способ лечения дефектов роговицы

Формула изобретения

1. Способ лечения дефектов роговицы, включающий использование суспензии культуры фетальных клеток роговицы человека, отличающийся тем, что культуру фетальных клеток наносят на внутреннюю поверхность мягкой контактной линзы в виде монослоя и помещают линзу на роговицу до полной эпителизации.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что линзу с монослоем фетальных клеток заменяют каждые 7 дней.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины - офтальмологии и может быть использовано при лечении эрозий и язв роговицы человека.

Наибольший удельный вес среди заболеваний, ведущих к слепоте, имеют язвенные поражения роговицы, этиология которых разнообразна. Данное состояние обычно развивается в результате механических, термических, химических повреждений, а также бактериальных, грибковых и вирусных инфекций роговицы. Выбор патогенетически обусловленного лечения бывает затруднителен, т.к. не всегда ясны причины, препятствующие самопроизвольному заживлению роговицы.

Традиционная терапия включает обычно применение антибиотиков, препаратов нуклеинового ряда, солкосерила, витаминов в качестве стимуляторов различных стадий репаративных процессов в роговице. Однако использование антибактериальных средств нередко оказывается неэффективным и малооправданным с патогенетической точки зрения - соскоб с язвы часто бывает стерильным. Антимикробные и противовирусные препараты, механизм действия которых заключается в нарушении процессов синтеза ДНК, широко использующиеся при лечении язвенных поражений роговицы, оказывают тормозящее влияние на регенерацию, что нередко приводит к затяжному течению патологического процесса, частым рецидивам и даже необходимости применения хирургических методов лечения, включая пересадку роговицы. Доказана эффективность применения лечебных мягких контактных линз при заболеваниях роговицы (Boles S.F. et al. - Cornеa, - 1992, - Vol. 11. - 1, Р. 47-52). Однако, несмотря на разнообразие предлагаемых способов лечения, часто не удается добиться полной эпителизации роговицы.

Медицина трех последних десятилетий создала серьезные научные предпосылки для развития фетальной терапии и трансплантации клеток. В настоящее время тысячи научных учреждений и клиник во всем мире практикуют метод клеточной трансплантации и рассматривают его в качестве главной альтернативы - пересадке органа.

Ближайшим аналогом предлагаемого способа является "Способ лечения ожогов глаз", патент RU 2140241, выдан 27/10 1999.

Техническим результатом предлагаемого способа лечения является ускорение регенерации роговицы реципиента.

Технический результат достигается за счет сочетания стимулирующего действия фетальных клеток, содержащих большое количество ростовых факторов и цитокинов, механической защиты надетой на роговицу мягкой контактной линзы, препятствующей смыванию слезной жидкостью клеток с поверхности роговицы.

Источником культуры эпителиальных и стромальных клеток роговицы служит ткань роговицы 14-22 недельных эмбрионов человека, которые получены при проведении искусственного прерывания беременности по медицинским показаниям.

Аборты проводятся в государственном учреждении - Научном центре акушерства, гинекологии и перинатологии (НЦАГ и П) РАМН строго в соответствии с основами законодательства об охране здоровья граждан - статья 36, приказом МЗ РФ 302 от 28.12.93, рекомендациями ВОЗ, принятыми РФ, а также нормами этического Комитета и специально созданной комиссии по госпитализации. Для получения культуры клеток использовались эмбрионы, сыворотка крови которых была проверена на контаминацию к возбудителям сифилиса, гепатита В и С, вируса иммунодефицита человека, цитомегаловируса, вируса простого герпеса, а также ряда внутриклеточных бактерий (микоплазма, хламидия, уреаплазма).

Используемая культура представляет собой монокультуру эпителиальных клеток роговицы (80%) и стромальных фибробластов (20%), клеток с характерными признаками, выращенных на полной питательной среде с добавлением 10% эмбриональной сыворотки теленка.

Известна способность фетальных клеток мигрировать, пролиферировать и образовывать новые ростки ткани. Можно предположить, что после того, как мягкая контактная линза нанесена на роговицу, происходит отлипание клеток от ее поверхности и перемещение их в область дефекта роговицы вследствие межрецепторных взаимодействий. Возможно слеза выполняет роль питательной среды для фетальных клеток, что создает благоприятные условия для их пролиферации и образования новых ростков, замещающих поврежденную ткань.

Способ осуществляют следующим образом.

Перед использованием культуры подсчитывают количество жизнеспособных клеток по исключению трепанового синего (как правило, 98%) и суспендируют в минимальном объеме полной питательной среды с добавлением 90% эмбриональной сыворотки теленка. Применяют суспензию с концентрацией 10⁶ кл/мл, содержущую 80% эпителиальных клеток роговицы и 20% стромальных фибробластов. Мягкую контактную линзу помещают в чашку Петри диаметром 35 мм, заполняемую питательной средой по краю линзы. Внутреннюю поверхность линзы не погружают в жидкость. Затем внутреннюю поверхность линзы полностью заполняют суспензией, содержащей 300000 клеток в 0,3 мл питательной среды, и оставляют так на 40 мин до достижения адгезии. Клетки самопроизвольно располагаются на линзе в виде монослоя. Контроль осуществляется с помощью светового микроскопа. Сразу после достижения адгезии мягкую контактную линзу отмывают физиологическим раствором, надевают на роговицу и оставляют там на несколько дней. Длительность ее ношения определяется регенераторной способностью роговицы. Исходя из свойств данной мягкой контактной линзы и возможности ее непрерывного ношения ее оставляют на роговице на 7 дней. При необходимости, в случае неполной эпителизации, ее заменяют на новую линзу с культурой фетальных клеток. Наш выбор остановлен на мягкой контактной линзе ACUYUE, имеющей высокий (58%) коэффициент влагосодержания, что позволяет оставлять ее на роговице на несколько дней. Можно использовать и другие типы линз, например: SOFLENS, SEE QUENS, SOFSPEEN.

Лечение проведено трем больным с трофическими язвами роговицы и двум больным с рецидивирующими послеожоговыми эрозиями роговицы в возрасте от 36 до 55 лет. В результате лечения у всех пациентов отмечалась полная эпителизация роговицы в сроки от 8 до 21 дня.

Клинический пример: больной М., 42 лет.

Поступил с диагнозом: ОС-состояние после термического ожога коньюнктивы и роговицы 3 степени, язва роговицы. Несмотря на активно проводимое терапевтическое лечение, включающее антибактериальные, нестероидные, тканевые, витаминные препараты, а также ингибиторы протеаз, положительной динамики в течение 1,5 мес после ожога добиться не удалось. Острота зрения ОС при поступлении - неправильная светопрорекция. Выраженный корнеальный синдром: смешанная инъекция, блефароспазм, светобоязнь, слезотечение. Роговица отечная, мутная, детали передней камеры не видны. В оптической зоне роговицы - язва размером 8 мм, до ¹/₂ глубины стромы.

Больному была сделана субконьюнктивальная инъекция суспензии фетальных клеток, после чего в течение 5 дней наблюдалась положительная динамика: уменьшился корнеальный синдром, в средней и нижней трети роговицы появилось просветление и стали видны детали передней камеры, язва уменьшилась до размеров 57 мм, глубина ее осталась прежней. Однако в течение последующих 3 дней положительной динамики не наблюдалось. В связи с этим был применен способ лечения с помощью фетальных клеток роговицы, адгезированных на внутренней поверхности мягкой контактной линзы. Длительность непрерывного ношения одной линзы - 7 дней, после чего она заменялась на новую. Лечение проводилось в течение 21 дня. Было использовано 3 линзы. За это время острота зрения повысилась до 0,02, был купирован корнеальный синдром, значительно уменьшился отек, язва роговицы полностью эпителизировалась.

Резюмируя представленные клинические данные, можно заключить, что результатом использования фетальных клеток, адгезированных на внутренней поверхности мягкой контактной линзы, явилось ускорение репаративной регенерации поврежденных ткакей роговицы.