противогерпетическое средство

Формула изобретения

Применение этадена в качестве противогерпетического средства.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и, в частности, офтальмологии.

В настоящее время в офтальмологической практике в качестве противовирусных средств для лечения заболеваний глаз, вызванных вирусом простого герпеса, нашли применение следующие препараты: 0,1% р-р ИДУ, 3% мазь Видарбин, Хелепин, Бонафтон, Интерферон, Зовиракс [Ю.Ф. Майчук "Вирусные заболевания глаз" - М. "Медицина" 1981, 272 с.].

Однако, применение вышеперечисленных препаратов не всегда оказывается эффективным. Это объясняется многими причинами - низкой растворимостью препаратов, невозможностью обеспечить терапевтические концентрации в месте репродукции вируса, токсическим действием химиопрепаратов на оболочки глаз, а также развитием резистентности ко всем применяемым препаратам. Поэтому для успешной терапии заболеваний глаз, вызванных вирусом простого герпеса, требуются новые противовирусные препараты, а также препараты, улучшающие трофику и регенерацию пораженной роговицы [А.А. Каспаров "Офтальмогерпес" - М., 1994].

Ближайшим аналогом предлагаемого средства является 5-йод-2 десоксиуридин (ИДУ), 0,1% глазные капли ИДУ нашли широкое применение в офтальмологической практике для лечения заболеваний глаз, вызванных вирусом простого герпеса, а кроме того, ИДУ остается главным препаратом - "маркером" при экспериментальной оценке новых противогерпетических средств (Ю.Ф. Майчук "Глазные инфекции" - Русский Мед. ж., 1999, т. 7, N 1, 16-19].

Известен препарат этаден, относящийся к группе стимуляторов процессов регенерации в тканях, в основе которых лежат процессы активации биосинтеза нуклеиновых кислот. Этаден в медицинской практике применяется для терапии термических и лучевых поражений кожи, при длительных незаживающих ранах в виде порошка и 1% инъекционного раствора [Этаден: Проспект - М., ЦБНТИ Мед. пром., 1985 - 18 с.].

Нами ранее показано, что препарат этаден в виде 0,5%-ного водного раствора в качестве репаративного препарата эффективен при лечении глазных вирусных заболеваний, сопровождающихся деструкцией (язвенные поражения) и нарушениями трофики роговицы.

Установлено, что сочетание в качестве специфического противогерпетического препарата инстилляций противовирусного препарата ИДУ и в качестве репаративного средства 0,5%-ного водного раствора этадена, который стимулирует репаративные процессы в роговице с герпетическими поражениями и ведет к сокращению сроков излечения [Патент на изобретение N 2122844 от 17.06.96 "Способ лечения герпетического кератита с изъязвлением" Ю.Ф. Майчук и др.].

Однако, дополнительные экспериментальные исследования показали, что препарат этаден самостоятельно проявляет противовирусную активность в отношении вируса простого герпеса.

Противогерпетическая активность данного препарата в известной литературе не описана.

Сущность предлагаемого изобретения состоит в том, что препарат репаративного действия этаден проявляет противовирусную активность в отношении вируса простого герпеса в системе in vitro на модели культуры клеток и in vivo на модели экспериментального герпетического кератита глаз кроликов.

Пример 1. Противогерпетическая активность этадена in vitro.

Испытание проводили на культурах ткани фибробластов эмбриона цыпленка, которые готовили по общепринятой методике.

Клеточную взвесь в концентрации 1 млн/кл в мл вносили по 0,2 мл в каждую ячейку 96-ячеичных культуральных плашек. Клетки инкубировали 48 часов в термостате при 37^oC (85% среды 199+15% сыворотки крупного рогатого скота, без консерванта). Затем монослои отмывали один раз раствором Хенкса и инфицировали вирусом простого герпеса штамм "1-C" 1 типа последовательными 10-кратными разведениями. Вирус и клетки инкубировали 1,5 ч при комнатной температуре. Затем монослои клеток отмывались свежей средой 199 один раз и вносили тестируемый препарат в следующих концентрациях: 1000; 100; 10; 1,0; 0,10; 0,01 мкг/мл. Культуры клеток помещали в термостат при 37^oC. Результаты учитывали по цитопатическому эффекту через 48 и 72 ч.

Контролем служили монослои клеток, обработанные только вирусом без препарата (контроль вируса), а также монослои клеток, обработанные тестируемыми концентрациями препарата без вируса (контроль на токсичность).

Результаты испытаний приведены в таблице 1.

Таким образом, установлено, что этаден обладает противовирусной активностью в системе in vitro в отношении вируса простого герпеса, ингибируя размножения вируса в концентрациях 100,0-0,1 мкг/мл. Причем, показано, что в концентрации 100 мкг/мл этаден снижает инфекционный титр на 3 lg через 48 ч после заражения и на 2,5 lg через 72 ч. Токсического действия препарата на клетки в этих концентрациях не отмечено.

Пример 2. Противогерпетическая активность этадена in vivo. Изучение противовирусной активности in vivo изучено на модели экспериментального офтальмогерпеса кроликов. В опыт брали 10 кроликов (20 глаз). Воспроизведение модели экспериментального офтальмогерпеса осуществляли по общепринятой методике, путем скарификации роговицы и последующего втирания вирусосодержащей суспензии в роговицу. Через 3 суток после развития типичной картины точечного кератита кроликов делили на 2 равноценные по клиническим критериям группы. Опытная группа получала инстилляции 0,5%-ного раствора этадена 3-4 раза в день; контрольная группа животных получала плацебо. Лечение продолжали до полного излечения кроликов в опытной группе. Об эффективности препарата судили по срокам эпителизации роговицы, а также по срокам излечения.

Результаты исследований приведены в таблице 2.

Как видно из представленных результатов, инстилляция 0,5%-ного водного раствора этадена обеспечивает выраженное терапевтическое действие, способствуют более быстрому процессу эпитепизации роговицы, ускорению выздоровления животных в достоверно короткие сроки (p<0,05), а кроме того отмечали более высокий процент выздоровевших животных в опытной группе по сравнению с контрольной (p<0,05) за счет его противогерпетического действия.