способ определения функционального состояния организма по степени резистентности крови к кислотному гемолизу

Формула изобретения

1. Способ определения функционального состояния организма по степени резистентности крови к кислотному гемолизу, включающий разведение пробы крови изотоническим раствором хлорида натрия, дискретную фоторегистрацию убыли оптической плотности под действием соляной кислоты, до достижения ее постоянного значения, математическую обработку полученных данных и определение по ее результатам фракций крови с различной кислотной резистентностью, отличающийся тем, что пробу крови разводят изотоническим раствором хлорида натрия с рН 7,4 в 2001 раз, из разбавленной пробы крови берут две равные части, одну из которых инкубируют с добавкой пропранолола, а другую помещают в кювету и определяют ее исходную оптическую плотность, после чего в нее добавляют раствор соляной кислоты, а дискретную регистрацию значений оптической плотности ведут в процессе автоматической регистрации кинетики кислотного гемолиза, затем в кювету помещают проинкубированную с пропранололом вторую часть пробы, определяют исходную оптическую плотность и, добавив в нее раствор соляной кислоты, также регистрируют значения оптической плотности и кинетику гемолиза, при этом регистрацию значений оптической плотности проб выполняют с дискретностью в 1 с, с введением результатов в базу данных компьютера, их обработкой с помощью программного обеспечения, включая представление в виде прямых и дифференцированных графиков кинетики кислотного гемолиза первой и второй частей пробы, по которым определяют относительное содержание фракций эритроцитов с различной кислотной резистентностью и регистрируют параметры кинетики гемолиза, проводят их обработку с помощью программного обеспечения и вводят результаты обработки в базу данных и подпрограмму экспертной оценки сравнения полученных величин показателей с нормой.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что кислотный гемолиз обеих частей пробы проводят 0,1 н. раствором соляной кислоты в соотношении 1: 20 к исходному объему.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что при определении исходной оптической плотности обеих частей пробы вводят подпрограмму с калибровочным графиком и определяют абсолютное количество эритроцитов в крови, а при дискретной регистрации значений оптической плотности обеих частей проб вводят подпрограмму с калибровочным графиком и определяют абсолютное и относительное содержание эритроцитов во фракциях с различной кислотной резистентностью.

4. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что при регистрации параметров кинетики гемолиза по прямым и дифференциальным графикам двух частей пробы вводят подпрограмму и определяют стабильные параметры кинетики гемолиза двух частей пробы, такие, как время начала и окончания гемолиза, продолжительности процесса гемолиза, количества фракций эритроцитов, максимальные скорости и время их развития для каждой фракции.

5. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что при регистрации стабильных параметров кинетики гемолиза двух частей проб вводят подпрограмму и определяют лабильные параметры кинетики гемолиза путем расчета разностей стабильных параметров кинетики гемолиза двух проб.

6. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что при регистрации стабильных параметров кинетики гемолиза двух частей проб вводят подпрограмму и определяют гематологические показатели пробы крови.

7. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что при графическом представлении кинетики гемолиза вводят подпрограмму и определяют относительный сдвиг прямых графиков кислотного гемолиза двух частей пробы, по которым определяют индекс свободных ₂ -адренорецепторов на мембранах эритроцитов.

8. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что при регистрации стабильных параметров кинетики гемолиза двух частей проб вводят подпрограмму и определяют концентрации в плазме тиротропного гормона гипофиза, а также тетра- и трийодтиронинов щитовидной железы.

9. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что в отдельных случаях проводят повторные анализы проб крови, регистрируя динамику изменения их показателей.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биологии и медицине, может применяться в экологической физиологии человека и животных, ветеринарной и клинической экспресс-диагностике.

Известны способы определения осмотического, теплового и химического гемолиза изолированных эритроцитов и цельной крови с добавкой антикоагулянтов с целью диагностики (а. с. СССР N1097949, G 01 N 33/48, опубл. 15.06.84, Бюл. N 22; N 1250952, G 01 N 33/48, опубл. 15.08.86, Бюл. N 30; N 1411669, G 01 N 33/48, опубл. 23.07.88, Бюл. N 27; N 1469464, G 01 N 33/49, опубл. 30.03.89, Бюл. N 12 и N 1647403, G 01 N 33/49, опубл. 07.05.91, Бюл. N 17), которые включают разбавление образцов гипо- или изотоническими растворами хлорида натрия, инкубацию проб в присутствии гемолитиков, периодическое измерение убыли их светорассеяния при длинах волн 670-750 нм, против холостых или полностью гемолизированных проб и последующие расчеты относительных скоростей гемолиза в те же отрезки времени. Однако все они требуют применения рядов пробирок с разными концентрациями гемолитиков, повышенного расхода крови и реагентов, раздельных затрат времени на выделение эритроцитов, регистрацию процесса, нередко с помощью технически сложных устройств, последующих расчетов и построения графиков гемолиза (эритрограмм) для полуколичественной оценки избранного типа резистентности. Поэтому указанные способы трудоемки и пригодны для характеристики свойств эритроцитов или крови, но не организма. Тем более они неприемлемы для популяционных обследований людей и диких животных, особенно мелких птиц и млекопитающих.

Наиболее близок предлагаемому изобретению "Способ определения индивидуальной чувствительности к гемосорбции при ишемической болезни сердца" (Патент РФ N 2007192, A 61 М 1/36, опубл. 15.02.94, Бюл. N 3). При его осуществлении разводят физиологическим раствором 1-2 капли капиллярной крови до объема 1,5 мл и оптической плотности суспензии 0,7. Полученную взвесь смешивают в термостатированной кювете спектрофотометра с равным объемом 0,04 н. соляной кислоты, регистрируя по секундомеру через каждые 30 с снижение величин оптической плотности. По результатам регистрации рассчитывают относительное содержание фракций эритроцитов с низкой и пониженной (до 180 с), средней (180-270 с) и высокой (более 270 с) устойчивостью к кислоте. Индекс резистентности, служащий критерием эффективности лечения, находят по процентному соотношению относительных количеств эритроцитов с низкой и пониженной устойчивостью и эритроцитов со средней и высокой устойчивостью.

К недостаткам данного способа относятся: невозможность длительного хранения разбавленных растворов хлорида натрия и соляной кислоты, которые быстро теряют исходные свойства из-за поглощения атмосферного аммиака, что вынуждает пренебрегать возможным искажением результатов анализа, либо готовить свежие растворы перед каждой серией определений; приблизительность объемов крови, физиологического раствора и соляной кислоты, неприемлемых для количественного определения показателей; дискретная регистрация гемолиза через относительно большие интервалы времени, препятствующая детализации процесса; неизбежность последующих расчетов, повышающих трудоемкость и длительность анализа; условность выражения результатов в относительных единицах графика и предложенных индексов, которые не интерпретируются в обычные диагностические показатели, снижая информативность анализа; непригодность этой громоздкой и трудоемкой процедуры для экспресс-диагностики морфофункционального состояния организма.

Задачей предлагаемого способа является повышение надежности и информативности анализа при одновременном снижении его трудоемкости, за счет стандартизации условий проведения и автоматизации большинства операций, включая фоторегистрацию гемолиза, построение эритрограмм, измерение количества эритроцитов и параметров кинетики гемолиза, а также расчеты количественных показателей, обеспечивающих экспресс-диагностику функционального состояния организмов людей и животных и их популяций.

Поставленная задача достигается тем, что при проведении способа определения функционального состояния организма по степени резистентности крови к кислотному гемолизу, включающего разведение пробы крови изотоническим раствором хлорида натрия, дискретную фоторегистрацию убыли оптической плотности до достижения ее постоянного значения под действием соляной кислоты, математическую обработку полученных данных и определение по ее результатам фракций крови с различной кислотной резистентностью, предлагается разводить пробу крови в 2001 раз изотоническим раствором хлорида натрия со значением pH 7,4 и брать из полученной разбавленной пробы крови две равные части, одну из которых инкубировать с добавкой пропранолола, а другую помещать в кювету фотометра, определять ее исходную оптическую плотность и, добавив в нее раствор соляной кислоты, проводить дискретную регистрацию значений оптической плотности в процессе автоматической регистрации кинетики кислотного гемолиза, затем в кювету помещать проинкубированную с пропранололом вторую часть пробы, определять ее исходную оптическую плотность и, добавив в нее раствор соляной кислоты, также выполнять регистрацию кинетики кислотного гемолиза, при этом регистрацию значений оптической плотности обеих частей пробы выполнять в автоматическом режиме с дискретностью в одну секунду, с введением данных в компьютер, их обработкой с помощью программного обеспечения, занесением результатов обработки в базу данных и их представлением в виде прямых и дифференцированных графиков кинетики кислотного гемолиза первой и второй частей пробы, по которым определять фракции эритроцитов с различной кислотной резистентностью и регистрировать параметры кинетики гемолиза, проводить их обработку с помощью программного обеспечения и вводить результаты обработки в базу данных и подпрограмму экспертной оценки сравнения полученных величин показателей с нормой.

При этом кислотный гемолиз обеих частей пробы проводить 0,1 н. раствором соляной кислоты в соотношении 1: 20 к исходному объему.

Кроме того, при определении исходной оптической плотности обеих частей пробы, вводить подпрограмму с калибровочным графиком и определять абсолютное содержание эритроцитов в крови, а при дискретной регистрации значений оптической плотности обеих частей проб вводить подпрограмму с калибровочным графиком и определять абсолютное и относительное содержание эритроцитов во фракциях с различной кислотной резистентностью.

Также при регистрации параметров кинетики кислотного гемолиза вводить подпрограмму и определять по прямым и дифференциальным графикам обеих частей пробы такие стабильные параметры кинетики, как: время начала и окончания гемолиза, его продолжительность, количества фракций эритроцитов, максимальные скорости гемолиза каждой фракции, время их развития и процентные доли на графике гемолиза.

При регистрации стабильных параметров кинетики гемолиза двух частей пробы вводить подпрограмму и определять лабильные параметры кинетики гемолиза путем расчета разностей стабильных параметров кинетики гемолиза в двух частях пробы.

Кроме того, при регистрации стабильных параметров кинетики гемолиза двух частей пробы вводить подпрограмму и рассчитывать гематологические показатели пробы крови.

Также при графическом представлении кинетики гемолиза вводить подпрограмму и определять относительный сдвиг прямых графиков кислотного гемолиза двух частей пробы, по которым рассчитывать индекс свободных ₂-адренорецепторов на мембранах эритроцитов.

При регистрации стабильных параметров кинетики гемолиза двух частей пробы вводить подпрограмму и рассчитывать концентрации в плазме тиротропного гормона гипофиза, а также тетра- и трийодтиронинов щитовидной железы.

Кроме того, в отдельных случаях проводить повторные анализы проб крови, регистрируя динамику изменения их показателей.

Стандартизация условий проведения анализа, позволяющая автоматизировать процесс, достигается точным дозированием крови и реагентов и постоянной величиной pH раствора хлорида натрия, делающей анализ независимым от pH образца крови. Применение 0,1 н. раствора соляной кислоты как гемолитика допускает его длительное хранение, а добавки в объеме 1/20 от разбавленной части пробы оптимизируют время гемолиза (для эритроцитов человека 250-350 секунд) и позволяют обойтись без перемешивания проб. Разведение проб крови в 2001 раз вводит концентрацию эритроцитов в них, в пределы линейной зависимости с ее оптической плотностью, что позволяет применить калибровочный график и с его помощью определять в пробах крови количество эритроцитов. Повторение анализа после инкубации части разбавленной крови с пропранололом (обзиданом) позволяет сравнивать исходную резистентность образца с имитацией in vitro его состояния при стрессе.

Дискретная автоматическая фоторегистрация гемолиза с частотой 1/с исключает риск пропуска деталей процесса, обеспечивая надежность анализа, и избавляет оператора от постоянного и утомительного слежения за временем протекания процесса. Свойственные прототипу громоздкие расчеты результатов, ручное построение по ним эритрограмм и идентификацию на последних фракций эритроцитов заменяет автоматизированное редактирование файлов анализов с последующим автоматическим дифференцированием графиков фоторегистрации обеих частей пробы. Оно не только обеспечивает визуализацию эритрограмм и выявление на них в виде пиков фракций низко-, средне- и высокостойких эритроцитов, но и позволяет идентифицировать ретикулоциты, которые обычно выявляют после специальной окраски и последующей микроскопии.

Автоматизация процесса обработки результатов позволяет дополнить эритрограммы обеих частей пробы регистрацией по их прямым и дифференциальным графикам параметров кинетики гемолиза, а также описать весь процесс и выявляемые при нем фракции рядом количественных характеристик. Последние непосредственно заносятся в компьютер, пополняя базу данных лаборатории результатами текущего анализа, и позволяют судить о состоянии мембран во фракциях эритроцитов как при исходном, так и стрессированном состояниях пациента а калибровочный график обеспечивает пересчет относительного содержания клеток в них в абсолютное. Процесс роста содержания клеток в низкостойких фракциях эритрограммы фиксируют, как правило, накануне месячных, у новорожденных, при донорстве, приеме адаптогенов, отдыхе после тяжелой работы и тренировок, а также различных анемиях, кровотечениях, ожогах, сеансах лазеротерапии, гипербарической оксигенации, дистанционной ударно-волновой литотрипсии и т. д. Любой стрессор (патоген), изменяя структуру мембран эритроцитов, усиливает распад клеток и создает неспецифическое напряжение в системе эритрона. Однако компенсирующий его эритропоэз (новообразование эритроцитов) выявляется не всегда. Его отсутствие при терминальных состояниях, запущенных онкозаболеваниях и слабая выраженность при хроническом дефиците пищи позволяет проводить по эритрограммам дифференциальную диагностику и прогнозирование исхода болезней.

Полученные кинетические характеристики гемолиза и количественная оценка фракций эритрограмм обеспечивают возможность расчетов вероятности типов кроветворения в организмах обследуемых, тогда как направленность и степень сдвига графиков в пробе с пропранололом относительно контроля допускает оценку состояния ₂-адренорецепторов на мембранах эритроцитов, позволяя судить о степени возбуждении их симпатоадреналовой системы. В частности, сразу после отлова диких животных и птиц у студентов перед экзаменами, при тяжелой работе, физических тренировках и других формах резкого возбуждения организмов сдвига графика в пробе с пропранололом не происходит.

Кроме того, наработанный ряд алгоритмов позволяет автоматически рассчитывать по параметрам гемолиза содержание лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и концентрацию гемоглобина в крови, что, в свою очередь, обеспечивает расчет таких эритроцитарных индексов как средний объем эритроцитов, цветовой показатель и содержание гемоглобина в эритроците (СГЭ). Тем же способом рассчитываются концентрации в плазме тиротропного гормона гипофиза (ТТГ) и гормонов щитовидной железы три- и тетрайодтиронинов (Т₃ и Т₄). В связи с участившимися в РФ йоддефицитными состояниями данные показатели необходимы терапевтам и эндокринологам, работу которых затрудняет дороговизна (сотни рублей), длительность исполнения (месяцы) и низкая надежность результатов их определения традиционными методами.

Предлагаемый способ осуществляется в соответствии с блок-схемой его алгоритма, представленной на фиг. 1. Для анализа берут 5 или 10 мкл пробы крови с антикоагулянтом (гепарин или Трилон Б) и разводят ее в 2001 раз изотоническим (0,85%) раствором хлорида натрия с pH 7,4 - блок 1. Берут из разбавленной пробы крови 2 равных части, одну из которых (контрольную) помещают в кювету фотометра толщиной 5 или 10 мм. Фотометр предварительно калибруют на подсчет эритроцитов, а выводы его гальванометра подключают через АЦП к PC-совместимой ПЭВМ, снабженной программным обеспечением. Измерив исходную оптическую плотность контрольной части пробы в диапазоне длин волн 670-750 нм, в кювету добавляют 1/20 исходного объема 0,1 н. раствора соляной кислоты, после чего проводят ее повторную фотометрию, измеряя убыль оптической плотности через каждую секунду, до установления ее постоянного значения - блок 2. Вторую (обзидановую) часть пробы в это время инкубируют при комнатной температуре и периодическом помешивании с добавкой 1/20 ее исходного объема 270 миллимолярного раствора пропранолола. По окончании фоторегистрации первой части пробы в том же режиме фотометрируют ее вторую часть - блок 3. Измерения убыли оптической плотности частей пробы - блоки 2 и 3 - проводят в автоматическом режиме, занося полученные результаты в базу данных (БД). По завершении процессов фоторегистрации контрольной и обзидановой частей пробы крови полученные файлы БД редактируют для удаления механических и электрических помех и проводят их обработку с помощью программного обеспечения, содержащего комбинацию графических и вычислительных методов расчета. Первая подпрограмма строит и визуализирует прямые и дифференцированные (эритрограммы) графики, выделяет и рассчитывает на них низко- (А), средне- (Б) и высокостойкие (В) фракции эритроцитов, количество и процентные доли (WmK и WmO) которых зависят от свойств исследуемого образца крови. Одновременно идентифицируют наиболее резистентную к кислоте фракцию ретикулоцитов (Ртц) - блок 4. Следующая подпрограмма регистрирует стабильные параметры кинетики гемолиза по прямым и дифференцированным графикам контрольной (К) и обзидановой (О) частей пробы, включая: время (в секундах) его начала (ТнК и ТнО) и окончания (ТоК и ТоО), продолжительности (LK и LO) процесса гемолиза и общее количество (NK и NO) выявляемых при этом на эритрограммах пиков (фракций эритроцитов). Каждая из фракций характеризуется максимальной скоростью (VмК и VмО) и временем ее развития (ТмК и ТмО) на эритрограмме. Затем с помощью подпрограммы рассчитывают лабильные параметры кинетики гемолиза как разности между соответствующими парами стабильных параметров двух частей пробы - блок 5. Далее с помощью подпрограммы по калибровочному графику определяют количество эритроцитов в крови (ЧЭ), а по параметрам кинетики гемолиза рассчитывают такие гематологические показатели, как гематокрит (Ht), скорость оседания эритроцитов (СОЭ), содержание в крови лейкоцитов (ЧЛ) и гемоглобина (Hb). Это позволяет дополнительно рассчитать такие эритроцитарные индексы, как средний объем эритроцита (СрОЭ, фл), цветовой показатель (ЦП) и среднее содержание гемоглобина в эритроците (СГЭ, пг), а также вероятность (%) "замедленного", нормального или шунтирующего типа кроветворения (ВТК) - блок 6а. Затем с помощью подпрограммы определяют относительный сдвиг прямого графика гемолиза обзидановой части пробы по сравнению с контрольной, по соотношению площадей под которыми рассчитывают (в %) индекс свободных ₂- адренорецепторов (БАР) - блок 6б. Далее вводят подпрограмму и рассчитывают по стабильным параметрам кинетики гемолиза обеих частей пробы концентрации тиротропина (ТТГ), три- (Т₃) и тетрайодтиронина (Т₄) в плазме крови - блок 6в. С помощью экспертной системы все полученные показатели нормируют и сравнивают с накопленными в базе данных результатами анализов крови, соответственно, людей или животных - блок 7. Программное обеспечение выдает на экран дисплея и принтер бланк анализа, характеризующий состояние организма обследуемого прямым и дифференцированным (эритрограмма) графиками гемолиза и группами количественных и качественных диагностических показателей. Последние позволяют экспрессно судить о состоянии системы крови и кроветворения - блок 8, симпатоадреналовой активности - блок 9 и функции щитовидной железы - блок 10, давая в совокупности представление о функциональном состоянии организма - блок 1.

Примеры конкретного осуществления способа.

Пример 1. У практически здорового мужчины 23 лет Р. Г. Д. , ежедневно получавшего фармакопейные дозы настойки женьшеня, трижды с интервалом в 7 суток взято из пальца по 1 капле капиллярной крови. Из ячейки иммунологического планшета, смоченной 5% раствором гепарина, 10 мкл образца крови переносят в бюкс с 20 мл 0,85% раствора хлорида натрия pH 7,4 и тщательно перемешивают суспензию до однородного состояния (разведение в 2001 раз). Контрольную пробу объемом 4 мл разбавленной крови фотометрируют при длине волны 670 нм в 10 мм кювете предварительно калиброванного на подсчет эритроцитов фотометра (ФЭК марки КФК-2), выводы гальванометра которого подключены через цифровой вольтметр к PC-совместимой ПЭВМ, снабженной программным обеспечением (ПО). Еще 410 мл той же разбавленной пробы крови переносят в бюкс с 0,2 мл 270 мкМ раствора пропранолола (обзидана). За время инкубации обзидановой части пробы при комнатной температуре и периодическом помешивании в кювету с контрольной частью пробы добавляют 200 мкл 0,1 н. раствора соляной кислоты и проводят в автоматическом режиме повторную фоторегистрацию с дискретностью в 1 секунду до достижения постоянного значения величины оптической плотности. Закончив процесс регистрации контрольной части пробы и удалив гемолизат из кюветы, фотометрию повторяют в том же режиме с обзидановой частью пробы. По завершении процесса фоторегистрации полученные файлы базы данных редактируют и, обработав с помощью ПО, получают бланк анализа, характеризующий состояние организма пациента прямыми графиками и эритрограммами кинетики гемолиза (фиг. 2), а также регистрируемыми и расчетными показателями анализа крови (табл. 1). Такие расчетные параметры кинетики гемолиза (ПКГ), как время развития максимальных скоростей гемолиза для каждого пика (ТмК и ТмО), продолжительности всего процесса (LK и LO) и проявления отдельных фракций, а также разности () между соответствующими стабильными ПКГ (лабильные ПКГ), содержатся в файле анализа и используются для расчетов. Но поскольку стандартный бланк анализа их не содержит, то в табл. 1 они отсутствуют.

На всех графиках сплошной линией (-) обозначена кинетика контрольных частей проб, а пунктиром (---) - кинетика гемолиза обзидановых частей пробы. Из эритрограмм (фиг. 2) и данных табл. 1 (анализ от 25.11.98) видно, что исходно у пациента снижено количество лейкоцитов (ЧЛ) и повышена скорость оседания эритроцитов (СОЭ), что говорит об ослаблении защитных сил организма. Также существенно снижены кислотная резистентность крови, содержание гемоглобина (Hb) и эритроцитов (ЧЭ), а ретикулоциты (Ртц) не выявились. Обнаруженной легкой степени анемии, вероятно, алиментарного происхождения соответствуют довольно высокие значения среднего объема эритроцита (СрОЭ) и других эритроцитарных индексов (ЦП и СГЭ), а оценка типа кроветворения указывает на относительно высокую вероятность его затруднений в момент взятия крови для анализа. Показатели активности симпатоадреналовой (индекс БАР) и тироидной функций находятся в пределах нормальных величин БД лаборатории, хотя количество тетрайодтиронина несколько повышено.

Недельный прием адаптогена (фиг. 2, анализ от 02.12.98) повысил количество низкостойких (изношенных) фракций эритроцитов. При этом резко усилилось шунтовое кроветворение, появились Ртц, возросли ЧЛ и ЧЭ в крови. Однако количество Hb и ЦП изменились незначительно, а СОЭ, Ht, СГЭ и, особенно СрОЭ, снизились, сделав основную (среднестойкую) часть эритроцитов более резистентной к кислоте. Также нормализовалось содержание Т₄ и в 1,5 раза от исходной повысилась симпатоадреналовая активность. К концу обследования (фиг. 2, анализ от 09.12.98) большинство вышеуказанных показателей, за исключением ЧЛ, ЦП и Т₃, стало возвращаться к исходным величинам. Полученные результаты и, в частности, рост затруднений кроветворения в 1,5 раза от исходного, по-видимому, можно объяснить утомлением организма из-за его избыточной стимуляции при ограниченных ресурсах.

Пример 2. Образцы крови больного А. К. В. 12 лет, с диагнозом "Токсическая гемолитическая анемия", поступали в лабораторию в ячейках термостатированного иммунологического планшета из отделения детской реанимации областной клинической больницы 5 раз за неделю. Дальнейшие операции способа проводились аналогично примеру 1. При этом 5 мкл образца крови переносят в бюкс с 10 мл 0,85% раствора хлорида натрия с pH 7,4, а для фотометрии в кювете толщиной 5 мм (ФЭК марки КФК-3) используют по 2 мл разбавленной пробы, соответственно добавляя к ним соляную кислоту и пропранолол в объеме 0,1 мл.

На фиг. 3 приведены эритрограммы проб, а количественные показатели анализов помещены в табл. 2. Динамика эритрограмм позволяет судить о воспроизводимости предлагаемого способа и возможности его применения для мониторинга. При этом заметно, что если в первые дни гемолиз начинается вскоре после добавки кислоты, то на 5 и 7 сутки это происходит гораздо позже. В процессе наблюдений все более заметны различия между графиками контрольной (К) и обзидановой (О) частей пробы, что свидетельствует о снижении степени стрессированности и нормализации симпатоадреналовой активности организма. Очевидно, что новообразованные эритроциты отличаются от прочих циркулирующих фракций, по крайней мере, неделю. Наконец, если в первые дни наблюдений на эритрограммах хорошо выражены 3 типа эритроцитарных фракций, обозначенные буквами А, Б и В, то по мере снижения тяжести болезни минорные фракции заметно уменьшаются в размерах. Это указывает на то, что по мере лечения у больного угасает распад поврежденных эритроцитов (А) и, соответственно, тормозится компенсирующее его новообразование эритроцитов (В).

При сопоставлении эритрограмм (фиг. 3) с количественными результатами анализов (табл. 2) видно, что в начале мониторинга общее ЧЭ в крови пациента в 2-2,5 раза меньше нормального для этого возраста. При этом относительное содержание низкостойких (распадающихся) эритроцитов повышено до 11,0%, а количество среднестойких - снижено до 78%. Этому соответствуют очень низкий гематокрит и крайне высокие величины эритроцитарных индексов (СрОЭ, ЦП и СГЭ), а также отрицательный индекс БАР и вдвое повышенная концентрация Т₃, свидетельствующие о стрессовом состоянии организма. Видно также, что вероятность затруднений кроветворения во всех случаях крайне низка, а выявленная тяжелая степень анемии вызвана признаками усиленного эритродиереза. Попытки организма компенсировать его проявляются увеличенным вдвое количеством Ртц, ростом до 10% содержания высокостойких эритроцитов и усиленным до 50% кроветворением шунтирующего типа, повышающим параметры кислотной резистентности крови. При устранении причин заболевания усиление новообразования эритроцитов резко снизило большинство признаков его тяжести, вследствие чего состояние больного заметно улучшилось и после недели лечения он был выписан из больницы как выздоровевший. Таким образом, в примере представлены возможности предлагаемого способа оценивать малодоступный для обычных анализов процесс кроветворения и отслеживать по динамике эритрограмм недавнее прошлое пациентов.

Пример 3. Берут по 5 мкл образцов крови белой лабораторной крысы, таких диких видов мелких млекопитающих, как полевка-экономка из отряда грызунов, бурозубка обыкновенная из отряда насекомоядных или сизый голубь. Дальнейшие операции способа проводят аналогично примерам 1 и 2. Эритрограммы мелких млекопитающих и птиц, выполненных предлагаемым способом, приведены на фиг. 4, а количественная оценка их морфофункционального состояния - в табл. 3. Очевидно, что у всех особей отчетливо выражена разница между эритрограммами контрольных и обзидановых частей проб, позволяющая судить об активности симпатоадреналовой системы в момент взятия крови. Суженное основание и большая заостренность главного пика эритрограммы крыс при меньшей, чем у человека, выраженности минорных фракций свидетельствуют о большей гомогенности эритроцитов в их циркуляции, что обычно объясняют их меньшим диаметром и большей сферичностью, чем у эритроцитов людей. По эритрограммам полевки-экономки и бурозубки видно, что гемолиз у них начинается гораздо раньше и заканчивается позже, чем у лабораторной крысы, причем асимметрия эритрограмм свидетельствует о большей гетерогенности эритроцитов в их крови. При этом у полевок отчетливо выражены несколько фракций эритроцитов, тогда как у бурозубок различия между ними более сглажены. Также видно, что кислотная резистентность ядерных эритроцитов голубей в 2,5 - 3 раза выше, чем у млекопитающих, что замедляет анализ образцов их крови до 15-20 мин. Сложная картина получаемых эритрограмм обусловлена завершением эритропоэза непосредственно в циркуляции птиц.

Предлагаемый способ технически прост и экономичен, а также отличается воспроизводимостью, высокой чувствительностью, экспрессностью и информативностью. При длительности анализа в 10-15 мин, что сравнимо с прототипом, способ визуально характеризует обследуемый организм двумя эритрограммами (исходного состояния и имитации стресса in vitro) и дополняет их более чем 40 количественными морфофункциональными показателями, из которых 14 расчетных. Автоматическое нормирование, экспертная оценка и группировка диагностических показателей дают информацию о функциях симпатоадреналовой системы, щитовидной железы и особенно подробно - системы крови. Последняя включает 7 стандартных гематологических величин, а также оценку кислотной резистентности мембран эритроцитов и вероятности типов кроветворения. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает не только получение обычных диагностических показателей крови, но и интеграцию параметров в "системный портрет" обследованного организма.

Способ сравнительно легко реализуется в обычных химических, клинических и сельскохозяйственных лабораториях, так как требует лишь сетевого электропитания, стандартного оборудования, ПЭВМ, класса PC 286 DX и 4-х видов распространенных реактивов. Требуемые для анализа 5-10 мкл крови людей можно брать из отходов крови с антикоагулянтом, которые обычно остаются в клинических лабораториях после ряда стандартных анализов, или получать проколом кожи людей, мелких лабораторных, домашних, сельскохозяйственных и диких животных и птиц. Важно лишь, чтобы они хранились без замораживания при температуре 4-6^oC и анализировались не позже 24 ч после их изъятия из организма. Предлагаемый способ позволяет анализировать за рабочую смену 50-70 образцов крови.

Сочетание информативности и экспрессности предлагаемого способа обеспечивает поточный скрининг и мониторинг морфофункционального состояния организмов людей и животных. Это позволяет использовать его показатели в ветеринарной и клинической экспресс-диагностике как критерии тяжести состояний при болезнях, чрезвычайных ситуациях и оценках эффективности лечебных мероприятий. Высокая чувствительность предлагаемого способа допускает применение этих диагностических показателей для оценки степени адаптированности людей и животных к условиям деятельности и среды обитания, а также функциональных резервов организма. При условии разработки портативного прибора возможно применение способа в полевых условиях для решения конкретных задач экологической физиологии человека и животных, также медицины катастроф.