способ диагностики активности лепрозного процесса

Формула изобретения

Способ диагностики активности лепрозного процесса путем исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что готовят смесь 0,1 мл сыворотки крови с 0,02 мл лепронина или лепрозина, инкубируют ее в течение 60 мин при комнатной температуре, наносят на поверхность предметного стекла в форме капель 20 мкл нативной сыворотки крови в качестве контроля и 20 мкл смеси, высушивают их при комнатной температуре, производят сравнительную микроскопию образцов и при наличии патологических структур треугольной формы в образце нативной сыворотки и отсутствии их в образце смеси диагностируют активный лепрозный процесс.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования.

Известны способы определения активности лепрозного процесса, основанные на гистологическом исследовании биоптатов пораженной кожи больных лепрой (Ridley D. S. Skin biopsy in leprosy. Histological interpretation and clinical application. - Basel, 1977. - 57 p.), а также на исследовании сыворотки крови с целью определения состояния гуморального иммунитета, отражающие стадии течения лепрозного процесса (Roche, P.W., Britton, W.J., Failbus, S.S., Williams, D., Pradhan, H.M., Theuvenet, W.J. Operational value of serological measurements in multibacilliary leprosy patients: clinical and bacteriological correlates of antibody responses // Int. J. of leprosy, 1990. - Vol. 58.- P. 480-490).

Наиболее близким к заявляемому изобретению по сущности является способ определения активности лепрозного процесса, основанный на обнаружении антител к фенольному гликолипиду-1 в сыворотке крови больных лепрой методом энзимсвязанного иммуносорбентного анализа (ELISA). Способ позволяет выявлять специфические антитела к микобактериям лепры в сыворотке крови у больных лепрой для определения активности лепрозного процесса. (Lyons N.F., Shannon E. J. , Ellis B.P.B., Naaf B. Association of IgG and IgM antibodies to phenolic glycolipid 1 antigen of Mycobacterium leprae with disease parameteres in multibacillary leprosy patients // Lepr. Rev. - 1988. - Vol. 59.- P.45-52). Однако известный способ обладает следующими недостатками:

- сложность и трудоемкость исследования;

- необходимость использования дорогостоящего оборудования и реактивов, что возможно лишь в условиях специализированной лаборатории.

Была поставлена задача создания более простого способа диагностики активности лепрозного процесса у больных лепрой, лишенного указанных недостатков.

Задача решается тем, что был разработан способ диагностики активности лепрозного процесса у больных лепрой, при котором готовят смесь 0,1 мл сыворотки крови с 0,02 мл лепронина или лепрозина, инкубируют ее в течение 60 минут при комнатной температуре, наносят на поверхность предметного стекла в форме капель 20 мкл нативной сыворотки крови в качестве контроля и 20 мкл смеси, высушивают их при комнатной температуре, производят сравнительную микроскопию образцов и при наличии патологических структур треугольной формы в образце нативной сыворотки и отсутствии их в образце смеси диагностируют активный лепрозный процесс.

Изложенная сущность изобретения подтверждается фотографиями, где:

Фиг. 1 демонстрирует структуры в образцах при активном лепрозном процессе: а - наличие патологических структур треугольной формы в образце нативной сыворотки крови больного лепрой, б - отсутствие патологических структур в образце смеси.

Фиг. 2 демонстрирует структуры в образцах при отсутствии активного лепрозного процесса (регресс заболевания): а - наличие патологических структур треугольной формы в образце нативной сыворотки крови больного лепрой, б - наличие тех же патологических структур треугольной формы в образце смеси.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь из вены берется в количестве 2 мл в сухую пробирку. После отстаивания крови в течение 60 минут 0,1 мл полученной сыворотки помещается в сухую пробирку Флоринского, в которую добавляется 0,02 мл лепрозина или лепронина в концентрации 3 мкг/мл. Инкубацию сыворотки крови с лепрозином или лепронином проводили в течение 60 минут при комнатной температуре. Затем наносится 20 мкл нативной сыворотки крови (контроль) на поверхность предметного стекла и рядом 20 мкл инкубированной смеси в форме капель. После высушивания при комнатной температуре образцы микроскопируются в проходящем свете. У больных с активным лепрозным процессом регистрировали наличие патологических структур треугольной формы в нативной сыворотке крови, а в образце смеси отмечали их отсутствие. У больных с неактивной стадией лепры (регресс заболевания) патологические структуры треугольной формы регистрировали в обоих образцах.

Предлагаемый способ прошел успешную апробацию в клинике НИИ по изучению лепры МЗ РФ в течение 1998-1999 гг.

Ниже приводятся результаты апробации.

Примеры:

Больной К., 1935 г.р., история болезни N 3863, поступил в клинику НИИ по изучению лепры в 1999 г. с диагнозом лепроматозный тип лепры.

Одновременно у больного для исследований были взяты кровь и биопсия с пораженного участка кожи.

В день получения материала при исследовании образцов нативной сыворотки крови были выявлены патологические структуры треугольной формы, а в образце смеси с лепронином они отсутствовали.

Заключение: активная стадия лепрозного процесса.

Результаты гистологического исследования биоптатов пораженной кожи, на проведение которых обычно затрачивается 10 дней с момента взятия материала, подтвердили наличие активно формирующегося инфильтрата лепроматозной структуры, содержащего большое количество M.leprae.

Пример 2. Больной Т., 1930 г.р., история болезни N 2774. Болен лепроматозным типом лепры с 1956 года.

При исследовании образцов как в нативной сыворотке крови, так и в смеси сыворотки крови с лепронином были выявлены патологические структуры треугольной формы.

Заключение: неактивная стадия лепрозного процесса.

По данным гистологического исследования в кожных биоптатах определялись инфильтраты нехарактерной структуры, в которых M.leprae не обнаружены.

Способ позволяет в течение первых суток определить активность лепрозного процесса у больных лепрой, технически прост, не требует использования дорогостоящего оборудования и реактивов, что дает возможность использования его в клинике-диагностической лаборатории любого лечебно-профилактического учреждения.