способ определения эндогенной интоксикации

Формула изобретения

Способ определения эндогенной интоксикации, включающий забор крови, отделение сыворотки от форменных элементов крови, депротеинезацию, центрифугирование, прибавление к 0,5 мл надосадочной жидкости 4,5 мл дистиллированной воды, спектрофотометрию пробы при длине волны 254 нм и диагностику по уровню молекул средней массы, отличающийся тем, что перед депротеинезацией сыворотку крови разводят в 10 раз физиологическим раствором, пробу центрифугируют в течение 10 мин и при значении более 0,136 единиц оптической плотности судят о наличии эндогенной интоксикации у больных.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической биохимии, и предназначено для определения эндогенной интоксикации при любых патологических состояниях путем биохимического исследования сыворотки крови.

Известен способ диагностики эндогенной интоксикации путем физико-химического исследования плазмы крови при определении ее удельной электропроводимости (Патент SU 1388801, МКИ G 01 N 33/48 от 12.09.88).

Однако этот способ является дорогостоящим, так как для его осуществления требуется электродный сосуд с платиновыми электродами, покрытыми платиновой чернью, недостатком способа является также большой объем плазмы крови (1 мл), необходимый для проведения исследования, которое не всегда можно получить у больного, особенно в педиатрической практике.

Известен также способ определения эндотоксикоза у больных различного профиля (Патент SU 1662678, МКИ G 01 N 33/48 от 06.09.88), состоящий из фракционирования белков сыворотки крови с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.

Недостатком данного способа является трудоемкость и длительность (более 10 часов) процесса.

Известен также способ (Патент SU 179059, МКИ G 01 N 33/48 от 24.03.89), заключающийся в депротеинезации сыворотки или плазмы крови трихлоруксусной кислотой и прибавления к супернатанту щелочи и реактива Бенедикта.

Однако и этот способ требует большого количества исследуемого материала (1 мл), которое не всегда можно получить у больного, особенно в педиатрической практике, и немалых затрат времени для определения эндогенной интоксикации.

Наиболее близким к предлагаемому способу является биохимический способ определения эндогенной интоксикации (Габриэлян Н.И., Левицкий Э.Р., Дмитриев А. А. и др. Скрининговый метод определения средних молекул в биологических жидкостях: Метод, рекомендации. - Москва, 1985. - 18 с.), заключающийся в определении уровня молекул средней массы в сыворотке крови. Молекулы средней массы являются интегральным биохимическим маркером эндогенной интоксикации (Владыка А.С., Левицкий Э.Н., Поддубная Л.П. и др. Средние молекулы и проблема эндогенной интоксикации при критических состояниях различной этиологии //Анестезиол. и реаниматол. - 1987. - 1-3. - С. 37-42).

Данный способ включает забор крови натощак, отделение сыворотки от форменных элементов крови путем центрифугирования, получение безбелковой пробы путем прибавления к 1 мл сыворотки крови 0,5 мл 10% трихлоруксусной кислоты и центрифугирования в течение 30 минут при 3000 оборотах в мин. Далее к 0,5 мл надосадочной жидкости прибавляют 4,5 мл дистиллированной воды и определяют оптическую плотность пробы на спектрофотометре при длине волны 254 нм. По величине оптической плотности пробы определяют содержание молекул средней массы и по их уровню судят о наличии эндогенной интоксикации.

Однако этот метод достаточно длителен в исполнении (центрифугирование осуществляется в течение 30 минут) и требует большого количества сыворотки крови (1 мл), необходимого для проведения исследования, которое не всегда можно получить у больного, особенно в педиатрической практике, что ограничивает применение этого способа у детей при малом объеме полученной крови, когда перед клиницистом встает вопрос о выборе необходимого комплекса лабораторных тестов.

Задачей заявляемого изобретения является уменьшение объема исследуемого материала и времени проведения исследования без понижения точности способа.

Поставленная задача решается тем, что в заявляемом способе, включающем забор крови, отделение сыворотки крови от форменных элементов крови путем центрифугирования, получение безбелковой пробы путем осаждения белков и центрифугирования, прибавление к 0,5 мл надосадочной жидкости 4,5 мл дистиллированной воды, определение оптической плотности пробы на спектрофотометре при длине волны 254 нм и последующее определение по оптической плотности пробы уровня молекул средней массы, по которому судят о наличии эндогенной интоксикации, перед получением безбелковой пробы сыворотку крови разводят в 10 раз физиологическим раствором и при уровне молекул средней массы больше 0,136 единиц оптической плотности определяют наличие эндогенной интоксикации у больных.

Кроме того, для получения безбелковой пробы производят центрифугирование в течение 10 минут.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом. Производят забор крови путем венопункции натощак. Кровь центрифугируют для отделения сыворотки от форменных элементов. Производят разведение сыворотки крови в 10 раз путем прибавления к 0,1 мл сыворотки крови 0,9 мл физиологического раствора. Далее для осаждения белков к пробе прибавляют 0,5 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты и перемешивают. Для получения безбелковой пробы производят центрифугирование при 3000 об/мин. Способ позволяет уменьшить время центрифугирования до 10 минут. Отбирают надосадочную жидкость в количестве 0,5 мл, прибавляют 4,5 мл дистиллированной воды и определяют оптическую плотность пробы на спектрофотометре при длине волны 254 нм. По величине оптической плотности пробы судят об уровне молекул средней массы, содержание которых выражается в единицах, количественно равных оптической плотности. У практически здоровых людей показатель молекул средней массы соответствует 0,124+0,004 оптических единиц. Содержание молекул средней массы более 0,136 оптических единиц позволяет говорить о наличии эндогенной интоксикации.

Пример. Больная Е-ва Н.Ф., 48 лет. Поступила в Республиканский артрологический центр при Саратовском НИИ травматологии и ортопедии с жалобами на боли в суставах обеих кистей и стоп, в обоих локтевых и коленных суставах и припухлость этих суставов.

При осмотре - больная бледная, вялая, пониженного питания, пальпируются группы лимфоузлов (подчелюстные, на шее, подмышечные). Отмечается выраженная атрофия мышц верхних и нижних конечностей, выраженная деформация мелких суставов и стоп, анкилозы лучезапястных суставов, контрактуры локтевых суставов, пролиферация суставных тканей. Кожа над коленными суставами теплее окружающих тканей; в полости суставов определяется небольшое количество свободного выпота.

Д-з: ревматоидный артрит, полиартрит, серопозитивная форма, степень активности III, стадия III, функциональная недостаточность II степени; эндогенная интоксикация.

У больной была произведена венопункция натощак. Тяжелое состояние пациентки требовало всестороннего лабораторного обследования, на что требовалось большое количество исследуемого материала. Эндогенную интоксикацию определяли по уровню молекул средней массы предлагаемым способом следующим образом. Взятую кровь центрифугировали для отделения сыворотки от форменных элементов. Затем проводили разведение сыворотки крови в 10 раз, для чего к 0,1 мл сыворотки крови прибавляли 0,9 мл физиологического раствора. Далее получали безбелковую пробу путем прибавления к 1 мл пробы 0,5 мл 10% трихлоруксусной кислоты и центрифугирования в течение 10 минут при 3000 оборотах в мин. После этого отбирали надосадочную жидкость в количестве 0,5 мл и прибавляли 4,5 мл дистиллированной воды. Затем определяли оптическую плотность пробы на спектрофотометре при длине волны 254 нм. По величине оптической плотности пробы судили о содержании молекул средней массы и о наличии эндогенной интоксикации. У данной больной содержание молекул средней массы, определяемых предлагаемым способом, составило 0,217 оптических единиц, что свидетельствовало о наличии эндогенной интоксикации вследствие высокой (III) степени активности воспалительного процесса, множественного поражения суставов. Данные клинико-лабораторного обследования подтверждали наличие выраженной эндогенной интоксикации. Анализ крови: эритроциты 4,210¹² л; гемоглобин 93 г/л; цветной показатель 0,75; лейкоциты 6,310⁹; эозинофилы 0; палочки 8%; сегменты 72%; лимфоциты 16%; моноциты 4%; СОЭ 50 мм/ч; серомукоид 0,35 ед. опт. пл. ; проба Гесса 365 усл.ед.; CRP - +++; -глобулины 22%; ревматоидный фактор 1:160.

С помощью предлагаемого способа обследовано 122 больных с различной патологией опорно-двигательного аппарата, в том числе с ревматоидным артритом, деформирующим остеоартрозом, асептическим некрозом головки бедра, а также больные нейрохирургического профиля с опухолью головного мозга, невралгиями и др. , проходящих стационарное лечение в Саратовском НИИ травматологии и ортопедии. Было также обследовано 51 практически здоровый человек (доноры) на базе станции переливания крови.

Предлагаемый способ позволяет значительно (в 10 раз) уменьшить объем крови, необходимой для исследования, и ускорить время определения эндогенной интоксикации, т. к. центрифугирование в течение 10 минут позволяет считать процесс завершенным. Данное предложение позволит расширить область применения способа, в частности использовать его в педиатрии, при малом объеме полученной крови, когда перед клиницистом встает вопрос о выборе необходимого комплекса лабораторных тестов.