способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота

Формула изобретения

1. Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота, включающий отбор пробы крови животного, подготовку образца этой пробы для фотометрического анализа и регистрацию коэффициента поглощения образца, отличающийся тем, что в качестве образца используют гемолизат крови, а коэффициент поглощения регистрируют в полосе с максимумом на длине волны 422 нм и при его величине, превышающей 2, животное считают здоровым, в противном случае диагностируют лейкоз.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при подготовке образца пробы используют титр разведения 1 : 400.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к технике диагностики ветеринарной онкологии, и может использоваться в животноводстве для определения заболеваемости лейкозом крупного рогатого скота.

Известен способ диагностики экссудативного плеврита [1], состоящий в том, что исследуют экссудат, получают спектр его поглощения при 410-455 нм и по возрастанию величины оптической плотности относительно исходного значения определяют прогрессирующее течение экссудативного воспалительного процесса.

Также известен способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота [2], состоящий в том, что отбирают пробу крови животного, подготавливают ее к анализу, определяют некоторые параметры этой крови, сравнивают их значения с заранее известными значениями для здоровых и больных животных, и на основании сравнения производят диагностику.

В этом способе определяют количество лейкоцитов, лимфоцитов и других форменных элементов крови и выводят лейкоформулу по "лейкозному ключу", и на основании этого "ключа" ставят диагноз.

Недостатки способа [2] состоят в следующем.

- Определение количества форменных элементов крови производят вручную, при визуальном их подсчете в мазках крови под микроскопом. Это весьма трудоемкая процедура, требующая и соответствующей подготовки пробы крови. В результате время на подготовку и анализ одной пробы составляет около одного часа. Кроме того, возможны и субъективные ошибки врача-гематолога.

- При использовании этого способа, срок хранения пробы крови не превышает 36 часов - при большем времени происходит разрушение лимфоцитов вне кровяного русла.

Наиболее близким к заявленному является способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота, включающий отбор пробы крови животного, подготовку образца этой пробы для фотометрического анализа и регистрацию коэффициента поглощения образца [3].

Недостатком данного способа, несмотря на достаточно высокую оперативность диагностики, является его невысокая достоверность, что не дает возможности, особенно на ранних стадиях лейкоза диагностировать болезнь и эффективно воздействовать на нее.

Технический результат, который может быть получен при осуществлении изобретения, состоит в повышении достоверности диагностики.

Этот результат достигается тем, что отбирают пробу крови животного, подготавливают образец этой пробы к фотометрическому анализу, регистрируют коэффициент поглощения образца, при этом в качестве образца используют гемолизат крови, а коэффициент поглощения регистрируют в полосе с максимумом на длине волны 422 нм и при его величине, превышающей 2, животное считают здоровым, в противном случае диагностируют лейкоз.

Этот коэффициент поглощения наиболее эффективно определять в полосе Соре (с максимумом на длине волны 422 нм), но в экспериментах регистрация осуществлялась в диапазоне 250-600 нм.

Гемолиз клеток крови осуществляли добавлением дистиллированной воды. При этом к 0,04 мл крови добавляли 4, 8, 16, 20 мл воды, что позволило получить разведение в титрах 1 : 100; 1 : 200; 1 : 300; 1 : 400; 1 : 500. Выявлено, что наиболее оптимальным и информативным является разведение 1 : 400.

Значение этого коэффициента (422 нм) сравнивают с заранее известными значениями для больных и здоровых животных, и на основании этого сравнения производят диагностику.

Для исследования различий в спектрах поглощения гемолизата крови больных и здоровых животных и для оптимизации способа были проведены исследования 380 проб крови от коров из различных хозяйств и районов, неблагополучных по лейкозу (определенному традиционными известными способами).

Результаты этих исследований представлены в табл. 1, 2 и на фиг. 1, 2. В ходе исследований было установлено, что удобными для диагностики являются полосы поглощения с центрами в районе 284, 358, 422, 546 и 581 нм.

Наиболее информативной является полоса Соре с центром 422 нм (фиг. 1). При этом оптимальным для фотометрии (и, соответственно, для диагностики заболеваний) является разведение гемолизата крови в соотношении 1 : 400 (фиг. 1 и табл. 2).

Установлено, что в полосе Соре (422 нм) коэффициент поглощения у здоровых животных имеет величину не менее 2, у больных он не превышает этой величины (табл. 2).

В ходе исследований установлено, что срок хранения отобранной крови животных может быть увеличен до 96 часов (при температуре < 10-20^oC) и до 3 месяцев (при замораживании).

Обнаруженная корреляционная связь между заболеваемостью животных и числом, характеризующим коэффициент поглощения, отражает факт конформационных изменений в гемоглобине, что позволяет с помощью спектрофотометрии проводить исследования гемолизата крови и получать спектры от больных и здоровых животных.

Таким образом, предлагаемый способ позволит в несколько раз уменьшить трудоемкость диагностики, повысить ее достоверность за счет автоматизации процесса измерений, в несколько раз уменьшить время проведения одного анализа.

Кроме того, существенно увеличивается срок хранения отобранной крови животных для постановки диагноза.

Источники информации

1. Авторское свид. СССР N 1354114. кл. G 01 N 33/48. 1987.

2. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота //Рекомендации/ ВАСХНИЛ. Сиб. отд. ИЭВС и ДВ: Новосибирск, 1989. С. 6-9.

3. Патент Российской Федерации N 2117289, кл. G 01 N 33/49, 1998.