способ получения иммуностимулятора

Формула изобретения

Способ получения иммуностимулятора путем экстракции природного сырья, отличающийся тем, что в качестве источника сырья используют обезжиренную и депигментированную биомассу Spirulina platensis, которую экстрагируют дистиллированной водой при 50 - 70^oC и отношении высушенной биомассы к дистиллированной воде 1 : (30 - 50), полученную суспензию обрабатывают 80 - 90%-ным раствором фенола при отношении суспензии к раствору фенола 10 : 1 и температуре 50 - 70^oC, после чего водную фазу отделяют, диализуют и высушивают.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам получения иммуностимуляторов.

Известен способ получения иммуностимулятора путем экстракции сырья растительного происхождения, в качестве которого используют сборы растений (см. напр. авт.св. СССР 1797894, кл. А 61 К 35/78, 1990).

Полученный известным способом иммуностимулятор не обладает достаточной активностью.

Известен также способ получения иммуностимулятора, когда в качестве сырья используется тимус теленка (см. напр. Goldstein A.L., Guha A., Zatz M.M., Hardy A., White A. Purification and biological activity of the thymus gland. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v.7, p.1800-1807, 1972).

Полученный известным способом иммуностимулятор при его высокой стоимости не обладает достаточной активностью.

Заявленное изобретение направлено на получение иммуностимулятора с более высокой активностью.

Указанный результат достигается за счет того, что в качестве сырья используют обезжиренную и депигментированную биомассу Spirulina platensis, которую экстрагируют дистиллированной водой при 50 - 70^oС и отношении высушенной биомассы к дистиллированной воде 1: (30 - 50), полученную суспензию обрабатывают 80-90%-ным раствором фенола при отношении суспензии к раствору фенола 10:1, при температуре 50-70^oС, после чего водную фазу отделяют, диализуют и высушивают.

Сущность изобретения характеризуется совокупностью существенных признаков, представленных в формуле изобретения, и иллюстрируется чертежами, где на фиг. 1 представлены графики влияния полученного предлагаемым способом иммуностимулятора и иммуностимулятора, полученного из тимуса телят на Т-спонтанное розеткообразование эритроцитов барана против Т-лимфоцитов человека (% Е-РОК), на фиг. 2 - восстановление иммунного ответа у мышей, подавленного гидрокортизоном, на пятый день после введения указанных иммуностимуляторов.

Как следует из результатов тестовых испытаний, по характеру иммуностимулирующего действия получаемый по предлагаемому способу препарат сходен с известным препаратом, получаемым из тимуса телят, но одинаковый эффект достигается при меньших дозах.

При использовании иммуностимулятора, полученного по предлагаемому способу, в дозах от 10^-2 мкг до 10^-3 мкг на мл инкубационной среды наблюдается увеличение числа Е-РОК почти на 50% от контроля, в то время как тимозин в той же концентрации увеличивает число Е-РОК всего на 15-20%.

При парентеральном введении иммуностимулятора, полученного по предлагаемому способу, мышам с эндогенным гиперкортицизмом наблюдается полное восстановление иммунного ответа на пятый день при дозировке 10^-2 мкг/мышь.

Пример. К 400 мл густой биомассы Spirulina platensis в целях обезжиривания и депигментации добавляют 1000 мл смеси хлороформа и метанола (2:1 объем на объем). Полученную суспензию подвергают перемешиванию в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем клеточную массу отделяют на воронке Бюхнера и вновь ресуспендируют в таком же объеме смеси хлороформа и метанола. Процедуру освобождения клеток от пигментов, липидов и фосфолипидов повторяют еще раз.

Затем клеточную массу выкладывают на фильтровальную бумагу и подсушивают на воздухе в течение 4-5 ч. Из 400 мл исходной суспензии получают 10-12 г обезжиренных воздушно-сухих клеток водоросли.

Полученный объем сухих клеток суспендируют в 300 мл дистиллированной воды при 70^oС и, поддерживая постоянной температуру, перемешивают в течение 12 ч, затем приливают 30 мл 90% фенола, нагретого до 70^oС. Суспензию выдерживают при перемешивании 30 мин и после охлаждения до комнатной температуры центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин до расслоения фенольной и водной фазы. Водную фазу диализуют против дистиллированной воды в течение 3-х дней и лиофилизируют.

Получаемый препарат - белый хлопьевидный порошок, хорошо растворимый в воде, представляет собой углевод-белковый комплекс, содержащий 32-34% полисахаридов, 23-25% белков, 11-13% аминосахаров и 28-30% аминокислот и минеральных веществ (состав комплекса определен по известным методикам). Углеводная часть состоит из остатков рамнозы (в преобладающем количестве), маннозы, галактозы, глюкозы, ксилозы и арабинозы.

Для получения оптимальных количественных характеристик по извлечению препарата из биомассы, при сохранении его активности, процесс экстракции проводят при массовом отношении биомассы к воде 1 : (30 - 50), используют 80 - 90%-ный раствор фенола, а обработку суспензии фенолом при объемном соотношении 10:1, при сохранении температурного режима в пределах 50 - 70^oС.

В случае понижения температуры ниже 50^oС при проведении экстракции и обработке суспензии раствором фенола процесс получения препарата значительно затягивается по времени, а при повышении температуры выше 70^oС происходит разрушение активных веществ и, соответственно, снижение активности получаемого препарата.

Уменьшение отношения биомассы к дистиллированной воде меньше 30 приводит к снижению объема получаемого препарата, тогда как увеличение этого отношения более 50 уже не приводит к заметным изменениям указанной характеристики.

Выбор параметров раствора фенола, как и приведенный выше выбор температурного режима, определяется, с одной стороны, сохранением активных веществ и, соответственно, активности получаемого препарата.

При соблюдении приведенных параметров обеспечивается выход конечного продукта 300 - 500 мг на 10 г сухих клеток, что составляет 3 - 5% от массы сухого сырья.