способ определения предрасположенности к формированию опиатной зависимости

Формула изобретения

Способ определения предрасположенности к формированию опиатной зависимости, включающий проведение тестовой нагрузки морфином, отличающийся тем, что определяют in vitro концентрацию циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) при тестовой нагрузке морфином в сочетании с налоксоном в нативных и в нативных предварительно морфинизированных мононуклеарных клетках периферической крови, рассчитывают индекс предрасположенности путем деления значения концентрации цАМФ в нативных предварительно морфинизированных на ее значение в нативных мононуклеарных клетках и при значении индекса более 1,3 определяют высокую предрасположенность к формированию опиатной зависимости.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к наркологии, и может быть использовано с целью выявления лиц с высоким риском развития зависимости для повышения эффективности профилактических мероприятий.

Известен способ определения предрасположенности к формированию опиатной зависимости в экспериментальных условиях у крыс путем тестовой нагрузки морфином методом самовведения с последующим определением количества морфина, потребленного животным (в ж-ле: Бюллетень Экспериментальной Биологии и Медицины. 1992, сентябрь 6; 114(9)стр. 296-298).

Недостатком этого способа является невозможность его использования у человека в связи с необходимостью искусственной морфинизации.

Также известен способ определения предрасположенности к формированию опиатной зависимости путем определения концентрации циклического 3", 5" - аденозинмонофосфата в мононуклеарных клетках периферической крови при тестовой нагрузке морфином и морфином в сочетании с налоксоном in vitro с расчетом индекса предрасположенности (заявка на изобретение N 2000115607/14 (016964) RU). Высокую предрасположенность к формированию опиатной зависимости определяют при численном значении индекса не более 1,3. Достоверность определения составляет 82,1% случаев.

Недостатком этого способа является недостаточно высокая точность определения.

Техническим результатом предлагаемого решения является повышение точности объективного, прижизненного способа определения предрасположенности к формированию опиатной зависимости у человека.

Этот результат достигается тем, что дополнительно определяют концентрацию циклического 3", 5" - аденозинмонофосфата в предварительно морфинизированных мононуклеарных клетках периферической крови, индекс предрасположенности рассчитывают путем деления значения концентрации циклического 3", 5"-аденозинмонофосфата в предварительно морфинизированных мононуклеарных клетках периферической крови на ее значение в нативных мононуклеарных клетках периферической крови и при значении индекса более 1,3 определяют высокую предрасположенность к формированию опиатной зависимости.

Не вытекает явным образом из известного уровня техники тот факт, что соотношение значений концентрации циклического 3",5"-аденозинмонофосфата в присутствии морфина и налоксона в предварительно морфинизированных и нативных мононуклеарных клетках периферической крови является более точным критерием предрасположенности к формированию опиатной зависимости.

Способ осуществляют следующим образом:

Из крови донора, разбавленной равным объемом культуральной среды RPMI-1640 с EDTA, методом центрифугирования (400g45 мин) в градиенте плотности выделяют суммарную фракцию мононуклеарных клеток периферической крови (МПК); собранные МПК промывают в избытке RPMI-1640 (400g15"). Часть МПК инкубируют 4,5 часа в среде, содержащей 0,5 мкМ морфина гидрохлорида, после чего промывают в избытке RPMI-1640 (400g15"). 510⁵ МПК (нативных и морфинизированных) инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре в конечном объеме 100 мкл RPMI-1640, содержащей 10 мкМ форсколина, 1 mM EDTA, 6 mM теофиллина, 50 нМ морфина гидрохлорида и 20 нМ налоксона. Реакцию останавливают внесением в пробу 1 мл охлажденного этанола. После переноса проб в пробирки для анализа и выпаривания этанола в токе азота определяют концентрацию цАМФ, например, с помощью коммерческого набора "Cyclic АМР ³H] assay system" (Amersham). Рассчитывают индекс предрасположенности путем деления концентрации цАМФ в мононуклеарных клетках периферической крови, предобработанных морфином, на концентрацию цАМФ в нативных. При значении индекса более 1,3 определяют высокую предрасположенность к формированию опиатной зависимости.

Пример 1.

In vitro в присутствии морфина и налоксона определяют концентрацию циклического 3", 5" - аденозинмонофосфата в нативных и предварительно морфинизированных мононуклеарных клетках периферической крови.

Группа 1. Донор А. Концентрация цАМФ в нативных МПК составляет 2,53 пмоля/10⁶ клеток, в предварительно морфинизированных МПК - 0,91 пмоля/10⁶ клеток. Коэффициент предрасположенности 0,91/2,53= 0,359, что меньше 1,3 и соответствует низкой предрасположенности к формированию опиатной зависимости. Среднее значение индекса предрасположенности по группе 0,370,15.

Группа 2. Донор В. Концентрация цАМФ в нативных МПК составляет 1,01 пмоля/10⁶ клеток, в предварительно морфинизированных МПК - 2,51 пмоля/10⁶ клеток. Коэффициент предрасположенности 2,51/1,01=2,4836, что больше 1,3 и соответствует высокой предрасположенности к формированию опиатной зависимости. Среднее значение индекса предрасположенности по группе 2,540,52.

Достоверность различий между группами составила P=0,01618. Предлагаемый способ применен у 28 доноров. Совпадение прогнозируемого и реального результатов имело место в 92,9% случаев.

Предлагаемый способ имеет преимущество перед известными, заключающееся в том, что он повышает точность безопасного объективного, без морфинизации организма (испытуемого) определения предрасположенности конкретного индивидуума к формированию опиатной зависимости.