладают полезными физическими, химическими и биологическими свойствами. Более конкретно, настоящее изобретение относится к декапептидам, которые ингибируют функцию половых желез и способствует высвобождению стероидных гормонов прогестерона и тестостерона в течение продолжительного периода времени, и к способам введения фармацевтических композиций, содержащих указанные декапептиды и предназначенные для этих целей, а в частности к лечению состояний, возникающих в результате гиперсекреции половых стероидных гормонов. Предпосылки создания изобретенияФолликулостимулирующий гормон (FSH) и лютеинизирующий гормон (LH), иногда называемые также гонадотропинами или гонадотропными гормонами, высвобождаются из гипофиза, который соединен с гипоталамусом гипофизарной ножкой. Высвобождение гормона передней долей гипофиза обычно необходимо перед высвобождением гормонов, продуцируемых гипоталамусом, таких как декапептид GnRH. Введение аналогов GnRH, которые являются антагонистами нормальной функции GnRH, было использовано для подавления секреции гонадотропинов, в основном у млекопитающих, а также для подавления или замедления овуляции. Поиск лучших антагонистов GnRH привел к получению антида (Antide), то есть [Ac-D-2Nal1, D-4ClPhe2, D-3Pal3, Lys(Nic)5, D-Lys(Nic)6, Ilys8, D-Ala10] -GnRH; и цетрореликса (Cetrorelix), то есть [Ac-D-2Nal1, D-4ClPhe2, D-3Pal3, D-Cit6, D-Ala10]-GnRH. В патенте США N5516887 описаны антагонисты GnRH, которые, как указывается, являются более эффективными в снижении уровней тестостерона в плазме, чем антид, например [Ac-D-2Nal1, D-4ClPhe2, D-3Pal3, D-N

Было неожиданно обнаружено, что некоторые другие модификации остатка в 5-положении или остатков в 5- и 6-положениях в антагонистах GnRH того подкласса, к которому относятся центрореликс, антареликс, ацилин, антид и другие, приводят к получению соединений, которые при их подкожном введении обладают особенно преимущественным свойством, заключающимся в продолжительности их биологической активности. Такие модификации были введены в остаток 4аминоРhе или в его эквивалент 4Aph или в 4-аминометилфенилаланин (4Amf), где первичная аминогруппа связана с метильной группой, присоединенной в 4- или параположении. В таких модификациях аминогруппа боковой цепи реагирует с изоцианатом с образованием карбамидной группы или реагирует с гетероциклической карбоновой кислотой, содержащей, по меньшей мере, 2 атома азота, расположенные таким образом, что они составляют карбамидную часть. Предпочтительными гетероциклическими реагентами являются D- или L-гидрооротовая кислота (Ноr) (С4N2H5(0)2СООН) и D- или L-2-имидазолидон-4-карбоновая кислота (Imz) (С3N2H5(0) СООН). В основном было обнаружено, что декапептиды-антагонисты GnRH, имеющие нижеследующую формулу, и их близкородственные аналоги и фармацевтически приемлемые соли обладают улучшенными фармакологическими свойствами, а в частности пролонгированной биологической активностью:
X-D-Nal-(A)D-Phe-D-Pal-Ser-Xaa5-Xaa6-Leu-Xaa8-Pro-Xaa10,
где Х представляет собой ацильную группу, имеющую 7 атомов углерода или Q, где Q представляет собой

А представляет собой 4Сl, 4F, 4Br, 4NO2, 4СН3, 4OСН3, 3,4Cl2 или C

Xaa5 представляет собой Aph (Q1) или Amf (Q2), где Q1 представляет собой


Хаа6 представляет собой D-Aph (Q2), D-Amf (Q2), D-Lys (Nic), D-Cit, D-Hci или D-Pal, где Q2 представляет собой For, Ac, 3-амино-1,2,4-триазол, Q или Q1;
Xaa8 представляет собой Lys(ipr), Arg, Наr, Arg (Et2) или Наr (Et2); и
Хаа10 представляет собой D-Ala-NH2, D-Ala-ол, Ala-ол, NHCH2CH3, Gly-NH3, AzaGly-NH2, Ala-NH2, Agl-NH2, D-Agl-NH2, Agl(Me)-NH2 или D-Agl(Me)-NH3, при условии, однако, что

X1D-Nal-(A)D-Phe-D-Pal-Ser (X2)-Xaa5-Xaa6-Leu-Lys(ipr)(X4)-Рrо-Х5,
где X1 -

А представляет собой 4Cl или 4F;
X2 представляет собой Н или гидроксилзащитную группу;
Хаа5 представляет собой Aph(Q1) или Amf(Q1), где Q1 представляет собой D-изомер, L-изомер или смесь D/L-изомеров любого из:


Хаа6 представляет собой D-Aph(Q2), D-Amf(Q2) или D-Pal, где Q2 представляет собой Ac, Q1, карбамоил или метилкарбамоил;
X4 представляет восприимчивую к действию кислоты аминозащитную группу; и
X5 представляет D-Ala-, Gly-, Ala-, Agl-, D-Agl-, Agl(Me)- или D-Agl(Me)-полимерный носитель; N(Et)-полимерный носитель; амид D-Ala, Gly или Ala; этиламид; AzaGly-NH2, или ОН, при условии, однако, что

За последние 10-12 лет были глубоко изучены конкретные свойства каждого из 10 остатков последовательности GnRH с точки зрения создания эффективного антагониста, и в результате этих исследований было обнаружено, что имеются различные эквивалентные остатки, которые могут быть выбраны в качестве замены, и такие замены других остатков одним из этих эквивалентов не оказывают существенного неблагоприятного действия на биологическую активность антагонистов декапептида GnRH. Такие эквивалентные замены могут быть осуществлены в антагонистах GnRH настоящего изобретения. Так, например, было показано, что в основном включение паразамещенного остатка D-Phe или остатка 2,4-дихлорзамещенного D-Phe или D-C


X-D-Nal-(A)D-Phe-D-Pal-Ser-Xaa5-Xaa6-Leu-Xaa8-Pro-Xaa10,
и к их фармацевтически приемлемым солям,
где Х представляет собой For, Ac, Acr, Pn, By, Vl, Vac, Bz и Q, где Q представляет собой

и где R представляет собой Н или низший алкил;
А представляет собой 4Сl, 4F, 4Br, 4NO2, 4СН3, 4OСН3, 3,4Cl2 или C

Хаа5 представляет собой Aph(Q1) или Amf(Q1), где Q1 представляет


Хаа6 представляет собой D-Aph(Q2), D-Amf(Q2), D-Lys (Nic), D-Cit, D-Hci или D-Pal, где Q2 представляет собой For, Ac, 3-амино-1,2,4-триазол, Q или Q1;
Xaa8 представляет собой Lys(ipr), Arg, Har, Arg(Et2) или Har (Et2); и
Хаа10 представляет собой D-Ala-NH2, D-Ala-ол, Ala-ол, NHCH2СН3, Gly-NH2, AzaGly-NH2, Ala-NH2, Agl-NH2, D-Agl-NH2, Аgl(Ме)-NН2 или D-Agl(Me)-NH2, при условии, однако, что












X-D-Nal-(A)D-Phe-D-Pal-Ser-Xaa5-Xaa6-Leu-Lys(ipr)-Pro-Хаа10,
и их фармацевтически приемлемые соли, где:
X представляет собой For, Ac, Acr, Pn, By, Vl, Vac, Bz или Q,
где Q представляет собой

и где R представляет собой Н или низший алкил;
А представляет собой 4Сl или 4F;
Хаа5 представляет собой Aph(Q1) или Amf(Q1), где Q1 представляет собой


Хаа6 представляет собой D-Aph(Q2), D-Amf(Q2), D-Cit, D-Lys(Nic) или D-Pal, где Q2 представляет собой For, Ac, Q или Q1; и
Хаа10 представляет собой D-Ala-NH2, D-Ala-ол, Ala-ол, NHCH2CH3 или Gly-NH2. Другой предпочтительный подвид антагонистов GnRH имеет формулу
X-D-Nal-D-4Cpa-D-Pal-Ser-Xaa5-Xaa6-Leu-Lys(ipr)-Pro-Хаа10
и их фармацевтически приемлемые соли, где:
Х представляет собой Ас или Q,
где Q представляет собой

и где R представляет собой Н или метил;
Хаа5 представляет собой Aph(Q1) или Amf(Q1), где Q1 представляет собой


Хаа6 представляет собой D-Арh(Q2), D-Amf(Q2) или D-Pal, где Q2 представляет собой Ac, Q или Q1; и
Xaa10 представляет собой D-Ala-NH2, D-Ala-ол или Ala-ол. Другой предпочтительный подвид антагонистов GnRH имеет формулу
MeCbm-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(Ноr)-D-Xaa6-Leu-ILys-Pro-Xaa10
и их фармацевтически приемлемые соли,
где D-Хаа6 представляет собой D-4Amf(Q1), D-Aph(Q1) или D-3Раl, где Q1 представляет собой D-Hor или

и где R представляет собой Н или низший алкил, а предпочтительно Н или метил;
Xaa10 представляет собой D-Ala-NH2, D-Ala-ол или Ala-ол. Соединения настоящего изобретения могут быть синтезированы методом классического пептидного синтеза в растворе, и такой синтез является предпочтительным для больших количеств продукта. Для получения ограниченных количеств, например менее 1 кг, может оказаться предпочтительным твердофазный синтез. Защитные группы боковой цепи, хорошо известные специалистам, предпочтительно присутствуют как часть любой аминокислоты, которая имеет особенно реакционноспособную или неустойчивую боковую цепь, при присоединении ее к цепи, присутствующей на полимере. Такой синтез позволяет получить полностью защищенный промежуточный пептидополимер, такой как
X1-D-Nal-(A)D-Phe-D-Pal-Ser(X2)-Xaa5-Xaa6-Leu-Lys(ipr)(X4)-Pro-(X5). Один из примеров химического промежуточного соединения, которое может быть использовано для синтеза антагониста GnRH, имеющего нужный остаток в 5- или 6-положениях, содержащих гидрооротил или ему подобные, представлено формулой
X1-D-Nal-D-4Cpa-D-Pal-Ser-(X2)-Aph(X3)-D-Aph(X3)-Leu-Ilys(X4)-Pro-(X5)
При синтезе пептидных промежуточных соединений, имеющих такую формулу, и других аналогов могут быть использованы группы Х1-Х5, определенные ниже. X1 представляет собой аминозащитную группу известного типа, которая обычно используется в ступенчатом синтезе полипептидов, и если Х в пептиде нужного состава представлят собой конкретную ацильную группу, то эта группа может быть использована в качестве защитной группы. Классами









Было обнаружено, что пептид, имеющий формулу: Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-Lys(Nic)-D-Lys(Nic)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2 (антид) обладает очень хорошими биологическими свойствами как антагонист GnRH, поскольку он имеет пептид, который в настоящем описании назван ацилином и который отличается от антида только в 5- и 6-положениях. Авторами изобретения было установлено, что при использовании этих молекул в качестве исходного материала и при создании других заместителей в 5- и 6-положениях или в 5-положении декапептида ацилина могут быть получены антагонисты GnRH, имеющие большую продолжительность биологической активности in vivo. Что касается положений 1-4 и 7-10, то было отмечено, что антид, ацилин и азалин являются абсолютно аналогичными. Нижеследующий декапептид [4Aph(Hor)5, D-4Aph(Cmb)6]-антид или [Ac-D-2Nal1, D-4Cpa2, D-3Pal3, 4Aph(Hor)5, D-4Aph(Cmb)6, Ilys8, D-Ala10]-GnRH был получен методом твердофазного синтеза. Этот пептид имеет следующую формулу:
Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L-гидрооротил)-D-Aph(карбамоил)-Leu-Lys(изопропил)-Pro-D-Ala-NH2. Сначала использовали около 0,50 грамма (0,54 ммоль/г) полимера МВНА (Bachem), и Вос-защищенный D-AIB связывали с полимером приблизительно в течение 2 часов в смеси диметилформамида (ДМФ)/СН2Сl2 с использованием около 0,65 ммоль Вос-производного и диизопропилкарбодиимида (DIC) и безводного 1-гидроксибензотриазола (HOBt) н качестве активирующих или связывающих реагентов. Остаток D-Ala связывается с остатком МНВА посредством амидной связи. После присоединения каждого аминокислотного остатка промывку, деблокирование, а затем присоединение следующего аминокислотного остатка осуществляли в соответствии со схемой 1 лабораторного синтеза, приведенной в конце описания, для получения примерно от 0,5 до 1 грамма исходного полимера. Вышеуказанную схему использовали для присоединения каждой аминокислоты пептида настоящего изобретения после присоединения первой аминокислоты. N







После деблокирования

Повторяли синтез, описанный в Примере 1, заменяя N


Для создания аналога [4Aph(Ноr)5]-ацилина повторяли процедуру синтеза, описанного в Примере 1, заменяя т-бутилизоцианат на уксусный ангидрид для проведения реакции с боковой цепью, деблокированной в положении 6. Отщепление этого декапептида от полимера и деблокирование с последующей очисткой проводили как описано в Примере 1. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L- гидрооротил)-D-Aph(L-ацетил)Leu-Lys (изопропил) -Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и имел чистоту более чем 99%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1630,6 Да, которая соответствовала ожидаемой массе 1630,8 Да. Оценка этого пептида с использованием стандартного in vivo-теста на подавление секреции LH у крыс, описанного в Примере 1, показала, что при дозе в 50 микрограммов этот пептид является биологически активным, и в первые 1-4 дня он является почти таким же эффективным, как и ацилин. Поэтому можно считать, что этот пептид обладает очень длительным LH-ингибирующим действием. Пример 1С
Повторяли синтез, описанный в Примере 1В, заменяя L-гидрооротовую кислоту на D/L-гидрооротовую кислоту с образованием изомерных декапептидов. Отщепление от полимера и деблокирование с последующей очисткой осуществляли как описано в Примере 1. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(D/L-гидрооротил)-D-Aph(ацетил)-Leu-Lys (изопропил) -Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, он представлял собой гомогенную смесь двух соединений без каких-либо примесей. МС-анализ показал, что его масса составляла 1630,6 Да, которая соответствовала ожидаемой массе 1630,8 Да. Оценка этого пептида с использованием стандартного in vivo-теста на подавление секреции LH у крыс, описанного в Примере 1, показала, что при дозе в 50 микрограммов этот пептид является биологически активным, и в первые 1-4 дня он является почти таким же эффективным, как и ацилин. Поэтому
можно считать, что этот пептид обладает длительным LH-ингибирующим действием. Пример 1D
Повторяли синтез, описанный в Примере 1В, заменяя L-гидрооротовую кислоту на D-гидрооротовую кислоту с образованием изомерного декапептида. Отщепление от полимера и деблокирование с последующей очисткой осуществляли как описано в Примере 1. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(D-гидрооротил)-D-Aph(ацетил)-Leu-Lys (изопропил) -Pro-D-Ala-NH2, получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и имел чистоту более чем 98%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1630,8 Да, которая соответствовала ожидаемой массе 1630,8 Да. Оценка этого пептида с использованием стандартного in vivo-теста на подавление секреции LH у крыс, описанного в Примере 1, показала, что при дозе в 50 микрограммов этот пептид обнаруживает пролонгированное биологическое действие, направленное на подавление секреции LH, и в первые 1-4 дня он является почти таким же эффективным, как и ацилин. Пример 1Е
Повторяли синтез, описанный в Примере 1В, заменяя N


Повторяли синтез, описанный в Примере 1В, заменяя N


Повторяли синтез, описанный в Примере 1, однако вместо реакции аминогруппы боковой цепи D-4Aph с т-бутилизоцианатом эту группу и остаток 4Aph одновременно подвергали реакции с гидрооротовой кислотой с образованием декапептида [4Aph(Ног)5, 4Aph(Ноr)6] -антида. Отщепление от полимера и деблокирование с последующей очисткой осуществляли как описано в Примере 1. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Раl-Sеr-4Арh(L -гидрооротил)-D-4Aph (L-гидрооротил) -Leu-Lys (изопропил) -Pro-D-Ala-NH2 получали с помощью очистки ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и имел чистоту более чем 99%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1728,4 Да, которая соответствовала вычисленной массе 1728,8 Да. Результаты ОФ-ВЭЖХ показали, что этот пептид является более гидрофильным, чем азалин В, который, в свою очередь, является более гидрофильным, чем ацилин. Оценка этого пептида с использованием стандартного in vivo-тecтa на подавление LH у крыс, описанного в Примере 1, показала, что при дозе в 50 микрограммов этот пептид является биологически активным, и в первые 1-4 дня он является почти таким же эффективным, как и ацилин. Поэтому можно считать, что этот пептид обладает длительным LH-ингибирующим действием. Этот синтез повторяли с заменой N


Повторяли синтез, описанный в Примере 1, однако вместо реакции аминогруппы боковой цепи D-4Aph с т-бутилизоцианатом эту группу подвергали реакции с D-гидрооротовой кислотой с образованием декапептида [4Aph(Ноr)5, D-4Aph(Ноr)6] -антида. Отщепление от полимера и деблокирование с последующей очисткой осуществляли как описано в примере 1. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L -гидрооротил)-D-4Aph(D- гидрооротил)-Leu-Lys(изопропил)-Pro-D-Ala-NH2 получали с помощью очистки ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и имел чистоту более чем 98%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1728,7 Да, которая соответствовала вычисленной массе 1728,8 Да. Результаты ОФ-ВЭЖХ показали, что этот пептид является более гидрофильным, чем азалин В, который, в свою очередь, является более гидрофильным, чем ацилин. Оценка этого пептида методом стандартного in vivo-теста на подавление LH у крыс, как и в Примере 1, показала, что при дозе в 50 микрограммов этот пептид является биологически активным, и в первые 1-3 дня он является почти таким же эффективным, как и ацилин. На 4-й день он обнаруживал значительно большую эффективность, чем ацилин, а поэтому можно считать, что этот пептид обладает очень длительным LH-ингибирующим действием. Пример 1J
Синтез декапептида [MeCbm-D-2Nal1, 4Aph(Ноr)5]-ацилина осуществляли, в основном, как описано выше в Примере 1В; однако? вместо удаления Fmoс-защитной группы сразу после присоединения N

Повторяли синтез, описанный в Примере 1, с заменой N


Повторяли синтез, описанный в Примере 1G, заменяя гидрооротовую кислоту на т-бутилизоцианат с образованием декапептида [4Aph(Cmb)5, D-4Aph(Cmb)6]-антида. Отщепление от полимера и деблокирование с последующей очисткой осуществляли как описано в Примере 1. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D- 3Раl-Sеr-4Aрh(карбамоил)-D-4Aрh(карбамоил) -Leu-Lys(изопропил)-Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и имел чистоту более чем 99%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1534,9 Да, которая вполне соответствовала ожидаемой массе 1534,7 Да. Оценка этого пептида с использованием стандартного in vivo-теста на подавление LH у крыс, описанного в Примере 1, показала, что при дозе в 50 микрограммов этот пептид является биологически активным, и в первые четыре дня он являлся почти таким же эффективным, как и ацилин. Поэтому можно считать, что этот пептид обладает длительным LH-ингибирующим действием. Пример 1М
Повторяли синтез, описанный в Примере 1G, заменяя гидрооротовую кислоту на метилизоцианат с образованием декапептида [4Aph(MeCmb)5, D-4Aph(MeCmb)6] -антида. Отщепление от полимера и деблокирование с последующей очисткой осуществляли как описано в Примере 1. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph (метилкарбамоил)-D-4Aph(метилкарбамоил)-Leu- Lys(изопропил)-Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и имел чистоту более чем 99%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1562,8 Да, которая соответствовала ожидаемой массе 1562,8 Да. Оценка этого пептида с использованием стандартного in vivo-теста на подавление LH у крыс, описанного в Примере 1, показала, что при дозе в 50 микрограммов этот пептид является биологически активным, и в первые два дня он являлся почти таким же эффективным, как и ацилин, а затем его активность в подавлении LH начинала несколько снижаться. Пример 2
Пептид [4Aph(Hor)5, D-Cit6]-антид, аналог пептида Цетрореликс (Cetrorelix), имеющий формулу Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph (L-гидрооротил)-D-Cit-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2 синтезировали методом, в основном, описанным в Примере 1. Вместо N



Аналог пептида антид, то есть [4Aph(Hor)5]-антид, синтезировали методом синтеза, в основном, как описано в Примере 1 патента США 5169935. После присоединения N


Аналог [4Aph(D/L-Imz)5] -ацилин синтезировали методом, в основном, описанным в Примере 1В, за исключением того, что L-Hor заменяли на D/L-Imz. После деблокирования 4Aph в 5-положении промежуточный пептид обрабатывали избыточным количеством В/L-2-имидазолидон-4-карбоновой кислоты, около 90 мг HOBt и около 0,66 ммоль DIC в растворе ДМФ в течение примерно 6 часов при комнатной температуре. Затем завершение синтеза промежуточного декапептида проводили как описано в Примере 1. Пептидополимер промывали, расщепляли и деблокировали и очищали как описано в Примере 1. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Раl-Sеr-4Арh(D/L-2- имидазолидон-4-карбонил)-D-4Aph(Ac)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид представлял собой гомогенную смесь двух соединений без каких-либо других примесей. ЖМСВИ-анализ показал, что его масса составляла 1602,7 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1602,8 Да. Анализ этого пептида, проведенный с использованием стандартного in vivo-теста на крысах, описанного в Примере 1, показал, что при дозе в 50 микрограммов этот пептид обнаруживает продолжительное действие, направленное на подавление секреции LH. В течение 3 дней и в течение 96 часов продолжительность подавления секреции LH была лишь незначительно выше, чем продолжительность действия ацилина. Пример 3А
Повторяли синтез, описанный в Примере 3, с использованием избытка L-2-имидазолин-4-карбоновой кислоты вместо D/L-Imz. Как было оценено, полученный пептид был, в основном, гомогенным, и его чистота составляла около 99%. ЖМСВИ-анализ показал, что масса этого пептида составляла 1602,5 Да и соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1602,8 Да. Этот пептид лучше растворялся в воде, чем ацилин. Анализ проводили как описано в Примере 1, и в дозе в 50 микрограммов этот пептид обнаруживал продолжительное действие, направленное на подавление секреции LH, причем в течение 96 часов продолжительность его действия была почти такой же, как и у ацилина. Пример 3В
Повторяли синтез, описанный в Примере 3, с использованием избытка L-2-имидазолин-4-карбоновой кислоты вместо D/L-Imz. Был получен пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(D-Imz)-D-4Aph(Ac)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2. ЖМСВИ-анализ показал, что его масса составляла 1602,6 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1602,8 Да. Этот пептид лучше растворялся в воде, чем ацилин. Анализ проводили как описано в Примере 1. Этот пептид обнаруживал биологическую активность, и в дозе в 50 микрограммов он ингибировал секрецию LH. Пример 3С
Пептид [4Aph(Imz)5, D-4Amf(Cbm)6]-ацилина синтезировали с использованием комбинации методов, описанных в Примерах 1А (для введения D-4Amf(Cbm)6) и 3А (для введения 4Aph(Imz)5). Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L -Imz)-D-4Amf(карбамoил)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и его чистота составляла более чем 98%. ЖМСВИ-анализ показал, что его масса составляла 1617,6 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1617,8 Да. Этот пептид анализировали как описано в Примере 1, и при дозе 50 микрограммов он обнаруживал длительное действие, направленное на подавление секреции LH. В течение 3 дней продолжительность подавления секреции LH была, в основном, такой же, как и у ацилина, а в течение 96 часов она была несколько выше. Пример 4
Пептид [4Aph(Ноr)5, D-4Amf (MeCmb)6]-антид, имеющий формулу Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L -гидрооротил)-D-4Amf(MeCmb)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2 синтезировали методом, описанным в Примере 1А. Вместо реакции D-4Amf в 6-положении с избытком т-бутилизоцианата в ДМФ проводили реакцию с метилизоцианатом. Затем завершение синтеза декапептида проводили как описано в Примере 1. Пептидополимер промывали, расщепляли и деблокировали, после чего его очищали как описано в Примере 1. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(L- гидрооротил)-D-4Amf(MeCmb)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и его чистота составляла более чем 99%. ЖМСВИ-анализ показал, что его масса составляла 1659,8 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1659,8 Да. Анализ, проведенный с использованием стандартного in vivo-теста на крысах, показал, что при дозе в 50 микрограммов пептид N4 обнаруживает лучшее подавление секреции LH, чем ацилин, и был сделан вывод, что он обладает биологической активностью очень длительного действия. Пример 4А
Повторяли синтез, описанный в Примере 4, заменяя метилизоцианат на уксусный ангидрид, в результате чего получали пептид [4Aph(Hor)5, D-4Amf(Ac)6] -антид. Пептид Ac-D-2Nаl-D-4Сра -D-3Раl-Sеr-4Арh(L- гидрооротил)-D-4Amf(Ac)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и его чистота составляла более чем 99%. ЖМСВИ-анализ показал, что его масса составляла 1644,5 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1644,8 Да. Этот пептид анализировали как описано в Примере 1, и при дозе 50 микрограммов он обнаруживал длительное действие, направленное на подавление секреции LH. В течение 3 дней продолжительность подавления секреции LH была такой же, как у ацилина, а в течение 96 часов она была несколько выше. Пример 4В
Декапептид, синтезированный и протестированный как описано в Примере 1А, модифицировали путем введения в его С-конец D-аланинола вместо D-аланиламида. Сначала синтезировали нонапептидный фрагмент, содержащий у своего С-конца пролин в качестве свободной кислоты, методом синтеза, в основном, описанным в Примере 1А, но с использованием полимера Merrifield (хлорметилированный полистирол с поперечными связями), поставляемого фирмой Bachem, Inc. После отщепления, деблокирования и очистки был получен следующий нонапептид: Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser -4Aph(Hor)-D-4Amf(Cmb)-Leu- ILys-Pro-OH. 0,15 ммоль этого пептида полностью деблокировали и ВЭЖХ-очищенный нонапептид растворяли в 3 мл сухого ДМФ вместе с 3,0 ммоль D-аланинола (Lancaster Chemical). Затем добавляли 0,60 ммоль РуВОР (Novabiochem), твердого вещества, используемого в качестве связывающего агента, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Реакцию гасили путем добавления 200 мл воды с получением эмульсии, которая была превращена в прозрачный раствор путем доведения рН до 2,5 с использованием ледяной уксусной кислоты. Полученный декапептид, Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph (Ноr)-D-4Amf (Cmb)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-oл, был очищен с помощью препаративной ОФ-ВЭЖХ с использованием ТЕАР (рН 2,3) в качестве буфера, с последующей дополнительной очисткой с использованием 0,1% TFA в качестве буфера. Как было оценено, полученный пептид являлся, в основном, гомогенным, и его чистота составляла более чем около 99%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1632,9 Да, которая соответствовала вычисленной массе 1632,8 Да. Оценка этого пептида с использованием стандартного in vivo-теста на крысах, описанного в Примере 1, показала, что при дозе в 50 микрограммов этот пептид является биологически активным, и эта биологическая активность продолжалась в течение, по крайней мере, 96 часов. Поэтому этот пептид можно считать пептидом с очень продолжительным действием. Пример 4С
Повторяли синтез, описанный в Примере 4В, с заменой в рекционной смеси D-аланинола на 3,0 ммоль L-аланинола (Aldridge Chemical). Полученный декапептид очищали как описано в Примере 4В, и как было оценено, он был, в основном, гомогенным, и имел чистоту более чем около 99%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1632,9 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1632,8 Да. Оценка этого пептида с использованием стандартного in vivo-теста на крысах, описанного в Примере 1, показала, что при дозе в 50 микрограммов этот пептид является биологически активным, и эта биологическая активность продолжается в течение, по крайней мере, 96 часов. Поэтому этот пептид можно считать пептидом с очень продолжительным действием. Пример 4D
Декапептид, синтезированный и протестированный как описано в Примере 1А, модифицировали путем введения в его С-конец D-аланинола вместо D-аланиламида. Нонапептидный фрагмент, содержащий у своего С-конца пролин в качестве свободной кислоты, синтезировали методом ТФПС на полимере Merrifield, но, в основном, так, как описано в Примере 1. После отщепления, деблокирования и очистки был получен следующий нонапептид: Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph (Ноr)-D-4Aph (Cmb)-Leu-ILys-Pro-OH. Затем этот очищенный нонапептид подвергали реакции с D-аланинолом, как описано в Примере 4В, и полученный декапептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph (Hor)-D-4Aph(Cmb)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-oл, очищали с использованием препаративной ОФ-ВЭЖХ, как описано в Примере 4В, за исключением того, что вместо ТЕАР при рН 2,3 использовали ТЕАР при рН 6,5. Как было оценено, полученный пептид являлся, в основном, гомогенным, и его чистота составляла более чем около 99%. МС-анализ показал, что пептид имеет массу 1618,9 Да, которая соответствовала вычисленной массе 1618,8 Да. Анализ пептида in vivo показал, что он является биологически активным. Пример 4Е
Повторяли синтез, описанный в Примере 4D, заменяя D-аланинол на L-аланинол. Полученный декапептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph (Hor)-D-4Aph(Cmb)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-oл, очищали с помощью препаративной ОФ-ВЭЖХ, как описано в Примере 4D, и, как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным, и его чистота составляла более чем 99%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1618,9 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1618,8 Да. Анализ пептида in vivo показал, что он является биологически активным. Пример 5
Пептид [4Aph(Ноr)3, D-4Amf(Cmb)6] -антид, который имел формулу Ас-D-2Nаl-D-4Сра-D-3Ра1-Sеr-4Арh(D-гидрооротил)-D-4Amf(Cmb)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2, синтезировали методом, в основном, описанным в Примере 1А. Вместо реакции D-4Aph в 5-положении с L-гидрооротовой кислотой боковую цепь подвергали реакции с D-гидрооротовой кислотой. Затем завершение синтеза промежуточного декапептида проводили как описано в Примере 1А. Затем пептидополимер подвергали стандартной промывке, расщеплению и деблокированию, после чего его очищали как описано в Примере 1. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Aph(D-гидрооротил)-D-4Amf(Cmb)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и его чистота составляла более чем 98%. ЖМСВИ-анализ показал, что его масса составляла 1645,8 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1645,8 Да. Анализ, проведенный с использованием стандартного in vivo-теста на крысах, показал, что при дозе в 50 микрограммов в течение 2 дней этот пептид обнаруживал почти такую же продолжительность подавления секреции LH, как и ацилин, и это LH-ингибирующее действие, но в несколько меньшей степени продолжалось через 72 и 96 часов. Пример 5А
Повторяли синтез, описанный в Примере 5, за исключением того, что вместо реакции деблокированной боковой цепи 4Amf с т-бутилизоцианатом проводили реакцию с уксусным ангидридом. Пептид Ас-D-2Nаl-D-4Сра-D-3Раl-Sеr-4Aрh(D -гидрооротил)-D-4Amf(Ac)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным, и его чистота составляла более чем 99%. ЖМСВИ-анализ показал, что его масса составляла 1644,7 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1644,8 Да. Этот пептид анализировали как описано в Примере 1, и при дозе 50 микрограммов в течение 3 дней этот пептид обнаруживал, в основном, такую же продолжительность подавления секреции LH, как и ацилин, а через 96 часов его LH-ингибирующее действие несколько превышало действие ацилина. Пример 6
Повторяли синтез, в основном, описанный в Примере 1F, за исключением того, что вместо N


Повторяли синтез, описанный в Примере 6, за исключением того, что вместо реакции деблокированной боковой цепи D-4Amf с уксусным ангидридом проводили реакцию с т-бутилизоцианатом, как описано в Примере 1, с образованием [4Aph(Hor)5, D-4Aph(Cmb)6]-антида. Декапептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Amf(L-гидрооротил) -D-4Aph (карбамоил) -Leu-Lys (изопропил) -Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным, и его чистота составляла около 99%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1659,6 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1659,8 Да. Этот пептид анализировали как описано в Примере 1, и при дозе 50 микрограммов через 1 день этот пептид обнаруживал такую же активность в подавлении секреции LH, как и ацилин, и примерно такую же активность он обнаруживал через 2 дня. Через 3 дня эта активность была несколько меньше, а через 4 дня она было приблизительно такой же, как и активность ацилина. Пример 6В
Повторяли синтез, описанный в Примере 6А, за исключением того, что реакцию осуществляли с метилизоцианатом вместо т-бутилизоцианата, в результате чего получали пептид [4Amf(Hor)5, D-4Amf(MeCmb)6]-антид. Пептид Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4Amf(L -гидрооротил)-D-4Арh(метилкарбамoил)-Leu-Lys(изопропил)-Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и его чистота составляла около 99%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1673,6 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1673,8 Да. Этот пептид анализировали как описано в Примере 1, и при дозе в 50 микрограммов через 1 день этот пептид обнаруживал такую же активность в подавлении секреции LH, как и ацилин, и примерно такую же активность он обнаруживал через 2 дня. На 3- и 4-й дни его активность, ингибирующая секрецию LH, была значительно меньше, чем активность ацилина. Пример 6С
Повторяли синтез, описанный в Примере 6, заменяя L-гидрооротовую кислоту на D-гидрооротовую кислоту, в результате чего получали пептид [4Amf(Ноr)5, D-4Amf(Ac)6] -антид. Пептид Ас-D-2Nаl-D-4Сра-D-3Раl-Sеr-4Amf(D-гидрооротил)-D-4Amf(ацетил)-Leu-Lys(изопропил)-Pro-D-Ala-NH2 получали путем очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ. Как было оценено, этот пептид был, в основном, гомогенным и его чистота составляла более чем 99%. МС-анализ показал, что его масса составляла 1658,7 Да, которая соответствовала вычисленной для этого пептида массе 1658,8 Да. Этот пептид анализировали как описано в Примере 1, и при дозе в 50 микрограммов, на 1-й и 2-й день, этот пептид обнаруживал, в основном, такую же активность в подавлении секреции LH, как и ацилин. На 3-й день его биологическая активность была существенно ниже, чем активность ацилина, и в дальнейшем она продолжала значительно снижаться. Пример 7
С использованием методики, в основном, описанной в Примерах 1-5, были также получены пептиды-антагонисты GnRH (I), представленные в конце описания. Эти пептиды являются биологически активными в ингибировании секреции LH. Пример 8
С использованием методики, в основном, описанной в Примерах 1-5 и в патенте США N5491217, были также получены следующие пептиды-антагонисты GnRH (II), представленные в конце описания. Эти пептиды являются биологически активными в ингибировании секреции LH и обладают очень хорошей растворимостью в воде при физиологическом значении рН. Было показано, что протестированные вышеуказанные соединения обладают биологической активностью в подавлении секреции LH на уровне, который является, по крайней мере, в основном, сравнимым с уровнем подавления секреции LH соответствующим пептидом-антагонистом GnRH, известным под названием антид, аналогами которого являются рассматриваемые пептиды. В результате широких исследований, проводимых в этой области за последнее десятилетие, биологическая активность, определенная в этом широко используемом тесте, который позволяет измерять подавление секреции LH, свидетельствовала о том, что указанные соединения обладают способностью ингибировать секрецию гонадотропина, а поэтому они могут оказывать полезное противогонадное подавляющее овуляцию действие. Исходя из их высокой растворимости, устойчивости к гелеобразованию in vivo, большой продолжительности биологической активности и других свойств, рассматриваемые соединения могут быть использованы в качестве противогонадных агентов, подавляющих секрецию гонадотропинов и ингибирующих высвобождение стероидов половыми железами, например, в качестве подавляющих овуляцию агентов. Соединения настоящего изобретения, в основном, вводят в форме фармацевтически приемлемых нетоксичных солей, таких как кислотно-аддитивные соли или металлокомплексы, ацетата и памоата, при этом предпочтительной может быть соль памовой кислоты. Если активный ингредиент вводят в виде таблетки, то эта таблетка может содержать фармацевтически приемлемый нетоксичный разбавитель, который включает связующее вещество, такое как трагакант, кукурузный крахмал или желатин; дезинтегрирующий агент, такой как альгиновая кислота; и замасливатель, такой как стеарат магния. Может быть также осуществлено внутривенное введение в изотоническом физиологическом растворе, в фосфатно-буферных растворах или т.п. Фармацевтические композиции, в основном, содержат эффективное количество пептида в сочетании со стандартным фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. В основном при внутривенном введении доза может включать от около 10 микрограмм до около 2,5 миллиграмма пептида на один килограмм массы тела хозяина. Природа этих соединений может оказаться эффективной для перорального введения; однако пероральная доза может быть выше. В целом, обработку индивидуумов этими пептидами, в основном, осуществляют таким же способом, как и клиническую обработку другими антагонистами GnRH, с использованием подходящего носителя, в котором это соединение является растворимым, и с введением дозы, достаточной для снижения уровней LH и FSH у пациента. Для доставки аналога-антагониста GnRH в организм в течение продолжительного периода времени, например в течение периода времени от одной недели до одного года после всего лишь одного введения, и для медленного его высвобождения может также оказаться желательным использовать депо-препараты и имплантанты. Для ингибирования оплодотворяющей способности и/или для ее регуляции, а также в тех целях, когда необходимо обратимое подавление гонадной активности, таких как предотвращение преждевременного полового созревания или во время лучевой терапии или химиотерапии, эти соединения могут быть введены млекопитающим внутривенно, подкожно, внутримышечно, перорально, чрезкожно, интраназально, внутрилегочно, ректально или интравагинально. Они могут быть также использованы для лечения стероидзависимых опухолей. Эффективные дозы могут варьироваться в зависимости от способа введения и конкретного вида млекопитающего, подвергаемого лечению. Некоторые из этих соединений имеют растворимость вплоть до 50 мг/мл, и, в основном, они могут быть использованы в виде 5-10 мг/мл-растворов при рН 5,4. Примером одной из таких типичных лекарственных форм является бактериостатический водный раствор при рН около 6, содержащий пептид, раствор которого вводят парентерально, в дозе порядка от около 0,1 до 2,5 мг/кг массы тела в день. Эти соединения считаются хорошо переносимыми in vivo и устойчивыми к гелеобразованию, и поэтому они могут быть вполне подходящими для подкожных инъекций в форме бактериостатического водного раствора, содержащего около 5% маннита, при рН около 4,9, при подходящих концентрациях выше около 0,75 мг/мл и даже выше около 1,0, без риска гелеобразования в месте инъекции. Эти пептиды-антагонисты GnRH могут быть также использованы в in vivo и in vitro-диагностике. Эти пептиды могут быть инъецированы in vivo с последующим анализом проб крови пациента для определения степени снижения секреции гормонов, например секреции LH. In vitro-анализы могут быть осуществлены для того, чтобы определить, являются ли некоторые опухолевые клетки восприимчивыми к GnRH. В этих анализах культуры опухолевых клеток обрабатывают пептидами-антагонистами GnRH, а затем прослеживают секрецию гормонов и пролиферацию клеток. Хотя настоящее изобретение описано на его предпочтительных вариантах осуществления, однако в него могут быть внесены различные изменения и модификации, очевидные для каждого специалиста и не выходящие за рамки объема изобретения, сформулированного в нижеследующей формуле изобретения. N-конец может оставаться незащищенным либо могут быть использованы другие эквивалентные ацилирующие группы, однако предпочтительным является ацетил либо замещенный или незамещенный карбамоил. Вместо Aph или D-Aph могут быть использованы Aph или D-Aph в 5- и 6-положении соответственно. Вместо Aph(Ас) аминоРbе-группа может быть обработана альтернативными ацилирующими агентами, как описано в патенте N 5506207, такими как муравьиная кислота,

Класс C07K7/23 лютеинизирующие гормон-выделяющие гормоны (ЛГВГ); родственные пептиды
Класс A61K38/09 гормон высвобождения лютеинизированного гормона (LHRH); относящиеся к нему пептиды
Класс A61P5/02 гормонов гипоталамуса, например TRH, GnRH, CRH, GRH, соматостатина