комплексный антипаразитарный препарат, не обладающий иммуносупрессией

Формула изобретения

1. Комплексный антипаразитарный препарат, не обладающий иммуносупрессией, включающий авермектиновый комплекс и вспомогательные вещества, отличающийся тем, что дополнительно содержит иммуностимулятор риботан при следующем соотношении компонентов, мас.%: авермектиновый комплекс 0,5 - 2,0; риботан 5,0 - 15,0; вспомогательные вещества - остальное.

2. Комплексный антипаразитарный препарат по п.1, отличается тем, что в качестве авермектинового комплекса содержит или авертин N, или аверсектин C, или ивермектин, или абамектин или др.

3. Комплексный антипаразитарный препарат по п.1 отличается тем, что включает авермектиновый комплекс из мицелия Streptomyces avermitilis ВКПМ S - 1440 с повышенным содержанием группы B.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарии, фармакологии, биологии и предназначено для лечения и профилактики паразитарных болезней животных, вызываемых разными видами клещей, насекомых, нематод.

Известны средства для лечения паразитарных болезней животных, включающие авермектины и носители (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8).

Наиболее близким по технической сущности к заявленному изобретению является препарат авермектинового комплекса для профилактики и комплексного лечения заболеваний, вызванных эндо- и эктопаразитами животных, содержащий активное начало из мицелия Streptomyces avermitilis ВНИИСХМ - 54 и фармакологически приемлемый носитель (2,3). В инъекционной лекарственной форме препарат содержит 18-20 г/л авермектинового комплекса в этаноле, включающего 36,75 1,35% компонентов группы B (B1+ B2), а фармакологически приемлемый носитель - остальное. Недостатком зарубежных и отечественных инъекционных форм на основе авермектинов является супрессия иммунной системы животных в течение 2-3-х недель (9), повышенная индивидуальная чувствительность некоторых животных, сопровождающаяся локальной припухлостью в месте инъекции, проходящей через 3-7 дней (10).

Целью настоящего изобретения является создание инъекционного препарата, обладающего не только высокой антипаразитарной активностью за счет более высокого содержания авермектинов группы B, но и иммуностимулирующим эффектом и отсутствием местного раздражающего действия.

Решение поставленной задачи достигается введением в состав инъекционного препарата в качестве антипаразитарного средства авермектинового комплекса авертин N, полученного из Streptomyces avermitilis ВКПМ-S-1140, но в равной степени можно использовать и применяемые в других лекарственных средствах авермектиновые комплексы, именуемые или аверсектин C, или абамектин, или ивермектин, или другие действующие вещества на основе авермектина. В качестве иммуностимулирующего и противовоспалительного средства, повышающего резистентность организма хозяина и предотвращающего местную реакцию, используют риботан (можно другие иммуностимуляторы); в качестве растворителя - спирт этиловый, спирт бензиловый; в качестве дезинтоксикационного комплексообразующего средства, пролонгирующего действие препарата, вводят поливинилпирролидон (ПВМ), полиэтиленгликоль 400; в качестве наполнителя используют воду дистиллированную при следующих соотношениях компонентов, мас.% (табл. 1).

Авермектиновый комплекс продуцируют почвенные микроорганизмы Streptomyces avermitilis, относящиеся к семейству авермектинов из группы макроциклических лактонов. Он состоит из 4 основных (B_1a, B_b, A_1a, A_1b) и 4 второстепенных (В_2a, В_2b, A_2a, A_2b) тесно связанных между собой компонентов. Выраженным антипаразитарным действием обладают компоненты группы В. Преимущество штамма Streptomyces avermitilis ВКПМ-S-1140 в том, что он продуцирует 67,8 - 77,4% компонентов группы В (15), в отличие от штамма Streptomyces avermitilis ВНИИСХМ-54 - 55,63 - 58,65% (2,3).

Для производства антипаразитарного препарата, не обладающего иммуносупрессией и местным раздражающим действием, но проявляющего высокую паразитоцидную активность, использовали авермектиновый комплекс из штамма Streptomyces avermitilis ВКПМ-S-1140 (действующее вещество - авертин N). В равной степени можно использовать авермектиновые комплексы: либо аверсектин C, либо абамектин, либо ивермектин, либо др. Все авермектиновые комплексы в очень низкой терапевтической дозе 0,2 мг/кг массы тела обладают широким спектром антипаразитарной активности (4).

Риботан - комплексный иммунокорректор, состоящий из низкомолекулярных пептидов (ММ 0,5 - 1,0 кДа) и низкомолекулярных фрагментов РНК. Иммуностимулирующее действие риботана направлено на повышение функциональной активности макрофагов, субпопуляций Т- и B- лимфоцитов, а также синтез интерферона и лимфокинов. Показанием для применения риботана являются паразитарные, вирусные и бактериальные инфекции животных.

Спирт этиловый - растворитель. Смешивается во всех соотношениях с водой, эфиром, хлороформом, глицерином; кипит при 78^oC (13,14).

Спирт бензиловый - растворитель. В воде трудно растворим, температура кипения 128-132^oC (14).

Полиэтиленгликоль-400 является хорошим растворителем и хорошим комлексообразователем, который часто применяют в качестве компонента лекарственной формы (12, 13).

Поливинилпирролидон (ПВП) - низкомолекулярный (12600 + 2700), медицинский представляет собой порошок, растворимый в воде, 95% спирте, мало растворим в углеводах и практически нерастворим в эфире. Применяют ПВП для приготовления кровезаменяющего препарата "Гемодез" дезинтоксикационного действия. ПВП образует комплексы с целым рядом фармацевтических препаратов и способствует пролонгированию их действия (13).

Вода дистиллированная - получают ее путем перегонки питьевой воды с помощью специальных перегонных аппаратов (13).

Из доступных заявителю источников информации не известна указанная совокупность существенных признаков, позволяющая получить указанный технический результат, поэтому заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности "новизна".

Заявителю не известны средства аналогичного назначения, в которых были бы раскрыты отличительные признаки заявляемого изобретения с получением от использования его в какой-либо совокупности признаков указанного технического результата. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности "изобретательский уровень".

Доказательства промышленной применимости заявляемого препарата приводятся в следующих примерах.

Пример 1. В 5-литровую емкость помещают 1,0 кг ПАП (полупродукт антипаразитарных препаратов из Streptomyces avermitilis) и 1,8 л 75%-ного этилового спирта. Смесь перемешивают в течение 1 часа, затем фильтруют, к фильтрату добавляют 1,5 кг ПЭГа, перемешивают в течение 10 минут и ставят на 24 часа в холодильную камеру при температуре 30-40^oC. Затем смесь помещают в емкость с нижним спуском и выдерживают при комнатной температуре 48 часов. За это время смесь расслаивается на 2 слоя. Для дальнейшей работы берут нижний слой смеси, к которой добавляют 0,5 л риботана, 0,2 кг ПВП, воду дистиллированную до объема 5 л и перемешивают в течение 20 минут, затем препарат разливают в тару.

Пример 2. В 5-литровую емкость помещают 1,6 кг ПАП, 1,45 л 75%-ного этилового спирта, 0,25 л 75%-ного бензилового спирта. Смесь перемешивают в течение 1,2 часа, фильтруют, добавляют 1,0 кг ПЭГа, далее по примеру N 1, затем добавляют 0,3 кг ПВП, 0,4 л риботана и дистиллированную воду. В результате получают препарат следующего состава, мас. %: авермектиновый комплекс 1,0; спирт этиловый 40,0; спирт бензиловый 4,0; полиэтиленгликоль 40,0; поливинилпирролидон 2,0; вода дистиллированная - остальное.

Пример 3.

Лекарственную композицию готовят по примеру N 1 при следующем составе компонентов: 0,5 кг ПАП, 2,0 л спирта этилового, 0,5 л спирта бензилового, 0,2 кг ПЭГа, 0,8 кг ПВП и 1,0 л риботана.

Предлагаемый комплексный препарат испытывают на разных видах животных, как интактных, так и пораженных экто- и эндопаразитами.

Пример 4. Иммуномоделирующее действие комплексного препарата на интактных мышах.

Из 40 белых беспородных мышей массой 20 г сформировали 5 равных групп. Мышам первой группы ввели авертин в дозе 0,18 мл/гол. (препарат разведен в 300 раз полиэтиленгликолем), второй - риботан в дозе 10 мкг/гол., третьей - комплексный препарат в дозе 0,1 мл/гол., пятой группе ввели плацебо.

Первичный иммунный ответ на тимусзависимый антиген определяли на 7 и 10 дни после введения препаратов. Титр антител у животных первой группы составил 4,00 0,40, у второй - 4,83 0,19, у третьей - 4,68 0,17, у четвертой - 4,40 0,12, против 3,62 0,40 в контроле. Следовательно, индекс действия (ИД) составил в первой группе 0,38, что подтверждает супрессирующее действие препарата, во второй - 1,21, в третьей - 1,08, в четвертой - 0,82.

Таким образом, комплексный препарат и риботан в дозе 10 мкг/мышь обладают выраженным иммуностимулирующим свойством, а комплексный препарат в дозе 5 мкг по риботану такими свойствами не обладает.

Пример 5. Влияние комплексного препарата на иммунный статус поросят.

Из 20 поросят, по данным лабораторных исследований зараженных гематопинусами и аскаридами, сформировали 2 группы. Животным первой группы (12 голов) ввели подкожно однократно комплексный препарат с целью лечения инвазионных болезней и повышения иммунного статуса, а 8 голов второй группы служили контролем.

При иммунологическом обследовании установили, что у поросят первой группы количество T-иммуноцитов составляло от 44,2 4,2 до 51,2 2,8 в течение 20 дней после введения препарата, индекс стимуляции (отношение Т-хелперов к T-супрессорам) составлял от 3,2 до 4,4, количество B-лимфоцитов было в пределах 26,8 4,2 до 29,4 3,2 также на 5, 10 и 20 дни наблюдений. Титры естественных антител составляли log₂ 4,0 0,1, log₂ 4,4 0,2 и log₂ 4,6 0,4 соответственно на 5, 10 и 20 дни после введения препарата.

Эффективность комплексного препарата против гематопинусов и аскарид составила 100%.

В контрольной группе количество Т-лимфоцитов составляло 22,8 4,2 - 24,6 3,4 - 23,8 2,4% соответственно на 5, 10 и 20 дни исследования, ИС составил 0,6 - 0,8. Количество B-лимфоцитов составило 14,4 2,2 - 14,0 0,1 и 12,4 1,1 %, а титры естественных антител от 2,0 0,2 до 2,4 0,1 log₂.

Животные контрольной группы за весь период наблюдения выделяли яйца аскарид и на коже было много гематопинусов.

Таким образом, комплексный препарат оказывает стимулирующее действие на T- и B-системы иммунитета, на субпопуляцию T-лимфоцитов, вызывает увеличение титра естественных антител и проявляет 100% эффект против паразитарных болезней свиней.

Пример 6. Антгельминтная и иммуностимулирующая активность комплексного препарата. Из 20 ягнят в возрасте трех месяцев, спонтанно инвазированных на 100% стронгилятами желудочно-кишечного тракта и стронгилоидами, сформировали 2 группы. Животным первой группы ввели подкожно однократно комплексный препарат, изготовленный по примеру N 1, в дозе 1 мл/50 кг массы тела, а животные второй служили контролем и препарат не получали. При оценке иммунного статуса установили, что количество Т-лимфоцитов у подопытных ягнят составляло от 37,8 5,8 до 44,4 4,2%, ИС от 2,6 до 4,2, количество B-лимфоцитов от 21,4 до 25,2%. Были также повышены бактерицидная активность и титры естественных антител. При исследовании фекалий методами Фюллеборна и Бермана яиц стронгилят и стронгилоидов у животных этой группы не обнаружили. Все контрольные животные на 100% выделяли яйца стронгилят разных видов.

Результаты опыта представлены в табл. 2.

Таким образом, введение комплексного препарата профилактирует нематодозы, повышает иммунный статус и общую резистентность животных

Пример 7. Лечебная и иммуностимулирующая эффективность комплексного препарата при псороптозе овец.

Из 20 овец, имеющих поврежденные участки кожной поверхности чесоточными клещами Psoroptes ovis, сформировали 4 равные группы. Овцам первой группы подкожно однократно ввели препарат, приготовленный по примеру 1, второй - по примеру 2; третьей - препарат, содержащий 1,0% ДВ и 10 мг риботана, четвертой - препарат, содержащий 1,0% ДВ, но без риботана. Через 8 дней инъекцию препарата повторили.

У овец первых трех групп уже после первой инъекции к пятому дню появилось заметное улучшение клинического состояния (зуд прекратился), у овец четвертой группы - к 10-му дню. После второй инъекции у животных первых трех групп полное выздоровление наступило через 40 дней, четвертой - через 50 дней.

В состав первых трех препаратов входил иммуностимулятор, который оказал в комплексе с авермектинами свое положительное действие.

Таким образом, антипаразитарная композиция предлагаемого состава, включающая в себя авермектиновый комплекс и иммуностимулятор, обладает не только широким спектром высокого антипаразитарного действия, но и предотвращает иммуносупрессию в сравнении с просто авермектинами.

Сочетание используемых компонентов в предлагаемом соотношении обеспечивает высокую антипаразитарную противовоспалительную эффективность и повышает резистентность организма хозяина.

Литература

1. William C. Campbell. lvermectin and abamectin. / New York, Berlin, Heidelberg, London, Paris, Tokyo, 1989, p. 1-25, 114-124.

2. Патент РФ N 2054483, 1993.

3.Патент РФ N 2054848, 1996.

4. Березкина С. В., Головкина Л.П., Дриняев В.А., Юркив В.А., Волкова Г. Н. Природные авермектины для лечения экто- и эндопаразитов животных. Матер. конф. "Систематика, таксономия и фауна паразитов", М., 1996. - С. 15-16.

5. Головкина Л.П., Березкина С.В. Противопаразитарные препараты на основе аверсектина С. // Ветинформ, 1998, - N 1. - С. 4.

6. Патент РФ N 2124895, 1999.

7. Заявка на патент РФ N 99116584, 1999.

8. Заявка на патент РФ N 99120285, 1999.

9. Сивков Г.С., Яковлева В.В., Чашкова И.А., Белецкая Н.И. и др. Влияние ивомека и фармацина на показатели иммунного ответа у животных // Ветеринария, 1998. - N 5. - С. 29-31.

10. Наставление по применению аверсекта-2 (фармацина) при паразитарных болезнях животных N 13-4-2 / 956, 1997. - С. 2.

11. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1984. - Т. 1. - С. 376.

12. Краткая химическая энциклопедия, М. С. Э., 1961. - Т. 5. - С. 964.

13. Справочник фармацевта. М.: Медицина, 1981. - С. 12, 16-24.

14. Государственная фармакология СССР, 1968, 10-е изд. С. 644 - 646, 905.

15. Патент РФ N 2098483, 1995.

16. Заявка на патент РФ N 98100018/14 (000181), 1998.