способ идентификации миграционной активности тучных клеток соединительной ткани млекопитающих и человека

Формула изобретения

Способ идентификации миграционной активности тучных клеток соединительной ткани млекопитающих и человека, включающий получение их изображения с гистологического препарата с помощью светового микроскопа и определения их планиметрических характеристик методами интерактивной компьютерной обработки и статистического анализа, отличающийся тем, что в качестве тучных клеток используют тучные клетки на полутонких срезах различных отделов бронхиального дерева и легких, подвергшихся действию инфракрасного лазерного излучения, и устанавливают повышение уровня миграции тучных клеток, а также абсолютные (периметр, площадь и длина) и относительные (округлость) плоскостные величины, характеризующие однотипность изменений показателей тучных клеток соединительной ткани зоны бифуркации трахеи и долевых бронхов.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к гистологии, касается морфологической и морфометрической оценки тучных клеток органов респираторной системы на фоне применения инфракрасного лазерного излучения. Известно, что действие гелий-неонового лазера повышает функциональную активность макрофагов, которая выражается в положительном хемотаксисе к очагу излучения [5]. Общепринятые способы морфометрии биологических объектов [1], в том числе морфометрии легких [2] и компьютерной микротелефотометрии, используются для объективизации исследований в техники и медицине [1, 3, 7]. За прототип взяты исследования [4], в которых с помощью системной морфометрии проведена идентификация фенотипа тучных клеток мезометриальной брыжейки на этапах секреторного цикла, а также метод морфометрической идентификации тучных клеток окуляр-микрометром в висцеральной плевре [6].

Недостатком данных способов является то, что авторы для изучения использовали пленочные препараты и не объективизировали миграционную активность тучных клеток, работали только на экспериментальном материале (лабораторные животные - крысы).

Предложенный способ позволяет оценить и квалифицировать миграционную активность тучных клеток при действии инфракрасного лазера, а также выделить самые информативные критерии планиметрических показателей тучных клеток на полутонких срезах различных отделов бронхиального дерева и легких, как на экспериментальном материале (крысы), так и на биопсийном материале больных с заболеваниями дыхательной системы (хронический обструктивный бронхит). Применение полутонких срезов для изучения ввиду их незначительной деформации и усадки тканей в процессе проведения и заливки материала в эпоксидные смолы, а также изготовление препаратов толщиной 1-1,5 мкм позволяет получить более достоверные результаты при морфометрии.

Способ осуществлялся следующим образом. На грудную клетку экспериментальных животных воздействовали импульсным инфракрасным лазером (Agnis-L01) в течение 15 дней на 6 полей справа и слева, контактным способом, суммарная доза составляла 7,8 Дж/см². Больным с хроническим бронхитом проводили эндобронхиальное облучение инфракрасным лазером (АЛТО), сканирующим методом, с плотностью потока мощности 20 Дж/см², время воздействия 5 мин. По окончанию срока воздействия лазера у экспериментальных животных для исследования брали зону бифуркации трахеи, долевого бронха и участок легкого, прилегающий к висцеральному листку плевры, у больных проводили забор биопсийного материала слизистой оболочки долевого бронха. На полученных препаратах, окрашенных метиленовым синим, с целью оценки уровня миграции тучных клеток проводился подсчет их числа на длину 100 мкм эпителиального пласта. Этот показатель в зоне бифуркации трахеи составил 2,20,33 (у интактных животных 1,20,25). В долевых бронхах миграция через эпителий тучных клеток была незначительная, но было выявлено резкое увеличение тучных клеток в зоне около висцерального листка плевры, где их число на единицу площади 5000 мкм² составляло после применения инфракрасного лазерного излучения 4,750,78 (у интактных животных 0,710,22). У больных хроническим бронхитом после проведения терапии инфракрасным лазером уровень миграции тучных клеток в эпителии составил 7,60,37 (до лечения 2,950,28). С целью доказательства однотипности реакции тучных клеток соединительной ткани трахеи и бронхов была проведена оценка морфометрических показателей с помощью полуавтоматического программно-аппаратного комплекса, позволяющего анализировать изображение структуры тучных клеток [3] . Морфометрия проводилась с помощью системы качественного анализа изображения "Морфометр", которая в сочетании с микроскопом выводит изображение на экран компьютера, что позволяет провести количественный анализ изображения по определенным параметрам. Были оценены характеристики изображения клеток: периметр, площадь, длина, ширина и формфакторы (X-проекция, Y-проекция, элонгация, эквивалентный радиус, ориентация, округлость, компактность). Из них статистически достоверными были: периметр, площадь, длина и округлость тучных клеток соединительной ткани зоны бифуркации трахеи и долевого бронха, это позволило нам объективизировать полученные результаты (см. таблицу).

Изобретение позволяет выделять наиболее информативные количественные морфологические критерии тучных клеток различных отделов органов дыхания, их миграционную активность и показать, что под действием инфракрасного лазера изменение в тучных клетках воздухоносных и респираторных отделов легких происходит синхронно, что свидетельствует о сбалансированности взаимосвязанных и взаимозависимых тканевых структур органов дыхания.

Источники информации

1. Автандилов Г. Г. Компьютерная микротелефотометрия в диагностической гистопатологии. - М.: РМАПО, 1996.

2. Вейбель Э.Р. Морфометрия легких человека. - М.: Медицина, 1970.

3. Генкин В.Л., Ерош И.Л., Москалев Э.С. Системы распознания автоматизированных производств. - Ленинград: Машиностроение, 1988.

4. Гордиенко Е. Н., Целуйко С.С. Способ морфометрической идентификации фенотипа тучных клеток мезометриальной брыжейки на этапах секреторного цикла. З. 98118672/13 (020520) от 12.10.1998.

5. Илларионов В.Е. Основы лазерной терапии. - М.: Респект, 1992, 121 с.

6. Пирогова Н. А. Гистологическая характеристика плевры в норме и при общем охлаждении организма // Новосибирск,1988. - Автореферат дисс. к.м.н. - С. - 18

7. Ульянычев Н.В., Безрукова Т.В., Целуйко С.С. Автоматизированная система для научных исследований в физиологии, патологии дыхания. - Благовещенск, 1988, 54 с.