способ определения наличия этилового алкоголя в организме человека

Формула изобретения

Способ определения наличия этилового алкоголя в организме человека, включающий морфологическое исследование ликвора, отличающийся тем, что ликвор центрифугируют, фильтруют, добавляют к нему кристаллообразующее вещество, например раствор двухводной двухлористой меди СuСl₂2Н₂О, помещают в термостат и выдерживают в течение 3-6 ч при температуре 48^oС, после чего путем сравнения полученных кристаллограмм ликвора с кристаллограммами ликвора здорового человека определяют в нем плотность расположения центров кристаллизации, наличие и направление роста колоний кристаллов, оценивают их форму, структуру и занимаемую ими площадь, и при установлении высокой плотности центров кристаллизации и наличии центростремительного роста колоний кристаллов кустистоподобной формы, пересекающихся между собой, сходящихся в центре и образующих очаг кристаллизации округлой формы, диагностируют наличие этилового алкоголя.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к судебной медицине и наркологии.

Известен способ лабораторного обнаружения и определения этилового алкоголя в крови и моче человека методом газожидкостной хроматографии (В.Ф. Пономарев. Об обнаружении и определении этилового алкоголя в крови и моче методом газожидкостной хроматографии. Методическое письмо, М., 1968. - 12 с.), заключающийся в том, что фиксируют превращение спиртов в алкилнитриты, которые затем на хроматографической колонке подвергают хроматографическому разделению на компоненты смеси, поступающие в детектор по теплопроводности - катарометр, сигналы которого регистрируются в виде ряда хроматографических пиков. В основе детектирования лежит измерение различий в теплопроводности чистого газа-носителя, поступающего в сравнительную камеру детектора, и смеси анализируемого вещества с газом-носителем, выходящей из хроматографической колонки в измерительную камеру детектора. Исследование трупного материала газохроматографическим методом производится судебными химиками в судебно-медицинской лаборатории.

Недостатками известного способа являются его определенная сложность, трудоемкость и достаточно высокая себестоимость.

Для его осуществления необходимы: отдельная лаборатория и специальное оборудование, предназначенные для хранения и исследования трупных объектов, сложная рецептура, включающая множество наименований основных компонентов и реактивов и специальная посуда для их приготовления; тщательный контроль за ходом процесса и участие в нем специалистов среднего звена и подготовленных экспертов.

Результат исследования оценивают методами построения калибровочного графика.

В качестве ближайшего аналога принят способ определения концентрации этилового спирта в организме человека путем газохроматического определения его без построения калибровочного графика (Н.П. Романюк //Судебно-медицинская экспертиза, М., 1980. - 4. - С. 38-39), заключающийся в теоретически обоснованном вычислении коэффициента для вычисления коэффициента перерасчета математическим методом наименьших квадратов. В настоящее время изложенный метод заложен в основе действующих компьютерных программ для определения этилового алкоголя в трупных объектах.

Однако данный способ достаточно длителен по времени исполнения и требует применения комплекса современных, в том числе компьютерных, методов исследования. Он не позволяет быстро и точно диагностировать визуально наличие или отсутствие отравления этиловым алкоголем.

Задачей изобретения является создание более простого и точного способа определения наличия этилового алкоголя в организме человека.

Сущность изобретения состоит в том, что в способе диагностики наличия отравления этиловым алкоголем, включающем морфологическое исследование ликвора пациента, ликвор центрифугируют, фильтруют, добавляют к нему кристаллообразующее вещество, например раствор двухводной двухлористой меди CuCl₂2H₂О, помещают в термостат и выдерживают в течение 3-6 часов при температуре +48^oС, после чего путем сравнения полученных кристаллограмм ликвора с кристаллограммами ликвора здорового человека определяют в нем плотность расположения центров кристаллизации, наличие и направление роста колоний кристаллов, оценивают их форму, структуру и занимаемую ими площадь и при установлении высокой плотности центров кристаллизации и наличии центростремительного роста колоний кристаллов кустистоподобной формы, пересекающихся между собой, сходящихся в центре и образующих очаг кристаллизации округлой формы, диагностируют наличие этилового алкоголя.

Использование изобретения позволяет получить следующий технический результат.

Способ позволяет быстро и точно диагностировать наличие или отсутствие этилового алкоголя в организме человека.

При этом весь процесс диагностики занимает несколько часов. Способ прост в исполнении, не требует специальной подготовки и использования дорогостоящей аппаратуры.

Он может быть использован в любой лаборатории для решения вопросов диагностики наличия или отсутствии этилового алкоголя в клинической медицине для определения тактики лечения и в судебно-медицинской практике для решения вопросов, поставленных правоохранительными органами.

Технический результат достигается за счет того, что авторами установлен факт: внедренный в организм человека этиловый алкоголь через наиболее чувствительную к нему центральную нервную систему проникает в ликвор, где постепенно разрушается, образуя крупномолекулярное органическое соединение - ацетальдегид, который может вытеснять молекулы воды в кристаллической решетке кристаллообразующего вещества CuCl₂2H₂О, изменяя при этом особенности кристаллизации ликвора.

Способ осуществляется следующим образом. 2 мл ликвора, отобранного у пациента путем люмбальной пункции, помещают в пробирку и центрифугируют при 1500 оборотах в минуту в течение 5 минут, затем добавляют 10 мл 2% спиртового раствора кристаллообразующего вещества, например, CuCl₂2H₂О (двухводной двухлористой меди) и отстаивают раствор в течение 15 минут. Далее полученный раствор фильтруют через бумажный обеззоленный фильтр и заливают его на поверхность дна чашки Петри, которую помещают в термостат на 3-6 часов при температуре +48^oС. Необходимыми условиями кристаллизации являются:

- постоянная температура реакции;

- строго горизонтальное положение дна чашки Петри, содержащей кристаллизирующийся раствор;

- отсутствие в течение процесса кристаллизации каких-либо воздействий на термостат механического, физического или химического характера (Л.А. Мороз, Б. Д. Каликштейн. Кристаллографический метод в исследовании различных биологических субстратов. Методические рекомендации. - М., 1986).

Морфологическое исследование полученных кристаллограмм ликвора проводят визуально путем сравнения с кристаллограммами ликвора здорового человека. При этом на поверхности кристаллограмм появлялось образование округлой формы, расположенное поверх основных (фоновых), беспорядочно расположенных на всем протяжении дна чашки Петри кристаллов звездчатой формы. На границе этого очага определялась высокая плотность расположения центров кристаллизации, от которых происходил центростремительный рост колоний кристаллов кустистой или близкой к таковой формы, сходящихся в центре с образованием очага кристаллизации округлой формы и пересекающихся между собой. При установлении высокой плотности центров кристаллизации и наличии центростремительного роста колоний кристаллов кустистоподобной формы, пересекающихся между собой, сходящихся в центре и образующих очаг кристаллизации округлой формы, диагностируют наличие этилового алкоголя.

В случае необходимости результат фиксируют при помощи компьютерной видеосъемки и прилагают его в виде таблиц с видеоизображениями.

Способ прошел испытания лабораторным методом в условиях работы бюро судебно-медицинской экспертизы. Исследован ликвор от 22 человек, находившихся в нетрезвом состоянии. В качестве контроля исследовался ликвор 14 здоровых людей. В процессе испытаний результаты кристаллографического метода контролировались судебно-химическим методом и проверкой достоверности результата кристаллографического метода путем установки в термостат 2-5 чашек Петри, содержащих подготовленный к процессу кристаллизации ликвор одного человека. Форма и структурные особенности сформировавшихся колоний кристаллов были одинаковыми во всех одновременно исследуемых чашках Петри. Установлена 100% достоверность наличия взаимосвязи формы и структурных особенностей колоний кристаллов от наличия или отсутствия алкогольной интоксикации (при судебно-химическом исследовании крови и мочи у исследуемых лиц обнаружена высокая концентрация этилового алкоголя).

Пример. Гр-ка С., 1950 года рождения и гр-н З., 1961 года рождения, доставлены в больницу по поводу черепно-мозговой травмы в состоянии алкогольного опьянения. При поступлении в стационар путем люмбальной пункции, произведенной с лечебно-диагностической целью, было изъято по 2 мл ликвора: ликвор центрифугировался при 1500 оборотах в минуту в течение 5 минут, затем добавляли 10 мл 2% спиртового раствора кристаллообразующего вещества, например, CuCl₂2H₂О (двухводной двухлористой меди) и отстаивали в течение 15 минут, фильтровали через бумажный обезволенный фильтр, выливали на дно чашки Петри и помещали в термостат на 3-6 часов при температуре +48^oС. Изображение полученных кристаллограмм ликвора гр-ки С. и гр-на З. представлено на фиг.1 и 2 (а, б, в), где а - общий вид колоний кристаллов на поверхности дна чашки Петри; б - детальное изображение формы колоний кристаллов; в - микроструктура кристаллов. С целью сравнения на фиг.3 представлены аналогичные изображения (а, б, в) колоний кристаллов ликвора здорового человека, взятого на исследование в качестве контроля у гр. Д. при обследовании в стационаре.

При исследовании кристаллограмм ликвора гр-ки С. и гр-на З. (Фиг.1, 2) установлено, что влияние алкоголя на формирование кристаллограмм проявлялось высокой плотностью центров кристаллизации и наличием центростремительного роста колоний кристаллов кустистоподобной формы, пересекающихся между собой, сходящихся в центре и образующих очаг кристаллизации округлой формы.

По результатам проведенных исследований у гр-ки С. и гр-на З. установлено наличие в организме этилового алкоголя.

При исследовании кристаллограмм ликвора у гр-на Д. из контрольной группы здоровых лиц (фиг. 3) установлено: рост колоний кристаллов отсутствует; форма, структура и плотность не изменены. Занимаемая площадь - около 10% поверхности дна чашки Петри. Диагноз: ликвор здорового человека.