смесь омега-3 полиненасыщенных жирных кислот

Формула изобретения

Смесь Омега-3 полиненасыщенных жирных кислот для коррекции дислипидемических состояний и синдрома гиперкоагуляции, содержащая комплекс эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот, комплекс насыщенных и ненасыщенных кислот С₁₂-С₂₂ и токоферол, отличающаяся тем, что указанные вещества находятся в смеси в следующем соотношении, мас.%:

Комплекс эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот - 42,8 - 93,0

Токоферол - 1,0

Комплекс насыщенных и ненасыщенных кислот С₁₂-С₂₂ - Остальное

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в качестве средства лечения и профилактики атерогеннных дислипопротеинемий и состояний, сопровождающихся повышенной свертываемостью крови /синдром гиперкоагуляции/.

Известна смесь жирных полиненасыщенных, мононенасыщенных и насыщенных жирных кислот, содержащая комплекс эйкозогексогенной (ЭПК) и докозогексагеновой (ДГК) кислот, а также комплекс моно-ди-три-тетраеновых кислот C₂₀, комплекс ненасыщенных, с менее чем шестью связями кислот C₂₂, комплекс ненасыщенных C₁₄ кислот, комплекс C₁₆ - ненасыщенных жирных кислот C₁₂, C₁₄, C₁₆, C₂₀, C₂₂ /А.С.Кобаладзе, Г.В. Медулашвили. Перспективы применения рыбьего жира в профилактике и лечении дислипопротеидемии и атеросклероза //Терапевт. архив, 1990, т.62, N11, с.151-154; A. Leaf. Cardiovascular Effects of Fish Oils Beyond the Platelet//Circulation, 1990. - v.82. - N 2. - p. 624-628./. Комплекс ЭПК и ДГК в описанной смеси содержит 15-21 вес.%.

Описанное вещество - продукт рыбий жир. Он используется для профилактики атеросклероза. Однако ввиду того что в рыбьем жире полиненасыщенные жирные кислоты, имеющие способность к конкурентному с арахидоновой кислотой биосинтезу преимущественно вазодилатирующих простагландинов и лейкотриенов, обладающих меньшей тромбогенной активностью /ЭПК и ДГК/, находятся в недостаточной концентрации для проявления терапевтического эффекта, необходимо употребление описанного продукта в значительном количестве для достижения эффективной концентрации ЭПК и ДГК в крови. Это приводит к избыточному потреблению жировой ткани, что вызывает ухудшение функционирования желудочно-кишечного тракта. Кроме того, указанный продукт в настоящее время загрязнен ДДТ в степени, невозможной, по мнению специалистов, для очистки /Атеросклероз (дискуссия за круглым столом)//Терапевтический архив. 1990 г., т.8, с.7-21/. Поэтому использование описанного вещества в качестве лечебного или профилактического средства практически исключено.

Известна смесь ненасыщенных и насыщенных жирных кислот, содержащая концентрированный рыбий жир, включающий в липидной части не менее 18% полиненасыщенных жирных кислот - МИП /масло ихтиеновое пищевое/, получаемое из гидробионтов методом обработки при низких температурах. МИП также применяется для профилактики и лечения атерогенных дислипидемий /Применение масла ихтиенового пищевого - альтернатива лекарственного лечения дислипидемий. И.В. Мартынов, В. А. Исаев, А. И. Мартынов, А.Л. Верткин, Е.И. Жаров и соавт. //Кардиология. 1991, т.31, N3, с. 5-8/.

Недостаток описанного решения состоит в том, что МИП представляет собой концентрат рыбьего жира, загрязненного ядовитыми веществами. Так, например, у 12% обследуемых препарат отменяли из-за развития побочных эффектов /обострений заболеваний желудочно-кишечного тракта/, а еще 32% больных прекращали прием МИП из-за неприятных органолептических свойств препарата.

Наиболее близким к предлагаемому решению по достигаемому результату является смесь ОМЕГА-3 полиненасыщенных жирных кислот, содержащая комплекс ЭПК и ДГК, комплекс насыщенных и ненасыщенных жирных кислот C₁₂-C₂₂, а также токоферол /Применение рыбьего жира для коррекции атерогенных дислипопротеинемий/ А.Л. Верткин, Ю.Б. Светова, А.И. Васягин, А.М. Мартынов, Е.А. Прохорович //Кардиология 1992. т.32. N5. С.88-92/. Описанное вещество носит название "МАКСЕПА". Комплекс ЭПК и ДГК в нем содержит 21,5-35 вес.%, а токоферола - 1 вес.%. В МАКСЕПЕ, кроме того, имеются комплексы других жирных кислот: ненасыщенных C₁₈, моно-ди-три-тетроеновых C₂₀, C₂₂, C₁₆, насыщенных C₁₄, C₁₈, C₂₀ - веществ, присутствие которых в МАКСЕПЕ, как в лечебном и профилактическом средстве, не требуется, но удаление которых из смеси чрезвычайно затруднительно технологически. Приведенная смесь используется для лечения и профилактики дислипидемических состояний и синдрома гиперкоагуляции /J. Mehta, D. Lawson, T. Saldeen. Reduction in plasminogen activator inhipitor-1 (PAI-1) with omega-3 polynnsaturated fatty acid (PUFA) intake//Am. Heart. Journal, 1988, v.116, N5, p.1201-1206; Руководство по гиперлипидемии (под редакцией Г.Р.Томпсона). 1991, 256 с./. Однако описанная смесь недостаточно эффективна при лечении и профилактике дислипопротеинемий и нарушений свертывающей способности крови, из-за невозможности быстрого достижения оптимальных концентраций ЭПК и ДГК в крови. Это происходит вследствие дозозависимого эффекта вещества, в связи с чем недостаточно высокая концентрация ЭПК и ДГК в препарате либо не вызывает запуска каскада биосинтеза вазодилатирующих простагландинов и лейкотриенов с низкой тромбогенной активностью, либо требует длительного приема вещества (до года) и в достаточно больших дозах (до 92 г/день) /Применение рыбьего жира для коррекции атерогенных дислипопротеинемий. А.Л.Верткин, Ю.Б.Светова, А.И.Васягин, А.М.Мартынов, Е.А.Прохорович // Кардиология, 1992, т.32, N5, с.88-92/, что приводит к потреблению 570-1130 КДж/день, т.е. 11 кг жировой ткани в год.

В основу предлагаемого изобретения поставлена задача создания такой смеси ОМЕГА-3 полиненасыщенных жирных кислот, которая бы позволила сократить сроки лечения, повысить эффективность лечебно-профилактического действия состояний, сопровождающихся повышенной свертываемостью крови и снизить количество случаев появления побочных эффектов.

Поставленная задача решается путем достижения в крови такой концентрации ЭПК и ДГК, при которой становится возможным запуск конкурентного взаимодействия с арахидоновой кислотой и заменой ее в каскаде биосинтеза простагландинов, преимущественно вазодилатирующих классов и лейкотриенов с низкой тромбогенной активностью, что обеспечит достижение терапевтического эффекта в течение 12-18 дней.

Предлагаемое вещество, как и известная смесь ОМЕГА-3 полиненасыщенных жирных кислот, содержит комплекс эйкозопентаеновой и докозогексаеновой (ЭПК и ДГК) кислот, комплекс насыщенных и ненасыщенных жирных кислот C₁₂-C₂₂ и токоферол и согласно изобретению указанные вещества находятся в смеси в следующем соотношении, вес.%:

Комплекс ЭПК и ДГК - 42,8-93,0

Токоферол - 1,0

Комплекс насыщенных и ненасыщенных жирных кислот C₁₂-C₂₂ - Остальное

Содержание в комплексе ЭПК и ДГК распределено примерно поровну. Так в предлагаемой смеси ЭПК составляет 27-42 вес.%, а ДГК - 23-56 вес.%, примеси - остальное.

Авторами экспериментально установлено оптимальное количество комплекса ЭПК и ДГК в смеси. Так, при содержании комплекса ЭПК и ДГК в смеси менее 42,8% эффективность смеси в качестве лечебного профилактического средства для воздействия на уровень атерогенных липопротеидемий и синдром гиперкоагуляции оказывается недостаточной - положительный эффект наступает при длительном (до года) употреблении препарата, сопровождается появлением таких побочных эффектов, как диспепсические расстройства, обострения хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта, что обусловлено недостаточной заменой арахидоновой кислоты в фосфолипидах клеточных мембран на ЭПК и ДГК. Увеличение содержания комплекса ЭПК и ДГК в смеси свыше 93 вес.% не имеет смысла ввиду достаточного клинического эффекта при указанных концентрациях и значительных технологических трудностях и экономических затратами при более высокой степени очистки.

Предлагаемое вещество получено таким образом.

Для получения смеси использовали липиды из измельченных цельных объектов, полученных разными способами: механическим, вытапливанием при температуре не ниже 45^oC, замораживанием или экстракцией органическими растворителями.

В колбу, снабженную обратным холодильником, загружали едкий натр 506,7 г, жира 700,0 г, водно-спиртового раствора едкого кали /250 г едкого кали, 250 мл воды, 250 г этанола/ и при перемешивании доводили температуру смеси до 80^oC на водяной бане. Гидролиз проводят при указанной температуре в течение 1 ч при перемешивании. Избыток спирта отгоняют, остальную массу охлаждают до 30^oC, нейтрализуют 50% раствором серной кислоты и подкисляют тем же раствором до pH 1,0. Затем температуру увеличивают до образования прозрачного слоя жирных кислот (примерно до 80^oC), которые отделяют от водного слоя в количестве 499,1 г. К указанному количеству жирных кислот добавляют двойной объем этанола, смесь этанола (90 мл) и концентрированной серной кислоты (90 мл). Этерификацию осуществляют при 80^oC в течение 2,5 часов при перемешивании. Избыток спирта отгоняют в вакууме 0,3-0,6 ати, этиловые эфиры жирных кислот экстрагируют петролейным эфиром, отмывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия до нейтральной реакции, высушивают безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель в вакууме.

Содержание этиловых эфиров жирных кислот определяли методом капиллярной газовой хроматографии на хроматографе "Fraktovap" Италия. После чего в смесь вводили 1% (вес.%) токоферола в качестве антиоксиданта.

В соответствии с описанным технологическим процессом был получен ряд смесей полиненасыщенных жирных кислот, содержащих различные концентрации комплекса ЭПК и ДГК; при этом содержание других ненасыщенных жирных кислот соответственно уменьшалось, насыщенные ликвидировались по мере повышения у концентрации ненасыщенных жирных кислот, количество токоферола во всех смесях было идентичным.

Смесь N 1: содержание этерифицированной ЭПК - 7,1%, ДГК - 4,8%; комплекса насыщенных и ненасыщенных кислот: эфиров насыщенных жирных кислот - 18,1%, эфиров остальных ненасыщенных жирных кислот - 69%, токоферола - 1%. Количество комплекса ЭПК и ДГК - 11,9%.

Смесь N 2: содержание этерифицированной ЭПК -19,7%, ДГК - 15,3%; комплекса насыщенных и ненасыщенных кислот: насыщенных жирных кислот - 11,8%, остальных жирных ненасыщенных кислот - 52,2%, токоферола - 1%. Количество комплекса ЭПК и ДГК - 35%.

Смесь N 3: содержание ЭПК -23,7%, ДГК -19,1%, насыщенных жирных кислот - 9,4%, ненасыщенных жирных кислот - 46,8%, токоферола - 1%, комплекса ЭПК и ДГК - 42,8%.

Смесь N 4: содержание ЭПК - 26%, ДГК - 27,9%, насыщенные жирные кислоты отсутствуют, остальные ненасыщенные жирные кислоты - 45,1%, комплекса ЭПК и ДГК - 53,9%, токоферола - 1%.

Смесь N 5: содержание ЭПК - 35,0%, ДГК - 58,0%; комплекса насыщенных и ненасыщенных кислот: насыщенные жирные кислоты - 0,9%, остальные ненасыщенные жирные кислоты - 5,1%, токоферол - 1%, комплекса ЭПК и ДГК - 93,0%.

Для изучения действия смесей в качестве средства, воздействующего на уровень атерогенных липопротеинемий, в свертывающую систему крови и выбора смеси с оптимальной концентрацией комплекса ЭПК и ДГК была проведена серия экспериментов. С этой целью было использовано 48 кроликов - самцов шиншилла с исходной массой тела 1,4 0,3 кг. Всем животным в течение 96 дней вводили перорально холестерин из расчета 0,25 г/кг массы тела. Все животные содержались в одинаковых условиях и на идентичной диете. Через 96 дней атерогенной диеты все 48 животных были разделены на 6 групп по 8 кроликов в каждой с сопоставимой массой тела животных во всех группах - 2,84-3,10 кг. 1-я группа представляла собою контроль за уровнем спонтанной регрессии холестеринемии, остальным пяти группам кроликов прибавлялось введение одинаковой дозы смесей жирных кислот, содержащих различные концентрации комплекса ЭПК и ДГК. Так, смесь N 1 была применена во второй группе, смесь N 2 - в третьей, смесь N 3 - в четвертой, смесь N 4 - в пятой, и смесь N 5 - шестой группе. В период лечения кролики всех групп находились на идентичной традиционной диете. Исследуемые параметры определяли перед началом введения (исходно) и через 2 недели после начала введения изучаемых смесей жирных кислот. Изучали в сыворотке крови, взятой из ушной вены, содержание общего холестерина /ХС/ /Биохимические методы исследования в клинике / Под ред. А.А. Покровского. - М. , 1969/, фосфолипидов /ФЛ/, липопротеиды низкой плотности /ЛПНП/, липопротеиды высокой плотности /ЛПВП/ с помощью диагностических наборов фирмы "Boehringer-Mannheim" (ФРГ). Также определяли время свертываемости и кровотечения по Бюрккеру (ВС), количество тромбоцитов (Тр) в мазке, окрашенном по Романовскому /по соотношению с эритроцитами/, агрегацию тромбоцитов (АТр) на агрегометре фирмы "Chronolog" (США) и АДФ1 (адекозиидуфосфат).

Результаты исследований сведены в таблицу.

Как видно из представленной таблицы, все показатели исходно во всех группах были сопоставимы и изменились в контрольной группе в динамике лишь по уровню регрессии холестерина, аналогичная депрессия этого показателя отмечалась и в ряде других групп (в четвертой группе ЭПК + ДГК = 42,8 вес.%), отмечались также достоверные по сравнению с исходным уровнем изменения количества фосфолипидов и липопротеинов низкой плотности. И лишь в группах, принимающих лечения смесями жирных кислот с комплексом (суммарным количеством) ЭПК и ДГК более 42,8 вес.%, определялись достоверные сдвиги не только по сравнению с исходным уровнем изучаемых показателей, но и по сравнению с уровнем регрессии их в контроле. Немаловажна также появляющаяся в 5-й группе тенденция и достоверное повышение в 6-й группе содержания липопротеинов высокой плотности, препятствующих развитию атеросклеротического процесса. Таким образом, в результате использования смесей жирных кислот с комплексом ЭПК и ДГК более 42,8 вес.% отмечается достоверное и быстрое (в течение двух недель) снижение атерогенных факторов (холестерина, фосфолипидов, липопротеинов низкой плотности), повышение уровня антиатеросклеротических веществ (липопротеинов высокой свертываемости), уменьшение количества тромбоцитов, уровня тромбагрегации.