способ дифференциальной диагностики обменных нарушений

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики обменных расстройств путем исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что сыворотку крови наносят на предметное стекло, накрывают покровным, сушат при температуре 37 - 38^oС, выдерживают на открытом воздухе 1,5 - 2 ч, изучают в поляризованном свете и при наличии кристаллов: веерообразных дендритов определяют гипероксалемию; друз, дендритоподобных сферолитов - гиперкреатинемию; оолитоподобных сферолитов - гиперкальциемию; мелкозернистых агрегатов - гиперглицинемию; перистых лучей - гиперурикемию; крестообразных сферолитов - гиперхолестеринемию.

Описание изобретения к патенту

Ранняя диагностика болезней обмена веществ по-прежнему актуальна. В настоящее время большинство исследователей акцентуируют внимание на молекулярных уровнях диагностики заболеваний (Кон P.M., Рот К.С. Ранняя диагностика обмена веществ. М., Медицина, 1986; У.Мак-Мюррей. Обмен веществ человека. М. , Медицина, 1980).

Изучение саморегулирующихся систем составляет часть молекулярного подхода к процессам, обуславливающим генетически запрограммированный код метаболических процессов. В последние годы обращает на себя внимание рост болезней обмена - приобретенных и врожденных. Среди приобретенных, в первую очередь, упоминается об ожирении, остеоартропатии, желчнокаменной, мочекаменной болезни, подагре, сахарном диабете, атеросклерозе, хронической обструктивной болезни легких, ишемической болезни сердца, гипотиреозе и т.д.

Диагностику болезней обмена осуществляют путем количественного определения содержания в сыворотке крови (СК) следующих веществ: холестерина, мочевой кислоты, креатинина, общего кальция, щавелевой кислоты, глицина различными способами: калориметрическим, спектрофотометрическим, массфрагментографией, ферментным, ионообменной хроматографией, автоматическим анализатором (Энциклопедия клинических лабораторных тестов. Под ред. Тица. Издательство Лабинформ. М., 1997). Для болезней обмена характерно повышение содержания в СК вышеуказанных веществ. Обычно, их повышение не бывает изолированным, оно сопровождается сочетанными комплексами присутствия различных веществ. Например, ожирение нередко сопровождается гиперхолестеринемией, гиперкреатинемией, гиперглицинемией, гиперкальциемией, гипероксалемией. Обычно, комплексное повышение выше названных компонентов определяют на стадии выраженных клинических проявлений заболевания. Для этого используют различные способы их определений, специфические реактивы, приборы, сложные автоматические устройства. В то же время ранние стадии развития того или иного заболевания не диагностируют прежде всего по техническим причинам, по отсутствию клиники заболевания, по наличию ничтожно малой концентрации веществ в СК. Исчезает возможность тонкой диагностики, когда заболевание протекает на уровне межмолекулярных взаимодействий.

В последние десятилетия в медицине, биологии и биофизике формируется новое направление - анализ молекулярной природы болезней обмена, выявление предпатологических молекулярных различий (Л.А.Пирузян, Л.А.Ландау. Вопросы медицинской биофизики. М., 1958).

Метаболический скринирующий тест ранней диагностики обменных расстройств на современном уровне требует автоматизированного устройства, которое могло бы одновременно (автоанализатор) определять паттерны биохимических комплексов.

Приводим краткие данные физиологии некоторых продуктов обмена в организме.

Щавелевая кислота

Щавелевая кислота (ЩК) - продукт окисления жирных кислот, гликолей, клетчатки, крахмала, глицерина, у здоровых лиц выделяется в виде оксалата кальция. Существует генетическая связь между мочевой кислотой и ЩК. Повышение ЩК характерно для щавелевой подагры (Б.Бэрда), мочекаменной болезни, спондилоартроза, уратической дискразии.

Мочевая кислота

Мочевая кислота (МК) - конечный продукт распада пуриновых оснований. Повышение ее содержания в крови наблюдается при подагре, заболеваниях почек, токсикозе беременных, при гематологических заболеваниях, приеме пищи, богатой пуринами, калькулезном холецистите, мочекаменной болезни, хронической обструктивной болезни легких, астме.

Глицин

Глицин - аминокислота, образованная щавелевой кислотой и креатинином. Он принимает активное участие во многих биохимических реакциях, являясь источником продукции щавелевой кислоты, которая является предшественницей креатинина, активно включается в пуриновое кольцо. При нарушении реакции переаминирования глиоксиловой кислоты в глицин, этот промежуточный продукт появляется в организме в свободном виде. Глицин - тормозной медиатор высвобождения ацетилхолина, главный предшественник порфирина, при нарушении обмена которого в печени накапливается глицин и порфобилиноген (гепатическая патология). Глицин - главный эндогенный источник щавелевой кислоты, основной компонент многих оксалатов, его обменные процессы генетически закодированы.

Кальций

Кальций (Ca) - входит в состав костной ткани, зубов, осуществляет передачу нервного импульса. Гиперкальциемия наблюдается при заболеваниях паращитовидных желез (гиперпаратиреоз), при мочекаменной болезни, желчнокаменной болезни, начальных проявлениях остеопороза различного происхождения, болезнях легких (астме, хронической обструктивной болезни легких, кожи, глаз, кишечника, почечных тубулопатиях).

Холестерин

Холестерин (ХС) - входит в состав клеточных мембран, переходя в плазму крови - эстерифицируется, образуя сложные эфиры с жирными кислотами. Гиперхолестеринемия имеет место при многих болезнях обмена - остеопорозе, ожирении, сахарном диабете, желчнокаменной болезни, ишемической болезни сердца, наследственных нефропатиях, болезнях суставов и позвоночника, болезнях печени, почек, гипотиреозе.

Креатинин

Креатинин - важное азотистое вещество мышц, участвующее в химических процессах, связанных с мышечными сокращениями. Его содержание в крови увеличивается при ухудшении функции почек, при бронхиальной обструкции, столбняке и длительном тетанусе. Креатин (креатинин) - химический сигнализатор митохондрий клеток. Креатинемия наблюдается в период обострения астмы и хронической обструктивной болезни легких. Накопление креатинина и пуринэргических компонентов способствует неполноценности иммунологической системы (блокада иммунологической памяти).

С целью определения обменных нарушений количественно определяют в сыворотке крови содержание креатинина, кальция, глицина, холестерина, щавелевой кислоты, мочевой кислоты (гиперкреатинемию, гиперкальциемию, гиперглицинемию, гиперхолестеринемию, гипероксалемию, гиперурикемию).

Известны способы определения отдельных компонентов с целью диагностики вида нарушенного обмена.

Так, креатинин определяют калориметрическим способом по Яффе (Поппер) (Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник. Под ред. В.В. Меньшикова. М., Медицина. 1987. С. 219-221).

Принцип: Креатинин реагирует с пикриновой кислотой в щелочной среде с образованием ароматных соединений.

Реактивы: Пикриновая кислота, соляная кислота, основной калибровочный раствор, креатинин, едкий натрий.

При определении используют набор Био-Ла-Тест "Креатинин", Лахема, ЧССР.

Ход определения: СК смешивают с раствором пикриновой кислоты, помещают в кипящую баню, центрифугируют, к центрифугатору добавляют едкий натр, воду и измеряют длину волны, строят калибровочный график.

Недостатки способа:

- нарушение нативности СК;

- использование дорогостоящих реактивов, аппаратов;

- исследование длины волны;

- косвенное определение наличия креатинина.

Холестерин определяют ферментным способом (Титов В.Н., Творогова М.Г., Никитин С. В. Холестерин сыворотки крови: методические аспекты и диагностическое значение. 1992. N 3-4. С.48-49).

Ферментное определение протекает в несколько этапов:

- ферментный гидролиз эфиров ХС при действии холестеролэстеразы с образованием свободного ХС и свободных жирных кислот;

- окисление ХС кислородом;

- использование хромогенов;

- источник ферментов;

- расчеты.

Недостатки способа:

- реакция субстрата с ферментом протекает не как обычно в растворе, а на разделе гидрофильной и гидрофобной фаз;

- гетерогенность распределения ХС между ЛП, активность его эстерификации в крови;

длительность определения - около 2 часов.

Глицин определяют способом хроматографического разделения на бумаге по Боде-Гири (Лабораторные методы исследования. Справочник. М., 1987, С. 222-224).

В основе принципа разделения лежат различия в степени адсорбции аминокислот и их растворимости в соответствующем растворителе.

После разделения аминокислота с нингидрином в слабокислой среде дают синее окрашивание с последующим превращением в оранжево-красный цвет.

Для осуществления способа необходимы:

1. Реактивы (бутиловый спирт, уксусная кислота, смесь бутилового спирта, уксусной кислоты и воды).

2. Специфическое оборудование (хроматографические камеры, хроматографические кюветы, специальная бумага).

В ходе исследования готовят материал в виде концентрированного безбелкового экстракта СК, получают одномерные хроматограммы СК, производят расчет аминокислот по калибровочным графикам.

Недостатки способа:

- использование реактивов;

- использование хроматографических камер, кювет;

- построение графиков;

- трудоемкость исполнения.

Кальций определяют унифицированным способом по цветной реакции с крезолфталеинкомплексоном (Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник. М., 1987. С. 264-265).

Принцип. Крезолфталеинкомплексон (КФК) образует с Ca в щелочной среде комплекс красно-фиолетового цвета, интенсивность его окраски пропорциональна концентрации Ca.

Реактивы: боратный буфер, глицин, оксин, рабочий буферный раствор.

Ход определения: К раствору КФК прибавляют исследуемую СК, фотометрируют, ставят калибровочную пробу.

Недостатки способа:

- наличие реактивов;

- цветовая интерпретация;

- фотометрия.

Щавелевую кислоту определяют способом перманганатометрического титрования (И.К.Цитович. Курс аналитической химии. М., Высшая школа. 1994. C.300-307).

В основе способа лежит процесс титрования, в котором титрантом служит раствор перманганата калия. В процессе титрования анализируемого раствора малиновая окраска раствора перманганата обесцвечивается.

Определение ЩК осуществляют косвенным путем - через определение содержания кальция в растворе. При этом в раствор переходит эквивалентное кальцию количество ЩК. Применяют раствор кальция, раствор ЩК, метиловый оранжевый, гидроксид аммония, серную кислоту и биологический материал (СК).

Получают фильтрат, титруют его раствором перманганата калия до появления слабой розовой окраски, производят пересчет

Недостатки способа:

- нарушение нативности биологической жидкости (СК);

- использование горячей серной кислоты;

- неоднократное нагревание смеси;

- косвенное определение содержания ЩК через определение оксалата кальция.

Известны способы количественного определения мочевой кислоты в СК: колорометрический, спектрофотометрический (Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник. М., 1987. С. 221; Колб В.Г., Камышников Н.П. Клиническая биохимия. Минск. 1976. С. 62-64).

Колорометрический способ (Мюллер-Зейферт).

Принцип основан на колорометрии окрашенных продуктов, образующихся при восстановлении фосфорно-вольфрамового реактива молочной кислотой.

Основные этапы способа:

1. Приготовление реактивов:

- реактив Фолина;

- 20% трихлоруксусная кислота;

- стандартный раствор мочевой кислоты;

- насыщенный раствор углекислого натрия.

2. Ход определения:

- в центрифужную пробирку поместить 1,5 мл сыворотки, 1,5 мл дистиллированной воды, 1,5 мл 20% трихлоруксусной кислоты;

- содержимое пробирки перемешивают с водой и через 30 минут центрифугируют;

- поместить в пробирку 0,5 мл сыворотки, 0,5 мл стандартного рабочего раствора, 0,5 мл трихлоруксусной кислоты, 0,5 мл дистиллированной воды, насыщенного раствора соды 0,7 мл, реактива Фолина -1 каплю.

3. Через 10 минут обе пробирки (пробы) колориметрируют на ФЭКе при зеленом светофильтре в кювете шириной 5 мл.

4. Производят расчет по формуле или по калибровочной кривой, которую строят из основного стандартного раствора серии разведений мочевой кислоты.

Недостатки способа:

- приготовление реактивов;

- использование дорогостоящего аппарата ФЭК;

- высокие материальные затраты.

В качестве прототипа для количественного определения в СК мочевой кислоты нами использован спектрофотометрический способ (Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник. М., 1987. С. 221-222).

Принцип способа. Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с образованием соединения голубого цвета.

Основные этапы способа:

1. Приготовление реактивов:

- серная кислота, 0,35 моль/л;

- натрий вольфрамовокислый двухводный 100 г/л;

- натрия карбонат 103 г/л;

- ортофосфорная кислота, 85%;

- лития сульфат;

- лития карбонат;

- фосфорно-вольфрамовый реактив;

- мочевая кислота;

- формалин;

- основной калибровочный раствор мочевой кислоты, 6 ммоль/л;

- рабочий калибровочный раствор мочевой кислоты 0,03 ммоль/л.

2. Ход определения;

- приготовление опытной пробы: к 8 мл воды добавляют 1 мл сыворотки, 0,5 мл 0,35 моль/л серной кислоты, перемешивают;

- к пробе добавляют 0,5 мл вольфрамовокислого натрия, перемешивают;

- через 5 - 10 минут фильтруют;

- к 3 мл фильтрата добавляют 1,5 мл раствора натрия карбоната, перемешивают;

- затем добавляют 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива, перемешивают;

- через 30 минут измеряют в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 590 - 700 нм (красный светофильтр) против холостой пробы, которую ставят так же, как опытную, но вместо фильтрата берут 3 мл воды;

- расчет ведут по формуле при сравнении с калибровочной пробой.

Недостатки способа:

- приготовление реактивов;

- использование спектрофотометра;

- нарушение нативности пробы СК добавлением различных реактивов;

- трудоемкость выполнения;

- большие материальные затраты;

- длительность выполнения.

Все вышеизложенное затрудняет одномоментное комплексное определение холестерина, щавелевой кислоты, мочевой кислоты, глицина, креатинина, кальция у одного и того же лица для диагностики обменных растройств.

Задачи предлагаемого изобретения:

1. Повышение достоверности показателей контроля за комплексом обменных расстройств.

2. Повышение информативности.

3. Упрощение способа и снижение стоимости.

4. Экспресс-диагностика обменных расстройств.

5. Упрощение приготовления пробы.

Сущность изобретения заключается в том, что для определения обменных расстройств сыворотку крови наносят на предметное стекло, накрывают покровным, сушат при температуре +37-38^oC на протяжении 1,5-2 часов, выдерживают на открытом воздухе 1,5-2 часа, затем исследуют в поляризованном свете и при наличии в препарате кристаллов - веерообразных дендритов определяют гипероксалемию; друз, дендритоподобных сферолитов - гиперкреатинемию; оолитоподобных сферолитов - гиперкальциемию, мелкозернистых агрегатов - гиперглицинемию; перистых лучей - гиперурикемию: крестообразных сферолитов - гиперхолестеринемию.

Способ осуществляют следующим образом:

1. Для забора берут кровь из вены - 3,0 мл натощак.

2. Полученный объем центрифугируют 5 минут для получения сыворотки.

3. Сыворотку в виде капель объемом 0,01 - 0,02 мл каждая наносят тарированной пипеткой на предметное стекло и накрывают покровным стеклом.

4. Высушивают в термостате при температуре +37-38^oC на протяжении 1,5-2 часов.

5. Выдерживают на открытом воздухе 1,5-2 часа.

Под микроскопом в поляризованном свете изучают картину кристаллизации и при наличии в препарате кристаллов - веерообразных дендритов определяют гипероксалемию; друз, дендритоподобных сферолитов - гиперкреатинемию; оолитоподобных сферолитов - гиперкальциемию; мелкозернистых агрегатов - гиперглицинемию; перистых лучей - гиперурикемию; крестообразных сферолитов - гиперхолестеринемию.

Нами предварительно были смоделированы эталоны - кристаллограммы (модельные композиты), приготовленные из сыворотки крови здорового человека, обогащенной рабочими калибровочными растворами, содержащими щавелевую кислоту, креатин, кальций, глицин, мочевую кислоту, холестерин. Концентрации веществ соответственно составили - 0,93 ммоль/л, 0,098 ммоль/л, 2,90 ммоль/л, 45 мг/л. 0,55 ммоль/л, 6,8 ммоль/л.

Приводим модельные композиты (МК) эталонов кристаллограмм, фото 1 - 6.

На фото 1 представлен МК сыворотки крови здорового человека, обогащенной щавелевой кислотой, присутствуют веерообразные дендриты.

На фото 2 представлен МК сыворотки крови здорового человека, обогащенной креатинином, присутствуют друзы и дендритоподобные сферолиты.

На фото 3 представлен МК сыворотки крови здорового человека, обогащенные кальцием, видны оолитные сферолиты.

На фото 4 представлен МК сыворотки крови здорового человека, обогащенной глицином, присутствуют мелкозернистые агрегаты.

На фото 5 представлен МК сыворотки крови здорового человека, обогащенной мочевой кислотой, присутствуют перистые лучи.

На фото 6 представлен МК сыворотки крови здорового человека, обогащенной холестерином, видны крестообразные сферолиты.

Экспериментальные исследования подтверждены 2300 наблюдениями.

Примеры

Пример 1, фото 7а-в. Б-ой И., 40 лет, N истории болезни (ИБ) 1272. Диагноз: хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ). На фото 7 приведена кристаллограмма (Кг) сыворотки крови (СК) больного при поступлении в пульмонологическое отделение. Присутствуют веерообразные дендриты (а), дендритоподобный сферолит (б), мелкозернистые агрегаты (в).

Технология. Из вены больного взято 3,0 мл крови, которая отцентрифугирована. Капли СК (5) объемом 0,02 мл каждая нанесли на предметное стекло, каждую накрыли покровным стеклом и высушили в термостате на протяжении 1,5 часа при Т = +37^oC. Затем препарат выдержали на открытом воздухе 2 часа и подвергли исследованию в поляризованном свете. Найдены веерообразные дендриты щавелевой кислоты, дендритоподобные сферолиты креатинина, мелкозернистые агрегаты глицина. Одновременно в СК определили: уровень щавелевой кислоты, который оказался повышенным (0,93 при норме 0,02 ммоль/л); креатинина, который оказался повышенным (0,099 при норме 0,044 ммоль/л); глицина, который тоже оказался повышенным (46 мг/л, при норме 18 мг/л). Гипероксалемия, гиперкреатинемия, гиперглицинемия, обусловленные ХОБЛ, подтвердились.

Пример 2, фото 8 а-в. Больной-У., 53 лет. ИБ N 1296. Диагноз: мочекаменная болезнь. На фото 8 а-в приведены (Кг) СК больного при поступлении в отделение. Присутствуют кристаллы - веероподобные дендриты, мелкозернистые агрегаты (а), перистые и мелкозернистые агрегаты (б), ОО-литоподобные сферолиты (в).

Технология. Из вены больного взято 3,0 мл крови, которая отцентрифугирована. Капли СК (4) объемом 0,02 мл каждая нанесли на предметное стекло, каждую накрыли покровным стеклом и высушили в термостате при Т = +38^oC на протяжении 2 часов. Затем препарат выдержали на открытом воздухе 1,5 часа и исследовали в поляризованном свете. Найдены оптически активные кристаллы: веерообразные дендриты щавелевой кислоты, мелкозернистые агрегаты глицина, ОО-литоподобные сферолиты кальция, перистые лучи мочевой кислоты. Одновременно в СК определяли уровень вышеуказанных веществ, который оказался повышен и соответственно составил: 1,36 ммоль/л (норма - 0,02 ммоль/л), 41 мг/л (норма - 18 мг/л), 2,98 ммоль/л (норма - 2,3 ммоль/л), 0,58 ммоль/л (норма - 0,18 ммоль/л). Гипероксалемия, гиперглицинемия, гиперкальциемия, гиперурикемия, обусловленные мочекаменной болезнью, подтвердились.

Пример 3, фото 9 а-в. Больная П., 45 лет, N ИБ 495. Диагноз: подагра.

На фото 9 а, б приведена (Кг) СК, приготовленная при поступлении больной в отделение. Присутствуют друзы (а), дендритоподобный сферолит (б), перистый луч (в).

Технология. Из вены больной взята кровь - 3,0 мл, отцентрифугирована. Капли СК (3) объемом 0,02 мл каждая нанесли на предметное стекло, каждую накрыли покровным стеклом и сушили в термостате 1,5 часа при Т = +38^oC. Затем препарат выдержали на открытом воздухе на протяжении 2 часов и исследовали в поляризованном свете. Найдены кристаллы: друзы и дендритоподобные кристаллы креатинина, единичные перистые лучи мочевой кислоты. Одномоментно в СК определяли уровень креатинина и мочевой кислоты, которые оказались повышенными, соответственно составив - 0,088 ммоль/л (норма - 0,044 ммоль/л), 0,20 ммоль/л (норма 0,18 ммоль/л). Гиперкреатинемия и гиперурикемия, обусловленные подагрой, подтвердились.

Пример 4, фото 10 а-в. Больная К., 38 лет, N истории болезни 489. Диагноз: аутоиммунный тиреоидит с гипотиреозом, осложненный мочекаменной болезнью. На фото 10 а-в приведена (Кг) СК, приготовленная при поступлении больной в стационар. Присутствуют: крестообразный сферолит (а), дендритоподобный сферолит (б), ОО-литоподобные сферолиты (в), перистый луч (а).

Технология. Из вены больной К. взято 3,0 мл крови, которая отцентрифугирована. Капли СК (4) объемом 0,01 мл каждая нанесли на предметное стекло, каждую накрыли покровным стеклом и высушили в термостате на протяжении 2 часов при Т = +38^oC. Затем препарат выдержали на открытом воздухе 1,5 часа и подвергли исследованию в поляризованном свете. Найдены оптически активные кристаллы: крестообразный сферолит (гиперхолестеринемия), дендритоподобный сферолит (гиперкреатинемия), перистый луч (гиперурикемия), ОО- литоподобные сферолиты (гиперкальциемия). Одновременно в СК определили содержание холестерина, мочевой кислоты, креатинина, кальция, которые оказались повышенными, составив соответственно - 7,2 ммоль/л (норма - 0,18 ммоль/л), 0.06 ммоль/л (норма - 0,04 ммоль/л), 2,85 ммоль/л (норма - 2,30 ммоль/л).

Гиперхолестеринемия, гиперурикемия, гиперкреатинемия и гиперкальциемия, обусловленные аутоиммунным тиреоидитом с гипотиреозом, осложненным мочекаменной болезнью, подтвердились.

Пример 5, фото 11 а-б. Больная М., 55 лет, ИБ N 989. Диагноз: желчнокаменная болезнь, подагра. На фото 11 а-б представлены (Кг) СК, выполненные крестообразными сферолитами (а), перистыми лучами (а), ОО- литообразными сферолитами (б).

Технология. При поступлении в отделение у больной из вены взята кровь 3,0 мл, отцентрифугирована. Капли СК (5), каждая объемом 0,02 мл, нанесены на предметное стекло, накрытое предметными стеклами. Образец поместили в термостат и сушили 1% часа при Т = +37^oC. Затем выдержали на открытом воздухе на протяжении 2 часов и микроскопировали в поляризованном свете. Обнаружены крестообразные сферолиты (гиперхолестеринемия), перистые лучи (гиперурикемия), ОО-литоподобные сферолиты (гиперкальциемия). Одновременно в СК определяли: уровень холестерина, который оказался повышенным (7,8 ммоль/л при норме 4,3 ммоль/л): уровень мочевой кислоты (0,42 ммоль/л при норме 0,18 ммоль/л), который был повышен, и уровень общего кальция тоже оказался повышенным (2,90 ммоль/л при норме 2,3 ммоль/л). Таким образом, гиперхолестеринемия, гиперурикемия и гиперкальциемия, обусловленные основным заболеванием, были подтверждены.

Пример 6, фото 12 а-в. Больной Г., 63 лет. ИБ N 1516. Диагноз: щавелевая подагра. На фото 12 а-в представлены кристаллы - друзы (а), мелкозернистые агрегаты (б,в).

Технология. Из вены больного Г. при поступлении взято 3,0 мл крови, отцентрифугировано. Капли СК (4), каждая объемом 0,01 мл, нанесены на предметное стекло и накрыты покровным. Препарат поместили в термостат при Т = +38^oC и сушили 2 часа, затем выдерживали на открытом воздухе 1,5 часа и исследовали в поляризованном свете. Найдены друзы (гипероксалемия), мелкозернистые агрегаты (гиперглицинемия). Одновременно в СК определяли уровень щавелевой кислоты и глицина, которые оказались повышенными и соответственно составили - 0,93 ммоль/л и 24,30 мг/л. Гипероксалемия и гиперглицинемия, обусловленные основным заболеванием, подтвердились.

Пример 7, фото 13 а-в. Больной И., 30 лет, ИБ N 1238. Диагноз: сахарный диабет, инсулинзависимый, средняя степень тяжести, диабетическая нефропатия 3 степени, ХПН₁. На фото 13 а-в приведена (Кг) СК, приготовленная при поступлении больного в эндокринологическое отделение. Видны кристаллы - дендритоподобные сферолиты (а), крестообразные сферолиты (б), перистые лучи (в).

Технология. Из вены взято 3,0 мл крови, которая отцентрифугирована. Капли СК (4) объемом 0,02 мл каждая нанесены на предметное стекло, каждую накрыли покровным. Образцы высушили в термостате на протяжении 1,5 часов при Т = +38^oC, затем выдержали на открытом воздухе 2 часа и исследовали в поляризованном свете. Найдены дендритоподобные кристаллы креатинина, крестообразные кристаллы холестерина, перистые лучи мочевой кислоты. Одновременно в СК определили уровень содержания креатинина, холестерина и мочевой кислоты, который оказался повышен и соответственно составил - 0,075 ммоль/л (норма - 0.44 ммоль/л), 6,8 ммоль/л (норма - 4,8 ммоль/л), 0,50 ммоль/л (норма - 0,18 ммоль/л). Таким образом, гиперкреатинемия, гиперхолестеринемия и гиперурикемия, обусловленные заболеванием, были подтверждены.

Пример 8, фото 14 а-б. Больная С., 55 лет. ИБ N 1239. Диагноз: ожирение 3 степени, подагра. На фото 13 а-б приведена (Кг) СК, приготовленная при поступлении больной в отделение. Присутствуют крестообразные кристаллы (а), перистые лучи (б).

Технология. Из вены больной С. взято 3.0 мл крови, которая отцентрифугирована. Капли СК (5) объемом 0,02 мл каждая нанесли на предметное стекло, каждую накрыли покровным стеклом и высушили в термостате при Т = +37^oC на протяжении 1,5 часа, затем выдержали на открытом воздухе 2 часа и исследовали в поляризованном свете. Найдены крестообразные сферолиты (гиперхолестеринемия) и перистые лучи (гиперурикемия). Одновременно в сыворотке крови определили: уровень холестерина, который оказался повышенным и составил 6,9 ммоль/л (норма - 4,3 ммоль/л), уровень мочевой кислоты, который тоже был повышен и составил 0,48 ммоль/л (норма - 0,18 ммоль/л). Гиперхолестеринемия и гиперурикемия, обусловленные заболеванием, подтвердились.

Преимущества предлагаемого способа:

1. Упрощение операции подготовки биологического материала для исследования.

2. Отсутствие применения сложных химических веществ и технического оснащения, приборов, установок для количественного определения щавелевой кислоты, мочевины, кальция, глицина, мочевой кислоты, холестерина.

3. Экономическая выгода.

4. Предлагаемый способ апробирован в клинических условиях - 2300 примеров.

Медико-социальный эффект

Применение способа позволяет повысить достоверность получения результатов, значительно снизить трудозатраты, упростить способ определения гипероксалемии, гиперкреатинемии, гиперкальциемии, гиперглицинемии, гиперурикемии, гиперхолестеринемии, проводить комплексную экспресс-диагностику.