способ исследования состояния адаптационных механизмов организма при экспериментальном токсическом гепатите

Формула изобретения

Способ исследования состояния адаптационных механизмов организма при экспериментальном токсическом гепатите, включающий определение свободной и связанной воды в биологической жидкости путем высушивания, отличающийся тем, что взятый материал наносят на предметное стекло в виде тонкого мазка, фиксируют первоначальную массу, производят высушивание при комнатной температуре с постоянной регистрацией веса до постоянной величины, с последующим досушиванием в термостате до получения сухого остатка, по данным взвешивания определяют точку полного испарения свободной воды и начало испарения связанной, рассчитывают содержание фракций воды в образцах, при этом достоверное относительно контроля повышение уровня связанной и снижение свободной воды в плазме и эритроцитах крови в первые 1-6 сутки и изменение обратного характера с 7 суток отражает состояние адаптационных механизмов при экспериментальном токсическом гепатите.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для изучения функционального состояния жидких сред организма как в условиях эксперимента, так и в условиях клиники.

Многочисленными исследованиями доказано, что процессы гидратации объективно отражают изменения адаптационных механизмов животных организмов, что при многих патологических процессах является одним из важнейших звеньев патогенеза и позволяет диагностировать заболевание на доклинической стадии.

Известен способ определения функционального состояния растительных и животных организмов (А.С. SU 1544381).

Суть известного способа состоит в следующем:

1. Производят забор биологической жидкости.

2. Определяют количество свободной воды в биологической жидкости путем вымораживания в микропипетке.

3. Высушивая ткань, определяют содержание общей воды, а содержание связанной составляет разницу между общей и свободной фракциями воды.

Основными недостатками этого способа является:

1. Необходимость замораживания ткани, для чего нужно морозильное оборудование.

2. Необходимость точной регистрации изменяющегося объема замерзающей ткани, для чего требуется соответствующее оборудование.

3. Трудоемкость и длительность определения. Работа с одним образцом занимает 3 ч времени.

Сущность способа определения функционального состояния организма состоит в том, что производят забор биологической жидкости, взятый материал наносят на предметное стекло в виде тонкого мазка, фиксируют первоначальную массу и производят высушивание при комнатной температуре с постоянной регистрацией изменения веса до его постоянной величины и далее досушивают образец в термостате, по данным взвешивания определяют точку полного испарения свободной воды и начала испарения связанной, на основании чего рассчитывают содержание фракций воды в образце, что позволяет судить о функциональном состоянии организма.

Тонкий слой исследуемой биологической жидкости обеспечивает быстрое и равномерное испарение со всей поверхности образца вначале свободной, а затем связанной воды. Постоянная регистрация изменения массы образца требуется для определения точки окончания высыхания свободной воды и начала высыхания связанной. Досушивание образца в термостате необходимо для полного удаления воды, так как при высокой температуре происходит денатурация белка, и он теряет способность связывать воду.

Способ осуществляется следующим образом. Производят забор биологической жидкости в количестве 0,1-0,2 мл. На предметное стекло наносят тонкий мазок биологического материала, помещают на аналитические весы, фиксируют начальную массу и затем регистрируют уменьшение массы с интервалом не более чем через 1 мин. Образен самопроизвольно высыхает при комнатной температуре до постоянного веса, в зависимости от вида ткани этот процесс длится от 15 до 25 мин. Затем помещают стекло в термостат на 2 ч при температуре 105^oС для полного удаления воды. По массе сухого остатка рассчитывают содержание общей воды:

Общ.вода % = М Н₂O_общ/М образца100%.

М образца = (М образца +М стекла) - М стекла.

М Н₂О = М образца - М сухого остатка.

По данным высушивания при комнатной температуре строят график зависимости массы от времени (см.чертеж). График отображает два последовательных процесса: высыхание свободной воды, а затем связанной. Каждый из этих процессов выражается линейной зависимостью, точка пересечения полученных прямых является точкой окончания высыхания свободной воды и начала высыхания связанной. Средние точки графика, которые находятся вне прямых, не учитываются, так как в этот период времени заканчивается высыхание свободной воды и начинается испарение связанной. Затем рассчитываем содержание свободной и связанной воды по формулам:

Связ.вода % = М Н₂Освяз. /М образца100%.

Своб.вода % = М Н₂Освоб. / М образца100%.

МН₂О_своб = (М образца + М стекла) - А.

МН₂О_связ. = А - М сухого остатка,

где А - масса образца со стеклом в момент окончания высыхания свободной воды и начала испарения связанной.

Пример 1. Под эфирным наркозом производят забой крысы и забор биологического материала: эритроцитарную массу. Предварительно взвешиваем предметное стекло, его масса составила 6,26130 г. Наносим тонкий мазок ткани и помещаем образец на аналитические весы. Фиксируем исходную массу - 6,29450 г, а затем регистрируем уменьшение веса через 1 мин до постоянного. Были получены данные, приведенные в табл.1.

Затем помещаем предметное стекло в термостат на 2 ч при температуре 105^oС, для полного высушивания воды. Сухой вес составил 6,27180 г. Строим график зависимости изменения массы от времени, который представляем в виде совокупности двух прямых, при этом средние точки исключают. На пересечении прямых находим точку окончания высыхания свободной воды и начало высыхания связанной - 6,27800. Рассчитываем содержание общей, свободной и связанной воды. Содержание общей воды составило: 68,37%, свободной - 48,34%, связанной - 18,67%.

Способ был апробирован на 45 половозрелых белых беспородных крысах обоего пола массой 160-180 г. В результате определения общей свободной и связанной воды вышеописанным способом в плазме и эритроцитарной массе было установлено (см. таблицу 2), что в контрольной группе содержание общей воды в плазме составило 92,390,07%, свободной воды - 81,000,14%, связанной - 11,380,09%, в эритроцитарной массе показатели были следующие: содержание общей воды - 68,520,03%, свободной 48,610,08% и связанной 19,910,08%. При формировании острого токсического гепатита на 1-е сутки от начала введения CCl₄ в плазме количество общей воды в плазме от контроля достоверно не отличалось и составило 92,510,048%, количество свободной уменьшалось до 77,390,08%, а связанной увеличивалось до 15,120,07%. В эритроцитарной массе изменения носили аналогичный характер, содержание общей воды было 68,490,03%, свободная вода снижалась до 43,630,06%, а связанная повышалась до 24,870,05%. На 7-е сутки острого токсического гепатита динамика была обратной. В плазме содержание общей и свободной воды повышалось до 69,370,04% и 54,310,07% соответственно, а связанной понижалось до 15,050,06%.

Результаты, полученные при исследовании биологической ткани организма методом высушивания, достоверно не отличались от данных, полученных дилатометрическим способом. Следует отметить, что независимо от способа определения фракционный состав воды жидких сред объективно отражает функциональное состояние организма.

Таким образом, способ диагностики состояния процессов гидратации жидких сред организма в эксперименте позволяет, во-первых, использовать небольшое количество биологического материала, что делает данный метод доступным для использования в клинических исследованиях, а во-вторых, делать объективные выводы о состоянии адаптационных механизмов в организме животного.