способ приготовления универсальной гемотрансфузионной среды

Формула изобретения

1. Способ приготовления универсальной гемотрансфузионной среды на основе крови 0 (I) группы, отличающийся тем, что из крови названной группы отделяют сыворотку от эритроцитарной массы, в сыворотке нейтрализуют естественные антитела "а" и "в" за счет добавления к ней реактива, содержащего антигены "А" и "В" помещают на 20 - 30 мин в холод при t = 4 - 8^oC, перемешивая каждые 5 мин, отделяют после выдерживания на холоде осевшие склеенные между собой эритроциты и получают универсальную плазму для переливания.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве реактива для нейтрализации сыворотки используют отмытые эритроциты АВ(IV) группы, смешивают их с сывороткой в соотношении 1 : 2 по объему.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что нейтрализацию антител проводят эритроцитами А₁В(IV) группы, при соотношении сыворотки и эритроцитов 1 : 1 по объему.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что нейтрализацию антител проводят отмытыми эритроцитами А₁(II) или А₂(II) в сочетании с эритроцитами В(III), а также отмытыми эритроцитами А₂В(IV), или А(II) в сочетании с В(III) при соотношении сыворотки и эритроцитов 1 : 1 по объему.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что плазму, полученную по пп.1, 2, 3 или 4, соединяют с дважды отмытыми эритроцитами 0(I) группы в соотношении 1 : 1 и получают универсальную кровь для переливания.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, точнее к гемотрансфузиологии, а именно к способу приготовления универсальной трансфузионной среды на основе нативной донорской крови.

В трансфузиологической практике используется три вида гемотрансфузионных средств. Во-первых, цельная кровь: консервированная кровь донора (изогенная, аллогенная), свежецитратная, кровь донора для переливания, холодоустойчивая, гепаринизированная, конвертированная (обменная) кровь, аутокровь и т.д. Во-вторых, клеточные компоненты крови; эритроцитная масса или взвесь, тромбоцитная или лейкоцитная масса и т.д. В-третьих, препараты плазмы крови.

В патентной литературе приводятся различные методы обработки крови и плазмы для использования ее с целью переливания.

Например, авт. св. СССР 1362478 (30.12.87) содержит сведения о способе получения препарата крови. Для этого используется балластный осадок в качестве исходного сырья, образующегося при получении альбумина из гемолизированной плазмы или сыворотки.

Описан способ получения осветленной сухой крови (а. с. N 1132950 07.01.85), кровь после охлаждения подвергают ультрафильтрации на мембранах с диаметром пор 0,04-0,06. В авторском свидетельстве N 1442215 (07.12.88) изложен способ возмещения цельной крови во время операции перед реинфузией за счет разведения ее раствором антикоагулянта в объеме, равном объему излившейся крови.

Для переливания используют различные препараты плазмы, например, описанный в патенте США N 4462980 (31.07.84) и цельной крови (патент США N 4891221, 02.01.90).

Несмотря на большие усилия ученых многих стран, все попытки создания "искусственной крови" до сих пор еще не увенчались успехом. Сложность получения подобных кровезаменителей упирается прежде всего в поиски форменных элементов или же тех веществ, которые могли бы взять на себя функцию гемоглобина для транспортировки кислорода и углекислоты.

Но такие полноценные инфузионные среды, заменяющие кровь, обеспечивающие дыхательную, транспортную, питательную и все остальные функции, присущие натуральной донорской крови, пока еще не известны современной мировой трансфузиологии.

Целью настоящей работы являлось найти способ приготовления универсальной натуральной донорской крови и плазмы, которая отвечала бы всем требованиям полноценной крови и могла бы переливаться реципиенту любой групповой принадлежности. Это важно и по той причине, что за последние годы отмечено заметное сокращение количества доноров крови, и, как следствие, уменьшение банка крови.

Из всех известных искусственных питательных трансфузионных сред нет ни одной, которая бы по своим качественным характеристикам приравнивалась бы к плазме крови, т.к. каждый плазмозамещающий препарат восполняет лишь отдельные составные части плазмы крови (воду, соли, аминокислоты и т.д.). Кроме того, точный состав всех ингредиентов плазмы еще не до конца известен, а к синтезу многих ее составляющих (например, ферментов) еще не найдены даже и подступы.

В качестве питательной основы для нашей трансфузионной среды мы выбрали плазмы 0 (I) группы крови по той причине, что только именно в ней содержатся плазморастворимые агглютиногены "А" и "В" в отличие от всех остальных групп.

Для обеспечения дыхательной функции нашей трансфузионной среды мы выбрали чистые эритроциты 0 (I) группы, которые, как известно, содержат очень слабый агглютиноген "0", не имеющий практического значения в повседневной трансфузиологии, поскольку он не имеет соответствующего ему по специфичности антитела, т. е. в соединении с антителом не образует комплекс "антиген-антитело".

В настоящей заявке мы попытались осуществить на практике приготовление универсальной натуральной донорской крови. Для этого необходимо разобрать, как еще сравнительно недавно учитывались изосерологические свойства крови при гемотрансфузиях.

Известно, что ранее при выбросе донорской крови широко пользовались правилом Оттенберга, по которому в эритроцитах донора не должны быть агглютиногены, одноименные естественным агглютининам крови репициента. Согласно этому правилу кровь группы 0 (I) считалась универсальной, т.к. она могла переливаться реципиентам всех остальных групп. Это объясняется тем, что агглютинины, содержащиеся в донорской плазме, сильно разбавляются в крови реципиента и лизиса эритроцитов реципиента не происходит из-за крайне малого титра введенных агглютининов. Кроме того, введенные естественные антитела инактивируются агглютиногенами "А" и "В" в плазме реципиента. Однако при массивном переливании крови универсального донора обескровленному реципиенту иной группы может наступить гемолиз эритроцитов реципиента избытком введенных естественных агглютининов донора.

Исходя из вышеизложенного можно сделать следующее заключение. Если из крови универсального донора удалить естественные и иммунные антитела (напомним: в плазме универсального донора отсутствуют плазморастворимые антигены "А" и "В"), то при переливании такой крови лицам другой групповой принадлежности исключается конфликт между антигенами и антителами. Заметим, что антиген "0" является очень слабым антигеном, для выявления которого требуются только специально приготовленные сыворотки, и практического значения в трансфузиологии он не имеет.

Таким образом, соединяя отмытые эритроциты 0 (I) группы, лишенные естественных антител, получаем универсальную гемотрансфузионную среду.

Приготовление универсальной донорской крови и плазмы.

После забора 10 мл донорской крови 0 (I) группы в центрифужную пробирку отделяем сыворотку от эритроцитарной массы путем центрифугирования при оборотах 3 тыс. в минуту. Определяем первоначальный титр естественных антител "а" и "в" по общепринятой методике. У доноров 0 (I) группы он, как правило, самый высокий и составляет от 32 до 128 и выше. В качестве реактива для нейтрализации естественных антител "а" и "в" в сыворотке 0 (I) группы используем отмытые эритроциты AB (IV) группы, содержащие антигены "А" и "В" (качество отмывания эритроцитов проверяется 20%-ным раствором сульфосалициловой кислоты или другой кислоты по общеизвестной методике). К сыворотке 0 (I) группы добавляем отмытые эритроциты АВ(IV) группы в пропорции: 2 объема сыворотки и 1 объем эритроцитов. Смешанную с эритроцитами сыворотку помещаем в холодильник при температуре +4 - +8^oC на 20-30 минут. Перемешиваем пробирку через каждые 5 минут.

Температурный режим +4 - +8^oC выбран не случайно, т.к. естественные антитела "а" и "в" являются полными холодовыми антителами, что обеспечивает их оптимальную активность в данных условиях. К тому же при указанной температуре расходуется гораздо меньшее количество требуемых эритроцитов для нейтрализации антител (в дальнейшем эритроциты будем обозначать как "реактив"), ибо, по известным литературным источникам, при температуре +4 - +8^oC к эритроцитам присоединяется в несколько раз больше молекул агглютининов, нежели при комнатной температуре и выше.

Время от 20 до 30 минут выбрано для полного завершения реакции агглютинации и объясняется тем, что пробирка с кровью за более короткий промежуток времени не успевает полностью остудиться (в отличие от маленькой капли на Петри) до требуемой температуры. Одновременно через каждые 5 минут пробирку со смесью сыворотки и реактива необходимо осторожно и плавно перемешивать и вновь ставить в холодильник. Цель перемешивания - обеспечить более тесное соприкосновение между антигенами эритроцитов и антителами сыворотки. Приводим этому объяснение. Общеизвестно, что реакция антиген-антитело протекает в две фазы: при первой фазе происходит фиксация антител на поверхности эритроцитов; во второй - склеивание эритроцитов между собой молекулами антител (агглютинация). Врачам - лаборантам, определяющим группу крови перекрестным методом, постоянно приходится наблюдать эти фазы. Так, например, при определении группы крови по стандартным эритроцитам сыворотка крови при первом перемешивании, как правило, не дает никакой агглютинации (внимание - не путать реакцию эритроцитов с моноклональными цоликлонами анти-А и анти-В). Если далее не перемешивать эритроциты с сывороткой - процесс склеивания эритроцитов полностью прекращается и возобновляется только при повторном перемешивании. По прошествии 0,5-1,0 минуты только при повторном перемешивании появляется уже заметная агглютинация эритроцитов. По истечении 5-ти минут реакция агглютинации в основном завершается (повторные перемешивания обязательны) и отчетливо видны агглютинаты на фоне просветленной сыворотки.

По истечении 20-30 минут вынимаем пробирку с кровью из холодильника. Последующим центрифугированием при 3 тыс. оборотов в минуту отделяем сыворотку от осевших эритроцитов и проверяем титр оставшихся непрореагировавших в ней естественных антител "а" и "в" по общепринятой методике. При этом титр естественных антител заметно снижается и обычно составляет 1:4 и 1:8 или же антитела совсем не определяются (см. табл. 1).

Чтобы решить вопрос, израсходовались ли полностью участвующие в реакции эритроциты (реактив), предлагаем следующий тест.

На планшет с лунками наносим в 3-х местах по 1 капле осевших эритроцитов (со дна пробирки). В первую лунку добавляем 2 капли цоликлона анти-В, во вторую - 2 цоликлона анти-А, в третью - 2 капли физиологического раствора натрия фторида. Перемешиваем, наблюдаем и оцениваем результат.

Во всех трех лунках видны склеенные между собой эритроциты (агглютинаты) примерно одинакового рисунка и конфигурации на фоне просветленной жидкости. Поскольку в третьей лунке не было реактива (не было цоликлона для выявления агглютиногенов), а агглютинацию эритроцитов отчетливо видно на фоне просветленной жидкости, можно заключить, что все эритроциты АВ (IV) группы, участвовавшие в нейтрализации естественных антител "а" и "в" 0 (I) группы, полностью израсходованы.

Несмотря на то, что реактив израсходован полностью, необходимо выяснить, достаточно ли было его количества для нейтрализации агглютининов и какие именно агглютинины удалены, а также дополнительное количество реактива, необходимого для нейтрализации оставшихся непрореагировавших агглютининов в сыворотке. Для этого предлагаем воспользоваться следующим тестом.

На эмалированную тарелочку вносим в первую и во вторую лунки по две капли полученной сыворотки 0 (I) группы; в третью и четвертую - по две большие капли нормальной сыворотки 0 (I) группы, взятой от донора (контроль). Добавляем в первую и третью лунки по 1 капле стандартных эритроцитов А (II) группы, во вторую и четвертую - по 1 капле стандартных эритроцитов В (III) группы. Перемешиваем время от времени и по истечении 5-ти минут оцениваем результаты. Вышеописанный тест предполагает результаты в вариантах, представленных следующими примерами.

Пример 1.

В первой и во второй лунках агглютинации не наступило, а в третьей и четвертой - отмечается отчетливая агглютинация эритроцитов (контроль) на фоне полностью просветленной сыворотки. Микроскопирование подтверждает данные результаты (см. табл. 1, графа 1).

Заключение: в полученной сыворотке полностью отсутствуют естественные антитела (стандартные эритроциты их не выявляют).

Пример 2.

В первой и во второй лунках отмечена слабая агглютинация, а в третьей и четвертой (контроль) - отчетливая агглютинация (см. табл.1, графа 2).

Заключение: в полученной сыворотке остались непрореагировавшие естественные антитела "а" и "в". Необходимо их дальнейшее титрование на предмет установления количества реактива, необходимого для их полной нейтрализации. В данном случае, хотя все эритроциты АВ (IV) группы, участвовавшие в нейтрализации естественных антител, полностью израсходованы, но их количество оказалось недостаточным для полной нейтрализации всех естественных антител.

Пример 3.

В первой лунке отмечается слабая агглютинация, во второй - агглютинации нет, а в третьей и четвертой (контроль) - отчетливая агглютинация (см. табл. 1, графы 3,5).

Заключение: в полученной сыворотке полностью отсутствуют антитела "в", а антитела "а" содержатся в незначительной концентрации. Это означает, что в качестве реактива частично использовался слабый антиген "А" (группа А₂В (IV), А₂ (II) или же в группе 0 (I) ранее до обработки отмечался относительно высокий титр антител "а" со слабым антителом "в". В этом случае после титрования антител "а" необходима их дальнейшая нейтрализация, для чего желательно использовать отмытые эритроциты группы А (II), содержащие сильный A₁.

Пример 4.

В первой лунке агглютинации нет, во второй - слабая агглютинация, а в третьей и четвертой (контроль) - отчетливая агглютинация (см. табл.1, графы, подтверждающие такие результаты, в таблице отсутствуют).

Заключение: подобного варианта мы не наблюдали ни в одном случае, ибо встречающиеся естественные антитела "в" в группе 0 (I) являются по своей силе адекватными естественным антителам "а" или же являются слабыми (что подтверждает повседневная изосерологическая практика лабораторий ОПК), а агглютиноген "В", в основном, всегда бывает сильным. Доказательство тому - отсутствие подгруппы в группе В (III) в отличие от групп А (II) и АВ (V), имеющих соответственно по две подгруппы: A₁(II), A₂(II) и A₁B(IV), A₂B (IV).

Для нейтрализации оставшихся непрореагировавших естественных антител вышеописанную процедуру повторяем по той же технологии, но только с двукратно меньшим количеством реактива.

Нейтрализацию естественных антител сыворотки 0 (I) группы крови можно проводить эритроцитами A₁B (IV) группы в соотношении количества сыворотки и реактива 1:1 (см. табл. 2). Как видно из таблицы, в 33 случаях из 40 естественные антитела "а" и "в" полностью нейтрализованы, в 7 случаях - естественные антитела "а" определялись в титре 1:2,1:4.

Нейтрализацию естественных антител сыворотки 0 (I) группы крови можно проводить также отмытыми эритроцитами A₁(II). A₂(II) в сочетании с эритроцитами В (III) группы, при этом отмывание эритроцитов обязательно с целью удаления остатков естественных антител в точно таком же соотношении, и с группой A₁B (IV) и А₂В (IV) (см. табл. 3 и 4). При сравнении данных из табл. 1-4 видно, что результаты нейтрализации естественных антител "а" и "в" как эритроцитами АВ (IV), так и А (II) в сочетании с В (III) группами, приблизительно одинаковые. Незначительное количество положительных результатов полной нейтрализации естественных антител, приводимых в табл. 3 и 4 по сравнению с данными, указанными в табл. 1 и 2, объясняется, по нашим данным (будут приводится ниже), несколько большей распространенностью сильного антигена "А" в группе А (II) по сравнению с группой АВ (IV).

Заметим, что нейтрализацию естественных антител при первом и втором этапе их нейтрализации можно проводить отмытыми эритроцитами А (II) и В (III) группами в комбинации (см. Пример 2) или A (II) группы (см. Пример 3) в зависимости от титра оставшихся непрореагировавших антител.

Чтобы получить универсальную гемотрансфузионную среду, нужно добавить к дважды отмытым эритроцитам 0 (I) группы полученную сыворотку (уже без антител) в соотношении 1:1.

Для получения универсальной гемотрансфузионной среды мы выбрали соотношение отмытых эритроцитов к сыворотке 1:1 по следующим причинам. Существующая в настоящее время мерка оценки соотношения эритроцитов плазмы (сыворотки) не является совершенной.

Во-первых, флакон с кровью после отстоя разделяется на эритроцитарную массу и плазму, при этом соотношение эритроцитов и плазмы бывает разным у различных доноров. Это зависит от количества гемоглобина, а значит, и эритроцитов (в настоящее время при нехватке доноров крови приходится не всегда строго придерживаться нормы гемоглобина у доноров, указанной в "Инструкции по медицинскому освидетельствованию доноров крови".

Во-вторых, имеет значение разное количество стабилизирующего раствора в зависимости от его рецептуры и одинакового количества по объему крови во флаконах, мешках. Эритроциты полностью и наиболее плотно оседают только в чистой сыворотке. Использование же растворов стабилизированных растворов увеличивает расстояние между эритроцитами по простым физическим законам, поэтому количество эритроцитов, находящихся в стабилизированном растворе, визуально будет иным, чем в действительности.

Также нельзя точно оценить соотношение сыворотки и эритроцитов в пробирке или спутнике или спутнике после ретракции сгустка и выделения сыворотки, поскольку между ними нет четких границ.

Мы предложили методику, по которой с большей достоверностью можно оценить соотношение между эритроцитами и плазмой.

Контейнер с кровью (не более 15-20 минут после забора крови) центрифугируем при оборотах 3000-4000 в минуту в течение не более 2 минут. За такое короткое время после взятия крови процесс ее свертывания находится только в начальной стадии. Быстрое центрифугирование имеет цель моментально отделить клеточную часть (эритроциты) от плазмы, тем самым предотвратить процесс свертывания крови и образования сгустков. После первого центрифугирования свежевзятой крови отделенная плазма имеет вид и консистенцию студня, содержащего в своем составе фибрин. Однако при внимательном рассмотрении удается увидеть тонкую пленку фибрина, разграничивающую слой эритроцитов и плазмы. После перемешивания стеклянной палочкой плазмы и осевших эритроцитов (можно не перемешивать, а повернуть спутник вокруг оси в центрифуге на 90^o - более или менее) повторно центрифугируем при тех же оборотах. По истечении 2 - 3 минут после центрифугирования содержимое в спутнике четко разграничится на две части: в нижней части - осевшие чистые эритроциты, в верхней - чистая сыворотка. Обе части разграничивает ровная линия фибринной пленки, полностью покрывающая нижний слой эритроцитов. Удаляем фибринную пленку, вновь перемешиваем эритроциты и сыворотку и ставим в холодильник для полного оседания эритроцитов. На следующий день оцениваем соотношение осевших эритроцитов и сыворотки. В нижней части спутника видна густая эритроцитарная масса, отделенная тончайшим ровным слоем лейкотромбомассы, которая полностью покрывает верхний слой эритромассы. Сверху над тонким слоем лейкотромбомассы находится сыворотка. При измерении соотношение между эритромассой и сывороткой будет составлять 1:1 (у здоровых доноров). Вот почему для получения универсальной гемотрансфузионной среды мы смешиваем отмытые эритроциты 0 (I) группы с обработанной сывороткой в соотношении 1:1.

Полученная гемотрансфузионная среда имеет в своем составе отмытые эритроциты 0(I) группы и сыворотку, лишенную антител и плазморастворимых агглютиногенов. Для убедительности отсутствия антител проводили следующий изосерологический контроль.

В штатив по порядку устанавливаются 4 центрифужные пробирки. В первую и во вторую пробирку наливается по 3 капли полученной и обработанной сыворотки 0 (I) группы, в третью и четвертую - по 3 капли нормальной сыворотки 0 (I) группы, взятой от донора (контроль). В первую и третью пробирки добавляется по 1 капле стандартных эритроцитов А (II) группы, во вторую и четвертую - по 1 капле стандартных эритроцитов В (III) группы. Перемешиваем и встряхиваем в течение 5-6 минут. Далее во все пробирки добавляем 8-10 мл изотонического раствора натрия хлорида до розовой окраски. Содержимое пробирок перемешиваем путем 1-2-кратного перевертывания их и просматривания на свет невооруженным глазом или через лупу с двукратным увеличением. При положительном результате видны крупинки склеенных эритроцитов на фоне просветленной или полностью обесцвеченной жидкости; при отрицательном - в пробирках видна равномерно окрашенная в розовый цвет, слегка опалесцирующая жидкость.

В данном случае в первой и во второй пробирках отмечен отрицательный результат, в третьей и четвертой - положительный. Отсюда можно сделать точно такое же заключение, какое сделано в примере 1: в приготовленной сыворотке полностью отсутствуют естественные антитела (стандартные эритроциты их не выявляют).

Однако в сомнительных случаях, когда агглютинация слишком слабо выражена или нет достаточной уверенности в ней, можно предложить воспользоваться следующим приемом оценки полученных результатов, основанном на разнице в скорости оседания эритроцитов и агглютинатов.

Этот же штатив с исследуемыми пробирками оставляем при комнатной температуре и выжидаем 15-20 минут, после чего учитываем результаты. В данном случае увеличение времени наблюдения позволяет выявить агглютинацию, не замеченную в первый момент после добавления физраствора и перемешивания, т.е. повышает чувствительность метода.

При положительном результате скорость оседания агглютинатов будет относительно высокой. Оседающие агглютинаты в основной своей массе наблюдаются в нижней части пробирки в виде зерен на фоне просветленной жидкости, и их интенсивность постепенно нарастает к низу с образованием на дне пробирки осадка из агглютинатов. Жидкость в верхней части обесцвечивается очень быстро, причем граница между верхним совершенно прозрачным слоем жидкости и верхним слоем оседающих агглютинатов сравнительно небольшой их интенсивности на фоне просветляющейся жидкости выражена нечетко из-за различной скорости оседания отдельных агглютинатов, имеющих различные размеры.

При отрицательном результате агглютинаты, как известно, не образуются, и поэтому здесь происходит обычное оседание эритроцитов, скорость оседания которых по сравнению со скоростью оседания агглютинатов по физическим законам будет меньше. В данном случае по прошествии того же времени, что и при оценке скорости оседания агглютинатов, осадок на дне пробирок образуется очень медленно или почти не заметен.

Описанный нами прием оценки результатов по разнице в скорости оседания эритроцитов и агглютинатов, применявшийся на протяжении нескольких лет и на большом фактическом материале (5000 наблюдений) показал свою надежность и может быть использован для практического применения.

Более чувствительные методы контроля на предмет выявления антител, кроме описанных выше, пока еще не разработаны, а антиглобулиновый тест (непрямая проба Кумбса) неприемлем, т. к. естественные антитела "а" и "в" являются полными холодовыми антителами, активными лишь при комнатной температуре и ниже.

В последнее время при гемотрансфузиях во избежание посттрансфузионных осложнений стали придавать значение и антигенным системам лейкоцитов, тромбоцитов и плазменных белков. По литературным данным, антигены системы АВО, МН, Келл, Даффи, Резус и другие содержатся не только в эритроцитах, но и в лейкоцитах и тромбоцитах. Однако при приготовлении универсальной донорской гемотрансфузионной среды по нашей методике вся имеющаяся тромбоцитарная и лейкоцитарная масса почти полностью удаляется и практического значения при гемотрансфузиях уже не имеет.

Что касается сывороточных групп крови, то они лишь учитываются при проведении судебно-медицинских экспертиз. К тому же еще напомним, что у доноров нулевой группы нет плазменных антигенов "А" и "В" в отличие от всех остальных групп крови.

Изобретение позволяет получить универсальную донорскую гемотрансфузионную среду, которую можно переливать лицам разных групп крови, не опасаясь при этом за осложнения в посттрансфузионном периоде, т.к. в крови отсутствуют компоненты, способные вызывать агглютинацию (лизис) эритроцитов. Указанными компонентами являются "А" и "В" и естественные антитела "а" и "в".

Вопрос о резус-принадлежности решается следующим образом. Резус-положительным реципиентам следует переливать только резус-положительную кровь, резус-отрицательным - резус-отрицательную. Техника приготовления универсальной резус-положительной и резус-отрицательной крови совершенно одинакова. Естественные антитела "а" и "в" можно нейтрализовать резус-положительными, так и резус- отрицательными эритроцитами. Поскольку резус-положительной крови всегда будет больше из-за ее большей распространенности, то целесообразно для этих целей использовать резус-положительные эритроциты.

Мы уже говорили, что в виде исключения и при абсолютных показаниях к гемотрансфузии допускается переливание крови без определения резус-принадлежности больного, однако в таких случаях должна переливаться только резус-отрицательная кровь.

При экстренном переливании крови, например, во время военных действий или при чрезвычайных ситуациях медработнику можно в экстренном порядке и с большой достоверностью определить резус-принадлежность при помощи цоликлонов "Анти-Д Супер" (выпускается ТОО "ЦОЛИПК" с очень хорошим качеством) в течение 1-2 минут. Правда, могут возникнуть некоторые затруднения и при определении резус-принадлежности, что обусловлено слабой разновидностью агглютиногена резус-Д_ю. Они дают очень мелкозернистую агглютинацию с цоликлоном "Анти-Д Супер", наступающую лишь на 5-6 минуте и больше. Но такая разновидность агглютиногена Резус-Д_ю встречается крайне редко. Практически в данном конкретном случае реципиент с группой Резус-Д_ю должен рассматриваться как резус-отрицательный, и ему следует переливать резус-отрицательную гемотрансфузионную среду. Если учесть, что процент резус-положительных реципиентов (так же, как и доноров) будет составлять 85%, а резус-отрицательных - 15%, из этого можно сделать заключение, сколько мешков (флаконов) с кровью как резус-положительной, так и резус-отрицательной, нужно иметь в медицинском ранце медработника в районе бедствий или во время чрезвычайной ситуации для оказания гемотрансфузионной помощи пострадавшим.