способ лечения печеночной недостаточности при заболевании печени различного генеза

Формула изобретения

1. Способ лечения печеночной недостаточности при заболевании печени различного генеза путем перорального введения функционально активных гепатоцитов, отличающийся тем, что ксеногенные лиофилизированные гепатоциты используют в капсульной форме по 0,2 г, которые вводят по 1 - 2 капсулы за 1,5 ч до еды 2 - 3 раза в день в течение 10 - 30 дней.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при острой печеночной недостаточности вводят по 2 капсулы 3 раза в день в течение 10 - 15 дней.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что при хронической печеночной недостаточности вводят по 2 капсулы 2 раза в день в течение 10 дней, а затем по 1 капсуле 2 раза в течение 14 дней.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно гепатологии, и может найти применение в реанимационных отделениях и отделениях интенсивной терапии при лечении острой и хронической печеночной недостаточности.

Наиболее близким к изобретению является способ лечения печеночной недостаточности при хронических заболеваниях печени путем перорального введения в желудочно-кишечный тракт взвеси гепатоцитов в растворе Хенкса из расчета и 2 мл на 100 г массы тела больного при концентрации 2x10 клеток в 1 мл за 30-40 минут до приема пищи через каждые два дня на третий до наступления устойчивой ремиссии, причем до и после приема взвеси гепатоцитов вводят 100 мл минеральной воды (Авторское свидетельство N 2063760, A 61 K 35/407).

Недостатками известного способа являются;

1. Невозможность длительного хранения взвеси, так как снижается функциональная активность гепатоцитов, а следовательно, эффективность лечения печеночной недостаточности.

2. Взвесь гепатоцитов, попадая в желудок, подвергается ферментной обработке и разрушению, что снижает функциональную активность гепатоцитов, а следовательно, и эффективность лечения.

3. Взвесь гепатоцитов требует дорогостоящих средств хранения, например, среда 199, раствор Хенкса.

4. Предложенная суточная доза взвеси гепатоцитов (2 мл на 100 г массы при концентрации 2x10 клеток в 1 мл) не может быть рассчитана на предсказуемый лечебный эффект, так как кислотность в желудке может колебаться в различных пределах: от низких до ее высоких значений. В связи с этим определить количество сохранившихся функциональных гепатоцитов не представляется возможным, поэтому лечебная доза гепатоцитов колеблется в различных пределах.

5. Пероральный прием взвеси гепатоцитов может вызывать у отдельных пациентов эстетически неприятные ощущения. Необходимость приема минеральной воды вызывает некоторую неопределенность: а) минеральная вода при заболеваниях желудочно-кишечного тракта подбирается соответственно заболевают; б) непонятно, почему необходимо принимать минеральную воду, с расчетом на какой эффект (содержание электролитов, pH раствора, наличие углекислого газа?),

Задачей изобретения является повышение эффективности лечения и упрощение способа.

Поставленная задача решается тем, что в способе лечения печеночной недостаточности при заболеваниях печени различного генеза путем перорального введения функционально активных гепатоцитов, ксеногенные лиофилизированные гепатоциты используют в капсульной форме по 0,2 г, которые вводят по 1-2 капсулы за 1,5 часа до еды 2-3 раза в день в течение 10 дней, причем при острой печеночной недостаточности вводят по 2 капсулы 3 раза в день в течение 10-15 дней, а затем по 1 капсуле 3 раза в день в течение следующих 10-15 дней, а при хронической печеночной недостаточности вводят по 2 капсулы 2 раза в день в течение 10 дней, а затем по 1 капсуле 2 раза в день в течение 14 дней.

Ксеногенные лиофилизированные гепатоциты при длительном хранении при комнатной температуре до 3-х лет сохраняют свою функциональную активность.

Клинический эффект достигается за счет поступления функционально активных гепатоцитов в составе химуса в тонкий отдел кишечника, откуда активные факторы гепатоцитов - фактор роста, энзимы - за счет пиноцитоза в неизменном виде и активном состоянии по кровеносной и лимфатической системам поступают в печень. Активные факторы гепатоцитов оказывают свой специфический эффект на печень больного, заключающийся в активации регенераторных процессов в пораженной печени, стимуляции синтезирующей и детоксикационной функций сохранившихся функционально активных клеток печени больного.

Для обоснования способа лечения и определения терапевтической дозы были проведены экспериментальные исследования на клинически здоровых крысах (106 голов) и больных собаках различного возраста и пород (1512 голов) со средней массой 10 кг.

Подопытные крысы были разделены на три группы.

Так, в первой группе для выявления побочного действия (токсичности) белым крысам вводили перорально 5 мл раствора с содержанием активного вещества 0,3; 0,4; 0,6 и 1,0 г. Как показали результаты проведенных исследований, препарат не оказывал токсического действия на экспериментальных животных даже при введении высоких концентраций. Экспериментальные животные в период наблюдения в течение 14 суток не погибали.

Общее клиническое состояние животных, а также динамика гематологических и биохимических исследований в период наблюдения были удовлетворительными.

Во второй группе животных модель токсического гепатита получали путем введения животным четыреххлористого углерода, предварительно разведенного в стерильном растительном масле в соотношении 1:1 в дозе 0,6 мл/кг перорально в течение трех дней.

Для определения оптимальной терапевтической дозы лиофилизированных ксеногенных гепатоцитов использовали широкий диапазон доз - от 0,06 до 0,50 мг/кг массы тела. Критерием терапевтической дозы считали такое количество препарата, при введении которого снижалась летальность, улучшалось клиническое состояние животных. Препарат вводили однократно или двукратно в течение пяти дней. Анализ полученных результатов показал зависимость выживаемости опытных животных от количества вводимого препарата (дозы), а также кратности введения. Так, при двукратном введении одной и той дозы препарата в течение 5 дней процент летальности снижался во всех опытных группах в 1,3-1,7 раза по сравнению с группами, где препарат вводился однократно, а при увеличении дозы препаратов до 0,5 мг/кг массы тела данный показатель снижается в 4-5 раз. На основании полученных данных можно считать оптимальной терапевтической дозой 0,20-0,50 мг/кг массы тела двукратно в течение 5 дней. Выявленные оптимальные терапевтические дозы препаратов подтверждали еще раз методом фармакологического скрининга при введении их животным с различной степенью поражения печени.

Проведенные исследования позволили установить целесообразность применения препарата при токсическом гепатите в указанных дозах, что позволяет снизить гибель животных в 2-5 раз и увеличить продолжительность их жизни.

В третьей группе опытных животных определяли кинетику перорально введенных лиофилизированных гепатоцитов, окрашенных трипановым синим. Для этого через определенные интервалы времени осуществлялась эутаназия животных. Установили движение клеточной суспензии в течение суток, часть этих клеток доходит до толстого отдела кишечника.

Данные результатов опытных исследований на крысах были подтверждены при лечении собак, с острой и хронической печеночной недостаточностью.

Критерием оценки эффективности препарата являлись показатели клинического состояния, положительная динамика снижения концентрации токсических веществ в крови и активности цитоплазматических ферментов сыворотки крови. Расчетным путем была составлена оптимальная терапевтическая доза предложенного препарата - 0,2 г в капсуле.

Определялась лечебная эффективность капсул препарата с содержанием активного вещества 0,2 г. Препарат назначали по 1 капсуле утром и вечером до кормления животного в течение пяти или десяти дней в зависимости от динамики клинических и биохимических показателей. Результаты лечения коррелировали с динамикой биохимических показателей (табл. 1 в конце описания). В таблице 1 представлены результаты биохимических исследований крови при лечении печеночной недостаточности в эксперименте.

Как видно из таблицы, в процессе лечения происходит улучшение клинико-гематологических показателей: стабилизация артериального давления, урежение пульса, частоты дыхания; нормализация уровня протеинемии, глюкоземии и холестеринемии; снижение концентрации токсических веществ, активности некоторых печеночных ферментов и т.д.

Полученные результаты легли в основу перорального применения лиофилизированных гепатоцитов в клинической практике.

Способ осуществляют следующим образом: при острой печеночной недостаточности больной перорально принимает лиофилизированные гепатоциты, содержащие по 0,2 г, в капсульной форме по 2 капсулы три раза в день за 1,5 часа до еды в течение 10-15 дней, затем по 1 капсуле три раза в день в течение следующих 10-15 дней; при хронической печеночной недостаточности в стадии декомпенсации больные перорально принимают по 2 капсулы два раза в день за 1,5 часа до еды в течение 10 дней, затем по 1 капсуле два раза в день в течение 14 дней.

Клинический пример

Больная Огородная И. В. , 35 лет, N истории болезни 11525, поступила 02.08.97 г., выписана 26.08.97 г. Диагноз: Передозировка парацетамолом, острая печеночно-почечная недостаточность.

При поступлении состояние тяжелое, в сознании, заторможена, беспокоит резкая слабость, головная боль. При осмотре: отмечается выраженная желтушность кожных покровов, геморрагии на коже туловища, инъецирование склер. В легких дыхание жесткое, хрипов нет. Гемодинамика стабильная, ЧСС - 78 уд/мин, АД -120/80 мм рт.ст. Живот вздут, перистальтики вялая, болезненность в правом подреберье. Диурез 50 мл в сутки. Из анамнеза известно: накануне 28.07.97 г. с целью самолечения в течение суток приняла 5 таблеток парацетамола. 29.07.97 г. - у больной появилась тошнота, рвота. 30-31.07.97 г отметила желтушность кожных покровов, иктеричность склер, снижение диуреза. В анализах крови отмечалась гиперферментемия: АлАТ - 524,5 н/моль с. л (30-40), АсАТ - 110,5 н/моль с. л (30-40), ЛДГ - 15,21 мкмоль/л (8,6), гипербилирубинемия: общий билирубин - 208,67 мкмоль/л (5,0-30,0), прямой - 154,0 мкмоль/л (2,0-26,0), протромбин - 79% (80-95), гиперазотемия: мочевина - 14,6 ммоль/л (10,0-12,0), креатинин - 354,0 мкмоль/л (80,0-120,0).

УЗИ брюшной полости: эхографические признаки диффузных изменений в печени, уплотнение паренхимы, увеличение селезенки, воротная вена - 1,5 см, R_i (индекс резистентности) - на ветвях печеночной артерии - 0,65, токсические изменения почек, размеры 11х5,6 см, R_i - 0,75. В брюшной полости, плевральных полостях значительное количество свободной жидкости.

Проводилась комплексная терапия; активные методы детоксикации - гемодиафильтрация (N5), плазмаферезы (N3), "рулеточные" диализы (N2), бужирование и катетеризация пупочной вены (БПВ) с последующим в/портальным введением глюкозы с витаминами группы "В", липоевой кислотой, спазмолитиками, реопрепаратами - трентал, курантил.

Консервативная терапия включала: инфузионную терапию с форсированием диуреза, корректно анемии, гипопротеинемии, водно-электролитного баланса. В связи с сохраняющейся гипербилирубинемией (билирубин общий - 112,0 мкмоль/л), гиперферментемией (АлАТ - 107,8 н/моль с.л, АсАТ - 121,0 н/моль с.л, ЛДГ - 8,0 мкмоль/л), в курс защитной печеночной терапии был включен пероральный прием лиофилизированных гепатоцитов в течение 10 дней по 2 капсулы 3 раза в день, а затем по 1 капсуле 3 раза в день в течение последующих 10 дней.

После проведенного лечения в анализах крови отмечалось снижение концентрации общего билирубина до 87,3 мкмоль/л, уровень аланиновой и аспарагиновой трансаминаз нормализовался. Отмечалось восстановление диуреза. При контрольном исследовании брюшной полости (УЗИ+допплер) отмечалось восстановление внутрипеченочной гемодинамики; диаметр воротной вены - 1,3 см, R_i - нормализовался (0,58), восстановилась гемодинамика почек. Сохранялись умеренные явления портальной гипертензии: увеличение до 11х5 см. После проведенного лечения состояние больной улучшилось: исчезли признаки энцефалопатии, появился аппетит, стала активнее. Концентрация билирубина и ферментов достигла нормальных, величин. Больная выписана через 26 дней.

Клинический пример 2

Больной Фокин В.А., 49 лет, история болезни 4508, поступил 26.03.97 г. Диагноз: Цирроз печени, декомпенсация. Портальная гипертензия: гепатоспленомегалия, варикозно расширенные вены пищевода, асцит. Жалобы при поступлении: слабость, нарушение сна, головная боль. Из анамнеза известно, что больной страдает циррозом печени в течение 3 лет, злоупотребляет алкоголем.

Последнее ухудшение три недели назад - появилась слабость, снизился аппетит, нарушился сон, появилась неадекватность в поведении. Увеличился живот в размерах, появились отеки на нижних конечностях. При осмотре: кожные покровы, склеры желтушные, печень при пальпации +6 см из-под края реберной дуги, болезненная. Проводились инструментальные исследования. Сцинтиграфия печени: печень неправильной формы, контуры размытые, нечеткие, размеры 13х9х20 см, распределение РФП диффузно-неравномерное, со снижением РФП в правой доле, селезенка 16х12 ом, захват РФП 48%. Признаки цирроза печени, спленомегалия, портальная гипертензия. При УЗИ выявлено увеличение печени, уплотнение паренхимы, внутрипеченочная сеть расширена за счет портальной системы, диаметр портальной вены - 2,2 см, R_i - 0,80, диаметр селезеночной вены - 1,6 см. В брюшной полости - свободная жидкость. В анализах крови при поступлении отмечается гипербилирубинемия: общий билирубин -184,3 мкмоль/л, за счет прямого - 137,0 мкмоль/л, холестерин - 1,8 ммоль/л, бета-липопротеиды - 1,7 г/л, гипокалиемия - 3,5 ммоль/л, гипопротеинемия: общий белок - 58,0 г/л, гиперферментемия: АсАТ - 72,5 н/моль с.л, ЛДГ - 10,86 мкмоль/с.л, ГТП - 99,9 мЕ/л, протромбин - 85,0%.

Проводилось лечение: инфузионная терапия с форсированием диуреза - глюкоза, витамины группы "В", спазмолитики, антибиотики, диуретики. На 5 сутки со дня поступления больной получал перорально за 1,5 часа до еды лиофилизированные гепатоциты по 2 капсулы два раза в день в течение 10 дней, затем по 1 капсуле 2 раза в день в течение 14 дней. На 7 сутки приема лиофилизированных гепатоцитов отмечалось снижение концентрации общего билирубина на 45%, концентрация липидов увеличилась: холестерин - 3,3 ммоль/л, бета-липопротеиды - 3,0 г/л. Концентрация общего белка составляла 63,0 г/л. Концентрация АсАТ, ЛДГ нормализовались на 14-е сутки приема гепатоцитов.

Эти данные подтверждаются УЗИ: уменьшились признаки портальной гипертензии, свободной жидкости - минимальное количество. Больной стал активным, адекватным, улучшился аппетит, нормализовался сон. Больной выписан на 34 сутки заболевания с последующей ремиссией 6 месяцев.

По предлагаемому способу проведено лечение 47 больных. У всех больных течение заболевания соответствовало гепатопатии I - II степени. В лечении этой группы больных использовали лиофилизированные гепатоциты в капсульной форме в виде перорального приема.

Динамика изменения биохимических показателей крови в процессе лечения представлены в табл. 2 (см. в конце описания). Как видно из таблицы, снижение билирубинемии на 60% отмечалось на 6-е сутки, а на 14-е сутки - концентрация общего билирубина и его фракций уменьшилась на 80%.

Ферментемия снизилась на 14-е сутки: АсАТ - на 34%, АлАТ - на 60%. К концу третьей недели лечения биохимические показатели крови нормализовались. В процессе лечения отмечалось улучшение самочувствия больных, уменьшались проявления энцефалопатии: нормализовался сон и появлялся аппетит. У больных с хроническими заболеваниями печени уменьшались признаки портальной гипертензии, что подтверждалось инструментальными исследованиями (УЗИ, сцинтиграфия печени).

Таким образом, способ лечения больных с острыми и хроническими заболеваниями печени лиофилизированными гепатоцитами может рассматриваться как более эффективный, упрощенный и удешевленный по сравнению с приемом взвеси живых гепатоцитов, преимуществом данного способа лечения является высокая функциональная активность, точность дозировки, сохранность препарата от разрушающего действия желудочного сока, длительность их хранения (в течение 3 лет), что позволяет проводить лечение больных с различной степенью тяжести нарушений функции печени.