способ качественного определения малых доз наркотического вещества в исследуемой среде

Формула изобретения

Способ качественного определения малых доз наркотического вещества в исследуемой среде, включающий воздействие эталонным реагентом на исследуемую среду и регистрацию изменения физико-химических параметров, отличающийся тем, что в качестве эталонного реагента используют набор известных веществ, близких или сходных по природе, структуре и/или составу к определяемой малой дозе, и антител к этим известным веществам, при этом осуществляют потенцирование исследуемой малой дозы путем многократного последовательного разведения и внешней обработки по гомеопатическому методу, а идентификацию малой дозы производят по тому известному веществу, реакция которого с соответствующим антителом при введении в реакционную среду потенцированной формы малой дозы протекает с изменениями, регистрируемыми иммунохимическими методами анализа, основанными на реакции антиген-антитело.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области исследования медицинских препаратов и может быть использовано для качественного анализа малых доз вещества, в частности наркотиков, или стимулирующих допинговых препаратов и т.п. исследований.

Из уровня техники известен способ определения качества и вида малых доз вещества в исследуемой среде путем внешнего воздействия когерентным линейно поляризованным оптическим излучением с измерением оптических характеристик и последующим сравнением с характеристиками эталонного образца (RU 2112976 С1, G O1 N 33/15, 10.06.98).

Однако данный способ достаточно трудоемок и требует точной, дорогостоящей аппаратуры.

Известен также способ качественного определения малых доз вещества в исследуемой среде, включающий воздействие эталонным веществом-реагентом и регистрацию изменения физико-химических параметров соединения (С.К. Еремин, Б. Н, Изотов, Н.В. Веселовская, Анализ наркотических средств, М.: Мысль, 1993 г., с. 65-75).

При относительной простоте такой способ не обеспечивает высокой достоверности, поскольку регистрацию изменения физико-химических параметров производят, как правило, зрительно по изменению цвета-окраски.

Изобретение направлено на создание технологически простого, достоверного и эффективного способа качественного определения вида малых доз вещества в исследуемой среде.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе качественного определения малых доз вещества в исследуемой среде, включающем воздействие эталонным реагентом на исследуемую среду и регистрацию изменения физико-химических параметров, согласно изобретению в качестве эталонного реагента используют набор известных веществ, близких или сходных по природе, структуре и/или составу к определяемому веществу в малой дозе, и антител к этим известным веществам, при этом осуществляют потенцирование исследуемой малой дозы путем многократного последовательного разведения и внешней обработки по гомеопатическому методу, а идентификацию малой дозы производят по тому известному веществу, реакция которого с соответствующим антителом при введении в реакционную среду потенцированной формы малой дозы протекает с изменениями, регистрируемыми иммунохимическими методами анализа, основанными на реакции "антиген-антитело".

При этом регистрацию изменения течения реакции "антиген-антитело" производят преимущественно методом иммуноферментного анализа (см., например, Иммунологические методы, под ред. Г. Фримеля, пер. с нем., М.: Медицина, 1987, с. 73-225).

Технический результат изобретения достигается за счет ранее открытого одним из авторов Эпштейном О.И. и экспериментального подтвержденного эффекта изменения физико-химических и/или биологических свойств вещества в присутствии его потенцированной формы, полученной путем многократного последовательного понижения концентрации (разведения) и внешнего воздействия (например, в виде многократного вертикального встряхивания каждого промежуточного разведения или обработки ультразвуком, электромагнитным облучением и т.д.) преимущественно по используемой в гомеопатической практике технологии.

Для приготовления потенцированной формы вещество в малой дозе растворяют в нейтральном растворителе (дистиллированной воде, спирте, физиологическом растворе и т.п.), производя равномерное прогрессирующее уменьшение концентрации, как правило, путем последовательного разведения 1 части исходного вещества в 9 частях (для десятикратного разведения) или в 99 частях (для сотенного разведения) или в 999 частях (для тысячного разведения) нейтрального растворителя с многократным вертикальным встряхиванием (динамизацией) каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения заданной кратности (см., например, В. Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г. с. 14-29).

Антитела к исходным веществам, входящие в состав эталонного реагента, получают по известной методике путем иммунизации лабораторных животных (см., например, Иммунологические методы, под ред. Г. Фримеля, пер. с нем., М.: Медицина, 1987, с. 9-20).

Пример 1. Для определения вида наркотических веществ, содержащихся в моче, в качестве эталонных реагентов используют набор различных наркотиков, например: морфин, кокаин, фенобарбитал, ЛСД, амфетамин и антител к ним. Исследуемую пробу мочи, содержащую малую дозу наркотика, потенцируют по гомеопатическому методу и проводят ИФА по следующей методике.

В различные лунки планшета, предварительно сенсибилизированного раствором конъюгата морфина, кокаина, фенобарбитала, ЛСД, амфетамина, вносят раствор специфических антител к этим веществам и потенцированную форму исследуемой малой дозы. Кроме того, формируют контрольные лунки, сенсибилизированные указанными растворами наркотиков, в которые вносят растворы специфических антител к этим веществам и нейтральный буфер. Проводят инкубацию при 37^oС в течение часа, далее планшет отмывают, добавляют проявляющий реагент, содержащий ферментную метку, еще раз инкубируют, как описано выше, затем отмывают и добавляют субстратную смесь, выдерживают 10-15 мин в темноте и определяют на спектрофотометре с вертикальным ходом луча при 492нм оптическую плотность. Далее сравнивают ее значение, полученное в различных лунках планшета, содержащих смесь антител к исходным веществам и потенцированную форму исследуемой малой дозы, а также в контрольных лунках. Идентификацию малой дозы производят по тому известному исходному веществу, течение реакции которого с соответствующим антителом при введении потенцированной формы малой дозы изменяется, что регистрируют по изменению оптической плотности (D₄₉₂) по отношению к D₄₉₂, полученной в соответствующей контрольной лунке.

Анализ результатов идентификации малой дозы показал, что оптическая плотность, измеряемая в лунках планшета, сенсибилизированного конъюгатом кокаина, фенобарбитала, ЛСД, амфетамина, и содержащая антитела к ним, в присутствии потенцированной формы исследуемой малой дозы и в контроле составляет 0,80-0,84, а в лунке, сенсибилизированной конъюгатом морфина и содержащей антитела к морфину в присутствии потенцированной формы исследуемой малой дозы, эта величина равнялась 0,41, а в контроле - 0,81, то есть имеют место отклонения в параметрах течения реакции "антиген-антитело", что позволяет сделать вывод о наличии в исследуемой среде малой дозы морфина.