способ получения энтомопатогенного препарата диприн

Формула изобретения

Способ получения энтомопатогенного биологического препарата, включающий воспроизводство насекомых-хозяев, заражение их нематодами, сбор и концентрирование суспензии инвазионных личинок нематод с последующим приготовлением биопрепарата, отличающийся тем, что сбор личинок проводят в искусственную питательную среду, в которой они способны проходить полный сапрофитный цикл развития, давая несколько последовательных генераций, а приготовление биопрепарата осуществляют путем смешивания нематодной суспензии с инертным наполнителем - торфом или почвенным гумусом в сочетании с питательными добавками - отходами трихограммного производства, или куриным пометом, или агатом - 25.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к защите растений, и может быть использовано для борьбы с вредителями картофеля и других сельскохозяйственных культур.

Наиболее близким к заявляемому объекту техническим решением является способ получения энтомопатогенного биологического препарата, который включает заражение гусениц озимой совки (Agrotis segetum Schift) нематодой (Pristionchus uniformis), сбор погибших насекомых, отлов в воду мигрирующих инвазивных личинок, концентрирование нематодной суспензии, ее консервацию и хранение до применения.

Недостатками указанного способа являются низкая выживаемость инвазионных личинок в период хранения, снижение биологической активности препарата в процессе хранения, низкая эффективность перезимовавшего препарата в полевых условиях.

Целью изобретения является повышение выживаемости инвазионных личинок в период хранения, повышение вирулентности (ЛД₅₀) и эффективности препарата.

Известный способ включает поточное круглогодичное разведение озимой совки, заражение гусениц, сбор погибших насекомых и культивирование в них нематод, сбор нематодной биомассы, концентрирование, стандартизация и хранение нематодной суспензии. В качестве садков для культивирования озимой совки используют вазоны для выращивания растений различного диаметра. Емкости устанавливают попарно одну над другой, стыкуя широкими отверстиями. В качестве корма для гусениц озимой совки используют морковь, пшеничные отруби, картофель и воду с добавлением витаминов - аскорбиновой и фолиевой кислот.

Гусениц выращивают до IV-V возраста и затем инвазируют нематодами из расчета 50-100 личиной на гусеницу. Гибель насекомых от заражения наступает на 2-3-и сутки. Заражение осуществляют в чашках Петри по 10-20 особей в каждой. Инокулюм наносят в водном растворе на фильтровальную бумагу, которой выстилают донышки чашек Петри, прежде чем поместить туда гусениц.

Погибших насекомых, инвазированных нематодами, раскладывают на платформы из перевернутых (меньшего размера) чашек Петри, обернутых фильтровальной бумагой, которые помещают в чашки большего диаметра с тонким слоем воды на дне. Воду с отловленными нематодами сливают ежедневно. На каждую платформу помещают 10-15 особей.

Суспензию нематод отстаивают в течение суток, сливают супернатант и добавляют формалин в количестве 0,01%, после чего хранят в течение 1 - 1,5 года в холодильнике при температуре 4-5^oC.

Цель изобретения достигается тем, что для повышения потенциала размножения и повышения выхода мигрирующих личинок нематод их отлавливают не в воду, а в вытяжку из естественно опавших осенних листьев березы или других древесных пород (именуемых в дальнейшем искусственная питательная среда); концентрированную нематодную суспензию смешивают с инертным наполнителем (торф, почва гумусная) в концентрации 60-80% и питательными добавками (отходы трихограммного производства) - моли зерновой (Sitotroga cerealella Olig), огневки мельничной (Ephestia Kuchniella Voeg), озимой совки (Agrotis segetum Schift), помимо этого при предлагаемом способе в производство возвращаются погибшие бабочки озимой совки маточной и массовой культур, остающиеся от наработки гусениц, что делает производство биопрепарата более экономичным, куриный помет или другие отходы сельскохозяйственного производства в количестве 100 - 200 г/кг.

Указанные добавки в биопрепарат обеспечивают сохранение жизнеспособности, повышение потенциала размножения нематод в течение технологического процесса, наработки биопрепарата в производственных условиях, а также в период хранения, транспортировки, применения биопрепарата в полевых условиях и сохранения инвазионной активности биоматериала в естественных природных условиях в почве, в ризосфере растений, в пазухах листьев.

Применение получаемой таким образом формы биопрепарата путем внесения в почву поздней осенью или ранней весной освобождает почву от почвенных вредителей, а также внесение с нематодами инертных наполнителей (торф, гумусная почва) и питательных добавок (отходы трихограммного производства, куриный помет, сапропель и др.) усваиваются при этом растениями, улучшают структуру почвы и повышает ее плодородие, что приводит к дополнительному повышению урожая картофеля и других сельскохозяйственных культур.

Применение предлагаемой формы биопрепарата "Диприн" приводит к снижению количества применяемых ядохимикатов и минеральных удобрений, что обеспечивает получение экологически чистой сельскохозяйственной продукции и повышает ее качество. Помимо этого применение с целью защиты растений заявляемого биопрепарата не препятствует параллельной интродукции в природу различных полезных насекомых - энтомофагов и паразитов, - божьи коровки, златоглазки, ктыри, сирфиды, жужелицы, эдовум, эфидиус и т.д., а также способствует сохранению естественного фона энтомофагов и паразитов. Отсутствие пестицидных остатков способствует увеличению числа насекомоядных птиц и млекопитающих, повышает активность деятельности дождевых червей.

По предлагаемому способу препарат получают следующим образом.

В контейнеры-инсектарии объемом 3000х3500х2500 мм насыпают на 1/3 объема инертный экологический наполнитель (торф или гумусную почву). Поверх наполнителя насыпают слой (1-2 мм) свежих пшеничных отрубей. По углам расставляют поилки для гусениц или бабочек емкостью 0.3 - 0.5 л, которые заполняют ватой, смоченной раствором витаминов - аскорбиновой кислотой (0.001%) и фолиевой кислотой (0.0001%), 2 поилки, и с чистой водой - 2 поилки. Для бабочек 2 поилки заполняют чистой водой и 2 поилки - раствором сахарозы (5%).

Контейнер закрывает полупрозрачной пластиковой крышкой с отложенными на нее 5-10 тысячами яиц озимой совки маточной культуры. Гусеницы отрождаются из яиц и внедряются в среду. Выращивание гусениц до заражения (IV-V возраст) продолжается 20-24 суток. Содержимое поилок заменяют 1 раз в 2-3 дня. Корм добавляют по мере поедания. Для получения маточной культуры на питательный субстрат на кусочках полиэтиленовой пленки помещают ломтики картофеля, морковки или картофельную ботву. Корм меняют ежедневно до окукливания гусениц.

Вылетевшие бабочки спариваются и откладывают яйца на крышку контейнера. Через каждые двое суток крышку выталкивают из контейнера другой чистой крышкой, а крышку с отложенными на нее яйцами переносят в контейнер с предварительно подготовленным кормом.

Контейнеры с гусеницами IV-V возраста заражают нематодами из расчета 50-100 инвазионных личинок на одну гусеницу путем опрыскивания нематодной суспензией (1-2 л) рабочей поверхности контейнера из любого опрыскивателя.

Гусеницы заболевают, выходят на поверхность, где погибают на 2-3-и сутки после заражения.

После гибели гусениц переносят в чашки Петри по 10-20 особей в каждую и заливают искусственной питательной средой - 50-100 мл.

Водную вытяжку (искусственную питательную среду) готовят следующим образом: 10 г естественно опавших осенних листьев березы или хвои заливают 100 мл холодной воды и настаивают в течение 10 суток при комнатной температуре.

Выход нематод из погибших насекомых наблюдается через 10-12 суток после погружения их в среду. Выходящие личинки могут проходить полный сапрофитный цикл развития в искусственной среде. Жизненный цикл нематод - 6-7 дней. Плодовитость - 6-10 тысяч яиц/самку. Выходящие нематоды группируются возле погибшей жертвы и затем распределяются по всему субстрату. Выход нематод длится 2-3 месяца.

Через каждые 6 суток погибших насекомых с помощью пинцета переносят в другие чашки Петри, которые заливают средой, а содержимое предыдущей чашки переливают вместе с нематодами в емкость для хранения суспензии. В суспензии подсчитывают титр, помещают в холодильник или готовят сухую форму с наполнителем и добавками. Можно также осторожно сливать содержимое чашек Петри в емкость, не трогая погибших гусениц.

Нематоды размножаются на погибших насекомых с большой интенсивностью в течение 1-2 месяцев и поддерживают существование в течение 1-3 лет (без существенного наращивания титра). Каждое погибшее насекомое позволяет репродуцировать от 100 до 500 тысяч инвазионных личинок нематоды в месяц.

Нематодную суспензию концентрируют следующим образом: сначала отстаивают в течение суток, затем верхний слой супернатанта сливают, повышая тем самым титр суспензии в десятки раз. Полученную нематодную концентрат-суспензию смешивают с наполнителем с доведением титра до 50 тысяч инвазионных личинок в 1 г (см. примеры, табл. 1).

Применяемые наполнители и добавки существенно улучшили качество биопрепарата "Диприн" (табл. 2), нематоды хорошо воспроизводились в используемых субстратах (табл. 3). Применение предлагаемых препаративных форм биопрепарата "Диприн" при проведении полевых испытаний снижало численность зимующих стадий колорадского жука на 83-33%, заболеваемость фитофторозом снижалась на 99.56 - 64.8% и повышался урожай картофеля на 24 - 94% в сравнении с необработанным контролем. Новая препаративная форма биопрепарата "Диприн" показала также преимущество перед существующими жидкими формами биопрепаратов (табл. 1-4).