способ определения биологической совместимости эритроцитарной массы крови донора и крови реципиента

Формула изобретения

Способ определения биологической совместимости эритроцитарной массы крови донора и крови реципиента путем смешивания эритроцитарной массы крови донора и сыворотки реципиента, отличающийся тем, что регистрируют уровень люминолзависимой хемилюминесценции клеток эритроцитарной массы крови донора и железоиндуцированной хемилюминесценции сыворотки реципиента в течение 5 мин при Т= 37^oС, вычисляют величину светосуммы свечения клеток препарата крови донора и сыворотки реципиента раздельно, а затем после их инкубации в соотношении 1: 10 и при отсутствии увеличения или уменьшения величины светосуммы более чем на 50% определяют эритроцитарную массу крови донора и кровь реципиента как биологически совместимые.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и анестезиологии- реаниматологии.

Известен способ определения биологической совместимости переливаемой эритроцитарной массы крови и организма реципиента путем струйного переливания 10-15 мл эритроцитарной массы крови донора реципиенту с последующим наблюдением за состоянием реципиента в течение 3-х мин (см. Инструкция по переливанию крови и ее компонентов, Москва, 1988 г., стр. 16-19, МЗ СССР). Эту процедуру выполняют трижды. Оценивается частота пульса, частота дыхания, появление одышки, затрудненного дыхания, гиперемии лица и т.д. В случае развития клинических признаков реакции или осложнения поведение больного становится неспокойным: появляется ощущение озноба или жара, стеснение в груди, боли в пояснице, животе, голове. При этом могут развиваться следующие явления: снижение артериального давления, учащение пульса, учащение дыхания, появление бледности, а затем цианоза лица. При появлении любого из описываемых признаков переливание крови или ее компонентов должно быть немедленно прекращено. Отсутствие реакций у больного после троекратной проверки является основанием для продолжения трансфузии. Однако этот метод предусматривает введение препаратов крови донора в организм реципиента, что в случае положительной реакции вызывает патологическую реакцию у больного. Кроме того, у больных в состоянии наркоза при проведении этой пробы реакция организма реципиента может быть нечеткой или запоздалой.

Прототипом предлагаемого изобретения является способ определения совместимости по группам крови АВО, которая выполняется с сывороткой крови больного, получаемой путем центрифугирования или отстоя (см. Инструкция по переливанию крови и ее компонентов. Москва. 1988 г. МЗ СССР). На белую пластинку наносят 2-3 капли сыворотки крови больного, к которой добавляют в 5 раз меньшую каплю крови донора. Кровь перемешивают с сывороткой больного, затем пластинку периодически покачивают в течение 5 мин и одновременно наблюдают результат реакции. Отсутствие агглютинации эритроцитов донора свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента в отношении групп крови АВО. Появление агглютинации указывает на их несовместимость и на недопустимость переливания данной крови. Данный метод эффективен только в отношении агглютининов и агглютиногенов групп крови АВО и не реагирует на другие группы антигенов.

Технический результат - повышение точности определения биологической совместимости эритроцитарной массы крови донора и крови реципиента и снижение числа посттрансфузионных осложнений.

Способ осуществляется следующим образом. У больных (реципиентов) производят забор венозной крови с последующим исследованием железо-индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) сыворотки крови, а также определяют люминол-зависимую хемилюминесценцию клеток эритроцитарной массы донора с помощью прибора для измерения хемилюминесценции ХЛ-03 в течение 5 мин. В качестве основного показателя ХЛ используют светосумму свечения. Сыворотку крови в количестве 0,5 мл разводят в 20 мл фосфатного буфера (рН 7,45), помещают в кювету хемилюминомера, в котором поддерживается температура 37^oС. В течение 1 мин измеряют спонтанное свечение, а затем при постоянном перемешивании добавляют инициатор ХЛ (1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа) и регистрируют индуцированное свечение в течение 5 мин. На основании полученных кривых ХЛ измеряют величины спонтанного свечения (СП), быстрой вспышки (А), светосуммы свечения (S).

Эритроцитарную массу крови донора в количестве 0,1 мл разводят в 2 мл физиологического раствора (рН 7,0) с добавлением 0,5 мМ люминола. Регистрируют индуцированное свечение в течение 5-7 мин, измеряют светосумму свечения (S).

Затем совмещают эритроцитарную массу донорской крови и сыворотку реципиента в соотношении 1:10 и инкубируют при Т=37^oС в течение 5 мин, после чего определяют показатели ХЛ клеток совмещенных компонентов. При отсутствии повышения или понижения светосуммы свечения совмещенных компонентов на 50% эритроцитарная масса крови донора и кровь реципиента считается совместимой.

В качестве конкретных примеров изучены изменения ХЛ при определении индивидуальной совместимости эритроцитарной массы донорской крови и сыворотки реципиента у 30 больных с различной группой крови (0(1), А(2), В(3), АВ(4)) резус-положительной и резус-отрицательной, которым по показаниям была назначена трансфузионная терапия. Среди пациентов не было больных с заболеваниями крови. Все больные нуждались в трансфузионной терапии в результате перенесенных травм, состоявшегося желудочного кровотечения, кровотечения из женских половых органов. Возраст больных составлял от 5 до 82 лет.

Оценка совместимости проводилась параллельно двумя методами: методом определения совместимости по группам крови АВО (см. Инструкция по переливанию крови и ее компонентов. Москва. 1988 г. МЗ СССР), ее использовали в качестве контрольной, а также методом регистрации ХЛ. При последнем методе характерным для несовместимости препаратов крови донора и сыворотки реципиента являлось повышение или понижение светосуммы свечения смешанного препарата на 50 и более процентов от исходной величины светосуммы свечения клеток донорского препарата. Преимуществом предлагаемого способа является возможность графической регистрации проводимой реакции и возможность количественной оценки результата реакции.

Пример 1. Больной Л., 39 лет, поступил в отделение реанимации. Диагноз: состояние после операции, остеосинтез левой бедренной кости, геморрагический синдром. Определены показания для переливания эритроцитарной массы донорской крови. Проведено исследование группы крови больного-реципиента и группы крови донора, согласно Инструкции по переливанию крови и ее компонентов. Москва 1988 г. Проведено исследование совместимости крови донора и сыворотки реципиента по группам антигенов АВО и резус-фактору. Противопоказаний для переливания не выявлено. Проведена биопроба, которая также не выявила противопоказаний для переливания, однако через 15 мин после начала переливания основной массы препарата у больного появилась мышечная дрожь, бледность кожных покровов. Трансфузия прекращена, проведены лечебные мероприятия. Проявления трансфузионной реакции исчезли в течение последующих 20 мин. После чего было проведено исследование совместимости эритроцитарной массы крови донора и сыворотки реципиента методом хемилюминесценции. Эритроцитарную массу крови донора в объеме 0,1 мл развели в 2 мл физиологического раствора (рН 7,0), добавили 0,5 мМ люминола и в течение 5 мин регистрировали хемилюминесценцию с помощью прибора ХЛ-03. Светосумма донорского препарата составила 15 у.е. Сыворотку реципиента в количестве 0,5 мл развели в 20 мл фосфатного буфера (рН 7,45), поместили в кювету хемилюминомера, в течение 1 мин измеряли спонтанное свечение, а затем при постоянном перемешивании добавили 1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа и регистрировали индуцированное свечение в течение 5 мин. Светосумма свечения сыворотки реципиента была 8 у.е. После инкубации клеток донора и сыворотки реципиента в соотношении 1:10, в течение 5 мин при Т= 37^oС, вновь измерили светосумму свечения смешанных инкубированных клеток донорского препарата и сыворотки реципиента (0,1 мл смешанного препарата развели в 2 мл физиологического раствора (рН 7,0), добавили 0,5 мМ люминола и регистрировали свечение в течение 5 мин). Светосумма свечения составила 3 у. е. , т.е. снизилась в 5 раз или на 500%, что свидетельствует о несовместимости данного препарата донорской крови и сыворотки реципиента.

Пример 2. Больная Н., 39 лет, поступила в отделение реанимации. Диагноз: внематочная беременность по типу трубного аборта, геморрагический шок 2 степени. Операция: лапаротомия, ликвидация последствий внематочной беременности. Выявлены показания для переливания эритроцитарной массы. Определена группа крови донора и реципиента. Определена групповая и резус совместимость крови донора и реципиента обычным способом согласно инструкции. Определена совместимость крови донора и сыворотки реципиента методом хемилюминесценции согласно вышеуказанной методике. При этом светосумма свечения клеток донорской крови составила 1 у.е., а светосумма сыворотки реципиента 17 у.е. После инкубации клеток крови донорского препарата и сыворотки реципиента в соотношении 1: 10, в течение 5 мин при Т=37^oС, светосумма свечения инкубированных с сывороткой реципиента клеток донорской крови достоверно не изменилась и по-прежнему составила 1 у.е. После проведения биологической пробы больной была перелита эритроцитарная масса без каких-либо субъективных и объективных патологических проявлений, что указывает о высокой совместимости донорского препарата крови и сыворотки реципиента.

Таким образом, полученные данные позволяют утверждать, что метод регистрации хемилюминесценции способен оценить биологическую совместимость эритроцитарной массы донорской крови и сыворотки реципиента. Светосумма хемилюминесценции клеток эритроцитарной массы донорской крови после инкубации их с сывороткой реципиента в течение 5 мин при Т=37^oС использовалась в качестве диагностического критерия биологической совместимости.

Биологическая совместимость препарата донорской крови и сыворотки реципиента характеризуется изменением светосуммы свечения клеток крови донора после инкубации их с сывороткой реципиента при Т=37^oС, в течение 5 мин в пределах, не превышающих 50% от величины светосуммы клеток донорской крови до инкубации, вне зависимости от того произошло ли увеличение или уменьшение величины данной светосуммы.