способ выделения комплекса дестабилаза - простагландин из медицинской пиявки

Формула изобретения

Способ выделения комплекса дестабилаза - простагландин из медицинской пиявки, включающий экстракцию органическим растворителем, отличающийся тем, что pH растворов доводят до величины не менее 7,4, жирорастворимую фракцию собирают, упаривают до сухого остатка и растворяют в буферном растворе.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может применяться в биохимии, гематологии, медицине и медицинской промышленности.

Известен способ получения дестабилазы из пиявки, взятый нами в качестве прототипа (1), включающий аффинную хроматографию на L-лизине, иммобилизированном на водонерастворимом носителе, элюцию целевого продукта, нейтрализацию элюата и лиофилизацию. Однако полученный данным способом продукт не является гомогенным препаратом, т. к. содержит в своем составе гирудин и ингибитор калликреина, к тому же не вся дестабилаза связывается с L-лизином.

Целью предлагаемого изобретения является увеличение выхода конечного продукта и повышение его чистоты.

Поставленная цель достигается тем, что обработанное сырье подвергают многократной экстракции органическим растворителем, после чего жирорастворимую фракцию собирают и упаривают.

Способ осуществляют следующим образом. Обработанное сырье (секрет желез медицинской пиявки, лиофилизат, бактерию-симбионт) очищают, экстрагируют органическими растворителями не менее 2 раз, далее жирорастворимую фракцию собирают и упаривают до сухого остатка.

Приводим примеры осуществления способа.

Пример 1. 5 мл секрета слюны пиявок дважды экстрагируют трехкратным объемом этилацетата при pH 7,4. Собирают жирорастворимую фракцию, упаривают в роторном испарителе, растворяют в 0,05 М трис-HCl буфере pH-8,4. Конечный продукт обладает фибринолитической активностью, содержит простанойд, не имеет активность гирудина и ингибитора калликраина. При электрофорезе проявляется в виде одной полосы с ММ 12,3 кДа (таблица).

Пример 2. Все процедуры как в п. 1, но в качестве сырья использовали экстракт бактерии-симбионта в количестве 8 мл, а экстракцию проводили 3 раза трехкратным объемом хлороформа. Полученный препарат соответствует целевому продукту.

Пример 3. Все процедуры как в примере 1, но в качестве сырья использовали водный экстракт лиофильно высушенных пиявок и проводили четырехкратную экстракцию смесью хлороформ-этилацетат (1:1), также соответствие целевому продукту.

Пример 4. Все как в п.1, но была произведена однократная экстракция трехкратным объемом этилацетата. Активности целевого продукта снижены на 50% из-за неполного экстрагирования органическим растворителем комплекса дестабилаза-простанойд из секрета пиявок (таблица).

Преимущества способа заключаются в повышении объема выхода целевого продукта и его чистоты.

Литература

1. ДАН СССР, 1987, т. 292, N 6, с. 1492-1493т