способ культивирования яиц трематод

Формула изобретения

Способ культивирования яиц трематод, включающий получение яиц трематод и их культивирование в жидкой среде при температурном оптимуме, отличающийся тем, что яйца трематод получают из половых путей половозрелых гельминтов, а культивирование осуществляют в растворе мочевины концентрацией 0,3-0,4% и рН 6,7-6,9.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к экспериментальной паразитологии, касается способа культивирования яиц трематод и может быть использовано для получения инвазионного материала в экспериментальных целях.

Известен способ культивирования яиц трематод, включающий получение яиц трематод из кала или желчи зараженных животных с последующим культивированием в периодически сменяемой дистиллированной воде при температурном оптимуме (1, 2). Недостатки способа - сложность осуществления и низкая эффективность из-за недостаточного количества и низкого качества инвазионного материала (выход личинок около 30%, продолжительность жизни личинок - 18 часов, инвазиоспособность сохраняется в течение 2,5-3 часов после вылупления).

Цель изобретения - повышение эффективности при упрощении способа.

Сущность изобретения заключается в том, что яйца трематод получают непосредственно из половых органов половозрелых гельминтов, а для культивирования используют 0,3-0,4%-ный раствор мочевины с содержанием азота 461%.

На основании проведенных исследований по источникам патентной и научно-технической литературы можно сделать вывод, что совокупность существенных признаков является новой и обеспечивает повышение эффективности вследствие увеличения количества и повышения качества инвазионного материала.

Технический результат выражается в том, что предлагаемый способ позволяет увеличить выход личинок (до 70%), продолжительность их жизни (до 36 часов) и поддерживать их инвазиоспособность в течение 6-8 часов после вылупления.

Способ культивирования яиц трематод осуществляется следующим образом. 0,3-0,4%-ный раствор мочевины со сроком хранения не более 12 месяцев готовят растворением расчетного количества мочевины в отстоенной не менее 6 дней дистиллированной воде с тщательным перемешиванием на магнитной мешалке или стеклянной палочкой в течение 30 минут. Яйца трематод получают непосредственно из половых органов половозрелых гельминтов и после промывки помещают в свежеприготовленный 0,3-0,4%-ный раствор мочевины с рН 6,7-6,9 из расчета 500-600 яиц на 50 мл раствора и культивируют при температурном оптимуме.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Готовят 0,3%-ный раствор мочевины, доводят до рН 6,8, температуру раствора до 21^oС. 50 мл раствора заливают в чашку Петри. На часовом стекле с небольшим количеством дистиллированной воды у половозрелых гельминтов Fasciola hepatica, собранных из желчных ходов печени крупного рогатого скота, с помощью препаровальных игл из половых органов в воду выделяют яйцо. Для получения чистой фракции осадок пропускают через сито с размером ячеек 0,6 мм с последующим трехкратным промыванием. С помощью пипетки 500-600 яиц помещают в чайку Петри с 50 мл раствора, закрывают крышкой. Закрытую чашку Петри помещают в термостат. Культивирование осуществляют при температуре 28^oС в течение 14 дней без смены среды. Для получения личинок чашку Петри выставляют на свет (яркость светового потока 200 люкс) при температуре 21-24^oС. Выход личинок составляет 46%, продолжительность жизни 23-25 час.

Пример 2. Проводят культивирование яиц трематоды Fasciola hepatica предлагаемым способом в 4 сериях опытов с использованием раствора мочевины концентрацией 0,3, 0,35, 0,4 и 0,45% в сравнении с известным. Приготовление растворов и подготовка яиц для культивирования, как в примере 1. Эффективность определяют по количеству (выход личинок) и качеству инвазионного материала. Результаты представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемый способ при испытанных концентрациях раствора мочевины обеспечивает увеличение количества и повышение качества инвазионного материала. Наилучшие показатели получены при использовании 0,35%-ного раствора мочевины. При концентрации раствора мочевины 0,4% показатели эффективности снижаются до уровня, отмеченного при использовании 0,3%-ного раствора мочевины, что подтверждает нецелесообразность такого повышения и обоснованность параметров предлагаемого способа.

Из приведенных примеров видно, что предлагаемый способ отличает от прототипа простота осуществления и эффективность. Предлагаемый способ позволяет культивировать как сформированные (т.е. прошедшие весь цикл внутригельминтного формирования), так и неполностью сформированные яйца трематод, и получать инвазионный материал с характеристиками, оптимальными для экспериментальных исследований.

Источники информации

1. Г.А. Котельников Гельминтологические исследования окружающей среды. - М.: Росагропромиздат, 1991. - С.48-49.

2. Gold D., Goldberb M. Effect or light and temperature on hatching in F. Hepatica (Trematoda; Fasciola) //J.Zool. - 1976. - v.25 - 4. - P.178-185.