способ дифференциальной диагностики стадии хронизации хронического вирусного гепатита типа в и типа с

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики стадии хронизации хронического вирусного гепатита типа В и типа С, заключающийся в исследовании портальных трактов печени на препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, отличающийся тем, что определяют процент плазматических клеток и фибробластов в воспалительном инфильтрате портального тракта и рассчитывают диагностический показатель стадии хронизации К по формуле К= 3,79-0,39П-0,08Ф, где П - процент плазматических клеток в инфильтрате портального тракта, %; Ф - процент фибробластов в инфильтрате портального тракта, %, и при значении К, близком к 1,49, в интервале значений координат от 0,01 до 3,0 диагностируют первую стадию хронизации, при К, близком к -1,15, в интервале значений координат от -0,01 до -3,0 диагностируют вторую-третью стадии хронизации.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и касается способов дифференциальной диагностики стадии хронизации хронического вирусного гепатита (ХВГ) типа В и типа С.

Известно несколько способов дифференциальной диагностики стадии хронизации ХВГ. По V. Desmet et al. (1994) [1]. Стадия хронизации оценивается по характеру и выраженности фиброза в гистологических препаратах печени. 0 стадия - фиброз выявить не удается, 1 стадия - обнаружение портального и перипортального фиброза. 2 стадия - обнаружение одной порто-портальной септы и более, 3 стадия - обнаружение одной порто-центральной септы и более, 4 стадия - обнаружение узловой трансформации ткани печени - ложных долек, окруженных со всех сторон фиброзной тканью.

В.В. Серовым и Л.О. Севергиной (1996) [2] для оценки выраженности фиброза предложен гистологический индекс стадии хронизации (ГИСХ). В отличие от вышеизложенного способа авторы на гистологических препаратах печени предлагают учитывать не только наличие признаков портального и септального фиброза, но и "синусоидальный" (перигепатоцеллюлярный) фиброз. По предложению вышеуказанных авторов стадию хронизации заболевания определяет суммарная бальная оценка характера фиброза: фиброз и расширение большинства портальных трактов оценивается от 1 до 2 баллов, фиброз большинства портальных трактов с их расширением и сегментарный перипортальный фиброз - 3-4 балла, синусоидальный фиброз большинства долек - 1-4 балла, фиброз с образованием портальных септ (более 1) - 5-8 баллов, фиброз с образованием портальных септ (более 1) и нарушением строения печени - 9-12 баллов.

Таким образом, при сумме баллов 1-4 выставляется 1 стадия хронизации, при сумме баллов 5-8 - 2 стадия, при сумме баллов 9-12 - 3 стадия, при сумме баллов 13-16 - 4 стадия (цирроз).

Описанные способы определения стадии хронизации ХВГ дают хороший результат при исследовании достаточного объема печеночной ткани (например, при микроскопии аутопсийного материала) или при достаточной выраженности и распространенности гепатита, благодаря чему высока вероятность попадания всех вариантов фиброза в биоптат печени. При изучении биопсийного материала соблюдение этих условий оказывается затруднительным, так как объем материала ограничен объемом пункционной иглы. В связи с этим биоптат печени может оказаться недостаточно представительным, из-за чего возможна ошибочная оценка выраженности фиброза и стадии хронизации.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является способ, предложенный Ishak, A. Baptista, L. Bianchi et al. (1996) [3], заключающийся в выполнении биопсии печени, приготовлении гистологических препаратов и окрашивании их гематоксилином и эозином с последующим микроскопическим исследованием последних. Первая стадия (слабый фиброз) устанавливается при регистрации фиброза и расширении портальных трактов. Третья стадия хронизации - тяжелый фиброз документируется на основании обнаружения порто-портальной и/или порто-центральной септ. В сравнении с аналогами описанный прототип за счет объединения морфологических признаков 2-й и 3-й стадий хронизации позволил увеличить чувствительность метода. Однако точность данного метода при исследовании биопсии печени зависит от репрезентативности материала. Из-за малого объема ткани печени в биоптате (менее 0,01% от массы органа) может быть меньше 4 портальных трактов, что считается критерием недостаточности объема биоптата и требует повторной диагностической операции, что небезразлично для пациента. Даже при наличии достаточного количества портальных трактов и несмотря на диффузный характер изменений при ХВГ в конкретном биоптате могут отсутствовать фиброзные септы. В таком случае ошибочно диагностируется более благоприятная 1 стадия хронизации ХВГ.

Новый технический результат, заключающийся в повышении информативности исследуемого биоптата, точности диагностики стадии хронизации ХВГ, снижении травматичности исследования, достигают применением нового способа дифференциальной диагностики стадии хронизации хронического вирусного гепатита типа В и типа С, заключающегося в исследовании портальных трактов печени на препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, причем определяют процент плазматических клеток и фибробластов в воспалительном инфильтрате портального тракта и рассчитывают диагностический показатель стадии хронизации К по формуле

К=3,79-0,39П-0,08Ф,

где П - процент плазматических клеток в инфильтрате портального тракта, %;

Ф - процент фибробластов в инфильтрате портального тракта, %;

и при значении К, близком к 1,49, в интервале от 0,01 до 3,0 диагностируют первую стадию хронизации, при К, близком к -1,15, в интервале от -0,01 до -3,0 диагностируют вторую-третью стадию хронизации.

Способ осуществляют следующим образом: биоптат печени, взятый обычным методом, фиксируют в 10% формалине. Используя общепринятый метод изготовления гистологических препаратов [4], ткань печени обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, проводят через ксилол и заключают в парафин. Срезы печени окрашивают гематоксилином и эозином. При исследовании гистологического препарата определяется тип не менее чем 200 клеток воспалительного инфильтрата портальных трактов и вычисляется процент плазматических клеток и фибробластов. Если количество портальных трактов и плотность воспалительных инфильтратов в срезе недостаточны для выявления 200 клеток, дополнительно исследуются на серийных срезах те же портальные тракты, но на другом уровне. Проценты плазматических клеток и фибробластов в инфильтрате портального тракта подставляют в формулу, рассчитывают диагностический показатель К, сравнивают с вышеизложенными интервалами значений К и определяют стадию хронизации ХВГ у обследуемого пациента.

Примеры:

1. В портальных трактах больного Т плазмацитов - 3,5%, фибробластов - 50%

К=3,79-0,393,5-0,0850=-1,67 (2)

2. В портальных трактах больного Б плазмацитов - 0,5%, фибробластов - 11%

К=3,79-0,390,5-0,0811=2,71 (3)

Как показывают результаты расчета, у больного Т - 3 стадия хронизации, так как координата К (-1,67) ближе к центроиду второй-третьей стадии (-1,15); у больного Б-1 стадия хронизации, поскольку координата К (2,71) ближе к центроиду первой стадии (1,49). Таковы правила трактовки результатов дискриминантного анализа, с помощью которого выполнены расчеты (5).

С помощью предлагаемого способа исследованы биопсии печени 23 больных ХВГ. С помощью серологического исследования и полимеразной цепной реакции диагностирован ХВГ, вызванный вирусом типа В у 8 пациентов, типа С - 15. Ткань печени, полученная для исследования путем чрезкожной биопсии, обрабатывали стандартным способом. Срезы толщиной около 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. В портальных трактах подсчитывали количество плазматических клеток и фибробластов. Для этого просматривали не менее 200 клеток воспалительного инфильтрата. Количество плазмацитов и фибробластов выражали в процентах.

Исследование стадии хронизации проводилось способом, выбранным в качестве прототипа, и предлагаемым. Все случаи хронического вирусного гепатита в соответствии со способом, выбранным в качестве прототипа, были разделены в зависимости от характера фиброза в печени на две группы. В результате оказалось, что у 10 пациентов вирусный гепатит относился к первой стадии хронизации. у 13 - ко второй-третьей стадии хронизации заболевания.

При применении предлагаемого способа выявлено, что первая и вторая-третья стадии хронизации вирусного гепатита существенно различаются по доли (проценту) плазматических клеток и фибробластов в воспалительном инфильтрате портальных трактов (см. табл.). Так, при второй-третьей стадии хронизации ХВГ процент плазматических клеток в воспалительном инфильтрате портальных трактов больше, чем при первой стадии, в среднем в 5,3 раза, фибробластов - в 1,6 раза.

Для дифференциальной диагностики первой и второй-третьей стадий хронизации вирусного гепатита предлагаемым способом использован дискриминантный анализ из пакета программ Statistic for windows 5,0 [5]. Оказалось, что при использовании для дискриминации (диагностики) стадий хронизации процентного содержания плазмацитов и фибробластов уровень достоверности различий (р) составил 0,000026 (при F=18,8). Оценка эффективности дискриминантного анализа первой и второй-третьей стадий ХВГ показала, что его безошибочность (относительная частота принятия безошибочного отнесения больных ко 2-3 и 1 стадиям хронизации ХВГ) равна 96% [5].

Для диагностики стадии хронизации по результатам дискриминантного анализа определены координаты центроидов (статистическое понятие) - групповые интегральные параметры, вычисленные по исходным значениям процентного содержания в инфильтрате портальных трактов плазмацитов и фибробластов 23 больных ХВГ типа В и типа С. Координата центроида 1 стадии хронизации имела значение 1,5. Значение координаты 2-3 стадии хронизации -1,15.

Таким образом, предлагаемый способ дифференциальной диагностики стадии хронизации ХВГ позволяет по относительному количеству в воспалительном инфильтрате плазмацитов и фибробластов определить стадию хронизации вирусного гепатита в случаях, когда в биоптате печени отсутствуют порто-портальные или порто-центральные фиброзные септы. Применение предлагаемого способа повышает чувствительность и точность гистологической диагностики стадии хронизации вирусного гепатита, уменьшает травматичность исследования, поскольку делает излишней повторную биопсию печени в случаях, когда первый биоптат оказался неинформативным.

Литература

1. Desmet V., Gerber M., Hoofhagle J.H. et al. Классификация хронического гепатита: диагностика, определение степени тяжести и стадии течения. //Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии.-1995.- 2.-С. 38-45.

2. Серов В.В., Севергина Л.О. Морфологические критерии оценки этиологии, степени активности и стадии процесса при вирусных хронических гепатитах В и С. //Арх. патологии.-1996.-4.-С. 61-64.

3. Ishak, A. Baptista. L. Bianchi, F. Callea, J. De Groote, F. Gudat, H. Denk, V. Desmet, G. Korb, R.N.M. Mac Sween, M.J. Phillips, B.G. Portmann, H. Poulsen, P.J. Scheuer, M. Schmid, H. Thaler: Histological grading and staging of chronic hepatitis. //J. Hepatol.-1995.- 22.-P. 696-699.

4. Меркулов Г. А. Курс патогистологической техники. - Л.: Медицина.- 1969. - 422 с.

5. Юнкеров В.Н. Основы математико-статистического моделирования и применения вычислительной техники в научных исследованиях. /Под ред. В.И.Кувакина. Санкт-Петербург, 2000.-140 с.