модифицированные углеводами цитостатические средства

Формула изобретения

1. Модифицированные углеводами соединения формулы I

K - Sp - L - AA1 - AA2 - C,

где K - незамещенный или региоселективно модифицированный углеводный остаток,

Sp - арилен формулы







где R₁ означает хлор или гидроксиалкиламино;

AA1 - остаток аминокислоты в D- или L-конфигурации, который может иметь защитные группы или вторую группу K - Sp - L-, в которой K, Sp, L независимо от другой группы K - Sp -L могут иметь вышеуказанные значения, или прямая связь;

AA2 - остаток аминокислоты в D- или L-конфигурации, который может иметь защитные группы, или прямая связь;

C - цитостатический остаток, остаток цитостатического средства или производного цитостатического средства,

и их изомеры и соли.

2. Модифицированные углеводами соединения общей формулы I по п.1, где K - углеводный остаток формулы II



где A - метил, гидроксиметил, алкоксиметил, карбоксиалкилоксиметил;

R₂, R₃, R₄ отдельно или вместе означают водород, гидроксил, алкилокси, гидроксиалкилокси, карбоксиалкилкарбонилокси, сульфат, галоген, или два из остатков R₂, R₃, R₄ вместе означают эпоксигруппу, и Sp, L, AA1, AA2 и C имеют указанные в п.1 значения,

и их изомеры и соли.

3. Модифицированные углеводами соединения общей формулы I по п.1, где Sp - арилен формулы



K, L, AA1, AA2 и C имеют указанные в п.1 значения, и их изомеры и соли.

4. Модифицированные углеводами соединения общей формулы I по п.1, где C - хинолонкарбоновая кислота (а, б, в и г), батрацилин, камптотецин, доксорубицин, мелфалан, K, Sp, L, AA1 и AA2 имеют указанные в п.1 значения, и их изомеры и соли.

5. Модифицированные углеводами соединения общей формулы I по п.1, где AA1 - остаток аминокислоты, производимый от глицина, аланина, валина, лизина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, орнитина, тирозина, или серина в D- или L-конфигурации, который может быть связан с дополнительной группой R - Sp - L, или прямая связь, K, Sp, L, AA2 и C имеют указанные в п. 1 значения, и их изомеры и соли.

6. Модифицированные углеводами соединения общей формулы I по п.1, где AA2 - остаток аминокислоты, производимый от глицина, аланина, лизина, орнитина, диаминопропионовой кислоты или серина в D- или L-конфигурации, или прямая связь, K, Sp, L, AA1 и C имеют указанные в п.1 значения, и их изомеры и соли.

7. Модифицированные углеводами соединения общей формулы I по п.1, где C означает остаток формулы III

T - Q

где Q - остаток формулы



где Y = C-R, где R означает водород, галоген или метокси;

X₁ - водород, галоген;

X₂ - водород, аминогруппа,

или Q - остаток формулы



где X₃ означает галоген;

T - остаток формул





где R⁶ - водород, алкил с 1-3 атомами углерода, и K, Sp, L, AA1 и AA2 имеют указанные в п.1 значения,

и их изомеры и соли.

8. Цитостатическое средство, содержащее одно соединение по пп.1 - 7.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новым цитостатическим средствам, специфичным к опухолям, в частности к модифицированным углеводами соединениям цитостатической активности.

Химиотерапия при опухолевых заболеваниях сопровождается в большинстве случаев серьезными побочными действиями, обусловленными токсичностью химиотерапевтических средств в отношении пролиферирующих клеток других тканей. Уже много лет ученые занимаются проблемой улучшения селективности применяемых активных начал. Интенсивно разрабатывается синтез пролекарств, которые более или менее селективно высвобождаются в целевой ткани, например, в результате изменения значения pH (см. Tietze и др., например, патент DE N 4229903), с помощью ферментов (например, глюкуронидаз; см. Jacquesy и др., заявку ЕР N 511917, Bosslet и др., заявку ЕР N 595133) или антитело-ферментных конъюгатов (см. Bagshawe и др., заявку WO N 88/07378, Senter и др., патент США N 4975278, Bosslet и др., заявку ЕР N 595133). Проблематичными при этом оказываются, среди прочего, недостаточная стабильность конъюгатов в других тканях и органах и, в частности, повсеместное распределение активного начала, происходящее после внеклеточного высвобождения активного начала в опухолевой ткани.

Выраженная структура пектинов на поверхности опухолевых клеток (см. Gabius в источнике Onkologie 12, 1989 г., стр. 175) предоставляет принципиальную возможность путем связывания соответствующих компонентов углеводов с цитостатическими средствами целенаправленно воздействовать на опухолевые клетки. Эта перспектива ограничивается тем, что и в других тканях, в частности в печени, имеются пектины сходной специфичности в отношении углеводов (например, галактозы, лактозы, маннозы, N-ацетил-глюкозамина, фукозы и т.д.) (см. Ashwell и др. в источнике Annu. Rev. Biochem. 46, 1982 г., стр. 531: Stahl и др. в источнике Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 1977 г., стр. 1521: Hill и др. в источнике J. Biol. Chem. 262, 1986 г., стр. 7433; Jansen и др. в источнике J. Biol. Chem. 266, 1991 г., стр. 3343). Поэтому следует ожидать значительного накопления содержащих активное начало гликоконъюгатов в печени и в других богатых пектинами органах, если применяют такие немодифицированные сахары.

Гетероциклический амин батрацилин формулы (1) проявляет хорошее противоопухолевое действие в различных моделях рака кишки (см. патент США N 4757072).

Пептидные конъюгаты формулы (1) с хорошим действием ин витро и благоприятными свойствами растворимости (см. патент США N 4180343) при опыте на животных переносятся хуже, чем батрацилин. Описанные в заявке ЕР N 501250 конъюгаты фукозы сильно накапливаются в печени.

Хинолона формулы (2), 7-[(3aRS, 4RS, 7аSR)-4-амино-1,3,3а,4,7,7а- гексагидро-изо-индол-2-ил] -8-хлор-1-циклопропил-6-фтор-1,4- дигидро-4-оксо-3-хинолинкарбоновая кислота наряду с отличной антибактериальной активностью также обладает очень хорошим действием в отношении различных клеточных линий опухолей (см. заявку ЕР N 520240, заявку JP N 4253973). Этому противостоят, однако, значительные токсикологические проблемы, такие как, например, генотоксичность, токсичность в отношении костного мозга, высокая острая токсичность ин виво и т.д.

Задачей изобретения является получение новых модифицированных углеводами соединений цитостатической активности, обладающих сывороточной стабильностью, улучшенной клеточной и тканевой селективностью, в частности в случае опухоли печени, и улучшенной растворимостью и переносимостью.

Поставленная задача решается предлагаемыми модифицированными углеводами соединениями общей формулы (I)

K-Sp-L-AA1-AA2-C,

где K - незамещенный или региоселективно модифицированный углеводный остаток,

Sp - арилен формулы







где R означает хлор или гидроксиалкиламино,

AA1 - остаток аминокислоты в D- или L-конфигурации, который может иметь защитные группы или вторую группу K-Sp-L-, в которой K, Sp, L независимо от другой группы K-Sp-L- могут иметь вышеуказанные значения, или прямая связь,

AA2 - остаток аминокислоты в D- или L-конфигурации, который может иметь защитные группы или прямая связь,

C - цитостатический остаток, остаток цитостатического средства или производного цитостатического средства,

и их изомеры и соли.

Структурный элемент -Sp-L-AA1-АА2- в целом представляет собой спейсер, связывающий K и C.

Соединения формулы (I) могут иметься в стереоизомерных формах, например в виде энантиомеров или диастереомеров, или в виде их смесей, например в виде рацемата. Изобретение относится к чистым стереоизомерам, а также их смесям.

В случае необходимости смеси стереоизомеров можно разделять известным образом на единые стереоизомерные компоненты, например путем хроматографии или способов кристаллизации.

Соединения формулы (I) могут также иметься в виде их солей. В общем здесь можно назвать соли с органическими или неорганическими основаниями или кислотами, а также внутренние соли.

В число добавляемых кислот входят предпочтительно галогенированные водородные кислоты, например хлористо-водородная кислота и бромисто-водородная кислота, в частности хлористо-водородная кислота, далее фосфорная кислота, азотная кислота, серная кислота, моно- и бифункциональные карбоновые кислоты и гидроксикарбоновые кислоты, такие как, например, уксусная кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, оксалевая кислота, глюконовая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, салициловая кислота, сорбиновая кислота и молочная кислота, а также сульфокислоты, такие, как, например, п-толуолсульфокислота, 1,5-нафталиндисульфокислота или камфарная сульфокислота.

Физиологически невредные соли могут представлять собой металлические или аммониевые соли предлагаемых соединений, имеющие свободную карбоксильную группу. Особенно предпочтительными являются, например, соли натрия, калия, магния или кальция, а также аммониевые соли, которые производятся от аммиака или органических аминов, таких как, например, этиламин, ди- или триэтиламин, ди- или триэтиноламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, аргинин, лизин, этилендиамин или фенэтиламин.

В первую группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений общей формулы (I) входят соединения, у которых

K - углеводный остаток формулы (II)



где A - метил, гидроксиметил, алкоксиметил, карбоксиалкилоксиметил,

R₂, R₃, R₄ отдельно или вместе означают водород, гидроксил, алкилокси, гидроксиалкилокси, карбоксиалкилкарбонилокси, сульфат, или два из остатков R₂, R₃, R₄ вместе означают эпоксигруппу,

Sp, L, AA1, AA2 и C имеют вышеуказанные значения, и их изомеры и соли.

Во вторую группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений общей формулы (I) входят соединения, у которых

Sp - арилен формулы



К, L, AA1, AA2 и C имеют вышеуказанные значения, и их изомеры и соли.

В третью группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений общей формулы (I) входят соединения, у которых

C - хинолонкарбоновая кислота (а, б, в и г), батрацилин, камптотецин, доксорубицин, мелфалан,

K, Sp, L, AA1 и AA2 имеют вышеуказанные значения,

и их изомеры и соли.

В четвертую группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений общей формулы (I) входят соединения, у которых

AA1 - остаток аминокислоты, производимый от глицина, аланина, валина, лизина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, орнитина, тирозина, или серина в D- или L-конфигурации, который может быть связан с дополнительной группой K-Sp-L, или прямая связь,

K, Sp, L, AA2 и C имеют вышеуказанные значения,

и их изомеры и соли.

В пятую группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений общей формулы (I) входят соединения, у которых

AA2 - остаток аминокислоты, производимый от глицина, аланина, лизина, орнитина, диаминопропионовой кислоты или серина в D- или L-конфигурации, или прямая связь,

К, Sp, L, AA1 и C имеют вышеуказанные значения, и их изомеры и соли.

В шестую группу предпочтительных модифицированных углеводами соединений общей формулы (I) входят соединения, у которых C означает остаток формулы (III)

T-Q,

где Q - остаток формулы



где Y-C-R⁵, где R⁵ означает водород, галоген или метокси,

X₁ - водород, галоген,

X₂ - водород, аминогруппа,

или

Q - остаток формулы



где X₃ означает галоген,

T - остаток формулы



где R⁶ - водород, алкил с 1 - 3 атомами углерода,

и К, Sp, L, AA1 и AA2 имеют вышеуказанные значения,

и их изомеры и соли.

Благодаря вышеупомянутой активности соединения формулы (I) могут представлять собой активное вещество цитотоксического средства, являющегося дополнительным объектом изобретения.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Примеры серии А: Биологические опыты

Пример A.1

Тест торможения роста для определения цитотоксических свойств гликоконъюгатов батрацилина и хинолона-а

Клеточные линии SW480 и НТ 29 (АТСС N CCL 228 и НВТ-38) толстого кишечника человека и клеточную линию B16F10 меланомы мыши выращивают в чашках Ру в буфере RPMI 1640, содержащем 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Затем обрабатывают трипсином и подают в буфер RPMI, содержащий 10% эмбриональной телячьей сыворотки, и далее культивируют до достижения 50000 клеток/мл. В каждую чашку микротитратора с 96 чашками подают 100 мкл клеточной суспензии и инкубируют в термостате в атмосфере двуокиси углерода при температуре 37^oC в течение суток. Потом добавляют еще 100 мкл буфера RPMI и 1 мкл ДМСО с испытуемыми соединениями. Рост проверяют после третьего и шестого дней. Для этого в каждую чашку наносят 40 мкл раствора МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5- дифенилтетразолин-бромида) с исходной концентрацией 5 мг/мл воды. Инкубируют в термостате в атмосфере двуокиси углерода при температуре 37^oC в течение 5 часов, после чего буфер отсасывают и к каждой чашке добавляют 100 мкл изопропанола. После 30-минутного встряхивания 100 мкл воды экстинкцию измеряют при 540 нм с помощью прибора Titertek Multiskan МСС/340.

Цитотоксическое действие описанных гликоконъюгатов батрацилина в таблице 1а приведено в качестве значения KT₅₀ (концентрация 50%-ного торможения) для клеточных линий SW480 и НТ 29.

В таблице 1б сведены значения KT₅₀ гликоконъюгатов хинолона-а в отношении клеточных линий SW480, НТ 29 и B 16 F 10.

Зависимость биологического действия от углеводов дополнительно доказана неактивностью сравнительных соединений серий примеров 5, 6 и 11 N-[ N,N- бис-(4-гидроксифениламино- тиокарбонил)-лизил]-батрацилин и N-[ N,N- бис- (4-гидроксифениламино-тиокарбонил)-лизил-D-аланил]-батрацилин или N-[ N,N- бис-(4-гидроксифениламино-тиокарбонил)-D-лизил- хинолон-а (значения KT₅₀ > 250).

Пример А.2

Испытание ин витро на расщепляемость гликоконъюгатов

Кинетика расщепления с применением крови человека

1,225 мл крови человека вместе с 1,25 мл фосфатно-солевого буферного раствора и 25 мкл маточного раствора субстрата (1 мг/мл в 3% ДМСО в фосфатно-солевом буферном растворе) инкубируют при температуре 37^oC. Через 1 час и через 24 часа отбирают пробы в количестве по 1 мл, смешивают с 1 мл этанола, после чего оставляют стоять при 4^oC в течение 20 минут. Центрифугируют 5 минут при 3500 об/мин, после чего отбирают 100 мкл надосадочной жидкости для анализа с помощью высокоскоростной колоночной жидкостной хроматографии.

Кинетика расщепления с применением клеток

2,25 мл фосфатно-солевого буферного раствора вместе с 225 мкл клеточной суспензии (30 мг/мл) и 25 мкл маточного раствора субстрата (1 мг/мл в 3% ДМСО в фосфатно-солевом буферном растворе) инкубируют при температуре 37^oC. Через 1 час и через 24 часа отбирают пробы в количестве по 1 мл, смешивают с 1 мл этанола, после чего оставляют стоять при 4^oC в течение 20 минут. Центрифугируют 5 минут при 3500 об/мин, после чего отбирают 100 мкл надосадочной жидкости для анализа с помощью высокоскоростной колоночной жидкостной хроматографии.

Условия высокоскоростной колоночной жидкостной хроматографии:

Хроматограф: прибор фирмы Waters

Колонна: марки Bischoff Hypersil OCS RP 18 5 мкм 250 x 4 мм

Элюент A: 10 ммол буфера фосфата калия, pH 4,5

Б: смесь 80% ацетонитрила и 20% воды

Скорость подачи: 1 мл/мин

Длина волны: 372 нм

Градиент:

0 мин - 10% Б

10 мин - 60% Б

15 мин - 60% Б

18 мин - 10% Б

20 мин - 60% Б

Элюент конъюгатов хинолона-а:

А: 100% метанола

Б: 10 ммол буфера фосфата калия, pH 2,2

10 ммол гептансульфокислоты.

Результаты приведены в табл. 2а, 2б.

Пример А.3

Испытание по распределению в органах

Во всех экспериментах были использованы атимические голые мыши штамма NMRI nu/nu, которых разводят в лаборатории "Drug Development Laboratory, Oncotest GmbH" проф. X.X. Фибига в г. Фрайбурге. Животных держали в поликарбонатных клетках (торговой марки Макролон) в условиях ламинарного потока. В качестве опухолевого материала употребляли ткань клеточной линии SW 480, которая предварительно несколькими операциями переноса была введена в мыши.

Голым мышам в возрасте 6 - 8 недель подкожно имплантировали в боки по двум опухолям на животное. До рандомизации животных держали в течение 26 - 27 суток. Тогда средний размер опухолей составлял 500 мг и радиус опухолей - около 10 мм.

Сама фармакокинетика произошла следующим образом: голым мышам инъецировали испытуемое соединение, после чего мышей хранили еще в клетках до отбора пробы через полчаса или 4 ч. Отбор пробы начался с взятия крови. Для этого мышь наркотизировали эфиром в течение 30 - 60 с. Через 0,5 ч или же 4 ч после введения соединения открыли брюшную полость, мышь в наркозе обескровливали через вену Vena cava caudalis в течение 1 - 2 мин и затем умерщвляли путем перелома шейного отдела позвоночника. В результате этого происходила остановка системы кровообращения и прекращение перфузии органов. В дальнейшем отдельные органы освобождали и вынимали, что длилось около 5 мин. Непосредственно после этого взвесили пробы органов и затем остальное тело и замораживали в жидком азоте.

Соединение "конъюгат 1" внутрибрюшинно вводили в количестве 300 мг/кг веса тела, а соединение "конъюгат 2" вводили в количестве 100 мг/кг в хвостовую вену. При проведении опыта для каждого соединения и каждой дозы были использованы по 5 животным.

Результаты распределения конъюгата 1 приведены в таблице 3, а конъюгата 2 - в таблице 4.

А. Калибровка

5, 10, 50, 100 и 200 мкг соединения, растворенного в смеси этанола и воды в объемном соотношении 1:1, добавляли к 1 г печени коровы. Затем измельчали с помощью 1 г песка и 2,5 мл охлажденной смеси этанола и воды в объемном соотношении 1: 1 и пробы центрифугировали в течение 2 минут при 3500 об/мин. Надосадочную жидкость удаляли, остаток еще раз перемешивали с 2,5 мл смеси этанола и воды, центрифугировали и супернатанты объединяли. Отбирали по 100 мкл и подвергали анализу с помощью высокоскоростной колоночной жидкостной хроматографии.

Условия высокоскоростной колоночной жидкостной хроматографии:

Хроматограф: прибор фирмы Waters

Колонна: марки Bischoff Hypersil ODS RP 18 5 мкм 250 x 4 мм

Элюент: А: смесь 80% ацетонитрила и 20% воды

Б: 10 ммол буфера фосфата калия, pH 4,5

Градиент:

0 мин - 90% Б

10 мин - 40% Б

15 мин - 40% Б

18 мин - 90% Б

20 мин - 90% Б

Скорость подачи: 1 мл/мин

Длина волны: 372 нм

Б. Обработка органов

Обработку осуществляли аналогично примеру А, причем все органы обрабатывали 2,5 мл смеси этанола и воды и экстрагировали.

В. Обработка крови

Отобранное количество крови перемешивали с 2 мл смеси этанола и воды в объемном соотношении 1:1, центрифугировали в течение 2 мин при 3500 об/мин и надосадочную жидкость декантировали. К остатку еще раз добавляли 2 мл смеси этанола и воды в объемном соотношении 1:1, центрифугировали и супернатанты объединяли. Отбирали по 100 мкл объединенных супернатантов и подвергали анализу с помощью высокоскоростной колоночной жидкостной хроматографии в условиях, приведенных в примере А.

Конъюгант 1 (заявка EP N 501250



Конъюгант 2 (пример 3.9)



Пример A.4

Определение острой токсичности гликоконъюгатов батрацилина (разовое введение)

Острую токсичность производных батрацилина определяли на голых мышах штамма nu/nu.

Внутривенно введенные соединения один раз инъецировали мышам в виде водных растворов, а внутрибрюшинно введенные соединения - в виде растворов ДМСО в концентрациях до 400 мг соединения на кг мыши.

Переносимую разовую дозу вычисляли на основе потери веса животных до 21-го дня после введения соединения и на основе числа выживших животных.

Переносимые разовые дозы соединений приведены в таблице 5.

В случае соединений примеров 3.16, 3.33, 3.9, 6.12, 6.14, 6.2, 6.81, 8.2 доза составляла свыше 200 мг соединения на кг мыши. В случае соединений примеров 3.33, 6.12, 6.14, 6.2, 6.81 даже при дозе 400 мг/кг острой токсичности не было найдено.

В отличие от этого не содержащий сахара лизил-D-аланил- батрацилин примера 2.13 проявлял заметную токсичность уже при разовых дозах, составлявших от 25 до 50 мг на кг мыши.

Пример А.5

Определение острой токсичности после многократного введения

Часть соединений ввели внутривенно, другую часть - внутрибрюшинно, либо ежедневно в дни с 1-4 и с 7-10, либо в дни 1, 5 и 9. Дозировки составляли 400, 200 и 100 мг/кг в день. Анализ осуществляли на основе потери веса животных до 21-го дня и на основе числа выживших животных. Для проведения опыта для каждого соединения и каждой дозы были использованы по 5 животным. Результаты приведены в таблице 6.

Пример A.6

Кроветворная активность гликоконъюгатов хинолона-а по сравнению с соответствующим активным началом

Материал и методы

Испытание ин витро:

Клетки костного мозга вымывали из бедра мыши. 10⁵ клеток в среде марки McCoy 5А (0,3% агара) вместе с рекомбинантным мышиным колоние-стимулирующим фактором (GM-CSF) (торговый продукт Гензиме; образование колоний основных клеток) и соединениями (10^-4 - 100 мкг/мл) инкубировали при температуре 37^oC в атмосфере, содержащей 7% двуокиси углерода. Спустя 7 дней определили число колоний (< 50 клеток) и кластеров (17 - 50 клеток).

Испытание ин виво:

Мышам подкожно ввели 1, 3, 10, 30 мг/кг соединений. В различные промежутки времени (через 3, 24, 48, 72 ч. после инъецирования) удаляли бедра и выделяли клетки костного мозга. 2 10⁵ клеток вышеописанным образом инкубировали вместе с рекомбинантным мышиным колоние-стимулирующим фактором (GM-CSF) и спустя 7 дней определили число колоний и кластеров.

Результаты:

По данным таблицы 7 испытанные гликоконъюгаты по сравнению с хинолоном-а проявляли уменьшенное на фактор 10⁵ - 10³ торможение пролиферации основных клеток костного мозга.

И при испытании ин виво по сравнению с хинолоном-а торможения пролиферации основных клеток соединением примера 12.3 в дозировке до 30 мг/кг не наблюдалось. Уже при введении 3 мг/кг хинолона-а было индицировано массивное подавление пролиферации основных клеток (см. чертеж).

Пример A.7

Противоопухолевая активность конъюгатов хинолона-а

Активность ин витро гликоконъюгатов хинолона-а определяли на опухолевых ксенотрансплантатах человека в системе двухслойного культивирования на мягком агаре по Гамбургеру и Салмону (см. источник Science 197, стр. 461-463).

Твердые опухоли сначала выращивали в атимической голой мыши штамма NMRI nu/nu, выделяли операцией и раздробляли механическим способом. Отдельные клетки получали потом в результате инкубации при 37^oC в течение 30 минут в смеси ферментов, а именно 0,05% коллагеназы, 0,07% ДНКазы и 0,1% гиалуронидазы в буфере RPMI. Клетки два раза промывали, после чего их просеивали через сито с размером отверстий 200 мкм и 20 мкм.

Применили следующий способ культивирования:

Нижний слой содержал 0,2 мл модифицированной по способу Дульбекко среды Искова с 20% эмбриональной телячьей сыворотки и 0,7% агара. На этот слой наносили 40000 - 200000 клеток в 0,2 мл той же самой среды и 0,4% агара в чашки микротитратора с 24 чашками. Цитостатические соединения добавляли в 0,2 мл среды.

Культуры инкубировали в атмосфере, содержащей 7% двуокиси углерода, при температуре 37^oC в течение 6 - 15 дней. Потом выросшие колонии подвергали количественному анализу в инвертированном микроскопе, при этом за 24 часа до анализа живущих колоний подкрашивали красителем на основе хлористого тетразола.

Активность активного начала выражается в % выживших колоний по сравнению с числом колоний необработанных чашек (Т/С = число колоний обработанных чашек 100/число колоний необработанных чашек).

Соединение является активным, если значение Т/С 30%.

В таблице 8 это значение приведено в качестве значения KT₇₀ в мкг/мл.

Пример A.8

Испытания ин виво

Метод:

В день 0 мышам инокулируют 510⁶ опухолевых клеток типа B 16 F 10. У животных развиваются твердые брюшинные опухоли, после чего им ежедневно вводят испытуемые соединения или же только носитель для них. В контрольной группе обычно погибает 50% животных в период с 14 по 20 день. Испытуемые соединения вводят в буфере или в системе органических растворителей, состоящей из 20% метанола и 20% диметилсульфоксида в 0,7%-ном растворе поваренной соли.

Дача носителя не влияет на срок выживания животных. Терапевтический успех вытекает из продления времени выживания обработанных животных. Переносимость соединений анализируют параллельно на животных, не имеющих опухолей. По результатам переносимости и продления срока выживания можно ориентировочно определить терапевтический индекс.

Таблица 9 показывает терапевтическую активность соединения примера 11.12 на мышах, которым трансплантировали опухоль типа B16F10.

Пример А.9

Торможение ин виво роста опухоли при применении модели голой мыши

Материал:

Для всех экспериментов ин виво для испытания торможения роста опухоли использовали атимических голых мышей штамма NMRI nu/nu. Выбранный крупноклеточный рак легкого типа LXFL 529 выращивали в голых мышах серийными переносами. Человеческое происхождение опухоли было доказано изоферментативными и иммуногистохимическими методами.

Проведение эксперимента:

Голым мышам штамма nu/nu в возрасте 6 - 8 недель опухоль подкожно имплантировали в оба боки. В зависимости от времени роста с удвоением объема лечение начали, как только радиус опухолей достиг 5 - 7 мм. Мышей распределяли путем рандомизации по группе лечения и контрольной группе (5 мышей в каждой группе с 8 - 10 подвергающимися анализу опухолями). Все отдельные опухоли контрольной группы росли прогрессивно.

Размеры опухолей измеряли с помощью раздвижного калибра в двух измерениях. Объем опухоли, который находится в хорошем соотношении с числом клеток, употребляли затем для всех анализов. Объем определяли по формуле "длина ширина ширина /2" ([а b²]/2, а или b означают два прямоугольно расположенных диаметра).

Значения относительного объема опухоли каждой отдельной опухоли определяли путем деления размера опухоли в день H на размер опухоли в день 0 (в момент рандомизации). Средние значения относительного объема опухоли употребляли для дальнейшего анализа.

Торможение увеличения объема опухоли (объем опухолей в испытуемой группе /контрольной группе, T/C, в %) представляло собой окончательную измеренную величину.

Лечение:

Все соединения давали по интермиттирующему плану соответственно в день 1, 5 и 9. Все соединения вводили внутрибрюшинно при использовании воды в качестве растворителя.

Соединения камптотецина в данном опыте проявляли, как правило, сравнимую или лучшую активность.

Примеры серии Б: Примеры получения соединений

Пример 1.1

п-аминофенил-2-O-метил- - L-фукозид



1.1.а) п-нитрофенил-3,4-O-изопропилиден- -L-фукозид

Раствор 750 мг (2,63 ммоль) п-нитрофенил- -L-фукозида в 40 мл смеси диметилформамида и диоксана в соотношении 1:2 при 0^oC смешивают с 65 мг п-толуолсульфокислоты и 5 раз через каждые 30 минут 100 мкл 2-метоксипропена. После перемешивания при 20^oC в течение 16 часов сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99: 1. После сгущения получают 710 мг (83%) белого твердого вещества.

1.1.б) п-нитрофенил-2-O-метил-3,4-O-изопропилиден- - L-фукозид

100 мг (0,307 ммоль) соединения примера 1.1.а) смешивают с 96 мкл метил-йодида в 10 мл тетрагидрофурана, после чего порциями смешивают с 11 мг 80%-ного гидрида натрия. После перемешивания при 20^oC в течение 3 часов к смеси добавляют еще 96 мкл метилйодида и 11 мг гидрида натрия. После дальнейшего перемешивания при 20^oC в течение 16 часов к смеси добавляют небольшое количество воды и 100 мл дихлорметана. Реакционную смесь дважды встряхивают вместе с водой, органическую фазу сгущают и продукт очищают путем колоночной хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 8:1. Выход: 78 мг (75%).

1.1) п-аминофенил-2-О-метил--L-фукозид

78 мг (0,23 ммоль) п-нитрофенил-2-O-метил-3,4-O- изопропилиден- -L-фукозида перемешивают при 20^oC в течение 16 часов в 3 мл 80%-ной уксусной кислоты. Потом уксусную кислоту удаляют в вакууме, реакционную смесь смешивают с 10 мл метанола и после добавки двуокиси платины гидрируют в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении. Суспензию фильтруют на силикате марки Celite, после чего фильтруемый материал промывают метанолом. После очистки путем хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 97,5: 2,5 получают 77 мг (80%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1, R_f = 0,42.

Пример 1.2

п-аминофенил-3-O-метил- -L-фукозид



1.2.а) п-нитрофенил-3-О-метил- -L-фукозид

6 г (21 ммоль) п-нитрофенил- -L-фукозида в 300 мл абсол. метанола смешивают с 7,84 г (31,5 ммоль) окиси дибутилолова и нагревают с обратным холодильником в течение двух часов. Затем сгущают, остаток сушат и подают в 300 мл диметилформамида. После добавки 15,7 мл метилйодида реакционную смесь перемешивают в течение 40 часов при 70^oC. Растворитель удаляют в вакууме и остаток подают в 300 мл дихлорметана. Суспензию фильтруют, остающийся раствор снова сгущают и подвергают флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1. После сгущения получают 3815 мг (61%) целевого продукта.

1.2) п-аминофенил-3-О-метил- -L-фукозид

3,81 г (12,73 ммоль) п-нитрофенил-3-O-метил- -L-фукозида гидрируют аналогично примеру 1.1. Выход: 3 г (88%). Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; R_f = 0,53.

Пример 1.3

п-аминофенил-3-О-метил- -L-фукозид



Соединение получают аналогично примеру 1.2 из п-нитрофенил- -L-фукозида.

Выход: 63% через две стадии. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; R_f = 0,39.

Пример 1.4

п-аминофенил-4-O-метил- -L-фукозид



1.4.а) п-нитрофенил-2-O-бензил-4-O-ацетил- -L-фукозид

1 г (3,5 ммоль) п-нитpoфенил- -L-фукoзидa в 100 мл абсол. тетрагидрофурана смешивают с 31 мг п-толуолсульфокислоты и 1134 мг (7 ммоль) триэтилортоацетата. После перемешивания в течение 15 минут при 20^oC растворитель отгоняют в вакууме. Остаток подают в 50 мл тетрагидрофурана и 3 мл диметилформамида, после чего смешивают с 4165 мкл бензилбромида и 210 мг 60%-ного гидрида натрия. После перемешивания при 20^oC в течение часа к смеси добавляют 10 мл 80%-ной уксусной кислоты, сгущают и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1. После сгущения и сушки получают 1236 мг (85%) целевого продукта.

1.4.б) п-нитрофенил-2-O-бензил-3-O-ацетил-4-O-метил- -L- фукозид

1000 мг (2,39 ммоль) п-нитрофенил-2-O-бензил-4-O-ацетил- - L-фукозида растворяют в 60 мл бензола. После добавки 2988 мкл метилйодида и 1109 мг окиси серебра реакционную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 8 часов. Полученную смесь разделяют на компоненты путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1. Выделяют 239 мг (23%) п-нитрофенил-2-О-бензил-3-O-ацетил-4-O- метил- -L-фукозида и 653 мг (63%) изомерного п-нитрофенил- 2-O-бензил-3-O-метил-4-O-ацетил- -L-фукозида в виде белого твердого вещества.

1.4) п-аминофенил-4-O-метил- -L-фукозид

224 мг (0,52 ммоль) п-нитрофенил-2-O-бензил-3-O- ацетил-4-O-метил- -L-фукозида растворяют в 20 мл метанола и смешивают с 390 мкл 1н. раствора метилата натрия. После перемешивания в течение 16 часов при 20^oC нейтрализуют 80%-ной уксусной кислотой, сгущают и подают в дихлорметан. Органическую фазу промывают 1-н. раствора бикарбоната натрия и водой, сушат и сгущают. Остаток подают в 20 мл метанола и гидрируют над палладием на активном угле аналогично примеру 1.1. После сгущения продукт подают в воду и подвергают лиофилизации. Выделяют 119 мг (88%) белого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; R_f = 0,38.

Пример 1.5

п-аминофенил-3-О-н-пропил- -L-фукозид



1.5.а) п-нитрофенил-2-O-бензил-3-O-н-пропил-4-O-ацетил- L-фукозид

Аналогично примеру 1.4.б) соединение примера 1.4.а) подвергают взаимодействию с пропилйодидом с получением изомерных продуктов 3- и 4-пропилирования. В результате разделения путем хроматографии получают п-нитрофенил-2-O-бензил-3-O-н-пропил-4-O-ацетил--L-фукозид (выход: 49%) и п-нитрофенил-2-O-бензил-3-O-ацетил-4-O-н-пропил--L-фукозид (выход: 29%).

1.5.б) п-аминофенил-3-O-н-пропил- -L-фукозид

Фракцию 1 примера 1.5. а) подвергают реакции аналогично примеру 1.4 с получением 78% целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; R_f = 0,42.

Пример 1.6

п-аминофенил-3-десокси- -L-фукозид



1.6.а) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-4-O-ацетил- -L- гулозид

1 г (3,5 ммоль) п-нитрофенил- -L-фукозида в 100 мл тетрагидрофурана смешивают с 31 мг п-толуолсульфокислоты и 1134 мг (7 ммоль) триэтилортоацетата. После перемешивания в течение 15 минут при 20^oC растворитель отгоняют в вакууме. Добавляют 100 мл насыщенного раствора хлористого водорода в дихлорметане. После 10-минутной реакции сгущают и продукт очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1. Получают 793 мг (65%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 97,5: 2,5; R_f = 0,36.

1.6.б) п-нитрофен ил-З,6-дидесокси-З-хлор- -L-гулозид

375 мг (1,08 ммоль) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-4-O- ацетил- -L-гулозида растворяют в 25 мл метанола и смешивают с 10 каплями 1н. раствора метилата натрия. По истечении 20 минут подкисляют уксусной кислотой, сгущают и распределяют между 400 мл дихлорметана и 60 мл воды. Органическую фазу сушат, сгущают и осаждают из смеси дихлорметана и диэтилового эфира. Получают 315 мг (96%) целевого продукта.

1.6.) п-аминофенил-3-десокси- -L-фукозид

315 мг (1,04 ммоль) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор- L-гулозида растворяют в 40 мл метанола, смешивают с 200 мг палладия на активном угле и 290 мкл триэтиламина, после чего смесь гидрируют в течение 4 дней в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении. Суспензию фильтруют, промывают, сгущают и продукт очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 97,5:2,5. Получают 160 мг (65%) десокси-соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; R_f = 0,18.

Пример 1.7

п-аминофенил-3,4-дидесокси- -L-фукозид



400 мг (1,16 ммоль) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-4- O-ацетил- -L-гулозида примера 1.6.а) растворяют в 55 мл метанола, смешивают с 323 мкл триэтиламина и гидрируют в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении над 10%-ным палладием на активном угле. После перемешивания в течение 16 часов при 20^oC фильтруют на силикате марки Celite, промывают, сгущают и подают в 100 мл метанола. К смеси добавляют 1,5 мл 1н. раствора метилата натрия и перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов. Нейтрализуют уксусной кислотой, сгущают и полученные продукты разделяют путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 97,5:2,5. После сгущения соответствующих фракций и переосаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 120 мг (46%) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; R_f = 0,31 и 77 мг (28%) п-аминофенил-3-десокси- -L-фукозида. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; R_f = 0,18.

Пример 1.8

п-аминофенил-3,4-эпокси- -L-фукозид



80 мг (0,23 ммоль) п-нитрофенил-3,6-дидесокси-3-хлор-4-O-ацетил- -L-гулозида примера 1.6. а) подают в 10 мл метанола и смешивают с 345 мкл 1н. раствора метилата натрия. После ультразвуковой обработки в течение часа подкисляют 80%-ной уксусной кислотой, сгущают и подвергают хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99: 1. После сгущения соответствующих фракций продукт подают в метанол и гидрируют над палладием на активном угле аналогично примеру 1.1. Получают 46 мг (75%) целевого соединения. Масс-спектр (бомбардировка быстрыми атомами, далее: "бба"):m/e = 238 = М+1.

Пример 1.9

п-аминофенил-4-десокси- -L-фукозид



Данное соединение получают аналогично методу авторов T. Lindhorst и J. Thiem в источнике Carbohydr. Res. 209 (1991 г.), стр. 119, исходя из п-нитрофенил- -L-фукозида через п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензоил-4,6-дидесокси- 4-йод- -L-фукозид. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 90:10; R_f = 0,3.

Пример 1.10

п-аминофенил-3-О-карбоксиметил- -L-фукозид



1.10.а) п-нитрофенил-3-О-метоксикарбонилметил- -L- фукозид

1 г (3,5 ммоль) п-нитрофенил- -L-фукозида и 1,3 г (5,2 ммоль) окиси дибутилолова нагревают с обратным холодильником в 50 мл метанола в течение 2 часов. Раствор сгущают, остаток подают в 50 мл диоксана, смешивают с 2 мл сложного метилового эфира бромуксусной кислоты и 100 мг йодида тетрабутиламмония и нагревают с обратным холодильником в течение 16 часов. Растворитель упаривают и продукт очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99: 1. После сгущения соответствующих фракций и переосаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 455 мг (37%) целевого соединения.

1.10) п-аминофенил-3-O-карбоксиметил- -L-фукозид

282 мг (0,79 ммоль) п-нитрофенил-З-метоксикарбонилметил- -L-фукозида растворяют в 20 мл метанола и смешивают с 440 мкл 2н. раствора гидроокиси лития. После перемешивания при 20^oC в течение 2 ч доводят до значения pH 3 с помощью кислого ионообменника марки SC108 устанавливают и фильтруют. К фильтрату добавляют 250 мг палладия на активном угле. Затем гидрируют в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении в течение 1,5 ч, катализатор отделяют и промывают метанолом. Продукт сгущают, подают в воду и подвергают сублимационной сушке. Получают 212 мг (86%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,24.

Пример 1.11 п-аминофенил-3-O-метоксикарбонилметил- -L-фукозид



250 мг (0,7 ммоль) п-нитрофенил-3-метоксикарбонилметил- -1-L фукозида примера 1.10.а) растворяют в 20 мл метанола и гидрируют в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении в течение 1,5 ч. Катализатор отделяют и промывают метанолом. Продукт сгущают, подают в воду и подвергают сублимационной сушке. Получают 195 мг (85%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; R_f = 0,43; масс-спектр (бба): m/e = 328 = M+1.

Пример 1.12

п-аминофенил-3-О-гидроксиэтил- -L-фукозид



1.12.а) п-нитрофенил-3-О-гидроксиэтил- -L-фукозид

1000 мг (2,8 ммоль) п-нитрофенил-3-метоксикарбонилметил- -L-фукозида растворяют в смеси 160 мл тетрагидрофурана и 40 мл воды и смешивают с 53 мг борана натрия. По истечении 10 минут растворитель упаривают и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 95:5. После сгущения соответствующих фракций, подачи в воду и сублимационной сушки получают 362 мг (40%) целевого продукта.

1.12) п-аминофенил-3-O-гидроксиэтил- -L-фукозид

После гидрирования 362 мг соединения примера 1.12.а) аналогично примеру 1.1. получают 270 мг (82%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f = 0,43.

Пример 1.13 п-аминофенил-2-O-карбоксиметил- -L-фукозид



1.13.а) п-нитрофенил-2-О-метоксикарбонилметил- -L-фукозид

250 мг (0,88 ммоль) п-нитрофенил- -L-фукозида растворяют в 25 мл абс. тетрагидрофурана и 3 мл диметилформамида. К смеси добавляют 80 мг (2,64 ммоль) 80%-ного гидрида натрия и после 10-минутного перемешивания при 20^oC 35 мкл сложного бензилового эфира бромуксусной кислоты. Через каждые 10 минут 3 раза добавляют еще по 35 мкл сложного бензилового эфира бромуксусной кислоты. Перемешивают в течение 30 минут и обрабатывают метанолом. По истечении 10 минут подкисляют 5 мл 80%-ной уксусной кислоты.

Сгущают и дополнительно перегоняют в присутствии дихлорметана. Очистку путем флеш-хроматографии начинают с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 90:10:1. Позже применяют ту же самую смесь, но в соотношении 80:20:2. После сгущения соответствующих фракций остатки дигерируют диэтиловым эфиром и из первого элюента получают 157 мг (42%) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5: 1: 0,2; R_f = 0,65. Из второго элюента получают 33% изомерного 3-О-алкилированного соединения. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1: 0,2; R_f = 0,54.

1.13) п-аминофенил-2-O-карбоксиметил- -L-фукозид

Омыление и гидрирование 150 мг п-нитрофенил-2-О- метоксикарбоилметил- -L-фукозида осуществляют аналогично примеру 1.10. Получают 109 мг (83%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1: 0,2; R_f = 0,35.

Пример 1.14.а)

Синтез региоизомерных продуктов моносукцинилирования п-нитрофенил- -L-фукозида:

1100 мг (3,86 ммоль) п-нитрофенил- -L-фукозида растворяют в 50 мл пиридина и смешивают с 580 мг (5,79 ммоль) ангидрида янтарной кислоты. После перемешивания в течение 16 ч при 20^oC сгущают и дважды дополнительно перегоняют в присутствии дихлорметана. Осаждают из смеси дихлорметана и диэтилового эфира и получают 1 г неразделимой смеси, которую подают в смесь метанола и воды и смешивают с 846 мг (2,6 ммоль) карбоната цезия. Растворитель упаривают и дополнительно перегоняют в присутствии диметилформамида. Остаток подают в диметилформамид и смешивают с 618 мкл бензилбромида. После одночасовой ультразвуковой обработки бромид цезия отфильтруют и фильтрат сгущают. Распределяют между 500 мл этилацетата и 50 мл воды. Органическую фазу сушат и сгущают. Компоненты разделяют путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99:1. Получают:

Фр. 1: 87 мг (4,8%) п-нитрофенил-3-O-(3- бензилоксикарбонилпропионил)- -L-фукозида. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; R_f = 0,45.

Фр. 2: 27 мг (1,5%) п-нитрофенил-2-O-(3- бензилоксикарбонилпропионил)- -L-фукозида. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; R_f = 0,34.

Фр. 3: 190 мг (10,3%) п-нитрофенил-4-O-(3- бензилоксикарбонилпропионил)- -L-фукозида. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; R_f = 0,28.

1.14) п-аминофенил-З-О-сукцинил -L-фукозид



85 мг (0,17 ммоль) фракции 1 примера 1.14.а) растворяют в 5 мл тетрагидрофурана и 1 мл воды. Добавляют 20 мг двуокиси платины и гидрируют в течение 8 часов. Катализатор отфильтровывают, промывают смесью тетрагидрофурана и воды и фильтрат сгущают. Остаток подают в воду и лиофилизуют. Получают 57 мг (94%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,65.

Пример 1.15

п-аминофенил-2-O-сукцинил- -L-фукозид



Фракцию 2 примера 1.14.а) гидрируют аналогично примеру 1.14. Выход: 16 мг (87%). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1: 0,2; R_f = 0,62.

Пример 1.16

п-аминофенил-4-O-сукцинил- -L-фукозид



Фракцию 3 примера 1.14.а) гидрируют аналогично примеру 1.14. Выход: 125 мг (88%). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1: 0,2; R_f = 0,63.

Пример 1.17.

п-аминофенил-3,4-ди-О-метил- -L-фукозид



1.17.а) п-нитрофенил-2-O-бензил-3,4-O-изопропилиден- -L-фукозид

377 мг (1,16 ммоль) соединения примера 1.1.а) растворяют в 30 мл абс. тетрагидрофурана и смешивают последовательно с 690 мкл бензилбромида и 52 мг гидрида натрия, после чего перемешивают при 20^oC. Через 4 часа и 6 часов еще раз добавляют 690 мкл бензилбромида и гидрида натрия. Реакционную смесь перерабатывают аналогично примеру 1.1. б). Получают 245 мг (51%) целевого соединения.

1.17.б) п-нитрофенил-2-О-бензил-3,4-ди-О-метил- -L-фукозид

245 мг (0,59 ммоль) п-нитpoфeнил-2-O-бензил-3,4-O- изoпpoпилиден- -L-фукoзида перемешивают в 80%-ной уксусной кислоте в течение 16 часов при 20^oC. Сгущают и остаток перемешивают со смесью диэтилового эфира и пентана. Отсасывают, сушат и полученный продукт подают в 20 мл абс. тетрагидрофурана. К смеси добавляют 45 мг 80%-ного гидрида натрия и через 15 минут - 160 мкл метилйодида. Перемешивают в течение 20 часов при 20^oC, после чего обрабатывают метанолом и ледяной уксусной кислотой, сгущают и остаток распределяют между дихлорметаном и водой. Органическую фазу сушат, сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 100:1. Соответствующие фракции сгущают и сушат, после чего получают 188 мг (79%) целевого продукта.

1.17) п-аминофенил-3,4-ди-O-метил--L-фукозид

180 мг (0,45 ммоль) соединения примера 1.17.б) в смеси 15 мл метанола и 3 мл дихлорметана после добавления 50 мг палладия на активном угле гидрируют при комнатной температуре в течение 2 суток. Катализатор отфильтровывают, фильтрат сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 97,5:2.5. Получают 86 мг (68%) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; R_f = 0,21.

Пример 1.18

п-аминофенил-3-O-карбамоилметил--L-фукозид



100 мг (0,305 ммоль) соединения примера 1.11. растворяют в 10 мл метанола и смешивают с 0,5 мл 17%-ного раствора гидроксида аммония. Через 4 часа сгущают, подают в воду и лиофилизуют. Получают 95 мг (колич.) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f= 0,43.

Пример 1.19

п-аминофенил-2-О-гидроксиэтил- -L-фукозид



200 мг (0,56 ммоль) п-нитрофенил-2-O-метоксикарбонилметил- - L-фукозида примера 1.13.а) подвергают реакции аналогично примерам 1.12.а) и 1.12. Выход: 76 мг (45% через 2 стадии). Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; R_f = 0,2.

Пример 1.20

п-аминофенил-3,6-дидесокси-3-хлор- -L-гулозид



50 мг (0,165 ммоль) соединения примера 1.6.б) гидрируют в 5 мл метанола над палладием на активном угле в течение часа. Отфильтровывают от катализатора, промывают, сгущают, подают в воду и лиофилизуют. Получают 45 мг (89%) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; R_f = 0,35.

Пример 1.21

п-аминофенил- -L-рамнозид



300 мг п-нитрофенил- -L-рамнозида (сигма) подвергают реакции аналогично примеру 1.1 и получают 96% целевого соединения.

Пример 1.22

п-аминофенил-3-О-карбоксиметил- -L-рамнозид



1.22.а) п-нитрофенил-3-О-метоксикарбонилметил- -L-рамнозид

481 мг (1,63 ммоль) п-нитрофенил- -L-рамнозида подают в 30 мл метанола и смешивают с 629 мг (2,45 ммоль) окиси дибутилолова. Нагревают с обратным холодильником в течение 2 часов, сгущают и подают в 30 мл диоксана. К смеси добавляют 85 мг йодида тетрабутиламмония и 950 мкл сложного метилового эфира бромуксусной кислоты, после чего нагревают с обратным холодильником в течение 16 часов. В случае необходимости добавляют еще 1 мл сложного метилового эфира бромуксусной кислоты и продлевают время реакции. Сгущают и остаток очищают путем флеш-хроматографии. п-нитрофенил-3-О-метокси-карбонилметил- -L-рамнозид элюируют с применением смеси дихлорметана и метанола в соотношении 99: 1. После сушки получают 408 мг (70%) продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95:5; R_f=0,36.

Пример 1.22

п-аминофенил-3-О-карбоксиметил- -L-рамнозид

п-нитрофенил-3-О-метоксикарбонилметил- -L-рамнозид подвергают реакции аналогично примеру 1.10 c получением 80% целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной воды в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,26.

Пример 1.23

п-аминофенил--D-галактопиранозид



3,0 г (10 ммоль) п-нитрофенил- -D-галактопиранозида растворяют в 50 мл смеси метанола и воды в соотношении 1:1. После добавления 200 мг 10%-ного палладия на активном угле гидрируют в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении. Суспензию фильтруют на силикате марки Celite, после чего фильтруемый материал промывают 100 мл горячей смеси метанола и воды в соотношении 1:1. Фильтрат сгущают в вакууме. В результате перекристаллизации из метанола получают 2,11 г (78%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; _f = 0,62; []²⁰= -39,5 (с = 1,0/H₂O); т.п. =166^oC.

Пример 1.24

п-аминофенил-2-O-метил- -D-галактопиранозид



1.24.а) п-нитрофенил-6-О-трифенилметил--D-галактопиранозид

Раствор 9,0 г (30 ммоль) п-нитрофенил--D-галактопиранозида, 16,7 г (60 ммоль) хлортрифенилметана и 609 мг (5 ммоль) N,N-диметиламинопиридина в 100 мл абсолютного пиридина нагревают до 60^oC в течение 4 часов. После сгущения в вакууме остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1 ---> 3:2, каждый раз в присутствии 0,5% триэтиламина. Получают 9,23 г (57%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,55; т.п. = 82^oC.

1.24. б) п-нитрофенил-3,4-O-изопропилиден-6-O-трифенилметил--D-галактопиранозид

8,7 г (16 ммоль) вышеуказанного соединения смешивают с 400 мл диметоксипропана и каталитическим количеством (400 мг, 1,7 ммоль) ()-камфора-10-сульфокислоты. После реакции при комнатной температуре в течение часа реакцию прекращают добавлением 240 мл (1,7 ммоль) триэтиламина и сгущают в вакууме. В результате флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1 получают 6,2 г (66%) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,46; []²⁰= -42,1 (c = 0,94/CH₂Cl₂).

1.24.в) п-нитрофенил-2-O-метил-3,4-O-изопропилиден-6-O- трифенилметил- -D-галактопиранозид

5,83 г (10 ммоль) соединения примера 1.24.б) растворяют в 100 мл диметилформамида и смешивают с 2,5 мл (40 ммоль) метилйодида, после чего к смеси порциями добавляют 450 мг (15 ммоль) 80%-ной суспензии гидрида натрия в минеральном масле. После реакции при комнатной температуре в течение 2 часов реакцию прекращают прикапыванием 10 мл метанола и сгущают в вакууме. Остаток подают в 1000 мл дихлорметана и раствор интенсивно перемешивают с 500 мл воды. Органическую фазу сушат над 50 г сульфата магния, сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 12:1 1 ---> 8:1. Получают 4,72 г (79%) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1: 1; R_f = 0,72; []²⁰= -35,7 (c = 1,0/CH₃OH).

1.24.г) п-нитрофенил-2-O-метил- -D-галактопиранозид

Раствор 4,48 г (7,5 ммоль) вышеприведенного соединения в 200 мл дихлорметана смешивают с 20 мл 99%-ной трифторуксусной кислоты и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. После сгущения в вакууме остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:12:1. Получают 1,09 г (46%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,42: т.п. = 177^oC.

1.24) п-аминофенил-2-O-метил- -D-галактопиранозид

946 мг (3 ммоль) соединения примера 1.24.г) растворяют в 50 мл метанола и после добавления 0,5 мл воды и около 200 мг основного никеля Ренея гидрируют в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении в течение 2 часов. Суспензию фильтруют на силикате марки Celite, после чего фильтруемый материал интенсивно промывают 100 мл метанола. После сгущения фильтрата в вакууме получают 579 мг (68%) коричневатой пены. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,28; []²⁰= -39,3 (c = 0,15/CH₃OH).

Пример 1.25

п-аминофенил-3-О-метил- - D-галактопиранозид



1.25.а) п-нитрофенил-3-О-метил- -D-галактопиранозид

Раствор 1,5 г (5,0 ммоль) п-нитрофенил- -D- галактопиранозида в 40 мл абсолютного метанола смешивают с 1,87 г (7,5 ммоль) окиси дибутилолова и нагревают с обратным холодильником. Через 3 часа сгущают в вакууме и остаток сушат в течение часа в вакууме масляного насоса. Продукт подают в 40 мл абсолютного диоксана, полученный раствор смешивают с 1,9 мл (30 ммоль) метилйодида и реакционную смесь перемешивают в течение 16 часов при температуре ванны 100^oC. Затем растворитель отгоняют в вакууме и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2: 1; а потом этилацетата. Получают 1,32 г (84%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2 R_f = 0,34; т. п. = 196^oC; []²⁰= -53,3 (c = 1,0/CH₃OH).

1.25) п-аминофенил-3-О-метил--D-галактопиранозид

946 мг (3 ммоль) вышеприведенного соединения восстанавливают описанным в примере 1.24 образом и перерабатывают. Получают 656 мг (77%) коричневатых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,21; т.п. = 196^oC; []²⁰= -25,2 (c = 1,0/CH₃OH).

Пример 1.26

Ацетат п-аминофенил-4-O-метил- -D- галактопиранозида



1.26.а) п-нитрофенил-3-О-бензил--D-галактопиранозид

Раствор 1,5 г (5,0 ммоль) п-нитрофенил- -D-галактопиранозида в 40 мл абсолютного диоксана смешивают с 1,87 г (7,5 ммоль) окиси дибутилолова и нагревают с обратным холодильником. Через 3 ч полученный раствор смешивают с 3,6 мл (30 ммоль) бензилбромида и реакционную смесь перемешивают в течение 48 ч с обратным холодильником. Растворитель отгоняют в вакууме и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1-1:1. Получают 1,58 г (81%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3: 0,2; R_f = 0,69; т.п. = 127^oC.

1.26.б) п-нитрофенил-3-О-бензил-4,6-О-изопропилиден-- D-галактопираноид

6,26 г (16 ммоль) соединения примера 1.26.а) подвергают описанной в примере 1.24. б) реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5: 1-3: 1 получают 6,54 г (95%) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1: 1; R_f = 0,34; []²⁰= -38,9 (c = 1,0/ CH₂Cl₂).

1.26. в) п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензил-4,6-O-изопропилиден--D-галактопиранозид

4,31 г (10 ммоль) соединения примера 1.26.б) растворяют в 100 мл диметил-формамида, после чего смешивают с 12 мл (100 ммоль) бензилбромида и порциями по 450 мг (15 ммоль) 80%-ной суспензии гидрида натрия в минеральном масле. После реакции при комнатной температуре в течение 2 часов реакцию прекращают прикапыванием 10 мл метанола и сгущают в вакууме. Остаток подают в 1000 мл дихлорметана и раствор интенсивно перемешивают с 500 мл воды. Органическую фазу сушат над 50 г сульфата магния, сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 20:1-15:1-10:1. Получают 2,72 г (52%) бесцветного масла, которое содержит еще примеси. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,62.

1.26.г) п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензил--D-галактопиранозид

2,6 г (5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.24. г) реакции. После сгущения в вакууме и кипячения остатка в присутствии диэтилового эфира получают 805 мг (33%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f= 0,23; т.п. = 160^oC.

1.26.д) п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензил-6-O-трифенилметил- -D- галактопиранозид

722 мг (1,5 ммоль) соединения примера 1.26.г) подвергают описанной в примере 1.24.а) реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 15:1-0:1-5:1 получают 880 мг (81%) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; R_f= 0,79; []²⁰= -25,3 (с = 0,3/CH₂Cl₂).

1.26. е) п-нитрофенил-2,3-ди-O-бензил-4-O-метил-6-O- трифенилметил--D-галактопиранозид

724 мг (1 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанному в примере 1.24. в) метилированию. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10: 1-5: 1 получают 662 мг (90%) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1; R_f = 0,66; []²⁰= -38,7 (с = 0,2/CH₂Cl₂).

1.26) Ацетат п-аминофенил-4-O-метил-6-O-трифенилметил- -D- галактопиранозида

590 мг (0,8 ммоль) вышеуказанного соединения растворяют в 50 мл 90%-ной уксусной кислоты. После добавки 200 мг 10%-ного палладия на активном угле гидрируют в течение 16 часов в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении. Суспензию фильтруют на силикате марки Celite и фильтруемый материал интенсивно промывают 100 мл метанола. После сгущения фильтрата в вакууме и переосаждения остатка из смеси диэтилового эфира и петролейного эфира получают 253 мг (92%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и петролейного эфира в соотношении 5:1; R_f = 0,12.

Пример 1.27

п-аминофенил-6-О-метил- -D-галактопиранозид



5,84 г (10 ммоль) соединения примера 1.24.б) бензилируют описанным в примере 1.26. в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 15: 1-12: 1-5: 1, а потом этилацетата, каждый раз в присутствии 0,5% триэтиламина, получают две фракции продукта:

Фракция 1:1,71 г (25%) п-нитрофенил-2-O-бензил-3,4-O- изопропилиден-6-O-трифенилметил--D-галактопиранозида в виде желтоватой пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; R_f = 0,72; []²⁰= -8,1 (с = 1,0/CH₂Cl₂).

Фракция 2: 806 мг (19%) п-нитрофенил-2-O-бензил-3,4-O- изопропилиден- -D-галактопиранозида в виде желтоватого масла. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2: 1; R_f = 0,45; []²⁰= +2,8 (с= 1,2/CH₃OH).

1.27. б) п-нитрофенил-2-О-бензил-З,4-О-изопропилиден- 6-О-метил- -D-галактопиранозид

777 мг (1,8 ммоль) фракции 2 примера 1.27.а) подвергают описанному в примере 1.24.в) метилированию. После очистки путем флеш-хроматографий с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1-8:1 получают 730 мг (91%) коричневатого масла. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; R_f = 0,54; []²⁰= -11,6 (c = 1,1/CH₂CL₂).

1.27.в) п-нитрофенил-2-0-бензил-6-O-метил- -D-галактопиранозид

668 мг (1,5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.24. г) реакции. Фильтрат сгущают в вакууме и остаток кипятят в присутствии небольшого количества диэтилового эфира. После охлаждения до комнатной температуры получают 388 мг (64%) светло-бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,15; т.п.: 143^oC.

1.27) п-аминофенил-6-О-метил- -D-галактопиранозид

324 мг (0,8 ммоль) соединения примера 1.27.в) подвергают описанному в примере 1.24 восстановлению. Фильтрат сгущают в вакууме и остаток кипятят в присутствии небольшого количества диэтилового эфира. Получают 184 мг (81%) бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,05; Т.п.: 115^oC (разл.).

Пример 1.28

п-аминофенил-2,3-ди-O-метил- -D-галактопиранозид



1.28.а) Изопропилиденирование п-нитрофенил- -D-галактопиранозида

Раствор 7,5 г (25 ммоль) п-нитрофенил- -D-галактопиранозида в 1000 мл абсолютного ацетона смешивают с 500 мг безводного толуолсульфокислоты. 250 мл ацетона отгоняют при атмосферном давлении в течение 30 минут и потом непосредственно нейтрализуют добавкой 500 мг карбоната калия. После сгущения в вакууме остаток перемешивают с 1000 мл диэтилового эфира. Фильтруют, фильтрат сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1-1:1-3:2. При этом получают две фракции продукта:

Фракция 1:

3,74 г (44%) п-нитрофенил-3,4-O-изопропилиден- -D-галактопиранозида в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и 25%-ного аммиака в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,59; []²⁰= -54,2 (c = 0,38/CH₃OH).

Фракция 2:

4,3 г (50%) п-нитрофенил-4,6-O-изопропилиден- -D-галактопиранозида в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и 25%-ного аммиака в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,54; []²⁰= -81,0 (c = 0,31/CH₃OH).

1.28. б) п-нитрофенил-2,З-ди-О-метил-4,6-О-изопропилиден- -D-галактопиранозид

4,1 г (12 ммоль) фракции 2 примера 1.28.а) подвергают описанному в примере 1.24.в) метилированию. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1-2:1 получают 2,93 г (66%) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,42; []²⁰= -52,6 (с=0,34/CH₃OH).

1.28.в) п-нитрофенил-2,3-ди-О-метил--D-галактопиранозид

2,77 г (7,5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.24.г) реакции. Смесь держат при комнатной температуре в течение часа, после чего сгущают в вакууме и остаток сушат в течение часа в вакууме масляного насоса. В результате дигерирования с 100 мл смеси диэтилового эфира и петролейного эфира в соотношении 1:1 получают 1,11 г (45%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,24; т.п.: 156^oC.

1.28) п-аминофенил-2,3-ди-О-метил- -D-галактопиранозид

989 мг (3 ммоль) соединения примера 1.38.в) восстанавливают описанным в примере 1.24 образом. Получают 396 мг (44%) бесцветного масла. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и 25%-ного аммиака в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,50; []²⁰= -19,4 (c = 0,16/CH₃OH).

Пример 1.29

п-аминофенил-2,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозид



1.29.а) Тритилирование соединения примера 1.26.a)

11,7 г (30 ммоль) соединения примера 1.26.а) тритилируют описанным в примере 1.24. а) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10: 1-7:1-5:1, каждый раз в присутствии 0,5% триэтиламина, получают два продукта:

Фракция 1:

8,5 г (32%) трифенилметил-2-O-(п-нитрофенил)-3-O- бензил-6-O-трифенилметил- -D-галактопиранозида в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; R_f = 0,68; []²⁰= +42,8 (c = 1,0/CH₂Cl₂).

Фракция 2:

9,0 г (47%) п-нитрофенил-3-О-бензил-6-О-трифенилметил- -D-галактопиранозида в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; R_f = 0,22; []²⁰= -22,6 (c = 1,03/CH₂Cl₂).

1.29. б) п-нитрофенил-2,4-ди-О-метил-3-О-бензил-6-О-трифенилметил- -D-галактопиранозид

7,6 г (12 ммоль) фракции 2 примера 1.29.а) подвергают описанному в примере 1.24.в) метилированию. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1-10:1 получают 7,07 г (89%) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; R_f = 0,79; []²⁰= -35,8 (с=1,09/CH₃OH).

1.29.в) п-аминофенил-2,4-ди-O-метил-3-O-бензил- -D-галактопиранозид

6,0 г (9 ммоль) вышеуказанного соединения гидрируют в течение 48 часов описанным в примере 1.26 образом. Получают 1,39 г (40%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; R_f = 0,20; т.п.: 148^oC.

1.29) п-аминофенил-2,4-ди-О-метил- -D-галактопиранозид

779 мг (2 ммоль) соединения примера 1.29.в) гидрируют в течение 5 суток описанным в примере 1.24 образом. После упаривания объединенных фильтратов в вакууме и двукратного кипячения остатка в присутствии диэтилового эфира, взятого в количестве по 50 мл, получают 391 мг (65%) слегка зеленоватых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетата; R_f = 0,16; т.п.: 260^oC (разл.).

Пример 1.30

п-аминофенил-2,6-ди-O-метил- -D-галактопиранозид



1.30. а) п-нитрофенил-2,6-ди-О- метил-3,4-О-изопропилиден--D-галактопиранозид

4,1 г (12 ммоль) фракции 1 примера 1.28.а) метилируют описанным в примере 1.24.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10: 1-8: 1-5: 1 получают 3,25 г (73 %) бесцветного масла. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f=0,65.

1.30.б) п-нитрофенил-2,6-ди-O-метил- -D-галактопиранозид

2,77 г (7,5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.24. г) реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1 получают 1,63 г (66%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,31; т.п.: 222^oC.

1.30) п-аминофенил-2,6-ди-O-метил--D-галактопиранозид

989 мг (3 ммоль) соединения примера 1.30.б) восстанавливают описанным в примере 1.24 образом. Получают 597 мг (66%) бесцветного масла. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и 25%-ного аммиака в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,56; []²⁰= -53,1 (c = 0,49/CH₃OH).

Пример 1.31

Ацетат п-аминофенил-3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозида



1.31. а) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3,4-O-изопропилиден- -D- галактопиранозид

4,1 г (12 ммоль) фракции 1 примера 1.28.а) бензилируют описанным в примере 1.26. в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 6:1 получают 5,3 г (85%) желтоватого масла. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; R_f = 0,76; []²⁰= +8,8 (с=1,2/CH₃OH).

1.31.б) п-нитрофенил-2,6-ди-О-бензил--D-галактопиранозид

4,69 г (9 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.24.г) реакции. Смесь держат при комнатной температуре в течение 30 минут, сгущают в вакууме и остаток сушат в течение часа в вакууме масляного насоса. В результате перекристаллизации из этанола получают 2,89 г (67%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; R_f = 0,42; т.п.: 133^oC; []²⁰= -64,2 (с = 1,0/CH₃OH).

1.31. в) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3,4-ди-O-метил- -D- галактопиранозид

2,4 г (5 ммоль) вышеуказанного соединения метилируют описанным в примере 1.26. в) образом. После перекристаллизации из смеси этанола и н-гексана получают 1,74 г (69%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 1:1; R_f = 0,74; т.п.: 149^oC.

1.31) Ацетат п-аминофенил-3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозида

1,52 г (3 ммоль) соединения примера 1.31.в) гидрируют описанным в примере 1.26 образом. Получают 664 мг (62%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,47; т.п.: 140^oC (разл.).

Пример 1.32

п-аминофенил-3,6-ди-О-метил- -D-галактопиранозид



1.32. а) п-нитрофенил-3-O-метил-6-0-(трет-бутилдиметилсилил)- -D-галактопиранозид

Раствор 1,58 г (5 ммоль) соединения примера 1.25.а) в 150 мл диметилформамида смешивают с 1 г (15 ммоль) имидазола и 1,25 г (8 ммоль) трет-бутилди-метилсилил-хлорида и перемешивают в течение 24 часов при комнатной температуре. Затем реакцию прекращают добавкой 100 мл воды. Разбавляют 1000 мл дихлорметана, органическую фазу два раза промывают водой, взятой в количестве по 1000 мл, сушат над 20 г сульфата магния и сгущают в вакууме. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношений 15:110:15:1 получают 826 мг (38%) желтоватой пены, которая содержит еще примеси. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,59; []²⁰= -56,3 (с = 1,0/CH₂Cl₂).

1.32.6) п-нитрофенил-2,4-ди-O-бензил-3-O-метил-6-O-(трет- бутилдиметилсилил)- -D-галактопиранозид

773 мг (1,8 ммоль) вышеуказанного соединения бензилируют описанным в примере 1.26.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 30: 1-5:1 получают 810 мг (74%) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1; R_f = 0,58.

1.32.в) п-нитрофенил-2,4-ди-O-бензил-3-O-метил- D-галактопиранозид

732 мг (1,2 ммоль) соединения примера 1.32.6) растворяют в 6 мл тетрагидрофурана и смешивают при температуре 0^oC с 2,4 мл 1 М раствора фторида тетрабутиламмония в тетрагидрофуране. Перемешивают в течение 40 мин при комнатной температуре и сгущают в вакууме. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1-3:1-2:1 получают 512 мг (86%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,36; т.п.: 177^oC.

1.32. г) п-нитрофенил-2,4-ди-O-бензил-3,6-ди-O-метил- -D- галактопиранозид

446 мг (0,9 ммоль) вышеуказанного соединения метилируют описанным в примере 1.24.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 20:1-10:1-8:1 получают 401 мг (87%) бесцветного масла. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,70; []²⁰= -56,5 (c = 0,96/CH₂Cl₂).

1.32) п-аминофенил-3,6-ди-О-метил- -D-галактопиранозид

357 мг (0,7 ммоль) соединения примера 1.32.г) гидрируют описанным в примере 1.24 образом. После сгущения объединенных фильтратов в вакууме и кипячения остатка в присутствии 20 мл диэтилового эфира получают 207 мг (99%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,02; т.п.: > 280^oC (разл.).

Пример 1.33

п-аминофенил-4,6-ди-O-метил- -D-галактопиранозид



1.33. а) п-нитрофенил-2,З-ди-О-бензил-4,6-ди-О-метил- -D-галактопиранозид

2,4 г (5 ммоль) соединения примера 1.26. г) метилируют описанным в примере 1.24.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5:1 -3: 1 получают 1,89 г (74%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,76: т. п.: 100^oC.

1.33) п-аминофенил-4,6-ди-O-метил- -D-галактопиранозид

1,53 г (3 ммоль) соединения примера 1.33.а) гидрируют описанным в примере 1.24 образом. Получают 890 мг (99%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь метанола и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,71; т. п.: 180^oC (разл.).

Пример 1.34

п-аминофенил-2,3,4-три-О-метил- -D-галактопиранозид



1.34. а) п-нитрофенил-2,3,4-три-О-метил-6-О-трифенилметил- -D- галактопиранозид

1,63 г (3 ммоль) соединения примера 1.24.а) метилируют описанным в примере 1.24. в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5: 1-3: 1 получают 1,24 г (71%) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1: 1; R_f = 0,54; []²⁰= -53,6 (c = 0,3/CH₃OH).

1.34.б) п-нитрофенил-2,3,4-три-O-метил- -D-галактопиранозид

1,17 г (2 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.24. г) реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 3:1 -2: 1 получают 468 мг (68%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,12; т. п.: 104^oC; []²⁰= -68,2 (c = 0,47/CH₃OH).

1.34) п-аминофенил-2,3,4-три-O-метил- -D-галактопиранозид

343 мг (1 ммоль) соединения примера 1.34.б) восстанавливают описанным в примере 1.24 образом. Получают 224 мг (71%) бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,67; т.п.: 138^oC.

Пример 1.35

п-аминофенил-2,3,6-три-О-метил- -D-галактопиранозид



1.35.а) п-нитрофенил-2,3,6-три-О-метил- -D-галактопиранозид

2,63 г (3 ммоль) соединения примера 1.30.б) подвергают селективному метилированию описанным в примере 1.25. а) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 5: 1-2:1 получают 890 мг (32%) коричневатого масла. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,37; []²⁰= -63,3 (с = 0,9/CH₂Cl₂).

1.35) п-аминофенил-2,3,6-три-О-метил- -D-галактопиранозид

858 мг (2,5 ммоль) вышеуказанного соединения восстанавливают описанным в примере 1.24 образом. Получают 519 мг (66%) бежевой пены. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,23; []²⁰= -34,5 (с = 0,86/CH₃OH).

Пример 1.36

п-аминофенил-2,4,6-три-О-метил- -D-галактопиранозид



1.36.а) п-нитрофенил-2,4,6-три-O-метил-3-O-бензил- -D-галактопиранозид

1,96 г (5 ммоль) соединения примера 1.26.а) метилируют описанным в примере 1.24. в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10: 1 8:1 получают 1,47 г (68%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1; R_f = 0,46; т.п.: 164^oC.

1.36) п-аминофенил-2,4,6-три-O-метил- -D-галактопиранозид

1,3 г (3 ммоль) вышеуказанного соединения восстанавливают описанным в примере 1.26 образом. Получают 642 мг (68%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; R_f = 0,12; т.п.: 147^oC (разл.).

Пример 1.37

п-аминофенил-3,4,6-три-О-метил- -D-галактопиранозид



1.37.а) п-нитрофенил-2-O-бензил- -D-галактопиранозид

1,17 г (2 ммоль) фракции 1 примера 1.27.а) подвергают описанной в примере 1.24.г) реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 3:1-2: 1 получают 468 мг (68%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,12; т.п.: 104^oC; []²⁰= -68,2 (с = 0,47/CH₃OH).

1.37. б) п-нитрофенил-2-О-бензил-3,4,6-три-О-метил- -D- галактопиранозид

391 мг (1 ммоль) вышеуказанного соединения метилируют описанным в примере 1.24. в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10: 1-5: 1 получают 303 мг (70%) светло-желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,81; []²⁰= -76,5 (с = 1,1/CH₂Cl₂).

1.37) п-аминофенил-3,4,6-три-O-метил- -D-галактопиранозид

260 мг (0,6 ммоль) соединения примера 1.37.б) гидрируют описанным в примере 1.24 образом. Получают 161 мг (86%) бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; _f = 0,20; т.п.: 132^oC.

Пример 1.38

п-аминофенил-2,3,4,6-тетра-О-метил- -D-галактопиранозид



1.38.а) п-нитрофенил-2,3,4,6-тетра-O-метил- -D-галактопиранозид

904 мг (3 ммоль) п-нитрофенил- -D-галактопиранозида метилируют описанным в примере 1.24.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 8: 1-6:1-4:1-2:1 получают 633 мг (59%) бесцветного, воскообразного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,67; []²⁰= -55,7 (с = 0,9/CH₂Cl₂).

1.38) п-аминофенил-2,3,4,6-тетра-О-метил- -D-галактопиранозид

536 мг (1,5 ммоль) соединения примера 1.33.а) гидрируют описанным в примере 1.24 образом. После упаривания объединенных фильтратов в вакууме и кипячения остатка в присутствии 20 мл диэтилового эфира получают 412 мг (84%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,42; т.п.: 204^oC (разл.).

Пример 1.39

п-аминофенил- -D-маннопиранозид



3,0 г (10 ммоль) п-нитрофенил- -D-маннопиранозида гидрируют описанным в примере 1.23 образом. В результате осаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 2,03 г (75%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанолт; R_f = 0,69: т.п.: 161^oC; []²⁰= +102,7 (c = 1,0/H₂O).

Пример 1.40

п-аминофенил-3-О-метил- -D-маннопиранозид



1.40.а) п-нитрофенил-6-О-трифенилметил- -D-маннопиранозид

3,0 г (10 ммоль) п-нитрофенил- -D-маннопиранозида тритилируют описанным в примере 1.24. а) образом. Получают 4,35 г (80%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,52; []²⁰= +104,0 (c = 1,0/CH₃OH); т. п.: 102 - 104^oC.

1.40.б) п-нитрофенил-3-O-метил-6-О-трифенилметил- -D-маннопиранозид.

2,72 г (5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанному в примере 1.26. а) взаимодействию с 2 мл (30 ммоль) метилйодида. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1 и осаждения из смеси этанола и н-гексана получают 1,83 г (66%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3: 0,2; R_f = 0,68; []²⁰= +106,4 (c = 1,0/CH₃OH); т.п.: 104^oC.

1.40) п-аминофенил-3-О-метил- -D-маннопиранозид

1,4 г (2,5 ммоль) соединения примера 1.40.б) растворяют в 50 мл метанола. После добавки 300 мг 10%-ного палладия на активном угле гидрируют атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении в течение 24 часов. Суспензию фильтруют на силикате марки Celite, после чего фильтруемый материал интенсивно промывают 100 мл метанола. После сгущения фильтрата в вакууме остаток смешивают с 50 мл воды, фильтруют и фильтрат лиофилизуют. Получают 709 г (99%) коричневатого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,33; []²⁰= +92,9 (с = 1,1/CH₃OH).

Пример 1.41

п-аминофенил-2,3-ди-O-метил- -D-маннопиранозид



1.41.а) п-нитрофенил-4,6-О-бензилиден- -D-маннопиранозид

Раствор 6,0 г (20 ммоль) п-нитрофенил- -D-маннопиранозида в 120 мл диметилформамида смешивают с 3,2 мл (21,4 ммоль) бензальдегид-диметилацетала и 2,7 мл (20 ммоль) 54%-ного раствора тетрафторборной кислоты в диэтилового эфира. Перемешивают в течение 5 часов при комнатной температуре, после чего реакцию прекращают добавкой 2,8 мл (20 ммоль) триэтиламина и сгущают в вакууме. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала толуола, а потом смеси толуола и этанола в соотношении 20 : 1 получают 6,48 г (83%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,82; []²⁰= +170,7 (c = 1,0/CH₂Cl₂); т.п.: 116^oC.

1.41. б) п-нитрофенил-2,3-ди-О-метил-4,6-О-бензилиден- -D-маннопиранозид

3,9 г (10 ммоль) вышеуказанного соединения метилируют описанным в примере 1.24.в) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 20:1 -7: 1 и осаждения из смеси этилацетата и н-гексана получают 3,2 г (77%) бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; R_f = 0,67; []²⁰= +167,3 (c = 1,05/CH₃OH).

1.41) п-аминофенил-2,3-ди-О-метил- -D-маннопиранозид

1,25 г (3 ммоль) соединения примера 1.41.6) гидрируют описанным в примере 1.26 образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2: 1, а потом этилацетата, каждый раз в присутствии 0,5% триэтиламина, получают 480 мг (53%) красновато-коричневой пены. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f=0,31; []²⁰= +83,6 (c=0,76/CH₃OH).

Пример 1.42



1.42.а) п-нитрофенил-3-О-метоксикарбонилметил- -D- галактопиранозид

Раствор 7,53 г (25 ммоль) п-нитрофенил- -D-галактопиранозида в 180 мл абсолютного диоксана смешивают с 9,3 г (37,5 ммоль) окиси дибутилолова и нагревают с обратным холодильником. Через 4 часа полученный раствор смешивают с 8,3 мл (90 ммоль) сложного метилового эфира бромуксусной кислоты и 9,25 г (25 ммоль) йодида тетрабутиламмония и перемешивают реакционную смесь с обратным холодильником в течение 3 часов. Потом растворитель отгоняют в вакууме и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 50:1-20:1. Наряду с некоторыми побочными продуктами получают 4,05 г (43%) соединения примера 1.42. а) в виде бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f= 0,54; []²⁰= -62,0 (с = 1,0/CH₃OH); т.п.: 176^oC.

1.42) п-аминофенил-3-О-метоксикарбонилметил- -D-галактопиранозид

3,73 г (10 ммоль) соединения примера 1.42.а) гидрируют описанным в примере 1.24 образом. После осаждения из смеси этанола и н-гексана получают 2,98 г (87%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15: 3:0,2; R_f = 0,39; []²⁰= -36,3 (c = 1,07/CH₃OH); т.п.: 155^oC.

Пример 1.43



1.43) Натриевая соль п-нитрофенил-3-О-карбоксиметил- -D-галактопиранозида

Раствор 3,73 г (10 ммоль) соединения примера 1.42.а) в 100 мл метанола смешивают с раствором 400 мг (10 ммоль) гидроокиси натрия в 5 мл воды и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. После сгущения в вакууме остаток сушат в вакууме масляного насоса в течение 2 часов, после чего смешивают с 100 мл этанола. Кипятят с обратным холодильником в течение 5 минут, фильтруют после охлаждения на ледяной бане и получают 3,66 г (96%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,62; []²⁰= -50,0(c = 1,0/CH₃OH); т.п.: 180 - 185^oC.

1.43) Натриевая соль п-аминофенил-3-О-карбоксиметил- -D-галактопиранозида

3,05 г (8 ммоль) вышеуказанного соединения гидрируют описанным в примере 1.24 образом. После кипячения в присутствии 50 мл этанола получают 2,03 г (72%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,70: []²⁰= -22,4 (c = 1,0/CH₃OH): т.п.: 180 - 182^oC.

Пример 1.44

п-аминофенил-3-О-карбамоилметил- -D-галактопиранозид



1.44.a) п-нитрофенил-3-О-карбамоилметил- -D-галактопиранозид

Раствор 373 мг (1 ммоль) соединения примера 1.42.а) в 30 мл метанола смешивают с 10 мл 25%-ного водного раствора аммиака и перемешивают в течение 15 минут при комнатной температуре. После сгущения в вакууме остаток сушат в течение 2 часов в вакууме масляного насоса, после чего смешивают с 30 мл этанола. Кипятят с обратным холодильником в течение 5 минут, после охлаждения на ледяной бане отфильтровывают и получают 306 мг (85%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,14; []²⁰= -41,7 (c = 1,0/CH₃OH); т.п.: 229^oC (разл.).

1.44) п-аминофенил-3-О-карбамоилметил- -D-галактопиранозид

287 мг (0,8 ммоль) вышеуказанного соединения гидрируют описанным в примере 1.24 образом. После осаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 207 мг (79%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,10; т.п.: 205^oC (разл.).

Пример 1.45

п-аминофенил-3-O-(N-метил-карбамоилметил)- -D-галактопиранозид



1.45. а) п-нитрофенил-3-O-(N-метил-карбамоилметил)- -D- галактопиранозид

Раствор 373 мг (1 ммоль) соединения примера 1.42.а) в 30 мл метанола смешивают с 10 мл 30%-ного водного раствора метиламина и перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. После сгущения в вакууме остаток сушат в течение 2 часов в вакууме масляного насоса, после чего перекристаллизуют из этанола. Получают 372 мг (100%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,33; []²⁰= -36,7 (c= 1,0/CH₃OH); т.п.: 205^oC.

1.45) п-аминофенил-3-O-(N-метил-карбамоилметил)- -D-галактопиранозид

298 мг (0,8 ммоль) соединения примера 1.45.а) гидрируют описанным в примере 1.24 образом. После осаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 180 мг (66%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, Метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,16; т.п.: 239^oC.

Пример 1.46

п-аминофенил-3-O-(N-пропил-карбамоилметил)- -D-галактопиранозид



1.46. a) п-нитpoфенил-3-O-(N-пpoпил-кapбaмoилметил)- -D-гaлaктoпиpaнoзид

373 мг (1 ммоль) соединения примера 1.42.а) подвергают описанному в примере 1.45. а) взаимодействию с 823 мкл (10 ммоль) н-пропиламина. После сгущения в вакууме остаток осаждают из смеси этанола и н-гексана. Получают 340 мг (85%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15: 3:0,2; R_f = 0,49: []²⁰= -32,4 (c = 1,0/CH₃OH); т.п.: 155^oC.

1.46) п-аминофенил-3-O-(N-пропил-карбамоилметил)- -D-галактопиранозид

320 мг (0,8 ммоль) соединения примера 1.46.а) гидрируют описанным в примере 1.24 образом. После осаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 188 мг (63%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,31: т.п.: 154^oC.

Пример 1.47

п-аминофенил-3-O-(N-бутил-карбамоилметил)- -D-галактопиранозид



1.47.a) п-нитрофенил-3-O-(N-бутил-карбамоилметил)- -D-галактопиранозид

373 мг (1 ммоль) соединения примера 1.42.а) подвергают описанному в примере 1.45. а) взаимодействию с 900 мкл (10 ммоль) н-бутиламина. После сгущения в вакууме остаток осаждают из смеси этанола и н-гексана. Получают 413 мг (100%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,51; []²⁰= -26,8 (c = 1,0/CH₃OH); т.п.: 92^oC.

1.47) п-аминофенил-3-O-(N-бутил-карбамоилметил)- -D-галактопиранозид

332 мг (0,8 ммоль) соединения примера 1.47.а) гидрируют описанным в примере 1.24 образом. После осаждения из смеси этанола и н-гексана получают 105 мг (34%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанолами аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2: R_f = 0,32; т.п.: 135^oC.

Пример 1.48

п-аминофенил-3-O-метоксикарбонилметил- -D-маннопиранозид



1.48. a) п-нитрофенил-3-О-метоксикарбонилметил-6-О-трифенилметил- -D-маннопиранозид

13,6 г (25 ммоль) соединения примера 1.40.а) подвергают описанной в примере 1.42. а) реакции. После флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1 получают наряду с несколькими побочными продуктами 2,79 г (18%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; R_f = 0,50; т.п.: 95 - 97^oC.

1.48) п-аминофенил-3-О-метоксикарбонилметил-6-O- трифенилметил- -D-маннопиранозид

1,23 г (2 ммоль) соединения примера 1.48.а) гидрируют описанным в примере 1.40 образом и обрабатывают. Получают 250 мг (36%) коричневатого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,45.

Пример 1.49

п-аминофенил-3-О-карбоксиметил- -D-маннопиранозид



1.49. а) п-нитрофенил-3-О-бензоксикарбонилметил-6-О- трифенилметил- -D-маннопиранозид

13,6 г (25 ммоль) соединения примера 1.40.а) подвергают описанному в примере 1.42. а) взаимодействию с 14,4 мл (90 ммоль) сложного бензилового эфира бромуксусной кислоты. После флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 20:1-10: 1 получают наряду с некоторыми побочными продуктами 5,0 г (29%) желтоватой пены. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; R_f = 0,66; []²⁰= +74,8 (c = 1,0/CH₂Cl₂).

1.49) п-аминофенил-3-О-карбоксиметил- -D-маннопиранозид

2,08 г (3 ммоль) вышеуказанного соединения гидрируют описанным в примере 1.40 образом в течение 36 часов. После сгущения фильтрата остаток осаждают из смеси этанола и н-гексана. В результате промывания этилацетатом и повторного осаждения из смеси этанола и диэтилового эфира получают 495 мг (50%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,53: т.п.: 205 - 207^oC.

Пример 1.50

п-аминофенил-3-О-карбамоилметил- -D-маннопиранозид



1.50. a) п-нитрофенил-3-О-карбамоилметил-6-О-трифенилметил- -D-маннопиранозид

1,04 г (1,5 ммоль) соединения примера 1.49.а) подвергают описанной в примере 1.44. а) реакции. Остаток сушат в вакууме масляного насоса, после чего его очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:3. Получают 561 мг (62%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,67; []²⁰= +91,3 (c= 1,0/CH₂Cl₂); т.п.: 125 - 127^oC.

1.50) п-аминофенил-3-О-карбамоилметил- -D-маннопиранозид

541 г (0,9 ммоль) вышеуказанного соединения гидрируют описанным в примере 1.40 образом в течение 48 часов. После сгущения фильтрата остаток интенсивно промывают метанолом и получают 134 мг (45%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f= 0,21; т.п.: 126 - 128^oC.

Пример 1.51

п-аминофенил-3-десокси- -D-галактопиранозид



1.51.а) п-нитрофенил-2,6-ди-О-бензил-4-О-ацетил- -D-галактопиранозид

Раствор 2,7 г (5,6 ммоль) соединения примера 1.31.6) в 20 мл дихлорметана смешивают с 3 мл (16,3 ммоль) триэтилортоацетата и 20 мг толуолсульфокислоты. Реакционную смесь держат при комнатной температуре в течение 30 минут, после чего разбавляют 200 мл дихлорметана, промывают 50 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. Полученную бесцветную пену растворяют в 15 мл 80%-ной уксусной кислоты. Реакционную смесь держат при комнатной температуре в течение дополнительных 30 минут, после чего подают в 200 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, три раза экстрагируют хлороформом, взятым в количестве по 75 мл, объединенные органические фазы промывают 100 мл воды, сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. В результате осаждения из смеси этанола и петролейного эфира получают 2,43 г (83%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1; R_f = 0,64; []²⁰= -62,1 (с = 1,0/CH₂Cl₂); т.п.: 83^oC.

1.51. б) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3-O- трифторметансульфонил-4-O-ацетил- -D-галактопиранозид

К раствору 2,3 г (4,4 ммоль) соединения примера 1.51.а) в смеси 30 мл дихлорметана и 3 мл пиридина в атмосфере аргона при температуре -20^oC прикапывают раствор 2 мл (11,8 ммоль) ангидрида трифторметансульфокислоты в 30 мл дихлорметана. Реакционную смесь оставляют стоять при температуре -20^oC в течение часа, после чего подают в 200 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, органическую фазу отделяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала толуола, а потом смеси толуола и этилацетата в соотношении 20: 1 получают 2,39 г (83%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь толуола и этилацетата в соотношении 5:1; R_f = 0,55; []²⁰= -61,4 (c= 1,0/CH₂Cl₂); т.п.: 105^oC.

1.51.в) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3-десокси- -D-галактопиранозид

1,31 г (2 ммоль) вышеуказанного соединения растворяют в 25 мл толуола и смешивают с 1,54 г (6 ммоль) тетраборгидрата тетрабутиламмония. Реакционную смесь держат при температуре 80^oC в течение 2 часов, после чего разбавляют 200 мл дихлорметана, промывают 50 мл воды, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и сгущают в вакууме. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси толуола и этилацетата в соотношении 7: 1 получают 596 мг (64%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь толуола и этилацетата в соотношении 5:1; R_f = 0,10; []²⁰= -81,3 (с = 1,0/CH₂Cl₂); т.п.:114^oC.

1.51) п-аминофенил-3-десоксит- -D-галактопиранозид

465 мг (1 ммоль) соединения примера 1.51.в) гидрируют описанным в примере 1.40 образом в течение 6 часов. После сгущения фильтрата остаток осаждают из смеси этанола и петролейного эфира и получают 206 мг (81%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2, R_f = 0,22.

Пример 1.52

п-аминофенил-3,4-дидесокси- -D-галактопиранозид



1.52. а) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3,4-ди-O- трифторметансульфонил- -D-галактопиранозид

2,12 г (4,4 ммоль) соединения примера 1.31.б) подвергают описанному в примере 1.51. б) взаимодействию с 4 мл (23,6 ммоль) ангидрида трифторметансульфокислоты. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала толуола, а потом смеси толуола и этилацетата в соотношении 50: 1 получают 2,75 г (84%) желтоватого масла. Тонкослойная хроматография: месь толуола и этилацетата в соотношении 5:1; R_f = 0,67; []²⁰= -22,5 (c = 1,0/CH₂Cl₂).

1.52. б) п-нитрофенил-2,6-ди-O-бензил-3,4-дидесокси- -D-галактопиранозид

1,49 г (2 ммоль) соединения примера 1.52.а) подвергают описанному в примере 1.51. В) взаимодействию с 2,31 г (9 ммоль) тетраборгидрата тетрабутиламмония. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала толуола, а потом смеси толуола и этилацетата в соотношении 50: 1 получают 629 мг (70%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь толуола и этилацетата в соотношении 5:1; R_f = 0,53; []²⁰= -79,1 (c = 1,0/CH₂Cl₂), т.п.: 89^oC.

1.52) п-аминофенил-3,4-дидесокси- -D-галактопиранозид

450 мг (1 ммоль) соединения примера 1.52.б) гидрируют описанным в примере 1.40 образом в течение 5 часов. После сгущения фильтрата остаток осаждают из смеси этанола и петролейного эфира, в результате чего получают 183 мг (76%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2: R_f = 0,47; []²⁰= 115,1 (c= 1,0/CH₃OH); т.п.: 187^oC.

Пример 1.53

п-аминофенил-6-О-ацетил- -D-галактопиранозид



1.53.а) п-нитрофенил-6-О-ацетил- -D-галактопиранозид

К раствору 7,53 г (25 ммоль) п-нитрофенил- -D- галактопиранозида в 80 мл абсолютного ацетонитрила при температуре 0^oC прикапывают свежий раствор 2 мл (25 ммоль) пиридина и 1,85 мл (26 ммоль) ацетилхлорида в 20 мл ацетонитрила. Перемешивают при 0^oC в течение 30 минут и сгущают в вакууме. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 50: 1-20: 1 получают 4,02 г (47%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3: 0,2; R_f = 0,50.

1.53) п-аминофенил-6-О-ацетил- -D-галактопиранозид

1,72 г (5 ммоль) соединения примера 1.53.а) гидрируют описанным в примере 1.40 образом в течение 2 часов. После сгущения фильтрата остаток переосаждают из смеси метанола и диэтилового эфира и получают 1,34 г (86%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2: R_f = 0,34; []²⁰= -41,0 (с = 0,56/CH₃OH); т.п.: 180^oC (разл.).

Пример 1.54

п-аминофенил-3,4-ди-O-метоксикарбонилметил- -D-галактопиранозид



1.54.а) Ацилирование соединения примера 1.24.a)

1,36 г (3 ммоль) соединения примера 1.24.а) растворяют в 25 мл диметилформамида и смешивают с 1 мл (10,6 ммоль) сложного метилового эфира бромуксусной кислоты и порциями с 300 мг (10 ммоль) 80%-ной суспензии гидрида натрия в минеральном масле. Через 3,5 часа при комнатной температуре к смеси добавляют еще 250 мкл (2,65 ммоль) сложного метилового эфира бромуксусной кислоты и 75 мг (2,5 ммоль) гидрида натрия в минеральном масле. По истечении 2 часов реакцию прекращают прикапыванием 5 мл метанола и сгущают в вакууме. Остаток подают в 250 мл дихлорметана и раствор интенсивно перемешивают с 100 мл воды. Органическую фазу сушат над 10 г сульфата магния, сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 10:1-7:1-5:1-3:1. Получают 3 фракции продукта:

Фракция 1:

401 мг (21%) п-нитрофенил-2,3,4-три-O- метоксикарбонилметил- -D-галактопиранозида в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,47; []²⁰= -51,9 (с=0,26/CH₃OH).

Фракция 2: не идентифицирована; 88 мг бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,39; []²⁰= -61,5 (c= 0,26/CH₃OH).

Фракция 3:

275 мг (16%) п-нитрофенил-3,4-ди-O- метоксикарбонилметил- -D-галактопиранозида в виде бесцветной пены. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,30; []²⁰= -38,6 (с = 0,28/CH₃OH).

1.54) п-аминофенил-З,4-ди-О-метоксикарбонилметил- -D-галактопиранозид

206 мг (0,3 ммоль) фракции 3 примера 1.54.а) гидрируют описанным в примере 1.40 образом в течение 16 часов. Фильтрат сгущают, остаток кипятят в присутствии 20 мл диэтилового эфира, после чего получают 45,6 мг (37%) серых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,22; т.п.: 155^oC (разл.).

Пример 1.55

п-аминофенил-2,3,4-три-O-метоксикарбонилметил- -D-галактопиранозид



380 мг (0,5 ммоль) фракции 1 примера 1.54.а) гидрируют описанным в примере 1.40 образом в течение 16 часов. Фильтрат сгущают, остаток кипятят в присутствии 20 мл диэтилового эфира, после чего получают 46,8 мг (19%) желто-коричневого масла. Тонкослойная хроматография: смесь петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1; R_f = 0,29; т.п.: 106^oC (разл.).

Пример 1.56

п-аминофенил-4-O-( -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозид



4,63 г (10 ммоль) п-нитрофенил-4-O-( -D-галактопиранозил)- -D-галактопиранозида гидрируют описанным в примере 1.23 образом. Получают 3,04 г (70%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,55; т.п.: 235 - 237^oC (разл.).

Пример 1.57

Натриевая соль п-аминофенил-4-O-(3"-сульфат- -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозида



1.57. а) п-нитpoфенил-4-O-(3", 4"-O-изoпpoпидилен- -D- гaлaктoпиpaнoзил)--D-глюкопиранозид

23,2 г (50 ммоль) п-нитрофенил-4-O-( D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозида смешивают с 400 мл диметоксипропана и каталитическим количеством ()-камфора-10-сульфокислоты (400 мг, 1,7 ммоль). После реакции при комнатной

температуре в течение 3 суток реакцию прекращают добавкой 240 мкл (1,7 ммоль) триэтиламина, сгущают в вакууме и сушат 2 часа в вакууме масляного насоса. Полученные кристаллы подают в 500 мл смеси метанола и воды в соотношении 10:1 и кипятят с обратным холодильником в течение 6 часов. После сгущения в вакууме и очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 25:1-10:1, каждый раз в присутствии 0,5% триэтиламина, получают 15,2 г (60%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,49; т.п.: 253 - 255^oC (разл.).

1.57. б) п-нитрофенил-2,3,6-три-O-бензоил-4-0-(2", 6"-ди-O- бензоил-3", 4"-O-изопропидилен- -D-галактопиранозил)- -D- глюкопиранозид

К раствору 15,1 г (30 ммоль) соединения примера 1.57.а) в 300 мл пиридина при температуре 0^oC в течение 30 минут медленно прикапывают 50 мл (430 ммоль) бензоилхлорида. Перемешивают еще 2 часа при комнатной температуре, после чего реакционную смесь при перемешивании подают в 2000 мл ледяной воды. Через 15 минут выпавшие кристаллы отфильтровывают и подают в 1500 мл дихлорметана. Раствор два раза промывают водой, взятой в количестве по 500 мл, и два раза - 1н. раствором бикарбоната натрия, взятым в количестве по 500 мл. Органическую фазу сушат над 50 г сульфата магния, сгущают в вакууме и очищают путем перекристаллизации из метанола. Получают 26,7 г (87%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 50:1; R_f = 0,49; []²⁰= +23,6 (с = 1,08/CH₂Cl₂; т.п.: 272 - 274^oC.

1.57. в) п-нитрофенил-2,3,6-три-О-бензоил-4-0-(2",6"-ди-О-бензоил- -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозид

К раствору 20,5 г (20 ммоль) соединения примера 1.57.6) в 400 мл дихлорметана добавляют 20 мл 99%-ной трифторуксусной кислоты и перемешивают при комнатной температуре в течение 20 минут. Раствор два раза промывают 1н. раствором бикарбоната натрия, взятым в количестве по 200 мл, органическую фазу сушат над 10 г сульфата магния, сгущают в вакууме и остаток очищают путем осаждения из смеси дихлорметана и диэтилового эфира. Получают 18,0 г (91%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 20:1; R_f = 0,18; т.п.: 234^oC.

1.57. г п-нитрофенил-2,3,6-три-O-бензоил-4-O-(2",6"-ди-O- бензоил-4"-O-ацетил- -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозид.

5,5 г (5,6 ммоль) соединения примера 1.57.в) подвергают описанной в примере 1.51. а) реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 3: 1 - 1:1 получают 4,03 г (70 %) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 20:1; R_f = 0,67; т.п.: 118^oC.

1.57. д) Натриевая соль п-нитрофенил-2,3,6-три-O-бензоил-4-O- (2",6"-ди-O-бензоил-3"-сульфат-4"-O-ацетил- -D- галактопиранозил)- -D-глюкопиранозида

Раствор 3,59 г (3,5 ммоль) соединения примера 1.57.г) в 200 мл пиридина смешивают с 4,5 г (28 ммоль) комплекса триоксида серы и пиридина, после чего перемешивают сначала при температуре 60^oC в течение 2 часов, а потом при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакцию прекращают прикапыванием 50 мл метанола и сгущают в вакууме. Остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10:1. Получают твердый продукт, который подают в 200 мл смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1, после чего смешивают с 10 г Amberlite IR120 в виде Na⁺. Данную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение часа, фильтруют и фильтрат сгущают в вакууме. Получают 3,64 г (92%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 2:1; R_f = 0,87: т.п.: 168^oC.

1.57. e) Натриевая соль п-нитрофенил-4-O-(3"-сульфат- -D- галактопиранозил)- -D-глюкопиранозида

3,4 г (3 ммоль) соединения примера 1.57.д) растворяют в 150 мл абсолютного метанола, смешивают с 200 мг метилата натрия и перемешивают при температуре 60^oC в течение 7 часов. После охлаждения до комнатной температуры нейтрализуют с помощью Lewatit SC108 в виде H⁺ и фильтруют. Значение pH фильтрата прикапыванием 1н. натрового щелока повышают до pH 7-8, упаривают в вакууме и в результате переосаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 1,30 г (77%) слегка коричневатых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 2:1; R_f = 0,55: т.п.: 230^oC (разл.).

1.57) Натриевая соль п-аминофенил-4-О-(3"сульфат- -D- галактопиранозил)- -D-глюкопиранозида

1,13 г (2 ммоль) вышеуказанного соединения восстанавливают описанным в примере 1.24 образом. После кипячения в присутствии 50 мл диэтилового эфира получают 983 мг (92%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 2:1; R_f = 0,22; т.п.: 176^oC (разл.).

Пример 1.58

п-аминофенил-4-O-(3"-O-метил- -D-галактопиранозил)- -D- глюкопиранозид



1.58. а) Селективное метилирование п-нитрофенил-4-O-( -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозида

2,3 г (5 ммоль) п-нитрофенил-4-O-( -D-галактопиранозил)- - D-глюкопиранозида метилируют описанным в примере 1.25.а) образом. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 20:1-10:1-5:1 получают два продукта:

Фракция 1:

264 мг (11%) п-нитрофенил-2-O-метил-4-O-(3"-O-метил- -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозида в виде бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,46; []²⁰= -73,9 (с = 1,0/CH₃OH): т.п.: 228^oC (разл.).

Фракция 2:

1,0 г (42%) п-нитpoфенил-4-O-(3"-O-метил- -D-гaлaктoпиpaнoзил)- -D-глюкoпиранозида в виде бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,29; []²⁰= -65,3 (c = 1,1/CH₃OH); т.п.: 220^oC.

1.58) п-aминoфенил-4-O-(3"-O-метил- -D- гaлaктoпиpaнoзил)- -D-глюкoпиранозид

955 мг (2 ммоль) фракции 2 примера 1.58.а) восстанавливают описанным в примере 1.24 образом. После промывания 50 мл диэтилового эфира получают 894 мг (100%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,08; т.п.: 129^oC (разл.).

Пример 1.59

п-аминофенил-2-O-метил-4-O-(3"-O-метил- -D- галактопиранозил)- -D-глюкопиранозид



246 мг (0,5 ммоль) фракции 1 примера 1.58.а) восстанавливают описанным в примере 1.24 образом. После промывания 20 мл диэтилового эфира получают 186 мг (81%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,13; []²⁰= -3,6 (c = 1,0/CH₃OH); т.п.:105^oC.

Пример 1.60

п-аминофенил-4-O-(3", 4"-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозид



1.60. а) п-нитрофенил-2,3,6-три-O-бензил-4-0-(2",6"-ди-O- бензил-3",4"-O-изопропилиден- -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозид

5,0 г (10 ммоль) соединения примера 1.57.а) подвергают описанному в примере 1.26. в) взаимодействию с 30 мл (250 ммоль) бензилбромида в течение 16 ч. После сгущения в вакууме остаток подают в 300 мл этилацетата и раствор промывают 200 мл воды. Органическую фазу сушат над 10 г сульфата магния, сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси дихлорметана и метанола в соотношении 5:1, а потом дихлорметана. Получают 5,3 г (56%) коричневатого масла. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 50:1; R_f = 0,70; []²⁰= -23,2 (c = 1,08/CH₂Cl₂).

1.60. б) п-нитрофенил-2,3,6-три-O-бензил-4-O-(2",6"- ди-O-бензил- -D-галактопиpaнoзил)- -D-глюкoпиpaнoзид

4,77 г (5 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 1.57. в) реакции. После сгущения в вакууме и осаждения из смеси диэтилового эфира и петролейного эфира получают 3,94 г (86%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 50:1; R_f= 0,36: т.п.: 116^oC.

1.60. в) п-нитрофенил-2,3,6-три-O-бензил-4-O-(2",6"-ди-O- бензил-3",4"-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозид

1,8 г (2 ммоль) соединения примера 1.60.б) метилируют описанным в примере 1.24. в) образом. В результате осаждения из смеси дихлорметана и петролейного эфира получают 1,55 г (82%) бесцветных кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 50:1; R_f = 0,74; т.п.: 161 - 162^oC.

1.60) п-аминофенил-4-O-(3",4"-ди-O-метил- -D- галактопиранозил)- -D-глюкопиранозид

1,41 г (1,5 ммоль) соединения примера 1.60.в) растворяют в 50 мл метанола. После добавки 500 мг влажной гидроокиси палладия на угле (20% палладия) гидрируют в атмосфере водорода при незначительном избыточном давлении в течение 6 суток. Суспензию фильтруют на силикате марки Celite, после чего фильтруемый материал интенсивно промывают 100 мл метанола. В результате сгущения фильтрата в вакууме и промывания остатка дихлорметаном получают 425 мг (61%) коричневатых кристаллов. Т.п.: 124^oC (разл.).

Пример 2.1

N-аланил-батрацилин



2.1.а) N-[N-(трет-бутоксикарбонил)-аланил]-батрацилин

3,3 г (17,5 ммоль) N-(трет-бутоксикарбонил)-аланина и 6,8 мл (23 ммоль) 2-изобутокси-1-изобутоксикарбонил-1,2-дигидро-хинолина растворяют в 100 мл дихлорметана. После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 минут к смеси добавляют раствор 4,1 г (16,5 ммоль) батрацилина в 350 мл абсолютного диметилформамида, после чего реакционную смесь перемешивают еще 48 часов при комнатной температуре. Потом сгущают в вакууме до 50 мл, наполняют этилацетатом до 300 мл и сразу кипятят в течение 10 минут. Смеси дают охлаждаться до комнатной температуры, отфильтровывают и фильтруемый материал еще раз кипятят в присутствии 200 мл этилацетата. После охлаждения при перемешивании до 0^oC и фильтрации получают 6,18 г (84%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат: R_f = 0,57; т.п.: 246 -247^oC (разл.).

2.1) N-аланил-батрацилин

Раствор 10,5 г (25 ммоль) соединения примера 2.1.а) в 150 мл безводной трифторуксусной кислоты перемешивают при комнатной температуре в течение 15 минут. После сгущения в вакууме до 30 мл реакционную смесь при интенсивном перемешивании подают в 1000 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Перемешивают еще в течение 10 минут, отфильтровывают и промывают водой, небольшим количеством изопропанола и диэтиловым эфиром. Получают 7,15 г (89%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,06; т.п.: 261 - 262^oC (разл.).

Пример 2.2

Ди-трифторацетат N-[лизил-аланил]-батрацилина



2.2.а) N-[ N,N ди-(трет-бутоксикарбонил)-лизил- аланил]-батрацилин

2,1 г (6 ммоль) N,N-ди-(трет-бутоксикарбонил)-лизина и 2,4 мл (8 ммоль) 2-изобутокси-1-изобутокси-карбонил-1,2-дигидро-хинолина растворяют в 20 мл дихлорметана. После 20-минутного перемешивания при комнатной температуре к смеси добавляют раствор 1,6 г (5 ммоль) соединения примера 2.1 в 40 мл диметилформамида и перемешивают еще 16 часов при комнатной температуре. Потом сгущают в вакууме и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 2:1-1:1, а потом этилацетата. Получают 2,89 г (89%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,52; т.п.: 203 - 204^oC.

2.2) Ди-трифторацетат N-[лизил-аланил]-батрацилина

Суспензию 2,6 г (4 ммоль) вышеуказанного соединения в 25 мл дихлорметана смешивают с 10 мл безводной трифторуксусной кислоты, после чего полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. После сгущения в вакууме остаток кристаллизуют добавкой 100 мл диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и интенсивно промывают диэтиловым эфиром. Получают 2,68 г (99%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,05; т.п.: 144 - 146^oC (разл.).

Пример 2.3

N-[D-аланил]-батрацилин



2.3.а) N-[N-бензилоксикарбонил-D-аланил]-батрацилин

3,9 г (17,5 ммоль) N-бензилоксикарбонил-D-аланина подвергают описанной в примере 2.1.а) реакции и перерабатывают. Полученные желтые кристаллы (6,4 г, 80%) отделяют путем фильтрации. Объединенные фильтраты сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 3:2-1:1. Получают еще 1,35 г (17%) продукта. Тонкослойная хроматография: этилацетат: R_f = 0,45; т.п.: 256^oC; []²⁰= +75,1 (с = 1,0/CH₂Cl₂ + 0,5%CH₂OH).

2.3) N-[D-аланил]-батрацилин

11,4 г (25 ммоль) соединения примера 2.3.а) растворяют в 100 мл 33%-ного раствор бромистого водорода в ледяной уксусной кислоте. Смесь держат при комнатной температуре в течение 30 минут, после чего реакционную смесь сгущают в вакууме до 30 мл, после чего при интенсивном перемешивании ее подают в 1000 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Перемешивают еще 10 минут, отфильтровывают и промывают водой, небольшим количеством изопропанола и диэтиловым эфиром. Получают 7,87 г (98%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,06; т.п.: 267^oC (разл.).

Пример 2.4 N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)-лизил-D-аланил]- батрацилин



2.4. а) N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)- лизил-D-аланил]-батрацилин

5,3 г (11,3 ммoль) N- (тpет-бутoкcикapбoнил)- N- (флуopенил-9-мeтoкcикapбoнил)-лизина и 4 мл (14 ммоль) 2-изобутокси-1-изобутоксикарбонил-1,2-дигидро-хинолина растворяют в 40 мл дихлорметана. После 20-минутного перемешивания при комнатной температуре к смеси добавляют раствор 3,2 г (10 ммоль) соединения примера 2.3 в 80 мл диметилформамида, после чего реакционную смесь перемешивают еще 16 часов при комнатной температуре. Потом сгущают в вакууме и остаток суспендируют в 100 мл дихлорметана. К полученной суспензии добавляют 300 мл диэтилового эфира. После фильтрации и промывки фильтруемого материала диэтиловым эфиром получают 5,65 г (65%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,45; т.п.: 186^oC.

2.4) N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)-лизил-D-аланил]-батрацилин

5,6 г (7,3 ммоль) вышеуказанного соединения растворяют в 50 мл диметилформамида. После добавки 50 мл пиперидина перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов, сгущают в вакууме и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,1-15:5:0,1. Получают 2,5 г (62%) желтых кристаллов. Т.п.: 217^oC (разл.).

Пример 2.5

Трифторацетат N-[ N- (флуоренил-9- метоксикарбонил)-лизил-D-аланил]-батрацилина



2.5.а) N-[ N- (флуоренил-9-метоксикарбонил) N- (трет-бутоксикарбонил)- лизил-D-аланил]-батрацилин

5,3 г (11,3 ммоль) N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)- N- (трет- бутоксикарбонил)-лизина подвергают описанной в примере 2.4.а) реакции и очищают. Получают 7,0 г (80%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; _f = 0,51; т.п.: 223^oC.

2.5) Трифторацетат N-[ N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизил- D-аланил]-батрацилина

6,17 г (8 ммоль) соединения примера 2.5.а) подвергают описанной в примере 2.2 реакции. После сгущения в вакууме остаток осаждают из смеси дихлорметана и диэтилового эфира и получают 6,08 г (97%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,05; т.п.: 224^oC (разл.).

Пример 2.6

Трифторацетат N-[ N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизил-D-аланил] - батрацилина



6,17 г (8 ммоль) соединения примера 2.4.а) подвергают описанной в примере 2.2 реакции. После сгущения в вакууме остаток переосаждают из смеси дихлорметана и диэтилового эфира и получают 5,97 г (95%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,04: т.п.: 188^oC (разл.).

Пример 2.7

Ди-трифторацетат N-[лизил-D-аспарагил]-батрацилина



2.7. a) N-[N-(флуopенил-9-метoкcикapбoнил)-D-acпapaгил- (сложный трет-бутиловый эфир)]-батрацилин

7,2 г (17,5 ммоль) N-(флуоренил-9-метоксикарбонил)- D-аспарагил-(сложного трет-бутилового эфира)] подвергают описанной в примере 2.1.а) реакции. После сгущения в вакууме остаток подают в 1000 мл дихлорметана и два раза промывают 1н. соляной кислотой, взятой в количестве по 200 мл, и 200 мл 1н. раствора бикарбоната натрия. Продукт сушат над 20 г сульфата магния, фильтруют и сгущают до 100 мл. После добавки петролейного эфира получают 9,7 г (86%) соединения примера 2.7.а) в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; _f = 0,71; т.п.: 195^oC.

2.7.б) N-[D-аспарагил-(сложный -трет-бутиловый эфир)]- батрацилин

6,4 г (10 ммоль) вышеуказанного соединения растворяют в 100 мл дихлорметана. После добавки 50 мл морфолина перемешивают при комнатной температуре в течение 5 часов, сгущают в вакууме и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 4:1, затем этилацетата и потом смеси этилацетата и этанола в соотношении 10: 1. Получают 3,44 г (82%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; _f = 0,21; т.п.: 209^oC (разл.).

2.7.в) N-[ N,N- -ди-(трет-бутоксикарбонил)-лизил-D- аспарагил-(сложный -трет-бутиловый эфир)]-батрацилин

2,1 г (5 ммоль) соединения примера 2.7.6) подвергают описанной в примере 2.2. а) реакции. Получают 1,71 г (46%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат: R_f = 0,61; т.п.: 142^oC.

2.7) Ди-трифторацетат N-[лизил-D-аспарагил]-батрацилина

1,65 г (2,2 ммоль) соединения примера 2.7.в) подвергают описанной в примере 2.2 реакции и очищают. Получают 1,5 г (95%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь метанола и уксусной кислоты в соотношении 10:1; R_f = 0,29; т.п.: 154 - 155^oC (разл).

Пример 2.8

Ди-гидробромид N-[лизил-D-глутамил]-батрацилина



2.8. а) N-[N-(трет-бутоксикарбонил)-D-глутамил-(сложный -трет-бутиловый эфир)]-батрацилин

5,9 г (17,5 ммоль) N-(трет-бутоксикарбонил)-D-глутамил- (сложного трет-бензилового эфира) подвергают описанной в примере 2.1.а) реакции. После сгущения в вакууме остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1 с получением 9,45 г (95%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,61; []²⁰= +53,1 (c = 1,0/CH₂Cl₂): т.п.: 159^oC.

2.8.б) N-[D-глутамил-(сложный -бензиловый эфир)]-батрацилин

9,1 г (10 ммоль) соединения примера 2.8.а) растворяют в 100 мл муравьиной кислоты и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 6 часов. После сгущения в вакууме остаток подают в 100 мл метанола и значение pH раствора осторожный добавкой 25%-ного водного раствора аммиака повышают до pH 8. После повторного сгущения в вакууме и последующей очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и этанола в соотношении 10: 1 получают 4,2 г (56%) продукта в виде желтого масла. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,06.

2.8.в) N-[ N,N- ди-(тpет-бутoкcикapбoнил)-лизил-D- глутaмил-(сложный -бензиловый эфир)]-батрацилин

3,75 г (8 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 2.2. а) реакции и очищают его. Получают 2,26 г (35%) желтого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,40; []²⁰= +32,1 (с =1,2/CH₂Cl₂).

2.8) Ди-гидробромид N-[лизил-D-глутамил]-батрацилина

2,0 г (2,5 ммоль) соединения примера 2.8.в) растворяют в 33%-ном растворе бромистого водорода в 50 мл ледяной уксусной кислоты. Реакционную смесь держат при комнатной температуре в течение часа, после чего сгущают в вакууме и остаток интенсивно промывают диэтиловым эфиром. Получают 1,63 г (98%) продукта в виде желто-красных кристаллов, т.п.: 207 - 209^oC (разл.).

Пример 2.9

Ди-трифторацетат N-[лизил-глицил]-батрацилина



2.9.a) N-[N-(трет-бутоксикарбонил)-глицил]-батрацилин

3,07 г (17,5 ммоль) N-(трет-бутоксикарбонил)-глицина подвергают описанной в примере 2.1. а) реакции. Реакционную смесь держат при комнатной температуре в течение 3 дней, после чего сгущают в вакууме и остаток подают в 200 мл этанола. Перемешивают с обратным холодильником в течение 30 минут, охлаждают, фильтруют и получают 4,73 г (66%) целевого соединения в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,44; т.п.: 279^oC (разл.).

2.9.6) Гидрохлорид N-глицил-батрацилина

4,1 г (10 ммоль) вышеуказанного соединения при нагревании в ультразвуковой бане растворяют в 1200 мл дихлорметана. После добавки хлористого водорода в 100 мл диэтилового эфира перемешивают 30 минут при комнатной температуре, сгущают в вакууме и остаток смешивают с 200 мл этанола. После 10-минутного перемешивания с обратным холодильником, охлаждения и фильтрации получают 3,21 г (94%) продукта в виде желтых кристаллов, т.п.: 297 - 299^oC (разл. ).

2.9.в) N-[ N,N- ди-(трет-бутоксикарбонил)-лизил-глицил]-батрацилин

2,1 г (6 ммоль) N,N-ди-(трет-бутоксикарбонил)-лизина и 2,4 мл (8 ммоль) 2-изобутокси-1-изобутоксикарбонил-1,2-дигидро-хинолина растворяют в 20 мл дихлорметана. После 20-минутного перемешивания при комнатной температуре к смеси добавляют раствор 1,71 г (6 ммоль) соединения примера 2.9.б), 0,86 мл (5 ммоль) этилдиизопропиламина и 40 мл диметилформамида, после чего реакционную смесь перемешивают еще 16 часов при комнатной температуре. Затем сгущают в вакууме и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 1: 1, а потом этилацетата. Получают 1,69 г (53%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,31; т.п.: 211^oC (разл.).

2.9) Ди-трифторацетат N-[лизил-глицил]-батрацилина

1,4 г (2,2 ммоль) соединения примера 2.9.в) подвергают описанной в примере 2.2 реакции и очищают его. Получают 1,33 г (91%) продукта в виде желтых кристаллов. Т.п: 153^oC (разл.).

2.10.а) N-[N-(трет-бутоксикарбонил)-серил]-батрацилин

3,6 г (17,5 ммоль) N(трет-бутоксикарбонил)-серина подвергают описанной в примере 2.1.а) реакции. По истечении 48 часов сгущают в вакууме до 100 мл и смешивают с 2 л дихлорметана. Полученный раствор промывают 500 мл воды, два раза - 0,5н. соляной кислотой, взятой в количестве по 250 мл, и 250 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Сушат над 50 г сульфата магния и растворитель отгоняют в вакууме. Остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1: 1 и получают 4,6 г (64%) соединения примера 2.10.а) в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и уксусной кислоты в соотношении 100:1; R_f = 0,38; т.п.: 219^oC (разл.); []²⁰= -61,0 (с = 0,5/CH₂Cl₂ + 0,5% CH₃OH).

2.10.б) Гидрохлорид N-серил-батрацилина

Суспензию 4,6 г (10,4 ммоль) вышеуказанного соединения в 70 мл диоксана при перемешивании смешивают с 10 мл концентрированной соляной кислоты, после чего интенсивно перемешивают при комнатной температуре в течение часа. Потом сгущают в вакууме и остаток сушат в вакууме масляного насоса в течение 2 часов. После добавки 100 мл этанола кипятят с обратным холодильником в течение 15 минут. После охлаждения и отсасывания получают 1,97 г (96%) продукта в виде оранжевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,05; []²⁰= +51,8 (c = 1,0/H₂O); т.п.: > 270^oC (разл.).

2.10.в) N-[ N,N- ди-(трет-бутоксикарбонил)- лизил-серил]-батрацилин

1,86 г (5 ммоль) соединения примера 2.10.б) подвергают описанной в примере 2.9.в) реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1, а потом этилацетата получают 1,18 г (36%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и уксусной кислоты в соотношении 100: 1; R_f = 0,24; т.п.: 188^oC (разл.); []²⁰= -13,1 (c = 0,5/CH₂Cl₂ + 0,5% CH₃OH).

2.10) Ди-трифторацетат N-[лизил-серил]-батрацилина

1,0 г (1,5 ммоль) соединения примера 2.10.в) подвергают описанной в примере 2.2 реакции и продукт очищают. Получают 1,0 г (96%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,10; т.п.: 188 - 190^oC (разл.).

Пример 2.11

Ди-гидробромид N-[лизил-D-серил]-батрацилина



2.11. а) N-[N-(флуоренил-9-метоксикарбонил)-O-(трет-бутил)-D- серил]-батрацилин

6,7 г (17,5 ммоль) N-(флуоренил-9-метоксикарбонил)-O- (трет-бутил)-D-серина подвергают описанной в примере 2.1.а) реакции. После сгущения в вакууме и очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1 получают 5,64 г (52%) соединения примера 2.11. а) в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,87; т.п.: 225 - 226^oC (разл.).

2.11.б) N-[O-(трет-бутил)-D-серил]-батрацилин

2,89 г (4,7 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 2.7.6) реакции. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 3:2, а потом этилацетата получают 1,15 г (62%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; _f = 0,11; т.п.: 197^oC.

2.11. в) N-[ N,N- ди-(трет-бутоксикарбонил)-лизил-O- (трет-бутил)-D-серил]-батрацилин

1,1 г (2,8 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 2.2.а) реакции. Получают 1,94 г (96%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,59; т.п.: 208^oC.

2.11.г) Ди-трифторацетат N-[лизил-O-(трет-бутил)-D- серил]-батрацилина

1,08 г (1,5 ммоль) соединения примера 2.11.в) подвергают описанной в примере 2.2 реакции. После очистки получают 1,1 г (98%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь метанола и уксусной кислоты в соотношении 10:1; R_f= 0,30; т.п.: 128^oC.

2.11) Ди-гидробромид N-[лизил-D-серил]-батрацилина

1,05 г (1,4 ммоль) соединения примера 2.11.г) подвергают описанной в примере 2.8 реакции. После очистки получают 846 мг (96%) продукта в виде желто-красных кристаллов. Т.п.: 247 - 248^oC.

Пример 2.12

Ди-гидробромид N-[лизил-D-треонил]-батрацилина



2.12. а) N-[N-(флуоренил-9-метоксикарбонил)-O-(трет-бутил)-D- треонил]-батрацилин

6,96 г (17,5 ммоль) N-(флуоренил-9-метоксикарбонил)-O-(трет- бутил)-D-треонина подвергают описанной в примере 2.1.а) реакции. После сгущения в вакууме и очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси петролейного эфира и этилацетата в соотношении 1:1 получают 7,45 г (68%) соединения примера 2.12. а) в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,63; т.п.: 225 - 226^oC.

2.12.б) N-[O-(трет-бутил)-D-треонил]-батрацилин

3,8 г (6 ммоль) соединения примера 2.12.а) подвергают описанной в примере 2.7.6) реакции. После сгущения в вакууме получают 1,9 г (78%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,21; т.п.: 110-111^oC.

2.12. в) N-[ N,N- ди-(трет-бутоксикарбонил)-лизил-O-(трет- бутил)-D-треонил]-батрацилин

1,8 г (4,5 ммоль) соединения примера 2.12.б) подвергают описанной в примере 2.2. а) реакции. Получают 2,6 г (79%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этилацетат; R_f = 0,59: т.п.: 212^oC.

2.12.г) Ди-трифторацетат N-[лизил-O-(трет-бутил)-D-треонил]- батрацилина

2,5 г (3,4 ммоль) вышеуказанного соединения подвергают описанной в примере 2.2 реакции. После очистки получают 2,5 г (96%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь метанола и уксусной кислоты в соотношении 10:1; R_f= 0,30; т.п.: 142^oC (разл.).

2.12) Ди-гидробромид N-[лизил-D-треонил]-батрацилина

2,29 г (3 ммоль) соединения примера 2.12.г) подвергают описанной в примере 2.8 реакции. После очистки получают 1,86 г (97%) продукта в виде желто-красных кристаллов, т.п.: 232^oC (разл.).

Пример 2.13

Ди-трифторацетат N-[лизил-D-аланил]-батрацилина



2.13. а) N-[ N,N- бис-(трет-бутоксикарбонил)-лизил-D- аланил]-батрацилин

6 г (17,3 ммоль) N,N- бис-(трет-бутоксикарбонил)-лизина растворяют в 75 мл диметилформамида и смешивают при 0^oC с 3 г (26 ммоль) N-гидроксисукцинимида и 4,29 г (20,8 ммоль) N,N-дициклогексилкарбодиимида. По истечении 3 часов полученную мочевину отфильтровывают, к фильтрату добавляют 5 г (15,6 ммоль) N-[D-аланил] -батрацилина примера 2.3 и перемешивают 16 часов при 20^oC. Оставшуюся мочевину отфильтровывают и удаляют. Фильтрат сгущают, остаток перемешивают с метанолом и фильтруют. Фильтрат еще раз сгущают и обрабатывают метанолом. Фильтруют еще раз и остатки на фильтре объединяют. Их растворяют в смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10:1 и осаждают диэтиловым эфиром. Получают 8,22 г (81%) кристаллического целевого продукта.

2.13) Ди-трифторацетат N-[лизил-D-аланил]-батрацилина

Целевое соединение получают из 8,2 г соединения примера 2.13.а) аналогично примеру 2.2.

Выход: 7,58 г (89%).

Пример 2.14

Трифторацетат N-[ N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизил]- батрацилина



2.14. а) N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)- лизил]-батрацилин

Целевое соединение получают аналогично примеру 2.4.а) из N- (трет-бутоксикарбонил)- N-(флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизина и батрацилина. Выход: 78%.

2.14) Трифторацетат N-[ N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизил]- батрацилина

Целевое соединение получают аналогично примеру 2.5 из соединения примера 2.14.а). Выход: 90%.

Пример 2.15

Ди-трифторацетат N-[лизил- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)- лизил]-батрацилина



2.15а) N-[ N,N- ди-(трет-бутоксикарбонил)-лизил- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизил]-батрацилин

3240 мг (4,54 ммоль) соединения примера 2.14 растворяют в 50 мл диметилформамида и смешивают с 2550 мг (5,45 ммоль) сложного п-нитрофенилового эфира N,N- ди-(трет-бутоксикарбонил)-лизина и 938 мкл этилдиизопропиламина. Перемешивают 16 часов при 20^oC, сгущают и остаток сначала перемешивают с диэтиловым эфиром. Фильтруют и остаток на фильтре еще раз перемешивают со смесью метанола и диэтилового эфира в соотношении 1:1. После отсасывания и сушки получают 3881 мг (92%) целевого продукта.

2.15) Ди-трифторацетат N-[лизил- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)- лизил]-батрацилина

Соединение примера 2.15.а) деблокируют с помощью смеси безводной три-фторуксусной кислоты и дихлорметана в соотношении 1:1 аналогично примеру 2.2. Выход: 95%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:6:0,6; R_f = 0,08.

Пример 2.16

Дитрифторацетат N-[лизил- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)- , димино-пропионил]-батрацилина



Этот пептидный конъюгат получают аналогично примерам 2.14 и 2.15 через 4 стадии из батрацилина и N- (трет-бутоксикарбонил)- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-диаминопропионовой кислоты. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f= 0,15.

Пример 2.17

N-[лизил]-батрацилин



Отщепление флуоренил-метоксикарбонильной группы аналогично примеру 2.4 от трифторацетата N-[ N (флуоренил-9- метоксикарбонил)-лизил]-батрацилина примера 2.14. Выход: 65%.

Пример 2.18

Трифторацетат N-[серил-D-аланил]-батрацилина



2.18.а) N-[N-(трет-бутоксикарбонил)-серил-D-аланил]- батрацилин

Целевое соединение получают аналогично примеру 2.13.а) из N-(трет-бутокси-карбонил)-серина и N-[D-аланил]-батрацилина (см. пример 2.3). Выход: 77%.

2.18) Трифторацетат N-[серил-D-аланил]-батрацилина

Целевое соединение получают аналогично примеру 2.2 из соединения примера 2.18.а). Выход: 98%.

Пример 2.19

Трифторацетат N-[D-аланил-D-аланил]-батрацилина



Целевое соединение получают аналогично примеру 2.18 через 2 стадии.

Пример 2.20

N-[глутамил-D-аланил]-батрацилин



Целевое соединение получают аналогично примеру 2.18 через 2 стадии из сложного N-трет-бутоксикарбонил-глутамил- трет-бутилового эфира и N-[D-аланил] -батрацилина (см. пример 2.3). После отщепления трет-бутилоксикарбонила сгущают, продукт подают в воду, с помощью 0,1н. натрового щелока доводят до pH 7 и бетаин отсасывают.

Примеры 3.1 - 3.34

Общая формула



Пример 3.1

N-{ N- [O-( -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламинотио-карбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилин

3.1. а) N-{ N- (трет-бутоксикарбонил) N- [O-( -L-фукозил)-4- гидроксифенилaминo-тиoкapбoнил]-лизил-D-aлaнил}-бaтpaцилин

55 мг (0,22 ммоль) п-аминофенил- -L-фукозида в 10 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1: 1 при перемешивании смешивают с 34 мкл (0,44 ммоль) тиофосгена. Спустя 10 минут сгущают в вакууме и остаток сушат в высоком вакууме в течение часа. Полученное горчичное масло сочетают в среде абсолютного диметилформамида с 109 мг (0,21 ммоль) N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)-лизил-D-аланил]-батрацилина примера 2.4 в присутствии 115 мкл этилдиизопропиламина. После двукратного осаждения сырого продукта из смеси метанола и изопропанола получают 132 мг (75%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; R_f= 0,15.

3.1) N-{ N- [O-( -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламинотиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилин

127 мг (0,15 ммоль) соединения примера 3.1.а) в 10 мл дихлорметана перемешивают с 6 мл безводной труфторуксусной кислоты в течение 2 часов при температуре 0^oC. Сгущают, три раза отгоняют с применением 5 мл дихлорметана и очищают путем хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. После сублимационной сушки получают 80 мг (71%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,4; R_f = 0,3.

Аналогично примеру 3.1 из частично защищенного пептидного конъюгата примера 2.4 или же из аналогично получаемого изомерного N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)-лизил-аланил]-батрацилина получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 3.2

N{ N- [O-(2-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил] -лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.1.

Очистка промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси дихлорметана и метанола в соотношении 95:5 и продукта конечной стадии - с применением в качестве элюента сначала смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Выход: 55%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,4.

Пример 3,3

N{ N- [O-(2-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил] -лизил-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.1.

Очистка промежуточного продукта путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира и очистка продукта конечной стадии путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Выход: 65%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f= 0,21.

Пример 3.4

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.2.

Очистка промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 97,5: 2,5 и осаждения продукта конечной стадии из смеси метанола и диэтилового эфира. Выход: 59%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f = 0,19.

Пример 3.5

N-{ N- [O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил] -лизил-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.2.

Очистка промежуточного продукта путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира и очистки продукта конечной стадии путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Выход: 36%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5; R_f = 0,57.

Пример 3.6

N-{ N- [O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил] -лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.3.

Очистка промежуточного продукта путем осаждения из метанола с помощью диэтилового эфира и очистки продукта конечной стадии путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Выход: 44%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2: R_f= 0,15.

Пример 3.7

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-десокси- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.6.

Очистка промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 95:5 и осаждения продукта конечной стадии из метанола с помощью диэтилового эфира. Выход: 35%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,42.

Пример 3.8

Трифторацетат N-{ N- [O-(3,4-эпокси- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.8.

Очистка промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 95:5. Продукт конечной стадии несколько раз осаждают из метанола с помощью диэтилового эфира, после чего перемешивают с этилацетатом. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,49.

Пример 3.9

Натриевая соль N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.10.

Очистка промежуточного продукта путем перемешивания с метанолом и завершения осаждения с помощью диэтилового эфира. Продукт конечной стадии очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) сначала в соотношении 15:3:0,3, a потом 15: 6:0,6. Соответствующие фракции сгущают, подают в воду и с помощью 0,1н. натрового щелока доводят до pH 7. Отсасывают, остаток на фильтре подают в смесь диметилформамида и воды в соотношении 1:3 и добавляют один эквивалент 0,1н. натрового щелока. Сгущают, натриевую соль подают в воду и лиофилизуют. Выход: 43%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5; R_f = 0,15.

Пример 3.10

Натриевая соль N-{ N- [O-(3-O-карбамоилметил- -L-фукозил)-4-гидроксифениламино-тиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.18.

Очистка промежуточного продукта путем перемешивания с метанолом и завершения осаждения с помощью диэтилового эфира. Продукт конечной стадии очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:3: 0,3; R_f= 0,38; т.п.: 190^oC (разл.).

Пример 3.11

Ацетат N-{ N- [O-(4-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.4.

Очистка промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 95:5, а очистка продукта конечной стадии - с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. После сгущения к остатку добавляют один эквивалент ледяной уксусной кислоты и 10 мл воды и лиофилизуют. Выход: 52%. Тонкослойная хроматография: смесь

ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,43. Масс-спектр (бба): m/z = 760 = М + 1.

Пример 3.12

Трифторацетат N-{ N- [O-( -D-глюкозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение:п-аминофенил- -D-глюкозид.

Очистка промежуточного продукта и продукта конечной стадии путем перемешивания с метанолом и завершения осаждения с помощью диэтилового эфира. Выход: 83%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:8:0,8; R_f = 0,48.

Пример 3.13

Трифторацетат N-{ N- [O- ( D-глюкозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: п-аминофенил- D-глюкозид.

Получение целевого соединения аналогично изомеру примера 3.12.

Пример 3.14

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-O-метил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил- D-аланил}-батрацилина

3.14. a) N-{ N- (трет-бутоксикарбонил)- N- [O-(3-O-метил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилин

К раствору 62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.25 в 10 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1:1 при перемешивании добавляют 33,5 мл (0,44 ммоль) тиофосгена. Через 10 минут сгущают в вакууме и остаток сушат в течение часа в вакууме масляного насоса. Полученный изотиоцианат растворяют в 10 мл абсолютного диметилформамида, после чего добавляют 109,7 мг (0,2 ммоль) соединения примера 2.4 и 0,5 мл этилдиизопропиламина. Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, сгущают в вакууме и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смесь дихлорметана и метанола в соотношении 20:1. Получают 108,3 мг (62%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,42; т.п.: 194 - 195^oC (разл.).

3.14) Трифторацетат 14-{ N- [O-(3-O-метил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилина

Из 105,1 мг (0,12 ммоль) соединения примера 3.14.a) отщепляют трет-бутокси-карбонильную группу описанным в примере 2.2 образом. После сгущения в вакууме и переосаждения из смеси метанола и диэтилового эфира получают 57,4 мг (54%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,16; т.п.: 188-189^oC (разл.).

Аналогично примерам 3.14.а) и 3.14) из пептидного конъюгата примера 2.4, взятого в количестве по 109,7 мг (0,2 ммоль), получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 3.15

Трифторацетат N-{ N- [O-(-D-галактопиранозил)- 4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилина

Исходное соединение: 59,7 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.23.

Очистка промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10:1. Получают 79,5 мг (46%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,74; т.п.: 182^oC.

В результате очистки продукта конечной стадии (описанным в примере 3.14 образом) получают 77,1 мг (44%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f= 0,27; т.п.: 191 - 192^oC (разл.).

Пример 3.16

Трифторацетат N-{ N- [O-(3,4-ди-O-метил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилина

Исходное соединение: 79 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.31.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола сначала в соотношении 30:1, а потом 20:1. Получают 150,7 мг (85%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10:1; R_f = 0,35; т.п.: 197 - 199^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 137 мг (76%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10:1; R_f = 0,13; т.п.: 184 - 186^oC (разл.).

Пример 3.17

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-О-метоксикарбонилметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилина

Исходное соединение: 75,5 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.42.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола сначала в соотношении 30:1, а потом 25:1. Получают 124,1 мг (66%) продукта в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2: R_f = 0,50; т.п.: 165^oC. В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 107,8 мг (57%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 4:1; R_f = 0,53; т.п.: 183^oC (разл.).

Пример 3.18

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-O-кapбoкcиметил- -D- гaлaктoпиpaнoзил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил- D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 77,3 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.43.

В результате очистки промежуточного продукта путем переосаждения из смеси этанола и диэтилового эфира получают 172 мг (91%) натриевой соли в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,71; т.п. : 225 -228^oC.

В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 136,5 мг (73%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,12; т.п.: 217 - 220^oC (разл.).

Пример 3.19

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)- 4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 72,2 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.44.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1 получают 137,7 мг (75%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 4:1; R_f = 0,41; т.п.: 198-201^oC (разл.). В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 140,2 мг (75%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 4:1; R_f = 0,16; т.п.: 188 - 190^oC (разл.).

Пример 3.20

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-O-(N-метил- кapбaмоилметиил)- -D-гaлaктопиранозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 75,3 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.45.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 7: 1: 0,1 получают 158,4 мг (85%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15: 3:0,2; R_f = 0,25; т.п.: 161 - 163^oC (разл.). В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 132,5 мг (70%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,10; т.п.: 191-193^oC (разл.).

Пример 3.21

Трифторацетат N-{ N- O-[3-O-(N-пропил- карбамоилметил) -D--галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил] -лизил-D-аланил} -батрацилина

Исходное соединение: 81,5 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.46.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 8:1:0,1 получают 153,1 мг (80%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,33; т.п.: 187^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 154,9 мг (79%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f - 0,21; т. п.: 179^oC.

Пример 3.22

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-O-(N-бутил- кapбaмoилметил)- -D-гaлaктoпиpaнoзил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 84,6 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.47.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 12: 1 получают 132,7 мг (68%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,54; т.п.: 180 - 182^oC.

В результате очистки продукта конечной стадий согласно примеру 3.14 получают 115,2 мг (58%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2: R_f = 0,30; т. п.: 176^oC.

Пример 3.23

Трифторацетат N-{ N- [O-(3,4-дидесокси- -D-галактопиранозил)- 4-гидроксифениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 52,6 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.52.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 25: 1 получают 127,4 мг (77%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,60; т. п. : 166 - 167^oC. В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 103,1 мг (61%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f - 0,44; т.п.: 173 - 175^oC (разл.).

Пример 3.24

Трифторацетат N-{ N-[O-(6-O-aцетил--D-гaлaктoпиpaнoзил)-4-гидpoкcифениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 78,2 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.53.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 25: 1 получают 88,3 мг (49%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 4:1; R_f = 0,61; т.п.: 196-199^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 89,6 мг (49%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 4:1; R_f = 0,31; т.п.: 186^oC (разл.).

Пример 3.25

Трифторацетат N-{ N- [O-( -D- мaннoпиpaнoзил)-4-гидpoкcи-фенилaминo-тиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 59,7 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.39.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1 получают 101,7 мг (59%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол: R_f = 0,79; т.п.: 180^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 103,1 мг (59%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,34; т.п.: 177 - 178^oC (разл.).

Пример 3.26

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-O-метил- -D- маннопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-гиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 62,8 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.40.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 20: 1 получают 56,6 мг (32%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,38: т.п.: 191 - 192^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии согласно пример 3.14 получают 46,6 мг (26%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5: 1; R_f= 0,13: т.п.: 190 - 191^oC (разл.).

Пример 3.27

Трифторацетат N-{ N- [O-(2,3-ди-O-метил- -D- маннопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D- аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 66 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.41.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 25: 1 получают 77,8 мг (44%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 4:1; R_f = 0,65; т.п.: 182-183^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 66,1 мг (37%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 4:1; R_f = 0,40; т.п.: 181^oC.

Пример 3.28

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-O-метоксикарбонилметил- -D-маннопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-гиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 75,5 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.48.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 18: 1 получают 62,1 мг (33%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,66; т. п.: 165^oC.

В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 57,6 мг (30%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,43; т. п.: 183 - 184^oC.

Пример 3.29

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -D-маннопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 77,3 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.49.

В результате очистки промежуточного продукта путем переосаждения из смеси этанола и диэтилового эфира получают 173,4 мг (92%) натриевой соли в виде желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,57; т.п. : 201 -205^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 171,7 мг (92%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,29; т.п.: 196 - 198^oC (разл.).

Пример 3.30

Трифторацетат N-{ N- [O-(3-O-карбамоилметил- -D-маннопиранозил)-4гидрокси-фениламино-гиокарбонил]-лизил- D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 72,2 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.50.

В результате очистки промежуточного продукта путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1 получают 106,6 мг (58%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 4:1; R_f = 0,34; т.п.: 192 - 194^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии согласно примеру 3.14 получают 107,7 мг (58%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 4:1; R_f = 0,13; т.п.: 186 - 187^oC (разл.).

Пример 3.31

N-{ N- [О-(3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилин

3.31. a) N-{ N- (флуopенил-9-метoкcикapбoнил)- N- [O-(3,4-ди- O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил] - лизил-D-аланил} -батрацилин

К раствору 79 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.31 в 10 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1:1 при перемешивании добавляют 33,5 мл (0,44 ммоль) тиофосгена. Через 10 минут сгущают в вакууме и остаток сушат в вакууме масляного насоса в течение часа. Полученный изотиоцианат растворяют в 10 мл абсолютного диметилформамида и смешивают с 157 мг (0,2 ммоль) соединения примера 2.5 и 0,5 мл этилдиизопропиламина. Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, сгущают в вакууме и подают в смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1:1. Продукт осаждают путем добавки диэтилового эфира и промывают небольшим количеством холодного как лед метанола. Получают 191 мг (94%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1; R_f = 0,35; т.п.: 203^oC (разл.).

3.31) N- N- [O-(3,4-ди-O-метил--D-галактопиранозил)-4- гидроксифениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил)-батрацилин

От 182,2 мг (0,18 ммоль) соединения примера 3.31.а) описанным в примере 2.4 образом отщепляют флуоренил-9-метоксикарбонильную группу. После сгущения в вакууме и растворения в смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 продукт осаждают добавкой диэтилового эфира. Получают 127,1 мг (89%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,46; т.п.: 158^oC.

Аналогично примерам 3.31.а) и 3.31) из пептидного конъюгата примера 2.5 (взятого в количестве по 157 мг (0,2 ммоль)) получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 3.32

N- { N- [O-(3-O-(пиперидил-N)-карбонилметил--D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 75,5 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.42.

В результате очистки промежуточного продукта описанным в примере 3.31.а) образом получают 191,2 мг (91%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10:1; R_f = 0,28; т.п.: 208^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии описанным в примере 3.31) образом получают 155,8 мг (88%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,47; т.п.: 120^oC (разл.).

Пример 3.33

Натриевая соль N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил--D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилина

Исходное соединение: 77,3 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.43.

В результате очистки промежуточного продукта описанным в примере 3.31.а) образом получают 192 мг (90%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этанола и метанола в соотношении 1: 1; R_f = 0,05; т.п.: 211 - 213^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии описанным в примере 3.31) образом получают 110,6 мг (66%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,33: т.п.: 233 - 235^oC (разл.).

Пример 3.34

N-{ N- [O-(3-O-кapбaмoилмeтил- -D-гaлaктoпиpaнoзил)-4-гидpoкcи- фeнилaминoтиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 72,2 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.44.

В результате очистки промежуточного продукта описанным в примере 3.31.а) образом получают 159,2 мг (76%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1; R_f = 0,04; т.п.: 177^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии описанным в примере 3.31) образом получают 125,1 мг (76%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,48; т.п.: 106^oC (разл.).

Примеры 4.1 - 4.12

Общая формула



Пример 4.1

4.1. а) N-{ N- -[O-( -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизил-D-аланил}-батрацилин

140 мг (0,55 ммоль) п-аминофенил- L-фукозида описанным в примере 3.1. а) образом сначала переводят в горчичное масло, а потом продукт сочетают с 430 мг (0,55 ммоль) трифторацетата N- [ N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизил-D-аланил] -батрацилина (см. пример 2.5) в присутствии 375 мкл этилдиизопропиламина. После осаждения сырого продукта из смеси метанола и дихлорметана очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси ацетонитрила и воды в соотношении 10:1. В результате перемешивания остатка с диэтиловым эфиром получают 358 мг (67%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1: R_f = 0,48.

N-{ N- [O-( L-фукoзил)-4-гидpoкcи-фeнилaминo- тиoкapбoнил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

356 мг (0,37 ммоль) соединения примера 4.1.а) растворяют в 10 мл диметилформамида и 5 мл пиперидина и перемешивают в течение часа при температуре 20^oC. Сгущают и остаток очищают путем хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15 : 6: 0,6. Выход целевого продукта: 46%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15 : 4: 0,5; R_f = 0,11.

Аналогично примерам 4.1 из частично защищенного пептидного конъюгата примера 2.5 получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 4.2 Натриевая соль N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.10.

Промежуточный продукт очищают путем хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) сначала в соотношении 15 : 3 : 0,3, а потом 15 : 4 : 0,5. Целевой продукт очищают на стадии бетаина путем перемешивания с водой, после чего переводят в натриевую соль с помощью 0,1н. натрового щелока и сублимационной сушки из смеси диоксана и воды. Выход: 65%. Т.п.: 220^oC.

Пример 4.3

N-{ N- [O-(3-O-метил--L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил] -лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.2.

Промежуточный продукт очищают путем осаждения из дихлорметана с помощью диэтилового эфира. Целевой продукт очищают в результате многократного осаждения из диметилформамида с помощью диэтилового эфира. Выход: 88%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5 : 1 : 0,2; R_f = 0,28.

Пример 4.4

N-{ N- [O-(4-O-мeтил--L-фукoзил)-4-гидpoкcи-фeнилaминo- тиoкapбoнил] -лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.4.

Промежуточный продукт очищают путем многократного осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1 : 1 с помощью диэтилового эфира. Целевой продукт очищают путем колоночной хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15 : 8 : 0,8, после чего осаждают из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1 : 1 с помощью диэтилового эфира. Выход: 74%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 10 : 10 : 1: R_f = 0,19.

Пример 4.5

N-{ N- [O-{3,4-ди-O-метил--D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

4.5. а) N-{ N- [O-(3,4-ди-O-метил--D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фенил-амино-тиокарбонил- N- флуоренил-9-метоксикарбонил)]-лизил- D-аланил} -батрацилин

К раствору 79 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.31 в 10 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1 : 1 при перемешивании добавляют 33,5 мл (0,44 ммоль) тиофосгена. Через 10 минут сгущают в вакууме и остаток сушат в вакууме масляного насоса в течение часа. Полученный изотиоцианат растворяют в 10 мл абсолютного диметилформамида, после чего смешивают с 157 мг (0,2 ммоль) соединений примера 2.6 и 0,5 мл этилдиизопропиламина. Перемешивают в течение 16 часов при комнатной температуре и сгущают в вакууме. В результате многократного переосаждения остатка из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1 : 1 с помощью диэтилового эфира и последующей промывки небольшим количеством холодного как лед метанола получают 198 мг (98%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10 : 1; R_f = 0,23: т.п.: 175^oC.

4.5) N-{ N- [O-(3,4-ди-O-метил--D-галактопиранозил)-4- гидроксифениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

От 172,1 мг (0,17 ммоль) соединения примера 4.5.а) описанным в примере 2.4 образом отщепляют флуоренил-9-метоксикарбонильную группу. После сгущения в вакууме и растворения в смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1 : 1 продукт осаждают путем добавки диэтилового эфира. Получают 114,5 мг (85%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1 : 1; R_f = 0,16: т.п.: 206^oC (разл.).

Аналогично примерам 4.5. а) и 4.5) из пептидного конъюгата примера 2.6 (взятого в количестве по 157 мг (0,2 ммоль)) получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 4.6

N-{ N- [O-( -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил] -лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.23 (59,7 мг, 0,22 ммоль). Промежуточный продукт очищают описанным в примере 4.5.а) образом и получают 185,8 мг (94%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1; R_f = 0,09; т.п.: 182^oC (разл.).

В результате описанной в примере 4.5 очистки продукта конечной стадии получают 134,3 мг (88%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1 : 1; R_f = 0,04; т.п.: 221^oC (разл.).

Пример 4.7

N-{ N- [O-(3-O-метил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.25 (62,8 мг, 0,22 ммоль). Промежуточный продукт очищают описанным в примере 4.5.а) образом и получают 193,5 мг (97%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10 : 1; R_f = 0,27: т.п.: 178^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 2:1-1:1 получают 130,5 мг (84%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1:1; R_f = 0,09; т.п.: 206^oC (разл.).

Пример 4.8

N-{ N- [O-(3-O-метоксикарбонилметил--D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.42 (75,5 мг, 0,22 ммоль). Промежуточный продукт очищают описанным в примере 4.5.а) образом и получают 209,8 мг (99%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1; R_f = 0,32; т.п.: 235^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии описанным в примере 4.5 образом получают 164,3 мг (99%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1; R_f = 0,05; т.п.: 217^oC (разл.).

Пример 4.9

Натриевая соль N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил--D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.43 (77,3 мг, 0,22 ммоль).

Промежуточный продукт очищают описанным в примере 4.5.а) образом и получают 210,3 мг (99%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10 : 1 : R_f = 0,02; т.п.: 185^oC. После очистки продукта описанным в примере 4.5 образом остаток суспендируют в 10 мл воды и к суспензии при перемешивании прикапывают 0,05н. натровый щелок до того, как получается прозрачный раствор со значением pH < 10. Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 150,8 мг (90%) желтого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1 : 1; R_f = 0,04.

Пример 4.10

N-{ N- [O-(3-O-кapбaмoилмeтил] -D-галактопиранозил)-4-гидpoкcи- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.44 (72,2 мг, 0,22 ммоль).

Промежуточный продукт очищают описанным в примере 4.5.а) образом и получают 152,7 мг (73%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10:1; R_f = 0,11; т.п.: 229^oC (разл.).

После очистки продукта описанным в примере 4.5 образом остаток суспендируют в 20 мл смеси воды и диоксана в соотношении 1:1. Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 98,4 мг (61%) желтого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1:1; R_f = 0,10; []²⁰= +44,9 (c = 0,2/H₂O).

Пример 4.11

N-{ N- [O-( -D-маннопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.39 (59,7 мг, 0,22 ммоль).

Промежуточный продукт очищают описанным в примере 4.5.а) образом и получают 179,6 мг (91%) кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1; R_f = 0,07; т.п.: 176^oC (разл.).

После очистки продукта конечной стадии описанным в примере 4.5 образом получают 137,5 мг (90%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1 : 1; R_f = 0,09: т.п.: 213^oC (разл.).

Пример 4.12 N-{ N- [O-(3-O-метил- D-маннопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лиэил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: углевод примера 1.40 (62,8 мг, 0,22 ммоль).

Промежуточный продукт очищают описанным в примере 4.5.а) образом и получают 94,2 мг (48%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10:1; Rf = 0,13; т.п.: 173^oC (разл.).

В результате очистки продукта конечной стадии описанным в примере 4.5 образом получают 66,6 мг (43%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1; R_f = 0,07; т.п.: 215^oC (разл.).

Примеры 5.1 - 5.23

Общая формула



Пример 5.1

N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил--L-фукозил)-4- гидроксифениламино-тиокарбонил]- N- [O-(3-O-метил--L-фукозил)-4- гидроксифениламино-тиокарбонил] -лизил-D-аланил}-батрацилин

К 50 мг (0,16 ммоль) п-аминофенил-3-О-карбоксиметил--L-фукозида примера 1.10 в 10 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1: 1 при перемешивании добавляют 30 мкл (0,18 ммоль) тиофосгена. Через 10 минут сгущают и сушат в высоком вакууме в течение часа. Полученное горчичное масло сочетают в среде абсолютного диметилформамида с 109 мг (0,144 ммоль) конъюгата примера 3.4 в присутствии 82 мкл этилдиизопропиламина. Сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5. Полученное после сгущения вещество лиофилизуют из воды. Выход: 89 мг (56%). Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:6:0,6; R_f = 0,22.

Аналогично примеру 5.1 получают следующие конъюгаты, имеющие различные заместители.

Пример 5.2

N-{ N- [O-(3-O-мeтил--L-фукозил)-4-гидpoкcифeнилaминo-тиoкapбoнил] - N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидроксифениламино-тиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходные соединения: углевод примера 1.2, конъюгат примера 3.10.

Очистка путем осаждения сырого продукта из метанола с помощью диэтилового эфира. Выход: 78%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,45.

Пример 5.3

N-{ N- [O-(3-O-метил--L-фукозил)-4-гидроксифениламино-тиокарбонил] - N- [4-гидроксифениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацили

Исходные соединения: конъюгат примера 4.3, 4-гидрокси-анилин.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Выход: 60%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f = 0,31.

Пример 5.4

N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил--L-фукозил)-4-гидроксифениламино- тиокарбонил]- N- [4-гидроксифениламино-гиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилин

Исходные соединения: конъюгат примера 4.2, 4-гидрокси-анилин.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5. Потом остаток перемешивают со смесью метанола и диэтилового эфира. Выход: 55%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:6:0,6; R_f = 0,3.

Пример 5.5

N-{ N- [O-(4-O-метил--L-фукозил)-4-гидроксифениламино-тиокарбонил] - N- [4-гидроксифениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацили

Исходные соединения: конъюгат примера 4.4, 4-гидрокси-анилин.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Потом остаток осаждают из смеси метанола и дихлорметана с помощью диэтилового эфира. Выход: 49%. Т.п.: 128^oC. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f = 0,26.

Пример 5.6

N-{ N- [4-гидроксифениламино-тиокарбонил]- N- [O-(4- O-метил--L-фукозил)-4-гидроксифениламино-тиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходные соединения: конъюгат примера 3.11, 4-гидрокси-анилин.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Потом остаток лиофилизуют из смеси воды и диоксана. Выход: 50%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f= 0,29.

Пример 5.7

N-{ N- [4-гидроксифениламино-тиокарбонил]- N- [O- (3-O-метил--L-фукозил)-4-гидроксифениламино-тиокарбонил]-лизил-D- аланил}-батрацилин

Исходные соединения: конъюгат примера 3.4, 4-гидрокси-анилин.

Остаток осаждают из метанола с помощью диэтилового эфира. Выход: 76%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f = 0,26.

Пример 5.8

N-{ N- [O-(3-O-метил- L-фукозил)-4-гидроксифениламино- тиокарбонил]- N- [4-гидроксиэтиламино-2-[O-(3-O-метил--L-фукозил)-4- гидроксифенил-амино]триазин-6-ил]]-лизил-D-аланил}-батрацили

Исходные соединения: конъюгат примера 8.10, углевод примера 1.2.

Остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15: 2: 0,2. Выход: 9%. Масс-спектр (бба): m/z = 1165 = М+1. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15: 3: 0,3; Rf = 0,27.

Пример 5.9

N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидроксифениламино- тиокарбонил]- N- [ацетил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходные соединения: N-[ N- (ацетил)-лизил-D-аланил]-батрацилин, углевод примера 1.10.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) сначала в соотношении 15:2:0,2, a потом 15: 4:0,5. Затем остаток подвергают сублимационной сушке из воды. Выход: 46%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,31.

Пример 5.10

N-{ N- [O-(4-O-метил--L-фукозил)-4-гидроксифениламино-тиокарбонил]-N- [ацетил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

51 мг (0,067 ммоль) конъюгата примера 4.4 в 5 мл диметилформамида смешивают с 10 мкл ацетангидрида и перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Сгущают и осаждают из метанола с помощью диэтилового эфира. Выход: 46 мг (86%). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,6.

Пример 5.11

Натриевая соль N-{ N- [O-( -L-фукозил)-4-гидроксифениламино- тиокарбонил]- N- [сукцинил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

20 мг (0,027 ммоль) конъюгата примера 4.1 в 2 мл диметилформамида смешивают с 3 мг ангидрида янтарной кислоты и перемешивают при комнатной температуре в течение 6 часов. Сгущают и осаждают из метанола с помощью диэтилового эфира. Остаток подают в воду и добавляют 27 мкл 0,1н. натрового щелока. Выход: 20 мг (86%). Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 80:20:2; R_f = 0,2.

Пример 5.12

N-{ N- [O-(3-O-метоксикарбонилметил--D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- N- [O-(3,4-ди-O-метил--D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилин

37,7 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.42 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 79 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.31. После сгущения в вакууме и очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола сначала в соотношении 20: 1, а потом 10:1 получают 52,9 мг (45%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10:1; R_f = 0,14: т.п.: 178^oC (разл.).

Пример 5.13

Натриевая соль N- N- [O-(3-O-карбоксиметил- -D-галактопиранозил)- 4-гидроксифениламино-тиокарбонил] - N- [O-(3,4-ди-O-метил--D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-гиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилина

38,6 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.43 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 79 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.31. После сгущения в вакууме и растворения в смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1 продукт осаждают путем добавки диэтилового эфира. Остаток суспендируют в 10 мл воды и к суспензии при перемешивании прикапывают 0,05н. натровый щелок до того, как получается прозрачный раствор со значением pH < 10. Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 87,9 мг (74%) желтого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,17; []²⁰= +56,0 (с = 0,1/H₂O).

Пример 5.14

N-{ N- [O-(3-O-карбамоилметил- -L-галактопиранозил)-4-гидрокси- фенил-aминo-тиoкapбoнил] - N- [O-(3,4-ди-O-мeтил- -D-галактопиранозил)- 4-гидpoкcи-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацили

36,1 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.44 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 79 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.31. После сгущения в вакууме и растворения в смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1: 1 продукт осаждают путем добавки диэтилового эфира. Получают 45,9 мг (39%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,38; т.п.: 219^oC (разл.).

Пример 5.15

N-{ N- [O-(3,4-ди-O-метил--D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тио-кapбoнил] - - [O-(3-O-пипepидил-N)-кapбoнилмeтил--D-гaлaктoпиpaнoзил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D- аланил}-батрацилин

39,5 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.31 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 88,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.32. После сгущения в вакууме и очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола сначала в соотношении 20:1, а потом 10:1 получают 38,8 мг (32%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,79; т.п.: 205^oC (разл.).

Пример 5.16

Натриевая соль N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил--D-галактопиранозил)-4- гидрокcи-фeнилaминo-тиoкapбoнил] - N- [O-(3-O-(пиперидил-N)-карбонилметил--D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил] -лизил-D-аланил} - батрацилина

38,6 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.43 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 88,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.32. После сгущения в вакууме и растворения в смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1: 1 продукт осаждают добавкой диэтилового эфира. Остаток суспендируют в 10 мл воды и к суспензии при перемешивании прикапывают 0,05н. натровый щелок до того, как получается прозрачный раствор со значением pH < 10. Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 90,3 мг (71%) желтого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,05; []²⁰= +39,0 (с = 0,1/H₂O).

Пример 5.17

N- N- [O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фенил-амино-тиокарбонил]-N- -[O-(3-O(пиперидил-N)-карбонилметил- - D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилин

36,1 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.44 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 88,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.32. После сгущения в вакууме и растворения в смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1 продукт осаждают добавкой диэтилового эфира. Получают 44,8 мг (36%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,06; т.п.: 223^oC (разл.).

Пример 5.18

Натриевая соль N-{ N- [O-(3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил] - - [O-(3-O-карбоксиметил--D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилина

39,5 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.31 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 84,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.33. После сгущения в вакууме продукт подают в 20 мл смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1, после чего продукт осаждают добавкой диэтилового эфира. Остаток суспендируют в 10 мл воды и к суспензии при перемешивании прикапывают 0,05н. натровый щелок до того, как получается прозрачный раствор со значением pH < 10. Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 80,7 мг (68%) желтого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: этанол: R_f = 0,09; []²⁰= +35,0 (с = 0,1/H₂O).

Пример 5.19

Натриевая соль N-{ N- [-О(3-О-метоксикарбонилметил--D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил] - N- [O-(3-O-карбоксиметил--D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-гиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

37,7 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.42 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 84,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.33. После сгущения в вакууме продукт подают в 20 мл смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1, после чего продукт осаждают добавкой диэтилового эфира. Остаток суспендируют в 10 мл воды и к суспензии при перемешивании прикапывают 0,05н. натровый щелок до того, как получается прозрачный

раствор со значением pH < 10. Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 87,5 мг (71%) желтого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,10; []²⁰= +24,6 (с = 0,11/H₂O).

Пример 5.20

Натриевая соль N-{ N- [O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4-гидpoкcи-фeнилaминo-тиoкapбoнил]- N- [O-(3-O-кapбoкcимeтил] D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

36,1 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.44 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 84,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.33. После сгущения в вакууме продукт подают в 20 мл смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1, после чего продукт осаждают добавкой диэтилового эфира. Остаток суспендируют в 10 мл воды и к суспензии при перемешивании прикапывают 0,05н. натровый щелок до того, как получается прозрачный раствор со значением pH < 10. Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 78,6 мг (65%) желтого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: этанол: R_f= 0,11; []²⁰= -44,0 (с = 0,13/H₂O).

Пример 5.21

N-{ N- [O-(3,4-ди-O-мeтил- -D-галактопиранзил)-4-гидpoкcи- фeнилaминo-тиoкарбонил]- N- [O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)- 4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацили

39,5 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.31 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 81,9 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.34. После сгущения в вакууме и очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала этанола, а потом смеси этанола и метанола в соотношении 2:1 получают 17,4 мг (15%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_а = 0,20; т.п.: > 290^oC (разл.).

Пример 5.22

N-{ N- [O-(3-O-метоксикарбонилметил--D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил] - N- [O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

37,7 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.42 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 81,9 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.34. После сгущения в вакууме и растворения в смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1 продукт осаждают путем добавки диэтилового эфира. Получают 72 мг (60%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,21: т.п.: 222^oC (разл.).

Пример 5.23

Натриевая соль N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил--D-галактопиранозил)- 4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил] - N- [O-(3-O-карбамоилметил--D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

38,6 мг (0,11 ммоль) углевода примера 1.43 аналогично примеру 3.31.а) подвергают взаимодействию с 81,9 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 3.34. После сгущения в вакууме и растворения в смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1 продукт осаждают путем добавки диэтилового эфира. Остаток суспендируют в 10 мл воды и к суспензии при перемешивании прикапывают 0,05н. натровый щелок до того, как получается прозрачный раствор со значением pH < 10. Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 78,2 мг (65%) желтого аморфного твердого вещества. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,07; []²⁰= +33,0 (с = 0,1/H₂O).

Примеры 6.1 - 6.89

Общая формула



Пример { N,N- бис-[O-(2-O-метил--L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

К раствору 50 мг (0,19 ммоль) соединения примера 1.1 в 10 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1:1 при перемешивании добавляют 30 мкл (0,4 ммоль) тиофосгена. Через 10 минут сгущают в вакууме и остаток сушат в вакууме масляного насоса в течение часа. Полученный изотиоцианат растворяют в 10 мл абсолютного диметилформамида, после чего смешивают с 61 мг (0,09 ммоль) соединения примера 2.13 и 0,5 мл этилдиизопропиламина. Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Остаток осаждают из метанола с помощью диэтилового эфира. Получают 48 мг (50%) целевого продукта в виде желтых кристаллов.

Аналогично примеру 6.1 из пептидного конъюгата примера 2.13 или же L-аланил-изомера примера 2.2 получают следующие гликоконъюгаты:

Пример 6.2

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 100 мг (0,38 ммоль) углевода примера 1.2.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:0,5:0,05 - 15:1:0,1. Остаток осаждают из смеси дихлорметана, метанола и диэтилового эфира. Выход: 59%. Т. п.: 178^oC (разл.). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f = 0,51.

Пример 6.3

N-{ N,N- биc-[O-(4-O-мeтил- -L-фукoзил)-4-гидpoкcи- фeнилaминo-тиокарбонил]-лизил-O-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 115 мг (0,44 ммоль) углевода примера 1.4.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Остаток осаждают из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 и диэтилового эфира. Выход: 58%. т.п.: 176^oC (разл.). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f = 0,52.

Пример 6.4

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 115 мг (0,44 ммоль) углевода примера 1.2.

Очистка путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 и диэтилового эфира. Выход: 93%. Т.п.: 192^oC (разл.). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f = 0,46.

Пример 6.5

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 100 мг (0,38 ммоль) углевода примера 1.3. Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:1:0,1. Осаждение из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 и диэтилового эфира. Т.п.: 178^oC (разл.). Масс-спектр (бба): m/z = 1071 = М+1.

Пример 6.6

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-н-пропил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 38 мг (0,127 ммоль) углевода примера 1.5.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:1:0,1. Осаждение из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 и диэтилового эфира. Выход: 42%. Т.п.: 167 - 170^oC (разл.). Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%); R_f = 0,34.

Пример 6.7

N-{ N,N- бис-[O-(3-десокси- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 40 мг (0,167 ммоль) углевода примера 1.6.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Осаждение из смеси метанола и диэтилового эфира. Выход: 81%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f = 0,46.

Пример 6.8

N-{ N,N- бис-[O-(3,4-дидесокси- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 41 мг (0,183 ммоль) углевода примера 1.7.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 95:5. Продукт подвергают сублимационной сушке из смеси воды и диоксана. Выход: 60%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9: 1; R_f = 0,22.

Пример 6.9

N- {N,N- бис-[O-(3-гидроксиэтил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 75 мг (0,25 ммоль) углевода примера 1.12.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2 - 15:4:0,5. Осаждают из смеси метанола и диэтилового эфира. Выход: 66%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f = 0,28.

Пример 6.10

N-{ N,N- бис-[O-(2-гидроксиэтил- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 50 мг (0,167 ммоль) углевода примера 1.19.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:3:0,3. Осаждают из смеси метанола и диэтилового эфира, после чего продукт подвергают сублимационной сушке из смеси воды и диоксана. Выход: 72%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1: 0,2; R_f = 0,39.

Пример 6.11

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(2-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилина

Исходное соединение: 50 мг (0,16 ммоль) углевода примера 1.13.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:8:0,8 - 15:10:1. Остаток дигерируют диэтиловым эфиром, после чего продукт подвергают сублимационной сушке из смеси воды и диоксана. Переводят в динатриевую соль с помощью 2 эквивалентов 0,1н. натрового щелока, после чего осуществляют сублимационную сушку из воды. Выход: 49%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,5; R_f = 0,38. Масс-спектр (бба): бба^-: m/z = 1157 = М - 2Na + H⁺.

Пример 6.12

Динатриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил-- L-фукозил)- 4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: 200 мг (0,64 ммоль) углевода примера 1.10.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5 - 15:8:0,8 - 15:10:1. Остаток дигерируют диэтиловым эфиром, после чего продукт подвергают сублимационной сушке из смеси воды и диоксана в соотношении 1:1. Переводят в динатриевую соль с помощью 2 эквивалентов 0,1-н. натрового щелока, после чего осуществляют сублимационную сушку из воды. Выход: 59%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%); R_f = 0,1.

Пример 6.13

N- N,N- бис-[O-(3-O-карбамоилметил- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 60 мг (0,19 ммоль) углевода примера 1.18. Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:3:0,3. Остаток осаждают из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира, после чего отсасывают и продукт подвергают сублимационной сушке из смеси воды и диоксана в соотношении 1:1. Выход: 36%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,46; т.п.: 190^oC (разл.).

Пример 6.14

N-{ N,N- бис-[O-( -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 100 мг (0,39 ммоль) п-аминофенил--L- фукозид.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2 - 15:4:0,5. Остаток осаждают из диметилформамида с помощью диэтилового эфира и отсасывают. Выход: 48%. Т.п.: 195 - 198^oC.

Пример 6.15

N-{ N,N- бис-[O-( -L-рамнозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил] -лизил-D-аланил}-батрацилин

Исходное соединение: 158 мг (0,61 ммоль) углевода примера 1.21.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:3:0,3-15:4:0,5. Остаток лиофилизуют из смеси воды и диоксана. Выход: 87%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4: 0,5; R_f = 0,25.

Пример 6.16

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -L-рамнозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилина

Исходное соединение: 200 мг (0,64 ммоль) углевода примера 1.22.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5-15:8:0,8-15: 10: 1. Остаток дигерируют диэтиловым эфиром, после чего продукт подвергают сублимационной сушке из смеси воды и диоксана в соотношении 1:1.

Аналогично примеру 6.1 из различных пептидных конъюгатов батрацилина, содержащих у концевой амино-группы полностью деблокированный лизиновый остаток, получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 6.17

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-{O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-глицил}-батрацилина

Исходные соединения: 32 мг (0,1 ммоль) углевода примера 1.10,

32 мг (0,45 ммоль) ди-трифторацетата N-[лизил-глицил]- батрацилина примера 2.9.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:8:0,8-15:15:1,5. Остаток осаждают из смеси диметилформамида и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира, после чего продукт подвергают сублимационной сушке из смеси воды и диоксана. Переводят в динатриевую соль с помощью 2 эквивалентов 0,1н. натрового щелока, после чего продукт подвергают сублимационной сушке из воды. Выход: 25%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:8:0,8; R_f = 0,19. Масс-спектр (бба): m/z = 1189 = M+1.

Пример 6.18

N- { N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-глицил}-батрацилин

Исходные соединения: 60 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.2,

66 мг (0,1 ммоль) ди-трифторацетата N-[лизил-гли- цил]-батрацилина примера 2.9.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 90:10:1. Остаток осаждают из метанола с помощью диэтилового эфира, после чего продукт подвергают сублимационной сушке из смеси воды и диоксана. Выход: 68%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 80:60:2; R_f=0,62

Пример 6.19

N-{ N,N- бис-[O-( -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- лизил-лизил}-батрацилин

6.19. а) N-{ N,N- бис-[O-( -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил- N-флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизил}- батрацилин

Исходные соединения: 297 мг (1 ммоль) п-аминофенил- -L-фукозида,

66 мг (0,1 ммоль) ди-трифторацетата N-[лизил-( N-(флуоренил-9- метоксикарбонил)-лизил]-батрацилина примера 2,15,

206 мкл этилдиизопропиламина.

Очистка путем двукратного осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира, после чего остаток на фильтре промывают диэтиловым эфиром. Выход: 89%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5; R_f=0,31.

6.19) N-{ N,N- бис-[O-( -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-лизил}-батрацилин

515 мг (0,39) ммоль) соединения примера 6.19 а) растворяют в 5 мл диметилформамида и 5 мл пиперидина и перемешивают при 20^oC в течение 30 минут.

Реакционную смесь сгущают и остаток дигерируют диэтиловым эфиром. Отсасывают и остаток на фильтре подают в диметилформамид. После осаждения с помощью диэтилового эфира и последующей промывки остатка фильтрации получают 335 мг (78%) кристаллического целевого продукта. Масс-спектр (бба): m/z = 1100=M+1.

Пример 6.20

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-диаминопропионил}-батрацилин

6.20. a) N-{ N,N- -бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил] -лизил- N- -(флуоренил-9- метоксикарбонил)-диамино-пропионил}-батрацилин

Синтез осуществляют аналогично примеру 6.19.

Исходные соединения: 60 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.2,

100 мг (0,11 ммоль) ди-трифторацетата N-[лизил- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-диамино-пропионил]-батрацилина примера 2.16,

76 мкл этилдиизопропиламина.

Очистка путем двукратного осаждения из метанола с помощью диэтилового эфира, после чего остаток на фильтре промывают диэтиловым эфиром. Выход: 105 мг (73%).

6.20) N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-диаминопропионил}-батрацилин

103 мг (0,079 ммоль) соединения примера 6.20.а) аналогично примеру 6.19 деблокируют с помощью пиперидина. Очистку осуществляют путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:3:0,3-15:6:0,6. Продукт подвергают сублимационной сушке из смеси воды и диоксана. Выход: 21%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,32.

Пример 6.21

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил-- L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил- диаминопропионил}-батрацилина

Данное соединение получают аналогично примеру 6.20 через 2 стадии исходя из углевода примера 1.10 и пептидного конъюгата примера 2.16. От хроматографической очистки можно отказаться, так как побочные продукты можно удалять путем дигерирования метанолом и диэтиловым эфиром. Потом переводят в динатриевую соль с помощью 2 эквивалентов 0,1н. натрового щелока. Выход: 66% через 2 стадии. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 10:3:1,5: R_f = 0,3.

Пример 6.22

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-серил}-батрацилин

Исходные соединения: 60 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.2,

76 мг (0,11 ммоль) ди-трифторацетата N-[лизил-серил]-батрацилина примера 2.10.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Остаток осаждают из смеси дихлорметана, метанола и диэтилового эфира. Выход: 26%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1, R_f = 0,39.

Пример 6.23

N-{ N,N- бис[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-серил}-батрацилин

Исходные соединения: 60 мг (0,22 ммоль) углевода примера 1.2,

69 мг (0,11 ммоль) дигидробромида N-[лизил-O-серил]-батрацилина примера 2.11.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2. Остаток подвергают сублимационной сушке из смеси диоксана и воды. Выход: 29%. Тонкослойная хроматография% смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f = 0,36.

Пример 6.24

N- N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил}-батрацилин

Исходные соединения: 80 мг (0,3 ммоль) углевода примера 1.2,

53 мг (0,14 ммоль) N-[лизил]-батрацилина примера 2.17.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:1:0,1-15:2:0,2. Остаток осаждают из смеси метанола и диэтилового эфира. Выход: 26%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f = 0,22.

Пример 6.25

N- N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил}-батрацилин

Исходные соединения: 60 мг (0,19 ммоль) углевода примера 1.10,

24 мг (0,063 ммоль) М-[лизил]-батрацилина примера 2.17.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2-15:4:0,5. Остаток подвергают сублимационной сушке из воды. Выход: 26%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,25.

Пример 6.26

N-{ N,N- бис-[O-(3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил}-батрацилин

К раствору 79 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.31 в 10 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1:1 при перемешивании добавляют 33,5 мкл (0,44 ммоль) тиофосгена. Через 10 минут сгущают в вакууме и остаток сушат в вакууме масляного насоса в течение часа. Полученный изотиоцианат растворяют в 10 мл абсолютного диметилформамида, после чего смешивают с 37,7 мг (0,1 ммоль) соединения примера 2.17 и 0,5 мл этилдиизопропиламина. Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 30:1-20:1-10:1. Получают 56,7 мг (53%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этил-ацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,72; т.п.: 125^oC (разл.).

Пример 6.27

N-{ N,N- бис-[-O-(3-O-метоксикарбонилметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-гиокарбонил]- лизил}-батрацилин

75,5 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.42 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 37,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.17. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси.дихлорметана и метанола в соотношении 30:1-20:1-10:1 получают 51,1 мг (44%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,80; т.п.: 176^oC (разл.).

Пример 6.28

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил}-батрацилина

77,3 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.43 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 37,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.17. В результате осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира получают 53 мг (47%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,75; т.п.: > 260^oC (разл.).

Пример 6.29

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил}-батрацилин

72,2 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.44 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 37,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.17. Очищают путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира и получают 55,6 мг (48%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,09; т.п.: 206^oC (разл.).

Пример 6.30

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -D-галактопиранозил)- 4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-серил}-батрацилин

62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.25 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 69,3 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.10. После сгущения в вакууме продукт подают в смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1, осаждают добавкой 15 мл диэтилового эфира и промывают небольшим количеством холодного как лед метанола. Получают 46 мг (41%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,12; т.п.: 190 - 191^oC.

Пример 6.31

N-{ N,N- бис-[O-{ -L-фукопиранозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]лизил-серил}-батрацилин

56,2 мг (0,22 ммоль) п-аминофенил- -L-фукопиранозида подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 69,3 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.10. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала этилацетата, а потом этанола и осаждения из смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира получают 73,8 мг (70%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,15: т.п.: 123^oC.

Пример 6.32

N-{ N,N- -бис-[O-(3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-серил}-батрацилин

79 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.31 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 69,3 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.10. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала этилацетата, а потом смеси этилацетата и этанола в соотношении 7: 1 получают 43,8 мг (38%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,31; т.п.: 176^oC.

Пример 6.33

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метоксикарбонилметил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-серил}-батрацилин

75,5 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.42 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 69,3 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.10. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала этилацетата, а потом смеси этилацетата и этанола в соотношении 3: 1 получают 46,2 мг (37%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2: 1; R_f = 0,12; т. п.: 161^oC.

Пример 6.34

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-серил}- батрацилина

77,3 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.43 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 69,3 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.10 и очищают. Получают 39,2 мг (31%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,77; т.п.: 213 - 215^oC (разл.).

Пример 6.35

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-серил}-батрацилин

72,2 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.44 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 69,3 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.10. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и этанола в соотношении 2:1 получают 66,1 мг (53%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этил-ацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,14; т.п.: 192^oC (разл.).

Пример 6.36

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -D-маннопиранозил)-4-гидpoкcи- фeнилaминo-тиокарбонил]-лизил-серил}-батрацилин

62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.40 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 69,3 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.10 и очищают. Получают 48,9 мг (44 %) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,10; т. п.: 204^oC.

Пример 6.37

N-{ N,N- бис-[O-(2,3-ди-O-метил- -D-маннопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-серил}-батрацилин

66 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.41 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 69,3 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.10. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала этилацетата, с потом смеси этилацетата и этанола в соотношении 7:1 получают 52 мг (45%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_а = 0,28; т.п.: 164-165^oC.

Пример 6.38

N-{ N,N- биc-[O-(4-O-( -D-галактопиранозил)- -D-глюкoпиpaнoзил)-4-гидpoкcи- фениламино-тиокарбонил]-лизил-серил}-батрацилин

95,4 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.56 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 69,3 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.10. После сгущения в вакууме продукт интенсивно промывают 50 мл горячего метанола. Получают 61,6 мг (44%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол: R_f = 0,32; т.п.: 222^oC (разл.).

Пример 6.39

N-{ N,N- бис-[O-( -L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-серил}-батрацилин

56,2 мг (0,22 ммоль) п-аминофенил- -L-1-фукопиранозида подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 62,6 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.11. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала этилацетата, а потом этанола и осаждения остатка из смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1 в присутствии диэтилового эфира получают 50,9 мг (48%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,14; т.п.: 133^oC.

Пример 6.40

N-{ N,N- бис-[O-(3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- лизил-D-серил}-батрацилин

79 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.31 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 62,6 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.11. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала этилацетата, а потом смеси этилацетата и этанола в соотношении 5: 1 получают 53,8 мг (47%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,38: т.п.: 145 - 146^oC.

Пример 6.41

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метоксикарбонилметил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-серил}-батрацилин

75,5 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.42 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 62,6 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.11. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала этилацетата, а потом смеси этилацетата и этанола в соотношении 3:1 получают 52,4 мг (42%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2: 1: R_f = 0,12; т.п.: 168^oC.

Пример 6.42

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-серил}- батрацилина

77,3 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.43 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 62,6 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.11 и очищают. Получают 69,2 мг (55%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f= 0,71; т.п.: 214 - 216^oC (разл.).

Пример 6.43

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-серил}-батрацилин

72,2 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.44 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 62,6 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.11. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и этанола в соотношении 2: 1 получают 46,4 мг (38%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f= 0,10: т.п.: 173^oC.

Пример 6.44

N-{ N,N- бис-[O-( -L-фукопиранозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-аспарагил}-батрацилин

56,2 мг (0,22 ммоль) п-аминофенил- -L-фукопиранозида подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 72,1 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.7. Продукт очищают путем осаждения из смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1: 1 в присутствии диэтилового эфира. Получают 69,4 мг (64%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,14; т.п.: 185- 187^oC.

Пример 6.45

N-{ N,N- бис-[O-(3,4-ди-O-метил- -галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аспарагил}-батрацилин

79 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.31 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 72,1 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.7. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси этилацетата и уксусной кислоты в соотношении 200: 1, а потом смеси этилацетата и этанола в соотношении 3:1 получают 99,5 мг (85%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,59; т.п.: 149^oC (разл.).

Пример 6.46

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-гиокарбонил]-лизил- D-аспарагил}-батрацилина

77,3 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.43 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 72,1 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.7. В результате очистки путем осаждения из смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира получают 93,4 мг (73%) желтых кристаллов. Т.п.: 220^oC (разл.).

Пример 6.47

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аспарагил}-батрацилин

72,2 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.44 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 72,1 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.7. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси этилацетата, этанола и уксусной кислоты в соотношении 400:100:2 получают 69,7 мг (57%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,11; т.п.: 111^oC.

Пример 6.48

Натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-( -L-фукопиранозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-аспарагил}-батрацилина

21,7 мг (20 ммоль) соединения примера 6.44 суспендируют в 10 мл воды. К суспензии при перемешивании прикапывают 0,05н. натровый щелок до того, как получается прозрачный раствор со значением pH < 10. Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 20,6 мг (93%) желтого аморфного твердого вещества.

Пример 6.49

Натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D- аспарагил}-батрацилина

23,5 мг (20 мкмоль) соединения примера 6.45 подвергают описанной в примере 6.48 реакции и перерабатывают. Получают 23,9 мг (100%) желтого аморфного твердого вещества.

Пример 6.50

Три-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D- аспарагил}-батрацилина

25,6 мг (20 мкмоль) соединения примера 6.46 растворяют в 10 мл воды и к раствору при перемешивании прикапывают 0,05-н. натровый щелок до достижения значения pH 8. Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 24 мг (92%) желтого аморфного твердого вещества.

Пример 6.51

Натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D- аспарагил}-батрацилина

24,7 мг (20 мкмоль) соединения примера 6.47 подвергают описанной в примере 6.48 реакции и перерабатывают. Получают 23,0 мг (92%) желтого аморфного твердого вещества.

Пример 6.52

N-{ N,N- бис-[O- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-глутамил}-батрацилин

56,2 мг (0,22 ммоль) п-аминофенил- -L-фукопиранозида подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 66,8 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.8. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси этилацетата и уксусной кислоты в соотношении 200: 1, а потом смеси этилацетата, этанола и уксусной кислоты в соотношении

10: 1: 0,1 получают 39,5 мг (36%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,09; т.п.: 138 - 139^oC (разл.).

Пример 6.53

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фенйламино-тиокарбонил]-лизил-D- глутамил}-батрацилина

77,3 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.43 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 66,8 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.8. В результате очистки получают 97,4 мг (75%) желтых кристаллов, т. п.: 180^oC (разл.).

Пример 6.54

Три-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-глутамил}- батрацилина

25,6 мг (20 мкмоль) соединения примера 6.53 подвергают описанной в примере 6.50 реакции и перерабатывают. В результате очистки получают 24,3 мг (92%) желтого аморфного твердого вещества. []²⁰= +20,0 (с = 0,26/H₂O).

Пример 6.55

N-{ N,N- бис-[O-( -L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-глицил}-батрацилин

56,2 мг (0,22 ммоль) п-аминофенил- -L-фукопиранозида подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 66,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.9. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала этилацетата, а потом этанола получают 62,2 мг (60 %) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,12; т.п.: 176^oC.

Пример 6.56

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидpoкcи-фeнилaминo-тиокарбонил]-лизил- глицил}-батрацилин

62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.25 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 66,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.9. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и этанола в соотношении 10:1-2:1 получают 56,2 мг (52%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,22; т.п.: 197^oC.

Пример 6.57

N-{ N,N- бис-[O-(3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-глицил}-батрацилин

79 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.31 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 66,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.9. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и этанола в соотношении 10:13:1 получают 26,2 мг (23%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,39; т.п.: 209^oC.

Пример 6.58

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метоксикарбонилметил- -D-галактогпиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- лизил-глицил}-батрацилин

75,5 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.42 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 66,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.9. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и этанола в соотношении 10:1 получают 22 мг (18%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,06; т.п.: 194 - 195^oC (разл.).

Пример 6.59

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-глицил}- батрацилина

77,3 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.43 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 66,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.9. После сгущения в вакууме продукт интенсивно промывают метанолом, дихлорметаном и диэтиловым эфиром. Получают 86,8 мг (71%) желтых кристаллов. Т.п.: 230 - 232^oC (разл.).

Пример 6.60

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-глицил}-батрацилин

72,2 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.44 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 66,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.9. После сгущения в вакууме продукт промывают метанолом, дихлорметаном и диэтиловым эфиром. Получают 40,9 мг (35%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,05; т.п.: 214-216^oC(разл.).

Пример 6.61 N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -D-маннопиранозил)- 4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-глицил}-батрацилин

62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.40 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 66,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.9. В результате очис тки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и этанола в соотношении 10:1-2:1 получают 72,2 мг (66%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,18; т.п.: 175^oC.

Пример 6.62

N-( N,N- бис-[O-(2,3-ди-O-метил- -D-маннопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-глицил}-батрацилин

66 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.41 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 66,2 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.9. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и этанола в соотношении 10:13:1 получают 66,6 мг (60%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,41; т.п.: 173^oC.

Пример 6.63

N-{ N,N- бис-[O-( -L-фукопиранозил)-4-1-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-треонил}-батрацилин

56,2 мг (0,22 ммоль) п-аминофенил- -L-фукопиранозида подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 64 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.12. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала этилацетата, а потом этанола и осаждения продукта из смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира получают 30,5 мг (28%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,10; т.п.: 172^oC.

Пример 6.64

N-{ N,N- бис-[O-( -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

59,7 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.23 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10:1-1:1 получают 68,3 мг (64%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1:1; R_f = 0,49; т.п.: 222 - 224^oC (разл).

Пример 6.65

N-{ N,N- бис-[O-(2-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-1-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.24 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира получают 69,6 мг (63 %) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,24; т.п.: 208^oC (разл).

Пример 6.66

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.25 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 15:1-10:1-5:1 получают 94,3 мг (85 %) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,16; т.п.: 212^oC (разл).

Пример 6.67

N-{ N,N- бис-[O-(4-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.26 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 15:1-10:1-5:1 получают 52,6 мг (48%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола: _f = 0,88; т.п.: 192^oC (разл).

Пример 6.68

N-{ N,N- бис-[O-(6-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.27 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира получают 96,7 мг (88%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1: R_f = 0,04; т.п.: 210^oC (разл.).

Пример 6.69

N-{ N,N- бис-[O-(2,3-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

65,9 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.28 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 20:1 получают 57,4 мг (51%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,40; т.п.: 148^oC (разл.).

Пример 6.70

N-{ N,N- биc-[O-(2,4-ди-O-метил- -D-гaлaктoпиpaнoзил)-4- гидpoкcифениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

65,9 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.29 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 20:1-15:1-10:1 получают 74,2 мг (65%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,40; т.п.: 140^oC (разл.).

Пример 6.71

N-{ N,N- бис-[O-(2,6-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

65,9 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.30 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 20:1-15:1 получают 43,9 мг (40%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,43; т.п.: 229^oC (разл.).

Пример 9.72

N-{ N,N- бис-[O-(3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-гиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

79 мг (6,22 ммоль) соединения примера 1.31 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10:1 получают 66,2 мг (59%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3: 0,2; R_f = 0,39; т.п.: 184^oC.

Пример 6.73

N-{ N,N- бис-[O-(3,6-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

65,9 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.32 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 15:110:1 получают 57,1 мг (50%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,42; т.п.: 190^oC (разл.).

Пример 6.74

N-{ N,N- бис-[O-(4,6-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-гиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

79 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.33 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 20:1-10:1-5:1 получают 47,0 мг (42%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,39; т.п.: 169^oC.

Пример 6.75

N-{ N,N- бис-[O-(2,3,4-три-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

69 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.34 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 30:1 получают 83,8 мг (72%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10:1; R_f = 0,36; т.п.: 165^oC (разл.).

Пример 6.76

N-{ N,N- бис-[O-(2,3,6-три-O-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

69 мг (6,22 ммоль) соединения примера 1.35 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. Продукт очищают путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира и получают 105 мг (91%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,48; т.п.: 194^oC (разл.).

Пример 6.77

N-{ N,N- бис-[O-(2,4,6-три-O-метил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

69 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.36 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 30:1-10:1 получают 67 мг (58%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,54: т.п.: 228^oC (разл.).

Пример 6.78

N-{ N,N- бис-[О-(3,4,6-три-O-метил- -D-галактопиранозил)- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

69 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.37 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. Продукт очищают путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира и получают 109,3 мг (94%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,52; т.п.: 180^oC (разл.).

Пример 6.79

N-{ N,N- бис-[O-(2,3,4,6-тетра-O-метил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

69 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.38 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. Продукт очищают путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира и получают 99,2 мг (84%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10:1; R_f = 0,73; т.п.: 188^oC (разл.).

Пример 6.80

N-{ N,N- -бис-[O-(3-O-метоксикарбонилметил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D- аланил}-батрацилин

75,5 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.42 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. Продукт очищают путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира и получают 22 мг (18%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,33; т.п.: 194 - 195^oC (разл.).

Пример 6.81

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-Oкарбоксиметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил- D-аланил}-батрацилина

77,3 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.43 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. После очистки получают 99,7 мг (81%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,80: т.п.: 230^oC (разл.).

Пример 6.82

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

72,2 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.44 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 7:1 получают 29,4 мг (25%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 3:1; R_f = 0,23; т.п.: 201 - 202^oC.

Пример 6.83

N-{ N,N- бис-[O-(3,4-дидесокси- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

52,6 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.52 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 17: 1 получают 38,8 мг (37%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_f = 0,40; т.п.: 175^oC.

Пример 6.84

N-{ N,N- бис-[O-( -D-маннопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

59,7 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.39 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10:11:1 получают 52 мг (48%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1:1; R_f = 0,19; т.п.: 196^oC.

Пример 6.85

N-{ N,N- биc-[O-(3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4- гидpoкcи-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

79 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.31 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.2. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10:1 получают 77,6 мг (69%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 15:3:0,2; R_а = 0,33; т.п.: 186^oC.

Пример 6.86

N-{ N,N- бис-[O-(4-O-( -D-галактопиранозил)- -D- глюкопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилин

95,4 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.56 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. После сгущения в вакууме остаток интенсивно промывают 50 мл горячего метанола. Получают 102,8 мг (73%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: метанол; R_f = 0,27; т.п.: 225 - 226^oC (разл.).

Пример 6.87

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(4-O-(3"-сульфат- -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- батрацилина

117,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.57 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. Продукт очищают путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира и получают 152,8 мг (95%) желтых кристаллов. Т.п.: 232^oC (разл.).

Пример 6.88

N-{ N,N- бис-[O-(4-O-(3"-O-метил- -D-галактопиранозил)- -D-глюкопиранозил)-4-гидрохси-фениламино-тиокарбонил]-лизил- D-аланил}-батрацилин

98,4 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.58 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. Продукт очищают путем осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира и получают 118,2 мг (83%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 1:1; R_f = 0,58; т.п.: 221^oC (разл.).

Пример 6.89

N-{ N,N- бис-[O-(2-O-метил-4-O-(3"-O-метил- -D- галактопиранозил)- -D-глюкопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

101,5 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.59 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 67,7 мг (0,1 ммоль) пептидного конюгата примера 2.13. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 15:1-10:1-5:1 получают 101,3 мг (70%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 2:1; R_f = 0,58; т.п.: 233^oC (разл.).

Примеры 7.1 - 7.13

Общая формула



Исходя из других конъюгатов аминокислоты или пептидных конъюгатов батрацилина или исходя из батрацилина аналогично примеру 4.1.а) получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 7.1

N-{ N-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-D-аланил}-батрацилин

Исходные соединения: углевод примера 1.2, конъюгат аминокислоты примера 2.3. Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:1:0,1. Продукт подвергают сублимационной сушке из смеси диоксана и воды. Выход: 42%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f = 0,31.

Пример 7.2

Натриевая соль М-{N-[O-(3-O-карбоксиметил- -L- фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-D-аланил}- батрацилина

Исходные соединения: углевод примера 1.10,

конъюгат аминокислоты примера 2.3.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:3:0,3. Продукт подвергают сублимационной сушке из смеси диоксана и воды, после чего переводят в натриевую соль с помощью 0,1н. натрового щелока. Выход: 43%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5; R_f = 0,14.

Пример 7,3

N-{N-[O-( -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-серил-D-аланил}-батрацилин

Исходные соединения: п-аминофенил- -L-фукозид,

конъюгат аминокислоты примера 2.18.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:3:0,3. Продукт подвергают сублимационной сушке из смеси диоксана и воды. Выход: 93%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:3:0,3; R_f = 0,28. Масс-спектр (бба): m/z = 705 =M+1.

Пример 7.4

N-{ N-[O- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- D-аланил-D-аланил}-батрацилин

Исходные соединения: п-аминофенил- -L-фукозид,

конъюгат аминокислоты примера 2.19.

Очистка путем дигерирования метанолом и осаждения из смеси метанола и дихлорметана с помощью диэтилового эфира. Выход: 65%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,78.

Пример 7.5

N-{ N-[O-( -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-глутамил-D-аланил}-батрацилин

Исходные соединения: п-аминофенил- -L-фукозид,

конъюгат аминокислоты примера 2.20.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5-15:6:0,6. Продукт подвергают сублимационной сушке из смеси диоксана и воды. Выход: 92%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:8:0,8; R_f = 0,55.

Пример 7.6

N-[O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-батрацилин

250 мг (1 ммоль) батрацилина растворяют в 50 мл диоксана, к раствору добавляют 184 мкл тиофосгена и перемешивают при 20^oC в течение 2 часов. Сгущают, дигерируют с диэтиловым эфиром и фильтруют. Остаток на фильтре сушат в высоком вакууме в течение 16 часов, после чего подают в 30 мл диметилформамида. К смеси добавляют 312 мг (1 ммоль) углевода примера 1.10 и 500 мкл этилдиизопропиламина, после чего обрабатывают ультразвуком в течение 4 часов. Потом сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15: 2: 0,2-15: 6:0,6. Соответствующие фракции сгущают и лиофилизуют из смеси диоксана и воды. Выход: 363 мг (60%). Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:6:0,6; R_f = 0,38.

Пример 7.7

N-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-батрацилин

Соединение получают аналогично примеру 7.6 исходя из батрацилина и углевода примера 1.2. Продукт очищают путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15: 1:0,1. Выход: 58%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f = 0,39. Масс-спектр: m/z = 561 = M+1.

Пример 7.8

N-{ N-[O-(3,4-ди-O-метил- -D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-D-аланил}-батрацилин

37,5 мг (0,11 ммоль) соединения примера 1.31 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 32 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.3. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 30:1 получают 49,3 мг (75%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь этилацетата и этанола в соотношении 2:1; R_f = 0,81; т.п.: 185^oC (разл.).

Пример 7.9

N-{ N-[O-(2,3,4-три-O-метил- -D-галактопиранозил)- 4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-D-аланил}-батрацилин

34,5 мг (0,11 ммоль) соединения примера 1.34 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 32 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.3. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 40:1-15:1 получают 54,9 мг (81%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 20:1; R_f = 0,15; т.п.: 190^oC (разл.).

Пример 7.10

N-{ N-[O-(3-O-метоксикарбонилметил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-D-аланил} -батрацилин

37,8 мг (0,11 ммоль) соединения примера 1.42 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 32 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.3. В результате очистки путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 20:1-10:1 получают 44,3 мг (63%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол: R_f = 0,85; т.п.: 195^oC (разл.).

Пример 7.11

Натриевая соль N-{N-[O-(3-O-карбоксиметил- -D- галактопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-D- аланил}-батрацилина

38,6 мг (0,11 ммоль) соединения примера 1.43 подвергают описанному в примере 6.216 взаимодействию с 32 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.3. В результате очистки путем переосаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 получают 63,8 мг (89%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол: R_f = 0,15; т.п.: 217^oC (разл.).

Пример 7.12

N-{ N-[O-(3-O-карбамоилметил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-D-аланил}-батрацилин

37,8 мг (0,11 ммоль) соединения примера 1.44 подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 32 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.3. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 20:1-10:1-5:1 получают 20 мг (29%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол: R_f = 0,15; т.п.: 184^oC (разл.).

Пример 7.13

N-{ N-[O-( -L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-D-аланил}-батрацилин

28,1 мг (0,11 ммоль) п-аминофенил- -L-фукопиранозида подвергают описанному в примере 6.26 взаимодействию с 32 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 2.3. В результате очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси этилацетата и петролейного эфира в соотношении 2:1-5: 1 получают 49,8 мг (81%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: этанол; R_f = 0,50; т.п.: 173^oC.

Примеры 8.1 - 8.12 Общая формула



Пример 8.1

Трифторацетат N-{ N- [2-хлор-4-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламино]-триазин-6-ил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

8.1.а) N-{ N- [трет-бутоксикарбонил]- N- [2-хлор-4-[O-(3-O-метил--L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]- триазин-6-ил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

265 мг (0,98 ммоль) п-аминофенил-3-O-метил- -L-фукозида примера 1.2 и 181 мг (0,98 ммоль) цианухлорида подают в 50 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1: 1, охлаждают до -5^oC, добавляют 83 мг бикарбоната натрия и перемешивают при данной температуре в течение 15 минут. Затем к смеси добавляют 538 мг (0,98 ммоль) N- N- трет-бутоксикарбонил)-лизил-D-аланил]- батрацилина примера 2.4, растворенного в 14 мл диметилформамида, и 83 мг бикарбоната натрия и дают нагреваться до комнатной температуры. После перемешивания при 20^oC в течение 16 часов сгущают и остаток обрабатывают водой. Отсасывают, остаток на фильтре сушат в высоком вакууме и получают 890 мг (96%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10:1; R_f = 0,26.

8.1) Трифторацетат N-{ N- [2-хлор-4-[O-(3-O-метил- - L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-триазин-6-ил]-лизил-D- аланил}-батрацилина

100 мг (0,11 ммоль) соединения примера 8.1.а) в смеси 5 мл безводной трифторуксусной кислоты и 5 мл дихлорметана перемешивают при 0^oC в течение 30 минут. Сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15: 1,5: 0,15. Последующее осаждение из смеси метанола и диэтилового эфира приводит к получению 41 мг (95%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f = 0,26. Масс-спектр (бба): m/z = 829 = М+1.

Пример 8.2

Трифторацетат N-{ N- [4-гидроксиэтиламино-2-[O-(3-O- метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-триазин-6-ил]- лизил-D-аланил}-батрацилина

8.2. а) N-{ N- [трет-бутоксикарбонил]- N- (4-гидроксиэтиламино-2-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]- триазин-6-ил]-лизил-D-аланил}-батрацилин

100 мг (0,11 ммоль) соединения примера 8.1.а) растворяют в 3 мл диоксана. К раствору добавляют 60 мг карбоната калия и 6,5 мл 0,1н. раствора этаноламина в диоксане и перемешивают при 80^oC в течение 18 часов. Потом сгущают и остаток перемешивают с водой. Фильтруют и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:1: 0,1. После сгущения соответствующих фракций сушат в высоком вакууме и получают 83 мг (80%) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2; R_f = 0,23.

8.2) Трифторацетат N-{ N- [4-гидроксиэтиламино-2-[O-(3-O- метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-триазин-6-ил]-лизил- D-аланил}-батрацилина

67 мг (0,07 ммоль) соединения примера 8.2.а) деблокируют аналогично примеру 8.1. После очистки путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2 осаждают из смеси метанола и диэтилового эфира. Получают 90% целевого соединения. Масс- спектр (бба): m/z = 854 = М+1.

Аналогично примеру 8.1 получают следующие гликоконъюгаты:

Пример 8.3

Трифторацетат N-{ N- { 2-xлop-4-[O-(2-O-мeтил- -L-фукозил)-4- гидpoкcи-фениламино]-триазин-6-ил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.1.

Выход: 76%. Масс-спектр (бба): m/z = 829 = М+1.

Пример 8.4

Трифторацетат N-{ N- [2-хлор-4-[O-( -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино]-триазин-6-ил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: п-аминофенил- -L-фукозид.

Выход: 36%. Масс-спектр (бба): m/z = 815 = М+1. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,: R_f = 0,44.

Пример 8.5

Трифторацетат N-{ N- [2-хлор-4-[O-десокси- -L-фукозил)-гидрокси- фениламино]-триазин-6-ил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.6.

Выход: 56%. Масс-спектр (бба): m/z = 799 = М+1. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5: 1:0,2; R_f = 0,54.

Аналогично примерам 8.1.а), 8.2.а) и 8.2 из пептидного конъюгата батрацилина примера 2.4 или из получаемых соответствующим образом L-аланил-изомеров получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 8.6

Трифторацетат N-{ N- [4-гидpoкcиэтилaминo-2-[O-(2- O-мeтил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-триазин-6- ил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.1.

Выход: 78%. Масс-спектр (бба): m/z = 854 = М+1. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5; R_f = 0,33.

Пример 8.7

Трифторацетат N-{ N- [4-гидроксиэтиламино-2-[O-(4-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-триазин-6-ил]-лизил-D-аланил} - батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.4.

Выход: 38%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5; R_f = 0,4.

Пример 8.8

Трифторацетат N-{ N- [4-гидроксиэтиламино-2-[O-(3- десокси- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-триазин-6- ил]-лизил-D-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.6.

Выход: 77%. Масс-спектр (бба): m/z = 824 = М+1. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5: R_f = 0,37.

Пример 8.9

Трифторацетат N-{ N- (4-гидроксиэтиламино-2-[O- ( -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-триазин-6-ил]-лизил-D- аланил}-батрацилина

Исходное соединение: п-аминофенил- -L-фукозид.

Выход: 52%. Масс-спектр (бба): m/z = 840 = М+1.

Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5: R_f = 0,30.

Пример 8.10

Трифторацетат N-{ N- [4-гидроксиэтиламино-2-[O-(3- O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-триазин-6-ил]- лизил-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.2.

Выход: 88%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:3:0,3; R_f = 0,35.

Пример 8.11

Трифторацетат N-{ N- [4-гидроксиэтиламино-2-[O- (2-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фенилатлино]- триазин-6-ил]-лизил-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.1.

Выход: 58%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5; R_f = 0,40.

Пример 8.12

Трифторацетат N-{ N- -гидроксиэтиламино-2-[O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-триазин-6-ил]- лизил-аланил}-батрацилина

Исходное соединение: углевод примера 1.4.

Выход: 66%. Масс-спектр (бба): m/z = 854 = М+1. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5; R_f = 0,37.

Пример 9.1 Трифторацетат N-[D-аланил]-хинолона-а



9.1.а) N-[N-(трет-бутоксикарбонил)-D-аланил]-хинолон-а

3,6 г (19,2 ммоль) N-(трет-бутоксикарбонил)-D-аланина и 5,8 г (19,2 ммоль) 2-изобутокси-1-изобутокси-карбонил-1,2-дигидро- хинолина растворяют в 200 мл диметилформамида. После перемешивания при комнатной температуре в течение 8 часов к раствору добавляют 4 г (9,6 ммоль) хинолона-а и 3,3 мл этилдиизопропиламина, после чего реакционную смесь обрабатывают ультразвуком в течение 10 часов. Сгущают, остаток подают в дихлорметан и осаждают добавкой диэтилового эфира. Фильтруют, промывают диэтиловым эфиром, сушат в высоком вакууме и получают 4,58 г (81%) целевого продукта, которое подают на следующую стадию без дальнейшей очистки.

9.1) Трифторацетат М-[D-аланил]-хинолона-а

4,56 г (7,75 ммоль) соединения примера 9.1.а) растворяют в 50 мл дихлорметана и 50 мл безводной трифторуксусной кислоты при 0^oC и перемешивают в течение часа при данной температуре. Сгущают, дополнительно перегоняют в присутствии дихлорметана и осаждают из метанола с помощью диэтилового эфира. Получают 4,07 г (87%) кристаллического целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,34.

Пример 9.2

Трифторацетат N-[аланил]-хинолона-а



Синтез осуществляют аналогично синтезу изомера примера 9.1.

Пример 9.3

Ди-трифторацетат N-[лизил-D-аланил]-хинолона-а



9.3.а) N-[ N,N- бис-(трет-бутоксикарбонил)-лизил-D-аланил]- хинолон-а

341 мг (0,984 ммоль) N,N- бис-(трет-бутоксикарбонил)-лизина растворяют в 10 мл диметилформамида, после чего к раствору при 0^oC добавляют 200 мг (1,48 ммоль) N-гидроксибензотриазола и 227 мг (1,18 ммоль) N-(3-диметил-аминопропил)-N-этилкарбодиимида в виде гидрохлорида. После перемешивания в течение 3 часов при 10^oC к смеси добавляют 432 мг (0,82 ммоль) соединения примера 9.1 и перемешивают еще 2 часа при 20^oC. Сгущают и остаток три раза перемешивают с водой, взятой в количестве по 50 мл. Затем остаток подают в дихлорметан и сушат над сульфатом натрия. В результате осаждения с помощью диэтилового эфира получают 516 мг (78%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10: 1; R_f = 0,55.

9.3) Ди-трифторацетат М-[лизил-D-аланил]-хинолона-а

512 мг (0,63 ммоль) соединения примера 9.3.а) деблокируют аналогично примеру 9.1. Осаждают из этилацетата с помощью диэтилового эфира. Выход: 479 мг (90%). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 10:3:1,5; R_f = 0,3.

Пример 9.4

Ди-трифторацетат N-[лизил-аланил]-хинолона-а

Синтез осуществляют аналогично синтезу изомера примера 9.3.

Пример 9.5

N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)-лизил-D-аланил]-хинолон-а



9.5. а) N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)- N- (флуоренил-9- метоксикарбонил)-лизил-D-аланил]-хинолон-а

1,57 г (3,36 ммоль) N- (трет-бутоксикарбонил)- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизина растворяют в 25 мл диметилформамида и смешивают при 0^oC с 600 мг (5,04 ммоль) М/гидроксисукцинимида и 820 мг (4,03 ммоль) N,N-дициклогексилкарбодиимида. Через 3 часа образовавшуюся мочевину отфильтровывают, к фильтрату добавляют 1,5 г (2,86 ммоль) соединения примера 9.1 и перемешивают в течение 16 часов при комнатной температуре. Остающуюся мочевину отфильтровывают и фильтрат очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 97,5 : 2,5-90 : 10. Затем осаждают из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира. Выход: 1,5 г (56%). Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9:1; R_f = 0,47.

9.5) N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)-лизил-D-аланил]- хинолон-а

Отщепление флуоренил-метоксикарбонильной группы примера 9.5.а) с помощью пиперидина в диметилформамиде. Осаждение сырого продукта из диметилформамида с помощью диэтилового эфира. Выход: 72%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,43.

Пример 9.6

Трифторацетат N-[ N- (флуopeнил-9-метoкcикapбoнил)-лизил-D-aлaнил] - хинолона-а



Отщепление трет-бутоксикарбонильной группы примера 9.5.а) аналогично примеру 9.1. Осаждение сырого продукта из смеси метанола и диэтилового эфира. Выход: 80%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5; R_f = 0,36.

Пример 9.7

N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)-лизил-аланил]-хинолон-а

Синтез осуществляют аналогично синтезу изомера примера 9.5.

Пример 9.8

Ди-трифторацетат N-[лизил]-хинолона-а



9.8.а) N-[ N,N- бис-(трет-бутоксикарбонил)-лизил]-хинолон-а

1317 мг (3,8 ммоль) N,N- бис-(трет-бутоксикарбонил)-лизина связывают с хинолоном-а аналогично примеру 9.1. а). Очистку осуществляют путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:1:0,1. Получают 1010 мг (71%) целевого продукта.

9.8) Ди-трифторацетат N-[лизил]-хинолона-а

1005 мг (1,347ммоль) соединения примера 9.8.а) деблокируют аналогично примеру 9.1. После осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира получают 966 мг (93%) кристаллического целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 10:5: 3; R_f = 0,33.

Пример 9.9 Ди-трифторацетат N-[D-лизил]-хинолона-а

Синтез осуществляют аналогично синтезу изомера примера 9.8.

Пример 9.10

N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)-лизил]-хинолон-а



9.10. а) N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)- N- (флуopeнил-9- метoкcикapбoнил)-лизил]-хинолон-а

1350 мг (2,88 ммоль) N- (трет-бутоксикарбонил)- N- флуоренил-9- метоксикарбонил)-лизина связывают с хинолоном-а аналогичны примеру 9.8.а). Очистку осуществляют путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:1:0,1-15:2: 0,2. Получают 1025 мг (82%) целевого продукта.

9.10) N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)-лизил]-хинолон-а

Отщепление флуоренил-метоксикарбонильной группы примера 9.10.а) аналогично примеру 9.5. Двукратное осаждение сырого продукта из метанола с помощью диэтилового эфира. Выход: 86%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,48.

Пример 9.11

Трифторацетат N-[ N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизил]-хинолона-а -

Отщепление трет-бутоксикарбонильной группы примера 9.10.а) аналогично примеру 9.1. Двукратное осаждение сырого продукта из смеси метанола и диэтилового эфира. Сублимационная сушка из смеси диоксана и воды. Выход: 92%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5; R_f = 0,44.

Примеры 10.1-10.3

Общая формула



Пример 10.1

N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламинотио-карбонил]-лизил-D-аланил}-хинолон-а

10.1. а) N-{ N- (трет-бутоксикарбонил)- N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}- хинолон-а

К 78 мг (0,25 ммоль) п-аминофенил-3-O-карбоксиметил- - L-фукозида примера 1.10 в 15 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1:1 при перемешивании добавляют 47 мкл (0,28 ммоль) тиофосгена. После перемешивания при 20^oC в течение 10 минут сгущают и сушат в течение часа в высоком вакууме. Затем полученное горчичное масло в абсолютном диметилформамиде связывают с 180 мг (0,25 ммоль) N-[ N- (трет-бутоксикарбонил)-лизил-D-аланил]-хинолона-а примера 9.5 в присутствии 86 мкл этилдиизопропиламина. После двукратного осаждения сырого продукта из смеси дихлорметана и диэтилового эфира перемешивают с водой, после чего продукт подвергают сублимационной сушке из смеси диоксана и воды. Выход: 210 мг (78%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,62.

10.1) N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-хинолон-а

208 мг (0,193 ммоль) соединения примера 10.1.а) в 10 мл дихлорметана смешивают с 10 мл безводной трифторуксусной кислоты и перемешивают при 0^oC в течение часа. Сгущают, дополнительно перегоняют в присутствии 15 мл метанола и подвергают хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 10:10:0,8. После осаждения из диметилформамида с помощью диэтилового эфира получают 52 мг (28%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2: R_f = 0,53.

Аналогично примеру 10.1 из частично защищенных пептидных конъюгатов примера 9.5, 9.7 или же 9.10 получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 10.2

N- { N- [O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-аланил}-хинолон-а

Исходные соединения: углевод примера 1.2,

пептидного конъюгат примера 9.7.

Продукт промежуточной стадии очищают путем многократного осаждения из метанола с помощью диэтилового эфира. Продукт конечной стадии очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5-15:8:0,8. Выход: 20%. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:8:0,8; R_f = 0,15.

Пример 10.3

N-{ N- [O-(3-O-метилт- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолон-а

Исходные соединения: углевод примера 1.2,

конъюгат аминокислоты примера 9.10.

Продукт промежуточной стадии очищают путем осаждения из метанола с помощью диэтилового эфира. Продукт конечной стадии очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:8:0,8. Выход: 39%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,33.

Примеры 11.1-11.18

Общая формула



N-{ N,N- бис[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]- тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-хинолон-а

50 мг (0,19 ммоль) п-аминофенил-3-О-метил- -L-фукозида примера 1.2 в соответствии с примером 10.1.а) сначала переводят в горчичное масло, после чего связывают в 5 мл диметилформамида с 68 мг (0,08 ммоль) ди-трифторацетата N-[лизил-D-аланил]-хинолона-а примера 9.3 в присутствии 55 мкл этилдиизопропиламина. Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, сгущают и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 85:15: 1,5.8 результате осаждения из метанола с помощью диэтилового эфира получают 62 мг (63%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 80:20:2. Масс-спектр: m/z = 1242 = М+1.

Аналогично примеру 11.1 из пептидных конъюгатов примера 9.3, 9.4, 9.8 или же 9.9 получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 11.2

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино]-тиокарбонил]-лизил-аланил}-хинолон-а

Исходные соединения: 50 мг (0,19 ммоль) углевода примера 1.2, 0,08 ммоль пептидного конъюгата примера 9.4. Очистка путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 90:10:1 и осаждение из метанола с помощью диэтилового эфира. Выход: 79%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,42.

Пример 11.3

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино]-тиокарбонил]-лизил-аланил}-хинолон-а

Исходные соединения: 52 мг (0,166 ммоль) углевода примера 1.10,

0,07 ммоль пептидного конъюгата примера 9.4.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 80:20:2 и перемешивание остатка с метанолом. Выход: 79%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 10:3:1,5; R_f = 0,62.

Пример 11.4

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил)-хинолон-а

Исходные соединения: 44 мг (0,14 ммоль) углевода примера 1.10,

0,06 ммоль пептидного конъюгата примера 9.3.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 80:20:2 и перемешивание остатка с метанолом. Выход: 57%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 10:3:1,5; R_f= 0,62.

Пример 11.5

N-{ N,N- бис-[O-( -- L-1-рамнозил)-4-гидрокси- фениламино]-тиокарбонил]-лизил-аланил}-хинолон-а

Исходные соединения: 44 мг (0,166 ммоль) углевода примера 1.21,

0,07 ммоль пептидного конъюгата примера 9.4.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 80:20:1 и перемешивание остатка с метанолом и диэтиловым эфиром. Выход: 90 мг (89%). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2. Масс-спектр (электронно-ударная ионизация): m/z = 1212 = М+1.

Пример 11.6

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино] - тиокарбонил]-лизил}-хинолон-а

Исходные соединения: 70 мг (0,258 ммоль) углевода примера 1.2,

0,11 ммоль конъюгата аминокислоты примера 9.8.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 90:10:1 и осаждение из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира. Остаток смешивают с водой и перемешивают. Выход: 41%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,65.

Пример 11.7

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино]-тиокарбонил]-D-лизил}-хинолон-а

Исходные соединения: 50 мг (0,19 ммоль) углевода примера 1.2,

0,08 ммоль конъюгата аминокислоты примера 9.9.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 90: 10:1 и осаждение из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира. Перемешивание остатка с водой. Выход: 67%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f= 0,65. Масс-спектр (бба): m/z = 1169 = М+1.

Пример 11.8

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)- 4-гидрокси-фениламино]-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-а

Исходные соединения: 50 мг (0,16 ммоль) углевода примера 1.10,

0,07 ммоль конъюгата аминокислоты примера 9.8.

Реакционную смесь сгущают, подают в 10 мл диметилформамида, добавляют 8 мл 0,1н. натрового щелока и перемешивают при 20^oC в течение 2 часов. После повторного сгущения продукт подают в воду и значение pH доводят до 5. Лиофилизуют, дигерируют сначала метанолом, а потом смесью метанола и диэтилового эфира. Получают 68 мг (65%) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5: 1:0,2; R_f = 0,26.

Пример 11.9

Ди-натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -L- фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-тиокарбонил]-D-лизил}-хинолона-а

Исходные соединения: 100 мг (0,32 ммоль) углевода примера 1.10,

0,13 ммоль конъюгата аминокислоты примера 12.9.

Реакционную смесь сгущают, подают в 10 мл диметилформамида, добавляют 16 мл 0,1н. натрового щелока и перемешивают при 20^oC в течение 2 часов. После повторного сгущения продукт подают в воду и значение pH доводят до 5. Лиофилизуют, дигерируют сначала метанолом, а потом смесью метанола и диэтилового эфира. Получают 160 мг (77%) целевого соединения, т.п.: 218 - 220^oC. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 10:3:1,5; R_f = 0,69.

Пример 11.10

N- N,N- биc-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидpoкcи-фeнилaминo)- тиокарбонил]-D-лизил}-хинолон-а

Исходные соединения: 50 мг (0,19 ммоль) углевода примера 1.3,

0,08 ммоль конъюгата аминокислоты примера 9.9.

Целевое соединение получают аналогично примеру 11.7. Очистку осуществляют путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 10:10:1 с последующим осаждением из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира. Выход: 66%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,62.

Пример 11.11

N-{ N,N- бис-[O-( -L-рамнозил)-4-гидрокси-фениламино]- тиокарбонил] -D-лизил}-хинолон-а

Исходные соединения: 50 мг (0,19 ммоль) углевода примера 1.21,

0,08 ммоль конъюгата аминокислоты примера 9.9.

Целевое соединение получают аналогично примеру 11.7. Выход: 57%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,63.

Пример 11.12

Натриевая соль

N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]- тиокарбонил]-D-лизил}-хинолона-а

58 мг (0,05 ммоль) соединения примера 11.7 суспендируют в воде и с помощью эквивалента 0,1н. натрового щелока переводят в натриевую соль. В результате сублимационной сушке получают 60 мг целевого соединения.

Пример 11.13

Натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил-b-D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино]-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-а

Раствор 62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.25 в 10 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1:1 при перемешивании смешивают с 33,5 мл (0,44 ммоль) тиофосгена. Через 10 минут сгущают в вакууме и остаток сушат в вакууме масляного насоса в течение часа. Полученный изотиоцианат растворяют в 10 мл абсолютного диметилформамида и смешивают с 77,4 мг (0,1 ммоль) соединения примера 9.8 и 0,5 мл этилдиизопропиламина. Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, сгущают в вакууме и очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 10:10:1, а потом смеси метанола и аммиака (25%) в соотношении 20:1. Получают желтые кристаллы, которые суспендируют в 10 мл воды. К суспензии при перемешивании прикапывают 0,05н. натровый щелок до получения прозрачного раствора (pH < 10). Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 39,7 мг (32%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰ = +25,8 (с = 0,26/H₂O).

Пример 11.14

Натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(4-O-(3"-O-метил-b-D-галактопиранозил)- b-D-глюкопиранозил)-4-гидрокси-фениламино]-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-а

98,4 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.58 подвергают описанному в примере 11.13 взаимодействию с 77,4 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 9: 8. В результате очистки получают 62,5 мг (40%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰ = +12,9 (с = 0,26/H₂O).

Пример 11.15

Натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(2-O-метил-4-O-(3"-O-метил-b-D-галакто- пиранозил)-b-D-глюкопиранозил)-4-гидрокси-фениламино] -тиокарбонил] - лизил} -хинолона-а

101,5 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.59 подвергают описанному в примере 11.13 взаимодействию с 77,4 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 9.8. В результате очистки путем переосаждения из смеси метанола и дихлорметана в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира и кипячения в присутствии этанола получают желтые кристаллы, которые вышеописанным образом переводят в натриевую соль. Получают 51,1 мг (32%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰ = +27,9 (с = 0,24/H₂O).

Пример 11.16

Натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил-b-D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино]-тиокарбонил]-D-лизил}-хинолона-а

62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.25 подвергают описанному в примере 11.13 взаимодействию с 77,4 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 9.9. В результате очистки получают 77,3 мг (63%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰ = +23,8 (с = 0,63/ H₂O).

Пример 11.17

Натриевая соль N- N,N- биc-[O-(3-O-метил-a-D-мaннoпиpaнoзил)-4- гидpoкcи-фениламино]-тиокарбонил]-D-лизил}-хинолона-а

62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.40 подвергают описанному в примере 11.13 взаимодействию с 77,4 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 9.9. В результате очистки получают 33,6 мг (27%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰ = +0,7 (c = 0,28/H₂O).

Пример 11.18

Натриевая соль N-{ N,N- бис-[O-(4-O-(3"-O- метил-b-D-галактопиранозил)-b-D-глюкопиранозил)-4-гидрокси- фениламино] -тиокарбонил]-D-лизил}-хинолона-а

98,4 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.58 подвергают описанному в примере 11.13 взаимодействию с 77,4 мг (0,1 ммоль) пептидного конъюгата примера 9.9. В результате очистки получают 63,0 мг (41%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰ = -21,8 (с = 0,22/H₂O).

Примеры 12.1 - 12.15

Общая формула



Пример 12.1

N-{N"-[O-(3-O-(метил- -L-фукозил)-4-гидpoкcи-фeнилaминo]- тиокарбонил] -D-аланил}-хинолон-а

447 мг (1,66 ммоль) п-аминофенил-3-О-метил- -L-фукозида примера 1.2 описанным в примере 10.1. а) образом сначала переводят в горчичное масло, после чего в 40 мл диметилформамида осуществляют сочетание с 1 г (1,66 ммоль) трифторацетата N-[D- аланил]-хинолона-а примера 9.1 в присутствии 568 мкл этилдиизопропиламина. Перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов, сгущают и очищают путем многократного осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 с помощью диэтилового эфира. Потом остаток на фильтре два раза смешивают с водой. Получают 876 мг (66%) целевого продукта, т. п.: 198^oC. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f = 0,63.

Аналогично примеру 12.1 из конъюгатов аминокислоты примера 9.1 или же 9.2 получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 12.2

N-{N"-[O-(3-O-(метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино]-тиокарбонил] -аланил}-хинолон-а

Исходное соединение: 25 мг (0,092 ммоль) углевода примера 1.2. Очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 90:10:1 и осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 с помощью диэтилового эфира, после чего остаток на фильтре смешивают с водой. Получают 53 мг (52%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2: R_f = 0,65.

Пример 12.3

Моно-натриевая соль N-{ N"-[O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино]-тиокарбонил]-D-аланил}-хинолона-а

Исходные соединения: 523 мг (1,67 ммоль) углевода примера 1.10,

840 мг (1,39 ммоль) соединения примера 12.1.

После 6-часовой реакции сгущают и смешивают с водой. Очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:8:0,8 - 10:1:1, после чего осуществляют сублимационную сушку из смеси диоксана и воды. Потом подают в воду, к смеси добавляют эквивалент 0,1н. натрового щелока и лиофилизуют. Получают 525 мг (45%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f= 0,39.

Пример 12.4

N-{N"-[O-( -L-рамнозил)-4-гидрокси-фениламино]- тиокарбонил]-D-аланил} -хинолон-а

Исходное соединение: 20 мг (0,076 ммоль) углевода примера 1.21.

Очистка путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 90:10:1 и осаждения из метанола с помощью диэтилового эфира. Выход: 20 мг (34%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1: 0,2: R_f = 0,42.

Из частично защищенных конъюгатов N-(лизил)-хинолона-а или же конъюгатов N-(лизил-D-аланил)-хинолона-а получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 12.5

N-{ N- [O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил] -лизил}-хинолон-а

12.5.а) N-{ N- [O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]- N- [флуоренил-9-метоксикарбонил]- лизил}-хинолон-а

92 мг (0,34 ммоль) п-аминофенил-3-O-метил- -L-фукозида примера 1.2 аналогично примеру 10.1.а) сначала переводят в горчичное масло, после чего в 20 мл диметилформамида сочетают с 300 мг (0,34 ммоль) трифторацетата N-[ N- (флуоренил-9- метоксикарбонил)-лизил]-хинолона-а примера 9.11 в присутствии 116 мкл этилдиизопропиламина. Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, сгущают и очищают путем осаждения из дихлорметана с помощью диэтилового эфира. Остаток на фильтре смешивают с водой и лиофилизуют из смеси диоксана и воды. Получают 290 мг (79%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f=0,6.

12.5) N-{ N- [O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолон-а

288 мг (0,267 ммоль) соединения примера 12.5.а) растворяют в 20 мл дихлорметана и смешивают с 8 мл пиперидина. После 30- минутного перемешивания при 20^oC сгущают и осаждают из дихлорметана с помощью диэтилового эфира. Очищают путем флеш- хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 10:10:2. Остаток смешивают с диэтиловым эфиром и лиофилизуют из воды. Получают 90 мг (39%) целевого продукта. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 10:10:5: R_f = 0,4.

Аналогично примерам 12.5 из конъюгатов примера 9.11 или же 9.6 получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 12.6 Ди-натриевая соль N-{ N- [O-(3-O- карбоксиметил -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-лизил}-хинолона-а

Исходные соединения: 63 мг (0,2 ммоль) углевода примера 1.10, 158 мг (0,18 ммоль) соединения примера 9.11. Продукт промежуточной стадии очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5-10:10:1. Продукт конечной стадии очищают путем многократного смешивания с метанолом и промывания остатка на фильтре диэтиловым эфиром. Выход: 44%. Потом суспендируют в воде, с помощью двух эквивалентов 0,1н. натрового щелока переводят в ди-натриевую соль и раствор лиофилизуют. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 10:3:1,5; R_f = 0,34.

Пример 12.7

N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил}-хинолон-а

Исходные соединения: 147 мг (0,47 ммоль) углевода примера 1.10,

448 мг (0,47 ммоль) соединения примера 9.6.

Продукт промежуточной стадии очищают путем двукратного осаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 в присутствии диэтилового эфира. Остаток на фильтре смешивают с водой. Выход: 92%. Продукт конечной стадии очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 10:10:2. Продукт осаждают из диметилформамида в присутствии диэтилового эфира. Выход: 59%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 10:3:1,5; R_f = 0,4.

Пример 12.8

Гидрохлорид N-{ N- [O-(3-O-метил-b-D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-а

Исходные соединения: 62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.25,

180,0 мг (0,2 ммоль) пептидного конъюгата примера 9.11.

Продукт промежуточной стадии очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1-7: 1-2: 1. Получают 145,7 мг (67%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,48. Потом описанным в примере 4.5 образом флуоренил-9-метоксикарбонильную группу отщепляют и очищают. Получают желтые кристаллы, которые суспендируют в 10 мл воды. К суспензии при перемешивании прикапывают 0,1-н. соляную кислоту до получения прозрачного раствора (pH < 3). Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 119,4 мг (66%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰ = +33,8 (с = 0,28/H₂O).

Пример 12.9

Гидрохлорид N-{ N- [O-(3,6-ди-O-метил-b-D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-а

Исходные соединения: 65,9 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.32,

180,0 мг (0,2 ммоль) пептидного конъюгата примера 9.11.

Продукт промежуточной стадии очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1-7: 1-1: 1. Получают 115,0 мг (52%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,44. Потом описанным в примере 4.5 образом флуоренил-9-метоксикарбонильную группу отщепляют и очищают. Получают желтые кристаллы, которые суспендируют в 10 мл воды. К суспензии при перемешивании прикапывают 0,1н. соляную кислоту до получения прозрачного раствора (pH < 3). Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 94,3 мг (51%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰= 44,2 (с = 0,34 /H₂O).

Пример 12.10

Гидрохлорид N-{ N- [O-(3-O-метил-а-D-маннопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-а

Исходные соединения: 62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.40,

180,0 мг (0,2 ммоль) пептидного конъюгата примера 9.11.

Продукт промежуточной стадии очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 10: 1-5:1-1:1. Получают 96,7 мг (44%) желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 5:1; R_f = 0,47. Потом описанным в примере 4.5 образом флуоренил-9-метоксикарбонильную группу отщепляют и очищают. Получают желтые кристаллы, которые суспендируют в 10 мл воды. К суспензии при перемешивании прикапывают 0,1н. соляную кислоту до получения прозрачного раствора (pH < 3). Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 78,2 мг (43%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰ = -157,2 (с = 0,30 /H₂O).

Пример 12.11

Гидрохлорид N-{ N- [O-(4-O-(3"-O-метил-b-D-галактопиранозил)- b-D-глюкопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-а

Исходные соединения: 98,4 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.58,

180,0 мг (0,2 ммоль) пептидного конъюгата примера 9.11.

Продукт промежуточной стадии очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 20:10:1-10:10:1, а потом смеси метанола и аммиака (25%) в соотношении 20:1. Получают 132,1 мг (53%) бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 10: 10: 3; R_f = 0,60. Потом описанным в примере 4.5 образом флуоренил-9-метоксикарбонильную группу отщепляют и очищают. Получают желтые кристаллы, которые суспендируют в 10 мл воды. К суспензии при перемешивании прикапывают 0,1н. соляную кислоту до получения прозрачного раствора (pH < 3). Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 90,0 мг (42%) желтого аморфного твердого вещества, []²_D⁰ = +192,2 (с = 0,27/H₂O).

Исходя из незамещенного хинолона-а аналогично примеру 12.1 получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 12.12

Ди-натриевая соль N-[O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-хинолона-а

Исходные соединения: 78,5 мг (0,25 ммоль) углевода примера 1.10,

70,0 мг (0,167 ммоль) хинолона-а.

После 6-часовой реакции сгущают, продукт подают в диметилформамид, смешивают с 4 мл 0,1н. натрового щелока и перемешивают в течение часа. Очистку осуществляют путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5. С помощью 0,1н. натрового щелока доводят до значения pH 7 и лиофилизуют. Выход: 60 мг (44%). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2: R_f = 0,42. Масс-спектр (бба): m/z = 773 = M-2Na⁺+3H⁺.

Пример 12.13

N-[O-{ 3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]- хинолона-а

Исходные соединения: 32 мг (0,12 ммоль) углевода примера 1.2,

50 мг (0,12 ммоль) хинолона-а.

После 2-часовой реакции очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и ледяной уксусной кислоты в соотношении 90: 10:1. Потом осаждают из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1: 1 в присутствии диэтилового эфира. Выход: 59 мг (51%). Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f= 0,43.

Пример 12.14

Гидрохлорид N-{ N- (O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-а

86 мг (0,1 ммоль) углевода примера 12.5 подают в воду и с помощью эквивалента 0,1н. соляной кислоты переводят в соль. В результате сублимационной сушки получают 88 мг целевого соединения.

Пример 12.15

Гидрохлорид N-{ N- (O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-диамино-пропионоил}-хинолона-а

Исходя из N- (трет-бутоксикарбонил)- N- (флуоренил-9- метоксикарбонил)-L-диаминопропионовую кислоты и хинолона-а аналогично примеру 12.14 через несколько стадий получают гликоконъюгат примера 12.15. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5: 1:0,2; R_f = 0,3.

Примеры 13

Общая формула



Пример 13.1

N-{ N"-[O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил] -D-аланил}-хинолон-б

13.1. а) Хинолон-б: 4-амино-7-[(3aRS, 4RS, 7aSR)-4-амино- 1,3,3a, 4,7,7a-гексагидро-изоиндол-2-ил] -1-циклопропил-6-фтор- 1,4-дигидро-8-метокси-4-оксо-3-хинолинкарбоновая кислота

К 310 мг (1 ммоль) 5-амино-1-циклопропил-6,7-дифтор-1,4- дигидро-8-метокси-4-оксо-3-хинолинкарбоновой кислоты в смеси 4 мл ацетонитрила и 2 мл диметилформамида добавляют 170 мг (1,5 ммоль) 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана и 152 мг (1,1 ммоль) (3aRS, 4RS, 7aSR)-4-амино-1,3,3a,4,7,7a-гексагидро-изоиндола и нагревают с обратным холодильником в течение часа. Смесь сгущают в вакууме и остаток смешивают с около 20 мл воды. Выпавший остаток отсасывают и сушат в вакууме при температуре 100^oC. Выход: 301 мг (70% теории). Т.п. : 237 - 239^oC (разл.).

13.1.6) Трифторацетат N-[D-аланил]-хинолона-б

Целевое соединение получают исходя из соединения примера 13.1.а) и N-(трет-бутоксикарбонил)-D-аланина аналогично примеру 9.1.

13.1) N-{ N"-{ O-(3-O-метил- -L-фукозил)-4-гидpoкси- фениламино-тиoкapбонил]-D-аланил}-хинолон-б

Целевое соединение получают аналогично примеру 12.1 в результате взаимодействия соединения примера 13.1.6) с п- аминофенил-3-О-метил- -L-фукозидом примера 1.2.

Примеры 14

Общая формула



Хинолон-в: 8-(2-амино-5-метил-8-азабицикло[4.3.0] нон-3-ен-8- ил)-1-метил-7- фтор-5-оксо-5Н-тиазоло[3,2-а]-хинолин-4-карбоновая кислота

Пример 14.1

Гидрохлорид N-{ N- [O-(3-O-метил-b-D-галактопиранозил)-4-гидрокси-фенил амино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-в

14.1. а) Трифторацетат N-[ N- (флуopeнил-9-метокcикарбонил)-лизил]-хинолона-в

Исходные соединения: 1,4 г (3,0 ммоль) N- (трет-бутоксикарбонил)- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизина 820 мг (1,9 ммоль) хинолона-в

Промежуточный продукт получают аналогично примеру 9.1.а). В результате переосаждения из смеси этанола и диэтилового эфира получают 1,37 г (82%) светложелтых кристаллов, из которых аналогично примеру 9.1.6) высвобождают соединение примера 14.1. а). Получают 1,25 г (74%) оранжевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 30:10:1; R_f= 0,7; т.п.: 180^oC.

14.1) Гидрохлорид N-{ N- [O-(3-O-метил-b-D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-в

Аналогично примеру 12.5 62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.25 подвергают взаимодействию с 178,4 мг (0,2 ммоль) пептидного конъюгата примера 14.1.а). Промежуточный продукт очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 30:6:1-30:10:1 и получают 97,0 мг (44%) светложелтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 30: 10:1; R_f= 0,23. Затем вышеописанным образом отщепляют флуоренил-9-метоксикарбонильную группу и очищают. Получают желтые кристаллы, которые суспендируют в 10 мл воды. К суспензии при перемешивании прикапывают 0,1н. соляную кислоту до получения прозрачного раствора (pH > 3). Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 75,8 мг (41%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰ = +12,5 (с = 0,27/H₂O).

Аналогично примеру 14.1 из пептидного конъюгата примера 14.1.а) получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 14.2

Гидрохлорид N-{ N- [O-(3-O-метил-b-L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-в

Исходные соединения: 59,5 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.2, 178,4 г (0,2 ммоль) пептидного конъюгата примера 14.1.а) Промежуточный продукт очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 30:6:1-30:10:1 и получают 146,6 мг (67%) светло-желтых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 30:6:1: R_f = 0,48. Затем вышеописанным образом отщепляют флуоренил-9- метоксикарбонильную группу и переводят в гидрохлорид. Получают 107,7 мг (60%) желтого аморфного твердого вещества. []²_D⁰ = +51,6 (c = 0,36/H₂O).

Пример 14.3

Ди-натриевая соль N-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-в

Гликоконъюгат примера 14.4 получают исходя из соединения примера 14.1.а) аналогично примеру 12.6 через несколько стадий. Масс-спектр (бба): m/z = 911 = M-2Na+3H.

Пример 14.4

Гидрохлорид N-{ N- [O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-D-лизил}-хинолона-в

Конъюгат получают аналогично изомеру примера 14.2. Масс- спектр (бба): m/z = 867 = М+Н.

Примеры 15

Общая формула



Хинолон г: 4-(2-амино-8-азабицикло[4.3.0] нон-4-ен-8-ил)-1- циклопропил-6,8-дифтор-1,4-дигидро-4-оксо-хинолин-3-карбоновая кислота

Пример 15.1

Гидрохлорид N-{ N- [O-(3-O-метил-b-D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-г

15.1. а) Трифторацетат N-[ N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)- лизил]-хинолона-г

1,4 г (3,0 ммоль) N- (трет-бутоксикарбонил)- N- (флуоренил-9- метоксикарбонил)-лизина подвергают взаимодействию с 1,28 мг (2,8 ммоль) гидрохлорида хинолона-г описанным в примере 9.1.а) образом. В результате переосаждения из смеси дихлорметана и метанола в соотношении 1:1 в присутствии диэтилового эфира получают 1,97 г (83%) бежевых кристаллов, из которых аналогично примеру 9.1.6) высвобождают соединение примера 15.1.а). Получают 1,7 r (70%) бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 28:14:1: R_f = 0,60; т.п.: 215^oC.

15.1) Гидрохлорид N-{ N- [O-(3-O-метил-b-D-галактопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-г

Аналогично примеру 12.5 62,8 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.25 подвергают взаимодействию с 173,2 мг (0,2 ммоль) пептидного конъюгата примера 15.1.а). Промежуточный продукт очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 28:14:1, а потом смеси метанола и аммиака (25%) в соотношении 20:1. Получают 140,8 мг (65%) бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 28: 14: 1; R_f= 0,06. Затем вышеописанным образом отщепляют флуоренил-9-метоксикарбонильную группу и очищают. Получают бежевые кристаллы, которые суспендируют в 10 мл воды. К суспензии при перемешивании прикапывают 0,1н. соляную кислоту до получения прозрачного раствора (pH > 3). Раствор фильтруют, лиофилизуют и получают 102,6 мг (57%) желтого аморфного твердого вещества. [²_D⁰] = -49,0 (с = 0,26/H₂O).)

Аналогично примеру 15.1 из пептидного конъюгата примера 15.1.а) получают следующие гликоконъюгаты.

Пример 15.2 Гидрохлорид N-{ N- [O-(4-O-(3"-O-метил-b-D- галактопиранозил)-b-D-глюкопиранозил)-4-гидрокси- фениламино]-тиокарбонил]-лизил}-хинолона-г

Исходные соединения: 98,4 мг (0,22 ммоль) соединения примера 1.58, 173,2 мг (0,2 ммоль) пептидного конъюгата примера 15.1.а).

Промежуточный продукт очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента сначала смеси дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 20:10:1-10:10:1, а потом смеси метанола и аммиака (25%) в соотношении 20: 1. Получают 106,5 мг (43%) бежевых кристаллов. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (25%) в соотношении 10: 10: 3; R_f= 0,51. Затем вышеописанным образом отщепляют флуоренил-9-метоксикарбонильную группу и переводят в гидрохлорид. Получают 82,0 мг (39%) желтого аморфного твердого вещества, [²_D⁰] = +22,8 (с = 0,29/H₂O).

Примеры 16: гликоконъюгаты с мелфаланом

Общая формула



Пример 16.1

N-{ N" -[O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4- rидpoкcи-фенилaминo-тиокарбонил]-D-аланил}-мелфалан

16.1.а) N-тpeт-бутoкcикapбoнил-D-aлaнил-мелфaлaн

114 мг (0,6 ммоль) N-трет-бутоксикарбонил-D-аланина растворяют в 10 мл ди-метилформамида. При 0^oC к раствору добавляют 138 мг гидрохлорида N"-(3-диметиламинопропил)-N-этил-карбодиимида и 1-гидрокси-бензотриазол. Через 10 минут к смеси добавляют 153 мг мелфалана и перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов. Сгущают и распределяют между дихлорметаном и водой. Органическую фазу промывают, сушат над сульфатом натрия, сгущают и подвергают флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:2:0,2-15:4:0,5. Получают 134 мг (56%) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана, метанола и аммиака (17%) в соотношении 15:4:0,5: R_f= 0,45.

16.1 N-(N"-[O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-D-аланил}-мелфалан

Отщепление защитной группы и сочетание с углеводом осуществляют описанным в примерах 9.1 или же 12.1 образом. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f = 0,26. Масс-спектр (бба): m/z = 685 = М-Н.

Пример 16.2

N-(N"-[O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси-фениламино- тиокарбонил]-аланил-аланил}-мелфалан

Это соединение можно получать аналогично примеру 16.1 через несколько стадий. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f = 0,2. Масс-спектр (бба): m/z = 756 = М-Н.

Примеры 17: гликоконъюгаты с доксорубицином (адриамицином)

Общая формула



Пример 17.1

N-{ N" [O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-аланил-аланил}-доксорубицин

17.1.а)

N-[O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил] -ананил-аланил

160 мг (1 ммоль) аланил-аланина подают в 20 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1:1, после чего добавляют 1 мл основания Хюнига. 1,2 ммоль п-аминофенил-3-О-метил- -L-фукозида примера 1.2 аналогично примеру 10.1.a) сначала переводят в горчичное масло и потом подают в раствор дипептида. Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, сгущают и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси ацетонитрила и воды в соотношении 15:1. Соответствующие фракции сгущают и продукт осаждают из смеси метанола и диэтилового эфира. Выход: 267 мг (57%).

17.1) N-{N"-[O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-аланил-аланил}-доксорубицин

48 мг (0,1 ммоль) соединения примера 17.1.а) растворяют в 10 мл диметил-формамида, после чего смешивают с 23,1 мг гидрохлорида N"-(3-диметилами-нопропил)-N-этил-карбодиимида и 21 мг 1- гидрокси-бензотриазола. Через 5 минут к смеси добавляют 30 мг доксорубицина и 35 мкл основания Хюнига, после чего перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Сгущают и остаток очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 88:12. Соответствующие фракции сгущают и продукт лиофилизуют из смеси диоксана и воды. Получают 20 мг (40%) целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 10:1; R_f = 0,17. Масс-спектр (электронно-ударная ионизация): m/z = 997 = М+Н.

Пример 17.2

N-{ N,N- (бис-[O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-D-лизил-аланил}-доксорубици

17.2. а) N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-D-лизил-аланин

580 мг (1,31 ммоль) бис-трифторацетата D-лизил-аланина описанным в примере 17.1. а) образом связывают с 2,2 эквивалента углевода примера 1.2 в присутствии 1,3 мл основания Хюнига. Очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси ацетонитрилаи воды в соотношении 10:1. Получают 446 мг (41%) целевого соединения.

17.2) N-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4- гидрокси-фенил-амино-тиокарбонил]-D-лизил-аланил}-доксорубицин

59 мг соединения примера 17.2.а) связывают с 20 мг доксорубицина описанным в примере 17.1 образом. Получают 15 мг конъюгата. Тонкослойная хроматография: смесь дихлорметана и метанола в соотношении 85:15; R_f = 0,43. Масс-спектр (бба): m/z = 1365 = М+Н.

Примеры 18: гликоконъюгаты с камптотецином

Общая формула



Пример 18.1

20-O- { N,N- бис-[О-(3-О-метил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-аланил}-камптотецин

18.1.а) Трифторацетат 20-O-(аланил)-камптотецин

500 мг (1,44 ммоль) камптотецина растворяют в 20 мл диметилформамида и смешивают с 50 мг 4-диметиламинопиридина и N- трет-бутоксикарбонил-аланин-N-карбокси-ангидридом. По истечении 3 часовк смеси добавляют еще 775 мг N-трет-бутоксикарбонил-аланин- N-карбокси-ангидрида и суспензию обрабатывают ультразвуком в течение 16 часов. Сгущают, сырой материал подают в 50 мл дихлорметана и при 0^oC к смеси добавляют 5 мл трифторуксусной кислоты. Перемешивают в течение 30 минут, еще раз сгущают и продукт очищают путем флеш-хроматографии с применением в качестве элюента смеси

ацетонитрила и воды в соотношении 20:1. Соответствующие фракции собирают, сгущают и лиофилизуют из смеси диоксана и воды. Выход: 712 мг (93%). Масс-спектр (бба): m/z = 420 = М+Н.

18.1.6) Бис-трифторацетат 20-O-(лизил-аланил)-камптотецина

Конъюгат примера 18.1. а) стандартным образом связывают N,N- бис-(трет-бутоксикарбонил)-лизином, после чего деблокируют. Выход целевого соединения: 65%.

18.1) 20-O-{ N,N- бис-[O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-аланил}-камптотецин

п-аминофенил-3-O-метил- -L-фукозида примера 1.2 связывают с конъюгатом примера 18.1. б) аналогично примеру 11.1. Выход: 40%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 10:1; R_f = 0,44.

Пример 18.2

20-O-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-аланил}-камптотецин

18.2. а) Трифторацетат 20-O- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)- лизил-аланил]-камптотецина

Конъюгат примера 18.1. а) стандартным образом связывают с N- трет-бутоксикарбонил)- N- (флуоренил-9-метоксикарбонил)-лизином, после чего деблокируют аминофункции. Выход: 24% целевого соединения. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 20:1; R_f = 0,15.

18.2. б) 20-O-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси-фенилaминo-тиoкapбoнил] N- (флуopeнил-9-мeтoкcикapбoнил)-лизил-аланил]-камптотецин

Соединение примера 18.1.а) аналогично примеру 12.6 или же 12.5 модифицируют производным углевода примера 1.10. Сырой продукт очищают путем дигерирования водой, после чего лиофилизуют из смеси диоксана и воды. Продукт подают на следующую стадию без дальнейшей обработки.

18.2) 20-O- N- [O-(3-О-карбоксиметил- -L-фукопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-аланил}-камптотецин

Конъюгат примера 18.2.6) деблокируют с помощью пиперидина в диметилформамиде. По истечении 30 минут сгущают и остаток дважды дигерируют дихлорметаном. Потом продукт подают в диметилформамид и осаждают смесью метанола и диэтилового эфира. Продукт отсасывают, промывают диэтиловым эфиром и лиофилизуют из смеси диоксана и воды. Выход: 86%. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1: 0,2; R_f = 0,17.

Пример 18.3

Натриевая соль 20-O- N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L- фукопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил- аланил}-камптотецина

62 мг (0,074 ммоль) конъюгата примера 18.2 подают в смесь диоксана и воды и переводят в натриевую соль с помощью 1 эквивалента 0,1н. натрового щелока. Выход: колич. Тонкослойная хроматография: смесь ацетонитрила, воды и ледяной уксусной кислоты в соотношении 5:1:0,2; R_f= 0,17.

Аналогично примерам 18.1 и 18.2 получают следующие гликоконъюгаты камптотецина.

Пример 18.4

20-O-{ N,N- бис-[O(3-О-метил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-D-аланил} -камптотецин

Пример 18.5

20-O-{ N,N- биc-[O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4-гидpoкcи- фенилaминo-тиокарбонил]-лизил-валинил}-камптотецин

Пример 18.6

20-O-{ N- [O-(3-O-кapбoкcимeтил- -L-фукoпиpaнoзил)-4-гидpoкcи- фениламин-тиокарбонил]-лизил-валинил}-камптотецин

Пример 18.7

20-O- N- [O(3-О-метил- -D-галактопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-тиокарбонил]-лизил-валинил}-камптотецин

Пример 18.8

20-O-{ N- [O-(3-O-метил- -D-галактопиранозил)- 4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-аланил}-камптотецин

Пример 18.9

Гидрохлорид 20-O-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L- фукопиранозил)-4-гидроксифениламино-тиокарбонил]-лизил- валинил}-камптотецина

Соединение примера 18.6 переводят в гидрохлорид с помощью эквивалента 0,01н. соляной кислоты.

Пример 18.10

Гидрохлорид 20-O-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси- фениламино-гиокарбонил]-лизил-аланил}-камптотецина

Соединение примера 18.2 переводят в гидрохлорид с помощью эквивалента 0,01-н. соляной кислоты.

Пример 18.11

Гидрохлорид 20-O-{ N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-фенилаланил}-камптотецина

Пример 18.12

Натриевая соль 20-O-{ N,N- [O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-аланил}- камптотецина

Пример 18.13

Натриевая соль 20-O-{ N,N- бис-[O-(3-O-карбоксиметил- -L-фукопиранозил)-4-гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил- валинил}-камптотецина

Пример 18.14

Гидрохлорид 20-O-{ N- [O-(3-O-метил- -L-фукопиранозил)-4- гидрокси-фениламино-тиокарбонил]-лизил-аланил}-камптотецина