способ получения туберкулезного анатоксина

Формула изобретения

Способ получения туберкулезного анатоксина, включающий детоксикацию эндотоксина культуральной жидкости формалином, сорбцию на геле гидроокиси алюминия, стерилизацию, отличающийся тем, что в качестве эндотоксина используют культуральную жидкость авирулентного вакцинного штамма микобактерий БЦЖ, гель гидроокиси алюминия добавляют из расчета 1,9 - 2,0 мг/мл с последующим вакуумным выпариванием 60 - 65% неактивной части анатоксина.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к методу получения туберкулезного анатоксина для специфической профилактики туберкулеза.

Аналогом препарата, предназначенного для активной профилактики туберкулеза, является живая вакцина БЦЖ. Однако, несмотря на многолетнее применение вакцины БЦЖ, тем не менее, до последнего времени нет четких данных о ее защитном эффекте, так как эффективность ее применения колеблется от 2 до 83% /Бюлл. Всемирной организации здравоохранения /ВОЗ/, 1995/.

По данным ВОЗ /1995/, вакцина БЦЖ не предупреждает развитие легочных форм туберкулеза и оказывает слабое влияние на глобальные результаты борьбы с туберкулезом людей. В ветеринарной медицине ее применение ограничено ввиду аллергизации организма животных.

За прототип взят способ получения туберкулезного анатоксина, включающий детоксикацию формалином эндотоксина нативной культуральной жидкости вирулентной культуры микобактерий туберкулеза бовис с начальной аллергенной активностью 100 тысяч туберкулиновых единиц /Т.Е./ в 1 мл, при этом детоксикация проводится 0,25-0,3% концентрацией формалина при 44-45^oC, выдерживается до 7 дней, сорбция проводится на 3-4% геле гидроокиси алюминия, добавляемой из расчета 25-30% к общему объему с последующим отбрасыванием 50-55% надосадочной жидкости /патент N 2115432 "Способ получения туберкулезного анатоксина", авт. Евглевский А.А./.

Недостатком указанного способа является весьма высокое, до 30% от объема анатоксина, содержание в нем геля гидроокиси алюминия, а также использование для получения культуральной жидкости вирулентной культуры микобактерий бовис, делающим опасным его производство на начальном этапе.

Для устранения вышеперечисленных недостатков предлагается способ, включающий детоксикацию эндотоксина культуральной жидкости формалином, сорбцию на геле гидроокиси алюминия и стерилизацию.

Новым является то, что в качестве эндотоксина используют культуральную жидкость микобактерий вакцинного штамма БЦЖ. Данный вид микобактерий является авирулентным, а следовательно, безопасным в производстве.

Для получения туберкулезного анатоксина использовали культуральную жидкость, полученную после двухмесячного выращивания на жидкой синтетической среде Курской биофабрики авирулентных микобактерий вакцинного штамма БЦЖ, автоклавирования в режиме 1,5 атм в течение 2-2,5 часов биомассы, обеспечивающей выход аллергеноактивных веществ в пределах 91-92000 Т.Е./мл.

Сорбция на геле гидроокиси алюминия, добавляемой из расчета 1,9-2,0 мг/мл, позволила после выпаривания 60-65% неактивной части анатоксина получить конечный препарат с содержанием гидроокиси алюминия не выше 4 мг/мл, что не превышает требуемого верхнего норматива ее содержания, и обеспечить требуемую антигенную активность 190-200 тысяч Т.Е./мл.

Пример получения туберкулезного анатоксина. Взяли 1000 мл культуральной жидкости авирулентного вакцинного штамма микобактерий БЦЖ с начальной аллергенной активностью 91-92000 Т.Е./мл, детоксикацию которой провели, добавив 9 мл формалина с тем, чтобы его концентрация не превышала 0,3%, выдержали 7 дней при температуре 45^oC. Указанная концентрация формалина обеспечила полную инактивацию аллергенных, а следовательно, и токсичных свойств препарата. Полученный анатоксин с целью повышения его антигенной активности подвергли сорбции на геле гидроокиси алюминия, добавив 1,9 мг на 1 мл, после чего подвергли вакуумному выпариванию 65% неактивной части анатоксина. Полученный конечный продукт расфасовали по флаконам емкостью 200 мл и подвергли заключительной температурной стерилизации при 0,8 атмосфере в течение 30 минут.

Протективные свойства нового варианта туберкулезного анатоксина нами были испытаны на морских свинках в сравнении с защитным эффектом, индуцируемым вакциной БЦЖ. Схемой проведения опытов предусматривалась одно- и двукратная иммунизация морских свинок вакциной БЦЖ и туберкулезным анатоксином с последующим их заражением суспензией микобактерий туберкулеза, штамм Валле, в дозе 0,00001 мг/мл из расчета на одно животное.

Схема проведения и результаты опыта наглядности отображены в таблице.

Результаты проведенных сравнительных испытаний свидетельствуют о выраженных протективных свойствах нового варианта туберкулезного анатоксина и более высоком защитном его эффекте, по сравнению с вакциной БЦЖ. Отсутствие выраженной токсичности препарата указывает на потенциальную возможность его применения не только для целей иммунопрофилактики, но и для активной иммунотерапии туберкулеза.