бактерицидное и фунгицидное средство

Формула изобретения

Применение мальтола - продукта переработки древесной зелени пихты - в качестве бактерицидного и фунгицидного средства.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, фармакологии и может быть использовано в качестве средства, обладающего бактерицидным и фунгицидным действием для лечения заболеваний, вызванных патогенными вирусами, грибами(дрожжи) и микроорганизмами.

Известен ряд лекарственных препаратов растительного происхождения (например, из хвои сосны, ели), которые в виде настоек, масел применяются для лечения таких заболеваний, как ангина, гайморит, хроническое воспаление легких и др. (А.Ф. Гаммерман и др. "Лекарственные растения", Москва, Высшая школа, 1990 г., стр.94-100).

Известно применение пихтовой воды, которая является отходом при получении пихтового масла, в качестве вещества, обладающего противовоспалительным, биостимулирующим и общеукрепляющим действием (SU 1805966, А 61 К 35/78, 1986 г.).

Известно средство, обладающее противовоспалительной, антибактериальной и ранозаживляющей активностью (RU 2054945, А 61 К 35/78,1991 г.). Оно содержит капсульный экстракт пихты сибирской 19,0-20,0, монотерпеновые соединения эфирных масел 0,02-0,20 и растительное масло - остальное.

Известно применение фракции лабдановых спиртов - продукта переработки зелени хвойных пород в качестве вирулицидного, бактерицидного, фунгицидного средства (RU 2138279, А 61 К 35/78, 1997 г.).

Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, является расширение арсенала препаратов растительного происхождения, обладающих бактерицидными, фунгицидными свойствами.

Данная задача решается тем, что в качестве бактерицидного и фунгицидного средства применяют мальтол, полученный при переработке древесной зелени пихты.

Способ получения мальтола заключается в следующем. Измельченную древесную зелень пихты экстрагируют жидким диоксидом углерода. Температура окружающей среды и давление должны быть такими, при которых углекислота находится в жидком состоянии, например, при температуре помещения 18-25^oС давление составляет 52-60 атм. Полученный экстракт отстаивают при температуре 0-25^oС в течение 20-24 ч. Затем отделяют образовавшуюся кристаллическую часть от жидкости, промывают на фильтре малополярным органическим растворителем, например петролейным эфиром. В конце промывки создают пониженное давление и отсасывают остатки петролейного эфира, получают кристаллическую часть нелетучего остатка. Промытые кристаллы переносят в камеру для возгонки мальтола. Емкость с кристаллами нагревают до температуры 95-105^oС и затем в камеру для направления возгонки подают слабый поток воздуха с температурой около 15^oС. Возогнанные потоком воздуха кристаллы направляют на охлаждающие поверхности. Выделенные кристаллы снимают с охлаждающей поверхности. Полученный мальтол имеет чистоту 98-99,9%.

Были проведены исследования бактерицидных и фунгицидных свойств мальтола.

Для изучения и сравнения были взяты следующие вещества:

1) хлорофиллин натрия;

2) паста хвойная хлорофилло-каротиновая;

3) концентрат провитаминный хвойный;

4) мальтол, выделенный из хвои пихты сибирской.

Для изучения противомикробной активности полученных веществ была использована культура Candida albicans штамм 13 из музея ВКПГ (Российская коллекция патогенных грибов), Staphylococcus aureus ATCC 6538 р, Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aureginosa из музея ГИСК им.Тарасевича.

Candida albicans - дрожжеподобный гриб, наиболее частый возбудитель кандидоза различной локализации. Кандидоз - это оппортунистическая инфекция, возникающая на фоне "факторов риска" (применение широкоспектральных антибиотиков, кортикостероидов, цитостатиков, иммунодепрессантов при ВИЧ-инфекции и т.п.).

Staphylococcus aureus - грамположительный микроорганизм, частый сапрофит на коже и слизистых оболочках. Возбудитель воспалительных заболеваний различной локализации.

Escherichia coli - грамотрицательный микроорганизм. Обнаруживается в желудочно-кишечном тракте у человека и животных. Частая причина циститов, пиелонефрита, холецистита, септацемии, раневых инфекций. Некоторые штаммы - причина тяжелых диаррей у детей.

Pseudomonas aureginosa - грамотрицательный микроорганизм. Обнаруживается в каловых массах, на коже, в воде, в воздухе, в почве. Частый возбудитель латентных инфекций. Иногда является причиной менингита, респираторных, уринарных, интестинальных инфекций у детей. Вызывает тяжелые септицемии у пациентов с иммунодефицитами.

Методика проведения эксперимента была следующая.

Противомикробную активность веществ 1-4 определяли методом серийных разведений. Суспензия дрожжеподобного гриба приготовлялась на изотоническом растворе хлористого натрия из 2-суточных культур Candida albicans густотой 10 ед. по бактериальному стандарту (109 бак. клеток в 1 мл), что соответствует 107 дрожжеподобным организмам.

Противобактериальная активность проверялась на суспензии бактериальных суточных культур густотой 5 ед. по бактериальному стандарту.

Навески исследуемого вещества растворяли в диметилсульфоксиде из расчета 40 мг/мл (максимум растворения ряда веществ).

Приготавливали ряд пробирок, в первую из которых наливали 1,8 мл среды Сабуро (для дрожжеподобных грибов) или мясопептонного бульона (для бактерий); во все последующие - по 1 мл среды. Из пробирки с исходным раствором препарата в первую пробирку ряда добавляли 0,2 мл, из этой пробирки после перемешивания 1 мл переносили в следующую и так до конца ряда. Таким образом получается ряд разведений в убывающих концентрациях, кратный двум (40 - 20 - 10 - 5 и т.д. мг/мл). Затем в каждую пробирку испытуемого ряда добавляли по 0,1 мл взвеси микроорганизма.

В каждом титровании имелись три контрольных пробирки: контроль культуры (пробирка без исследуемого препарата), контроль препарата (пробирка, без культуры). Все контрольные и рабочие пробирки инкубировали 2 сут при 37^oС для изучения дрожжеподобных грибов и 1 сут при 37^oС - для изучения чувствительности грамположительных и грамотрицательных бактерий.

Минимальной ингибируюшей концентрацией (МИК) испытуемого вещества считалось разведение в последней пробирке, где отсутствовал видимый рост культуры. Для определения минимальной микробоцидной концентрации (МЦК) из всех пробирок, где отсутствовал видимый рост гриба, делался высев по 0,1 мл содержимого на чашки Петри с твердой питательной средой (агар Сабуро - для дрожжеподобных и мясопептонный бульон - для бактерий). Отсутствие роста свидетельствует о микробоцидном действии препарата в данном разведении.

Результаты исследований приведены в таблице.

Из всех исследованных веществ следует выделить субстанцию 4 (мальтол из хвои пихты сибирской) как вещество с наибольшей фунгицидной и бактериальной активностью. Это вещество хорошо растворилось в ДМСО, в связи с чем удалось легко проанализировать соотношение между МИК и МЦК ( 4 МИК/МЦК для Candida albicans - 0,015; для Staphylococcus aureus - 0,06; для Escherichia coli - 0,03). Активность субстанции 4 высока как в отношении дрожжеподобных грибов, так и в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий. Это вещество оказалось также наиболее активным для других дрожжеподобных и нитчатых грибов, имеющих большое значение в медицинском и экологическом плане.

Следует отметить, что исследованное вещество (мальтол) значительно менее активно по сравнению с современными антибиотиками и синтетическими препаратами, где чувствительность измеряются в мкг/мл. Однако учитывая природное происхождение и меньшую токсичность, меньшее кожно-раздражающее действие, это вещество может стать основой для разработки профилактических косметических и моющих средств.