способ получения йодированного белка

Формула изобретения

1. Способ получения йодированного белка, включающий растворение белка в щелочной среде, обработку полученного раствора йодсодержащим веществом и выделение готового продукта из реакционной смеси, отличающийся тем, что применяют йодсодержащее вещество, растворенное в кислоте, а выделение готового продукта осуществляют осаждением за счет снижения рН реакционной смеси до величины, не превышающей величину изоэлектрической точки готового продукта.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что применяют йодсодержащее вещество, растворенное в соляной кислоте.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что применяют йодсодержащее вещество, растворенное в уксусной кислоте.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, фармакологической и пищевой промышленности и может быть использовано в производстве пищевых добавок и для получения лекарственных препаратов, предназначенных для профилактики йодной недостаточности и регулирования йодного обмена.

Известен способ получения йодированного белка, заключающийся в том, что белок растворяют 0,02 М фосфатном буфере с рН 7,2 до получения финальной концентрации 2 мг/л. Затем в полученный раствор добавляют эквивалентное количество раствора хлористого йода (ICl) с концентрацией 0,022 М в глициновом буферном растворе, рН 8,5. В результате реакции получается раствор йодированного белка, который очищают с использованием хроматографических методов (М. Е. Koshland, F.M. Englberder, M.J. Erwis and S.M. Gaddone. Modification of Amino Acid Residues in Anti-p-azobenzenearsonic Acid Antibody during Extensive lodination, the Journal of Biological Chemistry, April 1963 - volume 238, number 4).

К недостатку известного способа можно отнести то, что конечный продукт имеет низкую концентрацию йодированного белка, а также недостаточную производительность процесса.

Перед авторами стояла задача по созданию способа йодирования белков, лишенного указанных недостатков. Для решения поставленной задачи в способе йодирования белка, включающем растворение белка в щелочной среде, обработку полученного раствора йодсодержащим веществом и выделение готового продукта из реакционной смеси, предлагается применить йодсодержащее вещество, растворенное в кислоте, а выделение готового продукта осуществлять осаждением за счет снижения рН реакционной смеси до величины, не превышающей величину изоэлектрической точки готового продукта.

Дополнительно предлагается применить йодсодержащее вещество, растворенное в соляной либо уксусной кислоте.

Применение йодсодержащего вещества, растворенного в кислоте, и снижение рН реакционной смеси до величины, не превышающей величину изоэлектрической точки готового продукта, позволяет совместить два процесса: процесс йодирования и процесс осаждения йодированного белка. Таким образом достигается технический результат.

Способ осуществляют следующим образом. Растворяют белок в буферном растворе с рН около 8, добавляют в этот раствор при перемешивании ICl, растворенный в кислоте. Количество кислоты (объем и концентрация) выбирают так, чтобы конечный рН реакционной смеси не превышал величину изоэлектрической точки готового продукта. В результате реакции происходит присоединение йода к ароматическим кольцам аминокислот - тирозин, фенилаланин, триптофан. В ходе реакции снижается рН и образуется осадок йодированного белка, который отделяют центрифугированием или фильтрованием.

Казеин начинает выпадать в осадок при рН ниже 7,2, но максимальная степень йодирования наблюдается в области изоэлектрической точки (рН 4,5) и ниже.

Пример 1. Один килограмм казеина растворяли в 10 л карбонатного буферного раствора с рН 8,2. В полученный раствор при интенсивном перемешивании добавляли 1 л 1 N раствора ICl в 4 N соляной кислоте. В ходе реакции наблюдали снижение рН до величины 2,5 (что значительно ниже изоэлектрической точки, которая равна 7,8) и образование суспензии йодказеина в течение 1,5 мин. Йодированный казеин выделяли из реакционной смеси фильтрованием с последующей сушкой до влажности 1,5%.

Пример 2. Растворяли 100 мг человеческого сывороточного альбумина в 10 мл фосфатного буфера с рН 7,2. Затем в этот раствор добавляли 370 мкл 1 N раствора ICl в 4 N соляной кислоте. В ходе реакции наблюдали снижение рН до величины 2,2 (изоэлектрическая точка полированного альбумина равна 4,7) и образование осадка йодированного альбумина. Йодированный альбумин выделяли из реакционной смеси центрифугированием с последующей лиофильной сушкой.

Пример 3. 95 г альбумина растворили в 4 л фосфатного буфера (0,05 М, pH 7,5), добавили 90 мл раствора хлористого йода (1 М) в 4 N соляной кислоте. При этом pH раствора снижался до величины 4,2 и образовался осадок йодированного альбумина. Йодированный альбумин отделяли от раствора центрифугированием (20 мин при 2500 об/мин). Содержание йода составило 6,4%.

Применение способа позволит повысить производительность процесса йодирования белков с получением сухого компактного продукта.