способ получения средства "бипекс" для лечения новообразований мозга

Формула изобретения

Способ получения средства для лечения нейроонкологических заболеваний, отличающийся тем, что раздельно измельчают ткани головного мозга и мягкие ткани эмбриона животного, гомогенизируют их, затем разбавляют физиологическим раствором в соотношении 1 : 2 по объему и выдерживают образовавшиеся растворы в течение 24 ч, а после удаления образовавшихся осадков к экстрактам добавляют консервант до достижения его концентрации в них не менее 0,5%, после чего полученные экстракты выдерживают в течение 5 сут, причем экстракт ткани мозга при температуре 37^oC, а экстракт мягких тканей - при 25^oC, после отделения нерастворимых частиц экстракты смешивают в соотношении 1 : 2 по объему и смесь выдерживают 48 ч при температуре 6 - 8^oC и подвергают ее стерилизации фильтрованием, затем фильтрат помещают в герметически закрытую емкость и выдерживают его в течение 36 ч при температуре 52^oC и 10 сут при температуре 8^oC, после чего производят асептическое фильтрование.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в онкофармакоглогии и нейроонкологии.

Новообразование мозга весьма трудно подвергается лечению. В настоящее время для их лечения используют хирургические способы и способы лучевой терапии совместно с химиотерапией.

Однако хирургические способы характеризуются сложностью выполнения, опасностью тяжелых осложнений и обладают недостаточной эффективностью. Лучевую терапию также нельзя признать достаточно эффективной, поскольку при ее действии одни клетки погибают, а другие наоборот - стимулируются.

В настоящее время не выявлены пути преодоления энцефалобарьера, который препятствует транспорту биологически активного средства к пораженным клеткам мозга. В связи с указанной трудностью не созданы препараты для лечения нейроонкологических заболеваний.

Авторами настоящего изобретения предлагается способ получения средства, обладающего выраженной противоопухолевой активностью при новообразованиях мозга.

Задачей настоящего изобретения является выявление путей преодоления энцефалобарьера и на этой основе создание способа, обладающего такой совокупностью операций и их режимов, которая направлена на получение эффективного средства для лечения новообразований мозга.

Поставленная задача решается тем, что в способе получения средства для лечения новообразований мозга, согласно изобретению, раздельно измельчают ткани головного мозга и мягкие ткани эмбриона животного, гомогенизируют их, затем разбавляют физиологическим раствором в соотношении 1 : 2 по объему и выдерживают образовавшиеся растворы в течение 24 часов, а после удаления образовавшихся осадков к экстрактам добавляют консервант до достижения его концентрации в них не менее 0,5%, после чего полученные экстракты выдерживают в течение 5 суток, причем экстракт ткани мозга при температуре 37^oC, а экстракт мягких тканей - при 25^oC, после отделения нерастворимых частиц экстракты смешивают в соотношении 1 : 2 по объему и смесь выдерживают 48 часов при температуре 6 - 8^oC и повергают ее стерилизации фильтрованием, затем фильтрат помещают в герметически закрытую емкость и выдерживают его в течение 36 часов при температуре 52^oC и 10 суток при температуре 8^oC, после чего производят асептическое фильтрование.

Авторами предусмотрены такие действия, их последовательность и режимы осуществления, от которых зависят свойства получаемого белково-пептидного комплекса (БПК).

Использование в качестве сырья для осуществления заявляемого способа тканей головного мозга и мягких тканей эмбриона животных отвечает специфичности получаемого средства.

Ткани головного мозга эмбриона животного поставляют в препарат транспортный пептид, который обеспечивает доступ активного компонента к возникшему в мозгу новообразованию, в том числе и злокачественному.

Мягкие ткани эмбриона, в свою очередь, снабжают получаемое средство функционально-активными пептидами, способными восстанавливать клетки образовавшейся опухоли.

Последующие операции способа и предназначены для выделения вышеуказанных пептидов. На первом этапе оба вида тканей эмбриона животного обрабатываются раздельно.

Гомогенизация тканей является подготовительной операцией к последующей экстракции растворимых белков и пептидов. Полученные гомогенаты разбавляют физиологическим раствором при их соотношении 1 : 2 по объему. Выбранное соотношение гомогената и физиологического раствора соответствует максимальной степени экстракции белков и пептидов, что в конечном итоге определяет активацию получаемого средства.

В процессе экстракции образуется осадок, который представляет собой структурные элементы. Образовавшийся осадок подлежит удалению, например посредством центрифугирования. К полученным экстрактам добавляют консервант, который необходим для подавления деятельности бактерий, т.е. для обеззараживания получаемого средства.

Количество консерванта определено границей - не ниже 0,05%.

Полученные экстракты после добавления консерванта выдерживают 5 суток, но при разной температуре. Экстракт, полученный из ткани мозга эмбриона животного, выдерживают при температуре 37^oC, а экстракт мягких тканей - при температуре 25^oC. При указанных условиях протекает процесс аутолиза. Особенности исходного сырья определяют, в конечном итоге, условия, при которых протекает аутолиз.

В процессе аутолиза тканей эмбриона происходит расщепление растворимых белков-предшественников и выделяются активные пептиды.

Кроме того, в процессе аутолиза образуются нерастворимые частицы, которые подлежат удалению фильтрованием через фильтр с определенным размером пор. Последующее смешивание двух фильтратов в соотношении 1 : 2 обусловлено условиями их эквивалентного взаимодействия и минимальными потерями активных пептидов.

Полученную смесь выдерживают в течение 48 часов при температуре 6 - 8^oC, при этих условиях происходит стабилизация смеси, сопровождающаяся диффузией, агрегацией, завершением аутолитических процессов и др.

Смесь подвергают стерилизации фильтрованием и помещают в герметически закрытую емкость, выдерживают там 36 часов при температуре 52^oC. В результате такой выдержки происходит сшивка - образованием активной фракции препарата.

В процессе последующего выдерживания смеси в течение 10 суток при температуре 8^oC имеющиеся примесные частицы коагулируют, превращаясь в более крупные, после чего следует асептическое фильтрование.

Заявляемый способ поясняется примером конкретного выполнения.

Пример. Ткань мозга в количестве 1 кг и мягкие ткани животного в количестве 2 кг раздельно измельчили и подвергли гомогенизации при температуре не выше 8^oC. Сразу после гомогенизации оба гомогената разбавили охлажденным физиологическим раствором в соотношении 1 : 2 по объему и выдерживали при постоянном перемешивании и температуре 8^oC в течение 24 часов.

Образовавшийся осадок удалили центрифугированием при 3000 об/мин и температуре 2 - 4^oC в течение 1 часа. Затем к полученным экстрактам добавляли при постоянном перемешивании консервант из расчета 100 мл 1%-го раствора хинозола в физиологическом растворе на 1 л экстракта.

После добавления консерванта экстракт ткани мозга выдерживали при температуре 37^oC в течение 5 суток, а экстракт мягких тканей - при 25^oC в течение 5 суток. В процессе указанной операции происходит образование нерастворимых частиц, которые подлежат отделению посредством фильтрования через фильтр с размером пор 0,45 мкм. Полученные два фильтрата объединили при соотношении 1 : 2 по объему. Затем полученную смесь выдерживали в течение 48 часов при температуре 6 - 8^oC, после чего осуществили стабилизацию фильтрованием через фильтр с размером пор 0,22 мкм. Смесь поместили в герметически закрытую емкость и выдерживали при 52^oC в течение 36 часов, продолжали выдерживать при 8^oC в течение 10 суток, после чего смесь асептически отфильтровывали. Полученный раствор ампулировали.

Полученное средство представляет собой прозрачную жидкость светло-коричневого цвета.

В эксперименте было установлено, что препарат "Бипекс" обладает выраженной противоопухолевой активностью при различных путях введения в широком диапазоне доз 45 - 200 мг/кг.

Были проведены клинические испытания "Бипекса" на 20 нейроонкологических больных, из которых 12 больных оперировано. Из 12 оперированных больных у 11 морфологически определена анапластическая астроцитома и у одного - метастаз рака. У 8 не оперированных больных клинически был установлен следующий диагноз: 15 больных - глиома головного мозга, 18 - метастаз рака. Во время испытаний 14 больных принимали полихимиотерапию, гормонотерапию - дексон, 3 - рентгенотерапию.

Больных обследовали в динамике. Изучали данные клиники, биохимические исследования крови, общие анализы мочи и крови.

Препарат вводили всем больным по 2 мл 1 раз в день внутримышечно в течение 10 дней. У каждого четвертого больного отмечено значительное улучшение общего состояния.

Таким образом, авторами заявляемого изобретения доказано, что получаемый препарат обладает выраженной противоопухолевой активностью и его следует признать высокоэффективным средством в нейроонкологии.